本发明涉及一种玫瑰苦荞多肽口服液及其制备方法，属于食品领域。
背景技术：
玫瑰花是一种珍贵的药材，味甘微苦、性温，最明显的功效就是理气解郁、活血散淤和调经止痛。对于心脑血管、高血压、心脏病及妇科有显著疗效。玫瑰花富含香茅醇、橙花醇、香叶醇、苯乙醇等多挥发性香气成分，因此泡出的玫瑰花茶具有甜美的香气。长饮此品有清热解毒、促进代谢、和肝养胃之功效，它还有平衡激素的作用，有助于女性的美丽与健康。金边玫瑰由于在人工种植之前一直以野生状态分布于荒郊野外，是经过长期自然物种选择的优良品种，在抗病性方面较其他玫瑰品种强得多。相对其他食用玫瑰而言，金边玫瑰在口感上弥补了玫瑰淡淡的苦涩味，显得更加的清新与甜蜜，香味上不浓郁，而多了一分宁静与祥和，让人百品不厌；再者，金边玫瑰花蕾小巧玲珑，花瓣较为紧凑，无论是完整性，还是味道的持久性都比一般玫瑰茶要好很多，金边玫瑰鲜花基本上不会挥发香气，而干花香味显著。
苦荞活性肽是苦荞中蛋白质经特征酶或生物降解后产生的具有显著生理活性，且由数个至数十个氨基酸组成的肽类混合物，有研究发现，苦荞多肽的功能活性远大于苦荞蛋白的功能活性，苦荞多肽是一种天然抗氧化剂，具有抗衰老、清除羟自由基、降血糖血脂、降血压、抗菌、预防肠癌和增强免疫力等功能活性。但是苦荞多肽作为食品成分时，常带有苦味，口感不好，为了改善苦荞多肽的口味，增加它的应用范围以及食用价值，人们开始研究如何去解决这个难题。
现代生物代谢研究发现：人类摄取的含蛋白质的物质首先经消化道的多种酶水解后，不像以前认为的那样仅以氨基酸的形式吸收，更多的是以低聚肽的形式直接吸收利用，而且二肽与三肽的吸收速率比单一的氨基酸还快，其中某些低聚肽不仅能提供某些营养物质促进人体的生长发育，还能起到一些特殊的生理功能，其中低聚肽具有很强的降低血液胆固醇、抑制血管紧张素转化酶活力、抑制大肠癌发生、抑制胆结石形成、抗菌、抗氧化以及增强人体免疫力、促进矿物质吸收等多种蛋白质与氨基酸不具备的生理活性功能，故在食品、生物、医用等行业具有广阔的应用价值。
虽然苦荞多肽具有多种生物活性，但是将其配制成溶液略带些苦味，入口味道不佳，故市场上苦荞多肽的成品少之又少。近年来玫瑰茶因其风味独特、酸甜可口、还具有美容养颜的功效而拥有广阔的市场，但是市场上的玫瑰味饮品稍有涩味，还不能被大多数青年消费者所接受。
因此，有必要提供一种既含有玫瑰和苦荞多肽的生物活性成分，又能改善多肽自身的苦味的功能性口服液。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种玫瑰苦荞多肽口服液，结合了玫瑰独特的味道和苦荞多肽易被人体直接吸收的特点，既具有促进肠道消化，具有通肠润便，预防肠癌等功效，又改善了苦荞多肽的原有的苦味，能够作为食品、保健食品、特殊医学用途配方食品使用。
本发明所提供的玫瑰苦荞多肽口服液，由苦荞多肽粉和玫瑰花于水中复配得到；
每100ml所述玫瑰苦荞多肽口服液的组成如下：
苦荞多肽粉1～10g；
玫瑰花1～3g；
余量的水。
具体地，每100ml所述玫瑰苦荞多肽口服液的组成如下：
1)苦荞多肽粉3～4.5g；玫瑰花1.5g；余量的水；
2)苦荞多肽粉3g；玫瑰花1.5g；余量的水；
3)苦荞多肽粉4.0g；玫瑰花1.5g；余量的水.
所述苦荞多肽粉的粒度为80～100目；
所述玫瑰花为金边玫瑰花，优选玫瑰干花(山东济南平阴县)。
本发明玫瑰苦荞多肽口服液还包括甜味剂；
所述甜味剂包括甘氨酸、木糖醇和蜂蜜；
每100ml所述玫瑰苦荞多肽口服液中，所述甜味剂的添加量如下：
蜂蜜1～2g木糖醇0.1～0.4g甘氨酸0.4～1.0g。
具体地，所述玫瑰苦荞多肽口服液为下述1)-4)中任一种：
1)每100ml所述玫瑰苦荞多肽口服液的组成如下：
苦荞多肽粉3～4.5g；玫瑰花1.5g；甘氨酸0.4～0.7g；木糖醇0.1～0.4g；蜂蜜0.6～1.2g；余量的水；
2)每100ml所述玫瑰苦荞多肽口服液的组成如下：
苦荞多肽粉3g；玫瑰花1.5g；甘氨酸0.6g；木糖醇0.3g；蜂蜜0.8g；余量的水；
3)每100ml所述玫瑰苦荞多肽口服液的组成如下：
苦荞多肽粉4.0g；玫瑰花1.5g；甘氨酸0.4g；木糖醇0.3g；蜂蜜1.2g；余量的水；
4)每100ml所述玫瑰苦荞多肽口服液的组成如下：
苦荞多肽粉4.0g；玫瑰花1.5g；甘氨酸0.7g；木糖醇0.2g；蜂蜜0.8g；余量的水。
本发明还提供了所述玫瑰苦荞多肽口服液的制备方法，包括如下步骤：
1)苦荞籽粒脱麸处理并粉碎得到苦荞粉；
2)所述苦荞粉经脱脂处理后进行蛋白提取得到苦荞蛋白粉；
3)所述苦荞蛋白进行固态发酵，所得苦荞多肽基质经复溶后离心处理，最后经浓缩冷冻干燥得到苦荞多肽粉；
4)冲泡玫瑰花得到玫瑰茶汤；
5)向所述玫瑰茶汤中加入所述苦荞多肽粉和所述甜味剂，搅拌即得。
上述的制备方法中，步骤2)中，所述脱脂处理的条件如下：
溶剂为石油醚；料液比为1：5～10g/ml，具体可为5g/ml；时间为36～56h，具体为48h；
所述脱脂处理可在通风橱中进行；之后在通风橱中通风晾干12h。
上述的制备方法中，步骤2)中，所述蛋白提取的步骤如下：
经所述脱脂处理后的所述苦荞粉加入至naoh水溶液中进行搅拌提取，然后离心收集上清液；向所述上清液中加入hcl水溶液调节ph值至4.3～4.5，离心收集沉淀；
所述naoh水溶液的ph值为10～11，优选为10；
所述苦荞粉与所述naoh水溶液的配比为：1g：1～10ml；
所述搅拌提取的温度为40～50℃，时间为0.5～1h；
所述hcl水溶液的摩尔浓度为0.05～0.1mol/l；
采用去离子水洗涤所述沉淀至中性。
上述的制备方法中，步骤3)中，所述固态发酵的步骤如下：
向经灭菌后的所述苦荞蛋白粉中加入磷酸氢二钾、葡萄糖和水，然后加入植物乳杆菌种子液进行发酵；
所述植物乳杆菌种子液按照下述方法制备得到：将植物乳杆菌接种于mas液体培养基中进行培养；所述培养的温度为28～30℃，时间为18～24h；
所述mas液体培养基的组成如下：
牛肉膏10g，胰蛋白胨10g，酵母浸粉5.0g，柠檬酸二胺2.0g，葡萄糖20g，吐温801ml，乙酸钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，水定容至1l，ph6.5～6.8。
所述苦荞蛋白粉的灭菌条件为：高压灭菌锅中121℃灭菌15～30min，冷却至室温；
所述磷酸氢二钾的添加量为所述苦荞蛋白粉质量的1～2％，优选2.0％；
所述葡萄糖的添加量为所述苦荞蛋白粉质量的2～3％，优选2.5％；
所述水与所述苦荞蛋白粉的配比为：2～4ml：1g，优选3ml：1g；
所述植物乳杆菌种子液的添加量为所述苦荞蛋白粉质量的5～15％，优选10％；
所述发酵的时间为36～56h，优选48h。
上述的制备方法中，步骤3)中，所述复溶的步骤如下：
向所述苦荞多肽基质中加入5～10倍体积的水，具体可为10倍，进行超声提取；然后煮沸后进行离心处理。
上述的制备方法中，步骤4)中，所述冲泡的步骤如下：
向沸水中加入玫瑰花，恒温泡制3～6min，具体可为3min。
本发明方法制备的苦荞多肽口服液罐装成瓶，密封，高压灭菌，冷却，得到成品。
本发明提供的玫瑰苦荞多肽口服液，成分简单，不仅丰富了口服液的种类，而且在促进肠道蠕动，治疗便秘、改善人体内分泌失调，及降血压、降血脂、抗肠癌等方面都有功效。本发明通过固态发酵法制备苦荞多肽避免了酶解法制备苦荞多肽产生过多的苦味，通过加入玫瑰茶、甘氨酸、木糖醇、蜂蜜等原料来掩盖苦荞多肽的苦味，以获得口感更佳的苦荞多肽口服液。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、玫瑰苦荞多肽口服液
(1)苦荞去麸：将苦荞籽粒倒入去麸皮机进行脱壳处理，之后用中草药专业粉碎机将苦荞米粉碎至60目。
(2)苦荞粉脱脂：用石油醚对苦荞粉进行脱脂(料液比为1：10，g/ml)，在通风橱中常温连续搅拌脱脂12h。之后在通风橱中通风晾干12h。
(3)蛋白提取：取100g脱脂苦荞粉(60目)，加入到ph为10.0的naoh溶液中(料液比为1:10，g/ml)，45℃恒温下搅拌提取1h，4000r/min离心10min，收集上清液，沉淀重复提取一次，上清液合并后加入0.05mol/lhcl调节ph4.5，离心，沉淀用去离子水洗至中性，冷冻干燥。
(4)脱脂苦荞粉固态发酵：取适量苦荞蛋白冻干粉在高压灭菌锅中121℃灭菌15～30min，冷却至室温，待用；将植物乳杆菌(lactobacillusplantarum，atcc14917：中国普通微生物菌种保藏中心)接种mas液体培养基，培养温度为28～30℃，耗氧培养18～24h，活化完成后低温保存待用；在无菌操作台操作，在已灭菌的苦荞蛋白中，加入2％磷酸氢二钾，2.5％葡萄糖，用无菌水调节固液比3:1(g/ml)，然后加入植物乳杆菌种子液(添加量10％)发酵48h。
(5)多肽粉制备：加入三倍体积蒸馏水摇匀，800w，30℃超声提取30min，然后100℃煮沸5min(灭植物乳杆菌)，8000r/min离心取上清液，浓缩后冷冻干燥备用。
(6)玫瑰茶汤制备：称取100ml的沸水，加入1.5g的玫瑰花，恒温泡制3min，得到玫瑰茶汤。
(7)玫瑰苦荞多肽口服液制备：向上述100ml玫瑰茶汤中后加入苦荞多肽粉3g、甘氨酸0.6g、木糖醇0.3g、蜂蜜0.8g。均质，罐装成瓶，密封，高压灭菌，冷却，得到成品。
(8)装盒：以每盒6瓶，每瓶25g，每盒共150g进行包装。
(9)测得成品口感微甜，香气较好，具有一定的促进肠道消化，治疗便秘、预防肠癌的功效。
二、玫瑰苦荞多肽口服液主辅剂配比的确定
将煮制好的玫瑰茶汤中按不同比例添加苦荞多肽粉与甘氨酸、木糖醇、蜂蜜配成具有不同保健功效的玫瑰苦荞多肽口服液，以每瓶25ml成品，通过感官指标进行产品综合评定，见表1。
玫瑰苦荞多肽口服液按照三个方面进行评定：香味(10分)、外观色泽(10分)、口感(10分)，总分(30分)。
表1玫瑰苦荞多肽口服液用料配比确定感官评定
经过感官评定(见表1)，由以上数据可见，在玫瑰茶汤中添加辅料的重量比例在苦荞多肽粉3.0～4.5g、甘氨酸0.4～0.7g、木糖醇0.1～0.4g、蜂蜜0.6～1.2g之间时，感官评价的总分均可以达到20分以上，根据数据选择玫瑰苦荞多肽口服液调配的最佳工艺配方比为苦荞多肽粉：甘氨酸：木糖醇：蜂蜜＝3.0：0.6：0.3：0.8；口感：微甜带酸，有特殊的玫瑰香甜味，而且其具有一定的促进肠道消化，改善便秘的功效。
为证实本发明的功效，对表中序号为11的玫瑰苦荞多肽口服液进行了如下实验。
1、实验材料
1.1受试物及主要试剂
1.1.1受试品
玫瑰苦荞多肽口服液，理化性质：金黄色澄清液体，每瓶玫瑰苦荞多肽口服液体积为25ml，口服液中多肽含量为3％(多肽0.75g)，临用前用蒸馏水配制成100，300，600mg/kg玫瑰苦荞多肽口服液剂量组。
1.1.2对照品
阴性对照品：复方地芬诺酯(每片含盐酸地芬诺酯2.5mg，硫酸阿托品25μg)；生产单位：常州康普药业有限公司；批号：h32022716。配制方法：临用前用蒸馏水配成5，10，20，30，40，50mg/kg复方地芬诺酯剂量组。
阳性对照品：枸橼酸莫沙必利片；生产单位：江苏豪森药业集团有限公司；批号：h19990315。配制方法：临用前用蒸馏水配成5，10，20，30，40，50mg/kg枸橼酸莫沙必利片剂量组。
1.2试验动物
spf级小鼠160只(5周龄，体质量28～32g，昆明纯种，雌雄各半)，购自于北京农学院动物实验中心。小鼠进行1周适应性饲养，自由饮水采食，普通饲料喂养；饲养温度(23±2)℃，相对湿度：25％～55％，光照：12/24h。)
1.3试验仪器
电子天平，奥豪斯仪器(上海)有限公司，型号：ar124cn；恒温鼓风干燥箱，上海精宏仪器厂，型号：dhg-9030a；测量工具：1ml注射器，10号灌胃针，手术器械，秒表等本实验室保存。
1.3样品溶液的配制
复方地芬诺酯混悬液制备(2g/l)：取复方地芬诺酯片16片，溶于20ml水中，超声30min，当天使用。活性炭混悬液制备：将100g阿拉伯树胶粉溶于400ml蒸馏水中，配成25％的透明溶液，再加入50g活性碳粉，煮沸3次，用蒸馏水定容至500ml，4℃冷藏，用前混匀。玫瑰苦荞多肽口服液，用蒸馏水稀释即可使用，可保存于4℃冰箱备用，用前30℃水浴处理。莫沙必利悬液制备(0.2g/l)：取枸橼酸莫沙必利片1片，溶于25ml水中，超声30min，当天使用。
2、实验方法
2.1实验标记
便秘造模分组：将84只小鼠随机分为7组，分别为空白对照组12只，复方地芬诺酯5，10，20，30，40，50mg/kg剂量组各12只，按标示的剂量灌胃，2次/d，连续考察7d；
试验动物分组：将72只便秘小鼠随机分成6组，分别为空白对照组12只，复方地芬诺酯模型阳性对照组12只，莫沙必利组12只，苦荞多肽口服液治疗组(剂量：100，300，600mg/kg)各12只。试验期间正常给水喂食。
试验笼子的标记方法：分组后，用不同颜色笼卡进行组别区分，并注明组别、试验编号、供试品名称、供试品浓度、动物号、性别等信息。
表2便秘实验动物的分组识别
2.2试验分组
2.2.1剂量设计依据
根据玫瑰苦荞多肽口服液中多肽最大配制浓度3％作为药效学研究的最高给药浓度，中、低组分别为2％和1％的浓度，给药体积均为10ml/kg，给药剂量分别为0.6g/kg、0.3g/kg、0.1g/kg。
22.2给药途径及次数
给药途径：依据拟临床给药途径，采用灌胃给药。治疗便秘实验每天给药2次，连续给药7d，期间每天监测排便情况。
2.3实验步骤
2.3.1复方地芬诺酯便秘模型的量－效关系考察
小鼠禁食不禁水16h，复方地芬诺酯组(剂量：5，10，20，30，40，50mg/kg)小鼠给予相应剂量药物灌胃，空白对照组给予等量生理盐水灌胃；30min后，所有试验小鼠给予活性炭混悬液(0.3ml)灌胃。记录首粒黑便时间、8h内排便粒数和质量及每粒粪便质量，连续灌胃5d，考察便秘模型的稳定性，选择复方地芬诺酯便秘模型的最佳给药剂量。
2.3.2玫瑰苦荞多肽口服液对便秘小鼠的量－效关系考察
便秘小鼠自由饮水采食，玫瑰苦荞多肽口服液组(剂量：100，300，600mg/kg)小鼠给予相应药物剂量灌胃，莫沙必利组给予莫沙必利悬液灌胃(1.875mg/kg)，空白组和模型对照组给予等量生理盐水灌胃，30min后，全部试验小鼠给予活性炭混悬液(0.3ml)灌胃。1次/d，连续给药7d，在此期间，记取单只小鼠首便时间、每天的排便粒数和质量及小鼠体质量变化情况。
2.3.3小肠运动试验
小鼠禁食不禁水饲养16h，玫瑰苦荞多肽口服液组和莫沙必利组小鼠给予相应药物灌胃，空白对照组和复方地芬诺酯组给予等量生理盐水灌胃，30min后，全部试验小鼠给予活性炭混悬液(0.3ml)灌胃，活性炭混悬液灌胃30min后，将小鼠全部处死，剪取幽门至下端盲肠处的小肠，平铺至直线。测量小肠长度(即小肠全长)及其幽门到活性炭运动前端的长度(即活性炭推进长度)，计算小肠推进率。小肠推进率(％)＝(活性炭推进长度/小肠全长)×100％。
3、实验结果
复方地芬诺酯便秘模型的量－效关系及稳定性试验结果，试验小鼠每粒粪便质量与复方地芬诺酯给药剂量存在相关性，符合公式：y＝-2.533x10-6x2-2.931x10-4x+0.05130(r2＝0.98200)，复方地芬诺酯给药剂量越大，小鼠每粒粪便质量则越轻。与空白对照组相比，20，30，40，50mg/kg剂量的复方地芬诺酯组小鼠的排便粒数(20mg/kg：p＝0.021；30，40，50mg/kg∶p＜0.01)明显减少，粪便总质量(10mg/kg：p＝0.023；20，30，40，50mg/kg：p＝0.000)和每粒粪便质量(30mg/kg：p＝0.024；40mg/kg：p＝0.005；50mg/kg：p＝0.000)明显降低以及首粒黑便时间(p＝0.000)明显延长，建模成功。但由于需要较长时间来验证药物效果，故需考虑便秘模型的稳定性，由表3可知，20mg/kg剂量的复方地芬诺酯组小鼠便秘模型不稳定，40mg/kg剂量的复方地芬诺酯组小鼠腹胀明显，而50mg/kg剂量的复方地芬诺酯组小鼠便秘模型容易死亡，故选择30mg/kg的剂量作为造模剂量。结果见表3-4。
表3复方地芬诺酯(dc)便秘模型的量－效关系(±s，n＝10)
注：与空白组对比*p<0.05，**p<0.01
表4复方地芬诺酯(dc)便秘模型的量－效关系(
注：与模型对照组对比*p<0.05，**p<0.01，与莫沙必利组对比δp<0.05，δδp<0.01
以上具体实施证明：综合口感以及治疗便秘试验来考虑，本发明方法制备的口服液拥有较好的保健作用。