基因工程鱼生长激素在水产养殖中的应用的制作方法

专利名称：基因工程鱼生长激素在水产养殖中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物工程和水产养殖领域，更具体地，本发明涉及一种新的鱼生长激素，其制法，以及其在水产养殖中的应用。
我国水产品生产以前是以海淡水捕捞为主，70年代开始提倡发展海淡水养殖，加之海洋捕捞资源衰退，目前水产养殖业在水产业中占有重要地位。90年代海淡水养殖得到迅猛发展。目前我国我国水产品海淡水养殖的总量已跃居世界首位。主要养殖品种有对虾，沼虾、甲鱼，河蟹，淡水鱼等等。由于社会对水产品具有很大的需求量，水产养殖业己成为国民经济中不可缺少的一部分。以近十年来发展趋势看，它将是21世纪的一个有前途的发展产业。
国内外对鱼类生长激素的研究始于八十年代，其体内代谢，分泌调控及作用机制的研究为鱼类生长激素应用于水产养殖提供了理论基础，八十年代后期，随着分子生物学研究技术的发展，许多鱼类生长激素基因被克隆，使采用基因工程技术制备鱼类生长激素并应用于水产养殖成为可能。主要研究进展有建立了放射免疫测定和酶联免疫吸附测定等高灵敏度的鱼类生长激素检测方法；对多种鱼类的生长激素体内代谢动力学的研究表明，外源生长激素不会在鱼体内产生积累；鱼类生长激素的分泌调控主要受下丘脑分泌的生长激素释放因子和释放抑制因子的双重调节；已有几十种鱼类生长激素基因被分离、克隆、表达与序列分析。目前对鱼类生长激素的作用机制的研究，包括鱼类生长激素受体研究，生长激素对鱼类的渗透调控原理，口服外源生长激素的作用方式，都有比较清楚的阐明。
采用基因工程技术表达鱼类生长激素，利用鱼生长激素促进鱼类生长的研究在国内外均有报道，国外研究鱼类生长激素的目的偏重于其作用机制和生理效应的阐明，国内研究单位较多偏重于鱼类生长激素在水产养殖上的应用。然而，尚没有将基因工程的鱼生长激素制剂大规模有效地用于水产养殖的报道。因此，本领域迫切需要对多种水产养殖品有刺激生长作用的新生长激素。此外，本领域还迫切需要高效和/或低成本地生产该类生长激素的方法。
本发明的目的是提供一种新的生长激素-鲢鱼生长激素(简称为“fGH”)，它对多种鱼类、虾类、蟹类和甲鱼等有显著的刺激生长的作用。
本发明的另一目的是提供一种高效和/或低成本地生产该鲢鱼生长激素的方法。
本发明的另一目的是提供一种含有上述鲢鱼生长激素的促进生长的制剂。
在本发明的第一方面，本发明提供了一种分离的鲢鱼生长激素，它具有如下所示的氨基酸序列ATGTCAGAGAACCAGCGGCTCTTCAACAACGCAGTCATCCGTGTTCAACACCTGCACCAG 60MetSerGluAsnGlnArgLeuPheAsnAsnAlaValIleArgValGlnHisLeuMisGlnCTGGCTGCAAAAATGATTAACGACTTTGAGGACAACCTGTTGCCTGAGGAACGCAGACAG 120LeuAlaAlaLysMetIleAsnAspPheGluAspAsnLeuLeuProGluGluArgArgGlnCTGAGTAAAATCTTTCCTCTGTCTTTCTGCAACTCTGACTCCATTGAGGCGCCCACTGGA 180LeuSerLysIlePheProLeuSerPheCysAsnSerAspSerIleGluAlaProThrGlyAAAGATGAAACGCAGAAGAGCTCTATGTTGAAGCTCCTTCGCATCTCTTTCCGCCTCATT 240LysAspGluThrGlnLysSerSerMetLeuLysLeuLeuArgIleSerPheArgLeuIleGAGTCCTGGGAGTTCCCCAGCCAGACCCTGAGCGGAGCCGTCTCAAACAGCTTGACCGTC 300GluSerTrpGluPheProSerGlnThrLeuSerGlyAlaValSerAsnSerLeuThrValGGTAACCCCAACCAGATCACTGAGAAGCTGGCCGACTTGAAAGTGGGCATCAGCGTGCTC 360GlyAsnProAsnGlnIleThrGluLysLeuAlaAspLeuLysValGlyIleSerValLeuATCAAGGGATGTCTGGATGGTCAACCAAACATGGATGATAACGACTCCCTGCCGCTGCCT 420IleLysGlyCysLeuAspGlyGlnProAsnMetAspAspAsnAspSerLeuProLeuProTTTGAGGATTTCTACTTGACCATGGGGGAGAGCGACCTCAGAGAGAGCTTTCGTCTTCTG 480PheGluAspPheTyrLeuThrMetGlyGluSerAspLeuArgGluSerPheArgLeuLeuGCTTGCTTCAAGAAGGACATGCACAAGGTGGAAACTTACCTAAGGGTTGCAAATTGCAGG 540AlaCysPheLysLysAspMetHisLysValGluThrTyrLeuArgValAlaAsnCysArgAGATCCCTGGATTCAAACTGCACCCTGTAG570ArgSerLeuAspSerAsnCysThrLeu*** 。
在本发明的第二方面，提供了一种分离的DNA序列，它编码本发明的鲢鱼生长激素。本发明还提供了含有所述DNA序列的表达载体，以及含有所述表达载体的转化的宿主细胞。较佳地，该宿主细胞是大肠杆菌。
在本发明的第三方面，提供了一种生产鲢鱼生长激素的方法，它包括步骤(a)在适合表达鲢鱼生长激素的条件下，培养权利要求3所述的转化的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有鲢鱼生长激素。
在本发明的一个实例中，分离步骤(b)是如下进行的离心收集菌体；
破碎菌体；收集包涵体；洗涤包涵体；溶解包涵体；和透析复性。
在本发明的另一实例中，该方法还包括在透析复性之后，对复性后的鲢鱼生长激素进行DEAE-Sepherose柱层析；用G-25 Sepharose脱盐；再经C8柱HPLC反向层析，从而进一步纯化鲢鱼生长激素。
在本发明的第四方面，提供了一种用于水产养殖的生长促进制剂，它含有本发明的鲢鱼生长激素作为主要成分，以及水产养殖上可接受的载体。较佳地，该鲢鱼生长激素是通过重组的鲢鱼生长激素。
本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
在附图中，

图1显示了获得鲢鱼生长激素产品的技术路线。
图2是质粒pET-5a(Novagen公司产品)的结构。
图3显示了鲢鱼生长激素的核苷酸序列和氨基酸序列。
图4显示了质粒pUC18fGH、pET-5F612和pET-5F567的构建过程。
本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。
如本发明所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。
如本文所用，“分离的鲢鱼生长激素”是指鲢鱼生长激素基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化鲢鱼生长激素。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。鲢鱼生长激素多肽的纯度能用氨基酸序列分析。
本发明提供了一种新的多肽—鲢鱼生长激素，它具有图3所示的氨基酸序列。本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明的鲢鱼生长激素核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。
一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或直接用TLP23编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。
在本发明中，术语“宿主细胞”包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞，昆虫细胞、和哺乳动物细胞。较佳地，该宿主细胞是大肠杆菌。
在本发明中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体，例如pUC，pET-5a等。
在本发明的一个实施例中，首先，本发明的发明人在分析了已知的生长激素基因序列后，用RT-PCR方法从鲢鱼的脑垂体中得到了鲢鱼生长激素基因的cDNA，并构建了含T7启动子的重组表达质粒pET-5F567，转化大肠杆菌BL21(DE3)，完成了基因工程菌的构建，表达的重组鲢鱼生长激素蛋白占细胞总蛋白的20％以上，达到了比较高的基因表达水平。
然后，本发明人建立了用大肠杆菌表达系统制备重组鲢鱼生长激素的技术。即通过高密度发酵技术，使单位体积发酵液中的外源蛋白表达量保持稳定的技术，发酵密度为A600＝30，表达量为600mg/L。建立了包括菌体破碎，包涵体收集、洗涤，包涵体溶解，蛋白质复性、纯化和冻干等步骤的鲢鱼生长激素的制备技术。
再次，发展了将重组鲢鱼生长激素用于水产品养殖的方法。通过实验，掌握了使用鲢鱼生长激素，提高水产品养殖产量的方法。使鲢鱼生长激素的使用范围扩大，不仅仅适用于鱼类养殖，也适用于虾，蟹，鳖类的养殖。
本发明的的鲢鱼生长激素，可广泛用于水产养殖，应用范围包括鱼类，虾类，蟹类和鳖等。鱼类生长激素能够促进鱼体蛋白质的合成，产生正氮平衡，提高肝脏或肌肉细胞对氨基酸的吸收率和RNA的合成率，达到提高食物的转化率，从而促进鱼体生长的目的。外源生长激素在鱼体内不会产生积累，并能够增加鱼体蛋白质的合成、增强鱼体对饵料中必需氨基酸的吸收，提高鱼肝脏脂肪分解酶活力，促进脂肪的分解以作为能量物质促进鱼体生长。改变我国现有水产养殖的面貌，发展出先进的水产养殖技术，缩短水产品养殖周期，提高产量，提高水产养殖的效益。为社会提供优质水产品。满足社会需求具有重大意义。
本发明还提供了用基因工程生产的鲢鱼生长激素和含该鲢鱼生长激素的、用于水产养殖的生长促进制剂。它含有本发明的鲢鱼生长激素作为主要成分，以及水产养殖上可接受的载体。在本发明的一个实施例中，在大肠杆菌系统高效表达了基因工程鲢鱼生长激素。经过基因工程菌发酵，破碎菌体，包涵体收集、洗涤和溶解，重组蛋白复性，离子交换柱层析纯化等工艺，获得了能满足用于水产养殖的质量要求的基因工程鲢鱼生长激素。该产品为易溶于水的白色固体粉剂，在常温下稳定，保质期为六个月。
如本文所用，“水产养殖上可接受的载体”指在水产养殖业中常规采用的各种对鱼、虾等水产动物无毒、无害的物质。适用于本发明的水产养殖上可接受的载体包括(但并不限于)水、缓冲液(如Tris-HCl缓冲液)、饵料等。在制得的用于水产养殖的生长促进制剂中，鲢鱼生长激素的含量没有特别限制。例如对于未稀释型产品，本发明鲢鱼生长激素的含量可高至95％，通常为10-90％，较佳地30-80％(重量)。对于直接使用的制剂(如含鲢鱼生长激素的饵料)，鲢鱼生长激素的含量可低至0.001％，通常为0.001-5％，较佳地为0.01-1％(重量)。
研究表明使用鲢鱼生长激素后，对养殖对象无任何毒副作用并不在其体内残留，对养殖对象肌肉中蛋白质，脂肪，氨基酸等组分也不产生化学异质性。委托上海浦东现代农业开发有限公司，东海水产研究所养殖场，苏州市华夏甲鱼养殖技术研究所，江苏省太湖渔业生产管理委员等通过浸泡处理和饵料饲喂的方法对基因工程鲢鱼生长激素进行促生长效应测试，试验对象有金鱼，锦鲤，鳜鱼，对虾，河鳗、中华鳖、中华绒螯蟹等。试验结果表明使用鱼生长激素能明显加快个体的生长速度，在相同的饲养时间段内平均增重10％-20％。
综上所述，本发明与国内外同类技术相比有以下特点，[1]鱼生长激素基因表达水平高，表达量占细胞总蛋白的20％以上。[2]在水产养殖中的使用范围比较广，可应用于金鱼，锦鲤，鳜鱼，对虾，河鳗、中华鳖、中华绒螯蟹等水产品的养殖。[3]使用方法简单易行，不对水生动物产生伤口或应激反应。[4]在基因工程鱼生长激素的制备工艺中，根据其应用于水产养殖的要求，充分考虑了经济合理的原则，制备成本较一般基因工程产品为低，预计其销售价格能够控制在较低的范围内。使用后对饲养成本增加不大，但收益增加十分可观，具有很好的推广应用前景。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New YorkCold SpringHarbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1鲢鱼生长激素(fGH)基因的制备及表达载体的构建用手术刀切开鲢鱼鱼头部位，在鱼脑底部一个小窝内可见一粒白色组织，这就是脑垂体，取出后立即冻入液氮中，-70C保存。
根据已知的银鲫生长激素基因的序列，设计并合成了两个引物引物(1)5’-TCGAATTCCTACAGGGTGCAGTTTGAAT-3’引物(2)5’-TCGGATCCACGGCCTCAGAGAACCAGCG-3’从冻存的脑垂体组织中提取出总mRNA，然后用引物(1)和(2)通过RT-PCR方法得到了约600bp左右的cDNA片段，经BamHI和EcoRI双酶切纯化后，在质粒pUC18相应的BamHI和EcoRI位点之间插入此片段，转化大肠杆菌DH5α宿主，得到质粒pUC18fGH(参见图4)。
从转化板上挑选白斑单克隆菌株进行酶切鉴定，选择正确的菌株进行序列测定，序列如图3所示。
与已知的银鲫序列比较，只有C端附近的一个Gly(GGG)改变为Glu(GAG)，其余氨基酸序列相同。
用BamHI和EcoRI将鲢鱼生长激素(fGH)基因从pUC18fGH上切下，将此片段插入用BamHI和EcoRI酶切的表达载体pET-5a(图2)的相应位点之间，就得到了带有6个融合肽表达的表达质粒pET-5F612，融合蛋白大小22.6kD(参见图4)。
为了进一步提高鲢鱼生长激素的表达，另行设计并合成了一个N端含NdeI位点的引物(3)5’-CCCATATGTCAGAGAACCAGCGGCTC-3’用引物(3)与原来已有的含EcoRI位点的引物(2)以pET-5F612为模板进行PCR扩增，得到的基因片段5’端有NdeI位点，3’端有EcoRI位点，将此片段的NdeI位点做成平端，EcoRI位点做成粘端，插入载体质粒pET-5a相应的NdeI和EcoRI位点之间，经测序证明，得到了不带融合肽的表达质粒pET-5F567(图4)。转入宿主大肠杆菌BL21(DE3)中，用IPTG诱导表达，表达产物大小为21kD左右，以包涵体形式出现，表达量占细胞总蛋白的20％以上。
实施例2鲢鱼生长激素基因在大肠杆菌中的高效表达和分离纯化从新鲜转化的Amp平板上挑取一个单克隆菌株，转接100mlLB摇瓶，37℃培养过夜，一级种子接入10L发酵罐基础培养基中，37℃培养，4小时后进入对数生长期，1mMIPTG诱导，半小时后开始连续补料30％胰化蛋白胨，30％酵母提取物，50％甘油，维持pH7.0左右。选择了高密度发酵的方法，提高了单位体积发酵液中的外源蛋白表达量，表达量基本稳定在600mg/L，发酵密度A600＝30。
将培养好的菌体发酵液于4℃，4000rpm，30min离心，收集菌体。用Tris-EDTA缓冲液充分悬浮菌体，于400公斤压力下匀浆破菌，循环匀浆两次至菌液不再粘稠，在此过程中保持低温冰浴。再次于4℃，8000rpm，20min离心，收集沉淀部分，洗涤数次，就得到了包涵体粗品。用超声波仪继续洗涤，包涵体的蛋白纯度为60％。
用8M的尿素溶液将包涵体充分溶解，进行透析复性，复性在4℃条件下进行48小时，其间10小时左右更换一次复性液。经离心去除不溶物，上清液为复性后的鲢鱼生长激素溶液，纯度80％以上。经冷冻干燥后保存。冻干样品可根据实际需要的浓度用水稀释使用，直接用于水产鱼苗，虾苗等的浸泡或饲料喂养。
实施例3
鲢鱼生长激素的鉴定复性后的鲢鱼生长激素溶液用DEAE-Sepherose柱层析纯化，收集蛋白单峰，纯度可达80％以上；用G-25Sepharose脱盐，再经C8柱HPLC反相层析，收集蛋白单峰，产品纯度达90％以上。纯品可用于质谱，蛋白序列等指标的鉴定。
质谱测定鲢鱼生长激素蛋白纯品的分子量为21,543道尔顿。
N端氨基酸序列测定鲢鱼生长激素蛋白样品的N端前16个氨基酸顺序为Met Ser Glu Asn Gln Arg Leu Phe Asn Asn Ala Val Ile Arg Val Gln。与预计的鲢鱼生长激素氨基酸序列(图3)相一致。
实施例4鲢鱼生长激素在水产养殖上的应用中科院上海生物工程研究中心在实验室饲养缸中对金鱼进行试验的结果为经鲢鱼生长激素浸泡的金鱼幼苗18个月后平均重量为410克，最大个体重量近600克，比对照组平均重量有明显增长。其它种类的水产品大田养殖委托有关单位开展的试验，结果如下[1]中国水产科学研究所东海水产研究所用鲢鱼生长激素对中华对虾和鳗鲡进行对比试验鲢鱼生长激素的使用方法用Tris-HCl缓冲液将鲢鱼生长激素配制成溶液，放置在低温下备用，每次投饵料前按每公斤配合饵料加20毫升鲢鱼生长激素溶液的比例，将饵料浸泡在鲢鱼生长激素溶液中5-10分钟，取出阴干10分钟后投喂。
或者，将鲢鱼生长激素混合在原料中配制成配合饵料。
结果中华对虾
鳗鲡
试验结果表明中华对虾在125天的饲养试验期内，使用鲢鱼生长激素后能增重20％左右。鳗鲡在43天的饲养试验期内，使用鲢鱼生长激素后能增重10％左右。上海浦东孙桥名特水产开发有限公司用鲢鱼生长激素对中华绒鳌蟹的养殖进行对比试验的结果
试验表明中华绒鳌蟹在130天的试验期内，使用鲢鱼生长激素能增重20％左右。苏州华夏甲鱼养殖技术研究所用鲢鱼生长激素对中华鳖进行对比试验的结果
试验表明中华鳖在303天的饲养试验期内，使用鲢鱼生长激素能够增重10％左右。上海锦洋观赏鱼有限公司用鲢鱼生长激素对锦鲤鱼养殖对比试验的结果
试验表明锦鲤鱼在144天的试验期内，使用鲢鱼生长激素后锦鲤鱼长度能增加20％左右。
从以上的研究结果看，鲢鱼生长激素对金鱼，鳗鲡，对虾，甲鱼，中华绒鳌蟹和锦鲤鱼的生长均有明显的促进作用。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
权利要求
1.一种分离的鲢鱼生长激素，其特征在于，它具有如下所示的氨基酸序列ATGTCAGAGAACCAGCGGCTCTTCAACAACGCAGTCATCCGTGTTCAACACCTGCACCAG 60MetSerGluAsnGlnArgLeuPheAsnAsnAlaValIleArgValGlnHisLeuHisGlnCTGGCTGCAAAAATGATTAACGACTTTGAGGACAACCTGTTGCCTGAGGAACGCAGACAG120LeuAlaAlaLysMetIleAsnAspPheGluAspAsnLeuLeuProGluGluArgArgGlnCTGAGTAAAATCTTTCCTCTGTCTTTCTGCAACTCTGACTCCATTGAGGCGCCCACTGGA180LeuSerLysIlePheProLeuSerPheCysAsnSerAspSerIleGluAlaProThrGlyAAAGATGAAACGCAGAAGAGCTCTATGTTGAAGCTCCTTCGCATCTCTTTCCGCCTCATT240LysAspGluThrGlnLysSerSerMetLeuLysLeuLeuArgI1eSerPheArgLeuIleGAGTCCTGGGAGTTCCCCAGCCAGACCCTGAGCGGAGCCGTCTCAAACAGCTTGACCGTC300GluSerTrpGluPheProSerGlnThrLeuSerGlyAlaValSerAsnSerLeuThrValGGTAACCCCAACCAGATCACTGAGAAGCTGGCCGACTTGAAAGTGGGCATCAGCGTGCTC360GlyAsnProAsnGlnIleThrGluLysLeuAlaAspLeuLysValGlyIleSerValLeuATCAAGGGATGTCTGGATGGTCAACCAAACATGGATGATAACGACTCCCTGCCGCTGCCT420IleLysGlyCysLeuAspGlyGlnProAsnMetAspAspAsnAspSerLeuProLeuProTTTGAGGATTTCTACTTGACCATGGGGGAGAGCGACCTCAGAGAGAGCTTTCGTCTTCTG480PheGluAspPheTyrLeuThrMetGlyGluSerAspLeuArgGluSerPheArgLeuLeuGCTTGCTTCAAGAAGGACATGCACAAGGTGGAAACTTACCTAAGGGTTGCAAATTGCAGG540AlaCysPheLysLysAspMetHisLysValGluThrTyrLeuArgValAlaAsnCysArgAGATCCCTGGATTCAAACTGCACCCTGTAG 570ArgSerLeuAspSerAsnCysThrLeu*** 。
2.一种分离的DNA序列，其特征在于，它编码权利要求1所述的鲢鱼生长激素。
3.一种表达载体，其特征在于，它含有权利要求2所述的DNA序列。
4.一种转化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求3所述的表达载体。
5.如权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，该宿主细胞是大肠杆菌。
6.一种生产鲢鱼生长激素的方法，其特征在于，它包括步骤(a)在适合表达鲢鱼生长激素的条件下，培养权利要求3所述的转化的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有鲢鱼生长激素。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，分离步骤(b)是如下进行的离心收集菌体；破碎菌体；收集包涵体；洗涤包涵体；溶解包涵体；和透析复性。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，该方法还包括在透析复性之后，对复性后的鲢鱼生长激素进行DEAE-Sepherose柱层析；用G-25 Sepharose脱盐；再经C8柱HPLC反向层析，从而进一步纯化鲢鱼生长激素。
9.一种用于水产养殖的生长促进制剂，其特征在于，它含有权利要求1所述的鲢鱼生长激素作为主要成分，以及水产养殖上可接受的载体。
全文摘要
本发明提供了一种新的生长激素——鲢鱼生长激素(简称为“fGH”),它对多种鱼类、虾类、蟹类和甲鱼等有显著的刺激生长的作用。本发明还提供一种高效和/或低成本地生产该鲢鱼生长激素的方法,以及含有上述鲢鱼生长激素的促进生长的制剂。试验结果表明本发明的鲢鱼生长激素能明显加快个体的生长速度,在相同的饲养时间段内平均增重10%－20%。
文档编号A61K38/27GK1328061SQ0011639
公开日2001年12月26日 申请日期2000年6月8日 优先权日2000年6月8日
发明者龚毅, 赵蓉, 陆玮, 虞谷松, 陈燕 申请人:中国科学院上海生物工程研究中心