一种高活菌发酵乳杆菌DALI02发酵液的制备方法

一种高活菌发酵乳杆菌dali02发酵液的制备方法
技术领域
1.本发明涉及一种高活菌发酵乳杆菌dali02发酵液的制备方法，属于功能食品领域。


背景技术：

2.大量研究证明了肠道微生物群影响着人体健康。肠道微生物群落结构中的生物失调与多种肠道疾病和代谢紊乱有关，如炎症性肠病、糖尿病和肥胖症。在这方面，益生菌和益生元作为微生物群调节剂的作用已被广泛用于治疗和预防疾病。益生菌被定义为“当以足够的量摄入时，能给宿主带来健康益处的活微生物”，而益生元是“被宿主微生物选择性利用并带来健康益处的底物”。另一方面，益生元是不可存活的底物，作为宿主所含有益微生物的营养物质，包括施用的益生菌菌株和常驻微生物。在益生元的最新定义中，预计它可以通过活宿主微生物的选择性利用，引发任何宿主微生物生态系统的变化，而不仅仅是肠道。
3.益生菌对于人体健康有着重要的意义，现代人由于身体劳累、运动不足、工作压力、饮食作息不规律等会导致机体免疫力下降，表现出一种亚健康状态，免疫力低下会使机体容易受病原菌等有害物质入侵，导致感冒及其它疾病的发生，提高免疫力的有效途径是注意饮食均衡，合理搭配各种营养成分，以及摄入高活菌型微生态制剂、发酵乳制品等营养保健品。


技术实现要素：

4.本发明的目的就是针对上述现有问题，提供了一种高活菌发酵乳杆菌dali02发酵液的制备方法。
5.本发明的目的是这样实现的：一种高活菌发酵乳杆菌dali02发酵液的制备方法，其特征在于，在乳清蛋白水解液中添加复合低聚糖搅拌混匀，经热处理、冷却后，再接种发酵乳杆菌dali02发酵剂后，经发酵后，得到高活菌发酵乳杆菌dali02发酵液；所述乳清蛋白水解液的制备方法为：将乳清蛋白粉溶于50℃的水中，用0.1 mol/l的naoh调节ph为6~8时，经杀菌后，冷却至60~70℃，添加木瓜蛋白酶，其中，乳清蛋白粉添加量占乳清水解液的8%~12%w/w，加酶量为2000~8000 u/g，水解温度为60~70℃，酶解时间为2~5h，水解度为10%~30%，经离心灭酶后，于90~95℃进行灭菌3~5 min，冷却得到乳清蛋白水解液；所述复合低聚糖由低聚果糖、低聚半乳糖、菊粉、水苏糖、低聚木糖充分混均后得到，其中，低聚果糖占乳清水解液的0.1%~0.4%w/w，低聚半乳糖占乳清水解液的1.0%~2.0%w/w，菊粉占乳清水解液的1.0%~2.0%w/w ，水苏糖占乳清水解液的1.0%~2.0%w/w，低聚木糖占乳清水解液的0.2%~0.7%w/w；所述发酵乳杆菌dali02发酵剂制备方法为：将发酵乳杆菌dali02的1代菌株按3%接种量接种于mrs液体培养基，置于37℃培养
箱培养18 h，得到发酵乳杆菌dali02发酵剂；其中，mrs液体培养基配置时，将大豆蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、酵母膏5 g、葡萄糖20 g、tweeen 80 1 ml、磷酸二氢钠2 g、无水乙酸钠5 g、柠檬酸三胺2 g、硫酸锰0.02 g、硫酸镁 0.1 g加入蒸馏水1l，调节ph至6.2左右，121℃、15 min灭菌，得到mrs液体培养基。
6.复合低聚糖添加到酶解乳清水解液中，热处理后，接种2%~5%的发酵乳杆菌dali02发酵剂，经37℃培养18~28 h制备而成，得到高活菌发酵乳杆菌dali02发酵液。
7.所述发酵乳杆菌dali02（lactobacillus fermentum dali02）在2018年7月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物探究所，保藏号为cgmcc no.16064。
8.所述高活菌发酵乳杆菌dali02发酵液的制备方法可以用于发酵乳饮料、活菌制剂产品形式。
9.本发明方法先进科学，通过本发明，提供的一种高活菌发酵乳杆菌dali02发酵液的制备方法，将发酵乳杆菌dali02与复合低聚糖进行结合，在乳清蛋白水解液中进行发酵，将益生元、益生菌与乳清水解液进行紧密结合，得到高活菌数的发酵乳杆菌dali02乳清发酵液，可用于具有高活菌数的发酵乳饮料、活菌制剂等食品、功能性食品与药品的生产。
10.相关培养基配方：1、mrs液体培养基：大豆蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、酵母膏5 g、葡萄糖20 g、tweeen 80 1 ml、磷酸二氢钠2 g、无水乙酸钠5 g、柠檬酸三胺2 g、硫酸锰0.02 g、硫酸镁 0.1 g，蒸馏水1l，调节ph至6.2左右，121℃、15 min灭菌。
11.2、mrs固体培养基：大豆蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、酵母膏5 g、葡萄糖20 g、tweeen 80 1 ml、磷酸二氢钠2 g、无水乙酸钠5 g、柠檬酸三胺2 g、硫酸锰0.02 g、硫酸镁 0.1 g，琼脂15 g，蒸馏水1 l，调节ph至6.2左右，121℃、15 min灭菌。
12.具体步骤：1、菌株的活化传代；发酵乳杆菌dali02：将1代菌株按3%接种量接种于mrs液体培养基，置于37℃培养箱培养18 h，备用。
13.2、乳清蛋白水解液的制备将8%~12%的乳清蛋白粉溶于50℃的水中，用0.1 mol/l的naoh调节ph为6~8时，经常规杀菌后，冷却至60~70℃，添加木瓜蛋白酶，加酶量为2000~8000 u/g，水解温度为60~70℃，酶解时间为2~5 h，控制水解度为10%~30%，在90~95℃/3~5 min进行灭酶，离心后取上清液备用。
14.3、发酵原料的制备向乳清蛋白水解液中添加复合低聚糖，复合低聚糖添加量按乳清蛋白水解液的量添加为0.1%~0.4%低聚果糖、1.0%~2.0%低聚半乳糖、1.0%~2.0%菊粉、1.0%~2.0%水苏糖、0.2%~0.7%低聚木糖，充分混匀后，备用。
15.4、 原料热处理与发酵经105℃热处理5~10 min后，接种2%~5%的二代发酵乳杆菌dali02发酵剂，将其放置37℃培养18~28 h。
16.总上，通过本发明，该方法是通过发酵乳杆菌dali02结合复合低聚糖（低聚果糖、
低聚半乳糖、菊粉、水苏糖、低聚木糖）在乳清蛋白水解液中进行发酵，将益生元、益生菌与乳清水解液进行紧密结合，得到高活菌数的发酵乳杆菌dali02乳清发酵液，该发酵乳杆菌可用于具有高活菌数的发酵乳、发酵乳饮料等食品、功能性食品与药品的生产。
附图说明
17.图1为发酵乳杆菌dali02在不同浓度低聚糖乳清发酵液中的活菌数；图2为发酵乳杆菌dali02在含不同浓度低聚糖乳清发酵液中的生长曲线（a：低聚果糖 b：低聚半乳糖 c：菊粉 d：水苏糖 e：低聚木糖）。
具体实施方式
18.下面结合附图以及附图说明对本发明做进一步说明。
19.实施例1：利用发酵乳杆菌dali02制备高活性合生元发酵液；在乳清蛋白水解液中，添加0.3%低聚果糖、1.2%低聚半乳糖、2.0%菊粉、1.5%水苏糖、0.4%低聚木糖，搅拌混匀后，95℃热处理8min，冷却至37℃，接种4%发酵乳杆菌dali02发酵剂，在37℃下发酵20h，冷却，采用无菌灌装，制备具有高活性的合生元发酵液。该产品中活菌数（采用mrs固体培养基计数）相较未添加复合低聚糖的发酵液提高了6.59倍（附图1）。
20.实施例2：利用发酵乳杆菌dali02制备益生菌冻干粉；在乳清蛋白水解液中，添加0..4%低聚果糖、1.0%低聚半乳糖、2.0%菊粉、1.0%水苏糖、0.3%低聚木糖，搅拌混匀后，95℃热处理5 min，冷却至37℃，按3%接种量接入发酵乳杆菌dali02发酵剂，在37℃下发酵22 h，冷却离心，真空冻干至含水量小于3%，此为具有高活菌的益生菌冻干粉。
21.实施例1、2中的乳清蛋白水解液的制备方法为：将8%~12%的乳清蛋白粉溶于50℃的水中，用0.1 mol/l的naoh调节ph为6~8时，经常规杀菌后，冷却至60~70℃，添加木瓜蛋白酶，加酶量为2000~8000 u/g，水解温度为60~70℃，酶解时间为2~5 h，控制水解度为10%~30%，在90~95℃/3~5 min进行灭酶，离心后取上清液备用。
22.将发酵乳杆菌dali02的1代菌株按3%接种量接种于mrs液体培养基，置于37℃培养箱培养18 h，得到发酵乳杆菌dali02发酵剂；其中，mrs液体培养基配置时，将大豆蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、酵母膏5 g、葡萄糖20 g、tweeen 80 1 ml、磷酸二氢钠2 g、无水乙酸钠5 g、柠檬酸三胺2 g、硫酸锰0.02 g、硫酸镁 0.1 g加入蒸馏水1l，调节ph至6.2左右，121℃、15 min灭菌，得到mrs液体培养基。
23.所述发酵乳杆菌dali02（lactobacillus fermentum dali02）在2018年7月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物探究所，保藏号为cgmcc no.16064。
24.本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的保护范围。