专利名称：具有2α位取代基的维生素D衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新型维生素D衍生物，具体来说是含有2α位取代基的维生素D衍生物。
已有报告表明(特公平6-23185号)，在大多数的维生素D衍生物中，2β位带有取代基的维生素D衍生物具有生物机体内的钙调节作用、对肿瘤细胞等的分化诱导作用等生理活性，作为医药，例如钙代谢异常引起的骨质疏松症、骨软化症等疾病的治疗药物或抗肿瘤剂有用。
作为2α位带有取代基的维生素D衍生物，已知为2α位带有4-羟基丁基或酰氧基的维生素D衍生物(J.Org.Chem.Vol.59，No.25，1994和特关昭51-19752号)等。但与2β位带有取代基的维生素D衍生物相比报告较少，所以希望进一步开发生理活性高的维生素D衍生物。
本发明者致力于开发2α位带有取代基的维生素D衍生物，对其生理活性等进行各种探讨。
另外本发明的目的是提供具有优良的维生素D受体结合能力的新型维生素D衍生物。
本发明者为解决上述课题，通过锐意探讨，结果发现通过在2α位导入特定取代基，可以提高维生素D受体的结合能力，从而完成了本发明。
即，通过本发明，提供了由通式(1)表示的维生素D衍生物 (式中，R1和R2是可以被羟基取代的直链或支链状低级烷基)。
在通式(1)中，优选R1为被羟基取代的碳原子数2-6的直链烷基，R2为被羟基取代的碳原子数1-12的直链或支链烷基。
更优选，R1为被羟基取代的碳原子数2-4的直链烷基，R2为被羟基取代的碳原子数3-10的直链或支链烷基。
另外，通过本发明的另一个方面，可以提供通式(2)表示的维生素D衍生物。 式中，R1表示2-羟乙基或3-羟丙基，R3表示4-羟基-4-甲基戊基或4-乙基-4-羟基己基。
在通式(2)中，优选R1为3-羟丙基，R3为4-羟基-4-甲基戊基。
通过本发明的其他方面，可以提供本发明的维生素D衍生物在制造伴随钙代谢异常的疾病的治疗药物中的用途。
通过本发明的其他方面，提供包括在伴随钙代谢异常疾病的治疗方法中对有必要采用这种手段进行治疗的患者给予治疗有效剂量的本发明的维生素D衍生物的给药方法。另外，本发明的维生素D衍生物，可以作为活性型维生素D3(即1α，25-二羟基维生素D3)代谢研究的试剂使用。
另外，作为本申请的优先权基础的特愿2000-050915号申请的内容全文引用在本说明书中。
在本说明书中，作为直链或支链的低级烷基，表示一般的碳原子数1-15的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。
另外作为可以被羟基取代的直链或支链的低级烷基，是指上述的低级烷基的任意氢原子可以被一个以上的羟基所取代。
R1和R2中取代的羟基数是1、2或3，优选1或2，更优选1。
R1优选被羟基取代的碳原子数2-6的直链烷基，更优选被羟基取代的碳原子数2-4的直链烷基。作为R1的非限定的具体例，例如羟基甲基、羟基乙基、羟基丙基、羟基丁基、羟基戊基、羟基己基等。
R2优选被羟基取代的碳原子数1-12的直链或支链烷基，更优选被羟基取代的碳原子数3-10的直链或支链烷基。作为R2的非限定的具体例，例如6-羟基-6-甲基-2-庚基、7-羟基-7-甲基-2-辛基、5，6-二羟基-6-甲基-2-庚基、4，6，7-三羟基-6-甲基-2-庚基等。
本发明的维生素D衍生物优选通式(2)表示的化合物。在该式(2)中，优选R1为2-羟基乙基或3-羟基丙基，更优选3-羟基丙基。优选R3为4-羟基-4-甲基戊基或4-乙基-4-羟基己基，更优选4-羟基-4-甲基戊基。
在本发明的通式(1)的化合物中，作为优选的化合物，例如(5Z，7E)-(1S，2S，3R，20R)-2-(3-羟基丙氧基)-9，10-闭联(seco)-5，7，10(19)-胆甾三烯-1，3，25-三醇。
本发明的维生素D衍生物可以作为医药使用，例如以伴随钙代谢异常疾病的治疗药物、抗肿瘤剂或免役调节剂等为目的使用。
另外，本发明的维生素D衍生物，可以作为活性型维生素D3(即1α，25-二羟基维生素D3)代谢研究的试剂使用。
本发明的通式(1)表示的维生素D衍生物和通式(2)表示的维生素D衍生物，都是新型化合物，其合成法没有特别的限定，例如可以按照以下说明的方法制造。另外，以下制造方法中化合物的序号，与后述的实施例中记载的反应路线的化合物序号相对应，这是为了使本方法容易理解，但本发明的制造方法并不局限于后述实施例中记载的内容。
作为初始原料，可以使用由D-葡萄糖等得到的结晶性环氧化物1。即将结晶性环氧化物与烷烃二醇反应，在3位上有选择的导入官能团，成为3位取代体2。然后将3位的官能团的羟基保护，成为化合物3，然后将保护4位和6位羟基的苯亚甲基缩醛部分用N-溴琥珀酰亚胺等进行溴化开裂，生成溴化体4。将由二醇体5、三甲硅烷基体6得到的醇体7的5位6位用锌粉形成烯烃得到二醇体8，然后在伯羟基上有选择地导入脱离基，得到磺化体9。然后例如经由环氧化物10在1位上导入乙炔基得到烯块体11。将烯炔体11用碳酸钾等处理，得到的烯炔体12的羟基通过甲硅烷化(例如叔丁基二甲基甲硅烷化)得到三甲硅烷基醚13、和所希望的CD环型的溴烯烃14，通过在适当的溶剂中使用钯催化剂反应，构造出2α-取代型维生素D的骨架。将得到的保护体15进行脱保护反应后，通过反相HPLC或薄层色谱法等常用方法精制，合成了目的产物维生素D衍生物16。或将保护体15精制后脱保护也可。
在此，作为维生素D衍生物的CD环状部分，可以使用公知的化合物。或从公知的CD环状化合物出发，通过对侧链进行适当的修饰，得到所希望的CD环状化合物。或CD环状化合物可以由相对应的带有侧链的公知的维生素D衍生物得到。
实施例通过下面的实施例进一步具体说明本发明，但本发明并不局限于实施例。
实施例中反应路线如下。
(合成例)(5Z，7E)-(1S，2S，3R，20R)-2-(3-羟基丙氧基)-9，10-闭联-5，7，10(19)-胆甾三烯-1，3，25-三醇(化合物16)的合成另外，以下实施例中没有特别注明的情况下％表示容量％。
(1) 甲基4，6-O-苯亚甲基-3-O-(3-羟基丙基)-α-D-阿卓吡喃糖苷(化合物2)的合成将环氧化物甲基2，3-无水-4，6-O-苯亚甲基-α-D-甘露吡喃糖苷(化合物1)(2.52g，9.54mmol)混悬于1，3-丙烷二醇(63ml)中，加入叔丁氧基钾(3.53g，31.5mmol)，在110℃下加热14小时。将反应液用二氯甲烷(400ml)和饱和氯化铵水溶液(200ml)分液，水层用二氯甲烷200ml萃取2次。合并有机层，用无水硫酸钠干燥后，硅胶柱色谱法(10％→66％乙酸乙酯/已烷)精制，得到无色油状的化合物2的二醇体3.06g(收率94％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.75-1.91(2H，m)、2.42(1H，d，J＝5.8Hz)、3.40(3H，s)、3.70-3.81(6H，m)、4.01-4.09(3H，m)、4.29-4.34(2H，m)、4.61(1H，s)、5.56(1H，s)、7.36-7.38(3H，m)、7.47-7.50(2H，m).EIMS m/z 340(M+)HREIMS C17H24O7(M+)计算值 340.1522；实测值340.1523(2)甲基4，6-O-苯亚甲基-3-O-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙基]-α-D-阿卓吡喃糖苷(化合物3)的合成将化合物2(3.06g，8.98mmol)溶解在DMF(30ml)中，加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.62g，10.8mmol)和咪唑(1.53g，22.5mmol)，在室温下搅拌3小时。将反应液用乙酸乙酯(500ml)和水(150ml)分液。有机层用水、饱和食盐水(各150ml)依次洗涤，无水硫酸钠干燥后，硅胶柱色谱法(10％→33％乙酸乙酯/己烷)精制，得到3.74g无色油状的化合物3(收率92％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.02和0.03(6H，分别s)、0.87(9H，s)、1.78-1.82(2H，m)、1.93(1H，br)、3.39(3H，s)、3.65～3.80(6H，m)、3.95(1H，dd，J＝2.7和8.8Hz)、3.99～4.00(1H，m)、4.26～4.33(2H，m)、4.89(1H，s)、5.55(1H，s)、7.34～7.37(3H，m)、7.47～7.49(2H，m).EIMS m/z 454(M+)，423(M-OCH3)+，397(M-tBu)+HREIMS C23H38O7Si(M+)计算值454.2387实测值454.2267(3)甲基4-O-苯甲酰基-6-溴-3-O-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙基]-6-脱氧-α-D-阿卓吡喃糖苷(化合物4)的合成将化合物3(2.42g，5.31mmol)溶解在四氯化碳(53ml)中，加入N-溴琥珀酰亚胺(1.04g，5.84mmol)和碳酸钡(586.8mg，2.97mmol)，加热回流40分钟。将反应液放冷后加入乙酸乙酯(50ml)，用滤纸滤除不溶物。滤液用乙酸乙酯(350ml)和0.1N饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)分液。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、水、饱和食盐水(各50ml)依次洗涤，无水硫酸钠干燥后，硅胶柱色谱法(10％→20％乙酸乙酯/己烷)精制，得到无色油状的化合物4的溴化物2.09g(收率74％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ-0.04和-0.03(6H，分别s)、0.83(9H，s)、1.67～1.73(2H，m)、2.52(1H，br s)、3.50(3H，s)、3.55～3.70(6H，m)、3.73(1H，dd，J＝4.0和7.3Hz)、3.97(1H，dd，J＝3.3和7.3Hz)、4.35(1H，dt，J＝3.7和7.0Hz)、4.70(1H，d，J＝3.3Hz)、5.45(1H，dd，J＝4.0和7.0Hz)、7.43～7.47(2H，m)、7.57～7.58(1H，m)、8.03～8.08(2H，m).EIMS m/z 519和517(M-Me)+、503和501(M-OCH3)+.HREIMS C23H37BrO7Si(M+)计算值 532.1492；实测值 532.1489.
(4)甲基6-溴-3-O-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙基]-6-脱氧-α-D-阿卓吡喃糖苷(化合物5)的合成将化合物4(2.09g，3.92mmol)溶解在CH3OH(50ml)中，加入28％NaOCH3的甲醇溶液(50ml)，室温下反应一夜。在反应液中加入硅胶(20g)，减压浓缩。将得到的浓缩残留物用硅胶柱色谱法(10％→33％乙酸乙酯/己烷)精制，得到无色油状的化合物5的二醇体1.62g(收率96％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.06(6H，s)、0.89(9H，s)、1.73～1.85(2H，m)、2.05(1H，brs)、3.00(1H，d，J＝8.8Hz)、3.43(3H，s)、3.54(1H，dd，J＝7.3和10.6Hz)、3.59(1H，t，J＝4.6Hz)、3.63(1H，ddd，J＝5.5，7.3和9.2Hz)、3.69～3.82(5H，m)、3.93～3.98(2H，m)、4.62(1H，d，J＝2.2Hz).FABMS m/z 469和467(M+K)+、453和451(M+Na)+、431和429(M+H)+、399和397(M-OCH3)+、373和371(M-tBu)+HREIMS C16H33BrO6Si(M+)计算值 428.1230；实测值428.1224.
(5)甲基6-溴-2，4-二-(O-叔丁基二甲基甲硅烷基)-3-O-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙基]-6-脱氧-α-D-阿卓吡喃糖苷(化合物6)的合成将化合物5(1.84g，4.29mmo1)溶解在DMF(30ml)中，加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.94g，12.9mmol)和咪唑(1.17g，17.2mmol)，室温下搅拌一夜。将反应液用乙酸乙酯(450ml)和水(100ml)分液。有机层依次用水、饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥后，硅胶柱色谱法(10％乙酸乙酯/己烷)精制，得到作为三甲硅烷基醚的无色油状的化合物6 2.66g(收率94％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.04、0.08、0.09和0.11(18H，分别s)、0.89和0.90(27H，分别s)、1.78～1.81(2H，m)、3.37(3H，s)、3.40(1H，m)、3.48(1H，dd，J＝7.3和10.6Hz)、3.55(1H，dt，J＝6.2和8.8Hz)、3.64～3.72(4H，m)、3.92～3.96(2H，m)、4.12～4.16(1H，m)、4.48(1H，br s).EIMS m/z 658和656(M+)、643和641(M-Me)+、601和599(M-tBu)+.
(6)甲基6-溴-4-(O-叔丁基二甲基甲硅烷基)-3-O-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙基]-6-脱氧-α-D-阿卓吡喃糖苷(化合物7)的合成将化合物6(2.78g，4.23mmol)溶解在THF(25ml)中，加入四丁基氟化铵的1M THF溶液(1.06ml，1.06mmol)，室温下搅拌2.5小时。在反应液中加入硅胶(10g)浓缩，浓缩残留物用硅胶柱色谱法(1％→20％乙酸乙酯/己烷)精制，得到无色油状的化合物7的醇体1.16g(收率51％)。然后回收原料化合物6得到647.1mg(收率23％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.05、0.11和0.12(12H，分别s)、0.89和0.90(18H，分别s)、1.79(2H，ddd，J＝2.6，6.2和12.8Hz)、2.06(1H，s)、3.42(3H，s)、3.48～3.50(1H，m)、3.52(1H，dd，J＝6.2和10.8Hz)、3.61～3.68(3H，m)、3.69～3.73(2H，m)、3.93(1H，br)、3.96(1H，dd，J＝3.3和8.1Hz)、4.11～4.15(1H，m)、4.59(1H，d，J＝2.2Hz)。EIMS m/z 544和542(M+.)、487和485(M-tBu)+(7)(2R，3S，4R)-4-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代]-3-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙氧基]六-5-烯-1，2-二醇(化合物8)的合成将化合物7(1.07g，1.97mmol)溶解在1-丙醇(50ml)中，加水(5ml)。加入锌粉(3.86g，59.1mmol)和氰硼氢化钠(247.9mg，3.94mmol)，95℃下搅拌20分钟。追加锌粉(2.58g，39.4mmol)在相同温度下搅拌35分钟后，再加入锌粉(2.58g，39.4mmol)和氰硼氢化钠(247.9mg，3.94mmol)，在相同温度下搅拌30分钟。追加锌粉(1.29g，19.7mmol)在相同温度下搅拌45分钟后，冷却，滤除不溶物。在滤液中加入硼氢化钠(74.5mg，1.97mmol)，室温下搅拌10分钟。在反应液中加入硅胶(1g)，浓缩残留物通过硅胶柱色谱法(2％→10％乙酸乙酯/己烷)精制，得到无色油状的化合物8的二醇体615.7mg(收率72％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.04，0.06和0.10(12H，分别s)、0.89和0.90(18H，分别s)、1.72～1.80(2H，m)、2.33(1H，t，J＝6.0Hz)、3.20(1H，d，J＝3.7Hz)、3.22(1H，dd，J＝4.4和6.6Hz)、3.54(1H，m)、3.62～3.75(4H，m)、3.79(1H，m)、3.86(1H，m)、4.36～4.38(1H，m)、5.20(1H，dt，J＝1.5和10.6Hz)、5.29(1H，dt，J＝1.5和17.2Hz)、5.89(1H，ddd，J＝5.9，10.6和17.2Hz).EIMS m/z 377(M-tBu)+(8)(2R，3S，4R)-4-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代]-3-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙氧基]六-5-烯-2-醇(化合物9)的合成将化合物8(482.5mg，1.11mmol)溶解在CH2Cl2(11ml)中，冰浴下加入2-均三甲苯磺酰氯(267.0mg，1.22mmol)和DMAP(271.2mg，2.22mmol)，0℃下搅拌1小时。再加入2-均三甲苯磺酰氯(145.6mg，0.666mmol)和DMAP(135.6mg，1.11mmol)，0℃下搅拌3小时。将反应液用乙酸乙酯(50ml)和水(50ml)分液。有机层用水和饱和食盐水(各10ml)依次洗涤，无水硫酸钠干燥后，硅胶柱色谱法(10％→17％乙酸乙酯/己烷)精制，得到无色油状的化合物9的磺酸酯体573.1mg(收率84％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.03和0.07(12H，分别s)、0.87和0.88(18H，分别s)、1.69～1.76(2H，m)、2.62(9H，s)、3.18(1H，dd，J＝1.8和4.8Hz)、3.44(1H，dt，J＝6.6和8.8Hz)、3.65(2H，t，J＝6.0Hz)、3.74(1H，dt，J＝6.4和9.2Hz)、3.90(1H，dd，J＝8.2和11.9Hz)、4.01～4.05(2H，m)、4.38(1H，t，J＝5.3Hz)、5.20(1H，d，J＝10.6Hz)、5.29(1H，d，J＝17.2Hz)、5.83(1H，ddd，J＝6.0，10.6和17.2Hz)、6.96和6.98(2H，分别
s).
EIMS m/z 601(M-Me)+，559(M-tBu)+(9)(3R，4S，5R)-3-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代]-4-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙氧基]-5，6-环氧六-1-烯(化合物10)的合成将化合物9(306.7mg，0.497mmol)溶解在THF(5ml)中，-78℃下加入六甲基二甲硅烷化物(silazide)1M THF溶液(0.596ml，0.596mmol)后，将反应液缓慢升温至室温。将反应液用乙酸乙酯(200ml)和饱和氯化铵水溶液(70ml)分液。有机层用水和饱和食盐水(各70ml)依次洗涤，无水硫酸钠干燥后，硅胶柱色谱法(己烷→10％乙酸乙酯/己烷)精制，得到无色油状的化合物10的环氧化合物204.7mg(收率99％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.04和0.08(12H.分别s)、0.88和0.90(18H，分别s)、1.77(2H，quintet J＝6.2Hz)、2.58(1H，dd，J＝2.8和4.8Hz)、2.76(1H，t，J＝4.8Hz)、2.82(1H，t，J＝6.2Hz)、3.06(1H，ddd，J＝2.8，4.8和6.2Hz)、3.55(1H，dt，J＝6.2和9.5Hz)、3.69(2H，t，J＝6.2Hz)、3.76(1H，dt，J＝6.2和9.5Hz)、4.21(1H，brt，J＝6.2Hz)、5.14(1H，d，J＝10.3Hz)、5.28(1H，d，J＝17.2Hz)、5.88(1H，ddd，J＝6.2，10.3和17.2Hz).EIMS m/z 359(M-tBu)+(10)(4R，5S，6R)-6-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代]-5-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙氧基]-1-(三甲基甲硅烷基)八-7-烯-1-炔-4-醇(化合物11)的合成将化合物10(155.7mg，0.374mmol)溶解在THF(5ml)中。另外，将三甲基甲硅烷基乙炔(0.132ml，0.935mmol)溶解在THF(5ml)中，在-78℃下加入丁基锂己烷溶液(1.61M，0.465ml，0.748mmol)，搅拌5分钟。在该溶液中-78℃下加入加入上述化合物10的THF溶液，再加入三氟化硼二乙醚络合物(52.1μl，0.411mmol)，将反应温度缓慢升温至10℃。反应液用乙酸乙酯(50ml)和饱和氯化铵水溶液(10ml)分液。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水(各10ml)依次洗涤，无水硫酸钠干燥后，硅胶柱色谱法(己烷→8％乙酸乙酯/己烷)精制，得到无色油状的化合物11的烯烃化合物178.0mg(收率92％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.04，0.05，0.10和0.13(15H，分别s)、0.89和0.91(18H，分别s)、1.78～1.81(2H，m)、2.47(1H，dd，J＝5.9和16.9Hz)、2.53(1H，dd，J＝8.4和16.9Hz)、3.24(1H，d，J＝4.4Hz)、3.31(1H，dd，J＝2.2和4.4Hz)、3.58(1H，dt，J＝6.6和9.2Hz)、3.70(2H，t，J＝5.9Hz)、3.81(1H，dt，J＝6.2和9.2Hz)、3.92～3.98(1H，m)、4.42(1H，dd，J＝4.4和5.9Hz)、5.20(1H，d，J＝10.6Hz)、5.31(1H，d，J＝17.2Hz)、5.89(1H，ddd，J＝5.9，10.6和17.2Hz)EIMS m/z499(M-Me)+，457(M-tBu)+(11)(4R，5S，6R)-6-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代]-5-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙氧基]八-7-烯-1-炔-4-醇(化合物12)的合成将化合物11(233.6mg，0.454mmol)溶解在甲醇(10ml)中，加入碳酸钾溶液(62.7mg，0.454mmol)后，室温下搅拌6小时。加入乙酸(52.0ml，0.908mmol)后，浓缩反应液，浓缩残留物用乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)分液。有机层用水和饱和食盐水(各30ml)依次洗涤，无水硫酸钠干燥后，硅胶柱色谱法(己烷→4％乙酸乙酯/己烷)精制，得到无色油状的化合物12的烯炔193.6mg(收率96％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.05，0.06和0.11(12H，分别s)、0.89和0.91(18H，分别s)、1.76～1.83(2H，m)、1.99(1H，t，J＝2.7Hz)、2.48(2H，m)、3.27(1H，dd，J＝2.2和4.4Hz)、3.33(1H，d，J＝4.4Hz)、3.58(1H，dt，J＝6.6和9.2Hz)、3.68～3.73(2H，m)、3.80(1H，dt，J＝6.2和9.2Hz)、3.96～4.02(1H，m)、4.43(1H，ddt，J＝1.5，4.4和5.9Hz)，5.22(1H，dt，J＝1.5和10.6Hz)、5.32(1H，dt，J＝1.5和17.2Hz)、5.89(1H，ddd，J＝5.9，10.6和17.2Hz)EIMS m/z385(M-tBu)+(12)(3R，4S，5R)-3，5-双-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代]-4-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙氧基]八-1-烯-7-炔(化合物13)的合成将化合物12(193.6mg，0.437mmol)溶解在CH2Cl2(5ml)中，冰浴下加入叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯(0.151ml，0.656mmol)和2，6-二甲基吡啶(0.153ml，1.31mmol)，0℃下搅拌1小时。反应液用乙酸乙酯(150ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)分液。有机层用水和饱和食盐水(各30ml)依次洗涤，无水硫酸钠干燥后，硅胶柱色谱法(己烷→3％乙酸乙酯/己烷)精制，得到无色油状的化合物13的三甲硅烷基醚219.3mg(收率90％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.03，0.05，0.07，0.09和0.10(18H，分别s)、0.89和0.90(27H，分别s)、1.74～1.80(2H，m)、1.95(1H，t，J＝2.6Hz)、2.35(1H，ddd，J＝2.6，5.5和16.9Hz)、2.49(1H，ddd，2.6，5.5和16.9Hz)、3.35(1H，dd，J＝3.5和5.5Hz)、3.60～3.76(4H，m)、3.88(1H，q，J＝5.5Hz)、4.30(1H，dd，J＝3.5和7.0Hz)、5.12(1H，br d，J＝10.3Hz)、5.20(1H，dt，J＝1.3和17.2Hz)、5.95(1H，ddd，J＝7.0，10.3和17.2Hz)EIMS m/z541(M-Me)+，499(M-tBu)+(13)将化合物13和化合物14缩合，进行脱保护反应，合成化合物16将化合物13(219.3mg，0.394mmol)和化合物14的乙烯基溴化物(129.6mg，0.363mmol)溶解在甲苯(5ml)溶液中，加入三乙胺(5ml)。在溶液中加入四(三苯基膦)钯(125.8mg，0.109mmol)，在120℃下回流90分钟。在反应液中加入乙酸乙酯(10ml)后，用硅胶垫滤除不溶物。将滤液在减压下用旋转蒸发器浓缩，硅胶柱色谱法(己烷→6％乙酸乙酯/己烷)粗精制，得到缩合物1，3-双-(O-叔丁基二甲基甲硅烷基)-2α-[3-{(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧代}丙氧基]-1α，25-二羟基维生素D3(化合物15)。
将化合物15(156.6mg)溶解在THF(3ml)中，加入四丁基铵氟化物的THF溶液(1M，0.940ml，0.940mmol)，在室温下反应96小时。将反应液减压下通过旋转蒸发器浓缩，将浓缩残留物溶解在甲醇(1ml)中，吸附在硅胶TLC板(20×20cm，0.5mm厚；10％MeOH溶于CH2Cl2)精制，得到维生素D衍生物化合物16约75.0mg。然后重复进行硅胶TLC板精制，得到56.3mg的化合物16(收率32％)。将化合物16用反相HPLC精制(精制条件反相HPLC YMC-Pack ODS柱20×150mm，9.0ml/min，CH3CN∶水＝3∶2)，得到白色粉末。
反相HPLC精制的化合物16的数据如下1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.54(3H，s)、0.93(3H，d，J＝6.4Hz)、1.21(6H，s)、2.24(1H，dd，J＝9.2和13.4Hz)、2.69(1H，dd，J＝4.4和13.4Hz)、2.81～2.83(1H，m)、3.38(1H，dd，J＝3.2和7.5Hz)、4.03～4.08(1H，m)、4.
44(1H，brd，J＝2.8Hz)、5.10(1H，d，J＝1.8Hz)、5.39(1H，br s)、6.01(1H，d，J＝11.3Hz)、6.42(1H，d，J＝11.3Hz)EIMS m/z490(M+)、472(M-H2O)+，454(M-2H2O)+HREIMS C30H50O5(M+)の计算值490.3660；实测值490.3638试验例 与牛胸腺维生素D受体(VDR)的结合试验测定上述合成例得到的本发明维生素D衍生物与牛胸腺得来的维生素D受体的结合能力的试验。
分别将1α，25-二羟基维生素D3(作为标准物质使用)和本发明的维生素D衍生物调制成各种浓度的乙醇溶液。将1α，25-二羟基维生素D3受体在使用前溶解在从Yamasa Biochemical(Choshi，Chiba，Japan)购买的(lot.110431)、1安瓿(约25mg)的0.05M磷酸0.5M钾缓冲液(PH7.4)55ml中。
将本发明的维生素D衍生物或1α，25-二羟基维生素D3的乙醇溶液50μl(0.23mg蛋白质)装入试管中，在室温下预孵化后，加入[3H]1α，25-二羟基维生素D3使最终浓度达到0.1nM，在4℃下孵化一夜。在反应物中加入DCC(右旋糖苷被覆木炭)混合后，在4℃下放置30分钟，3000rpm离心分离10分钟，使与受体结合的[3H]1α，25-二羟基维生素D3和游离的[3H]1α，25-二羟基维生素D3分离。上清液(500μl)与ACS-II(9.5ml)(Amersham，England)混合，测定放射活性。
1α，25-二羟基维生素D3的VDR结合性作为100时，本发明的维生素D衍生物的VDR相对结合性为180，计算式如下所示。
X＝(y/x)×100X本发明的维生素D衍生物的VDR相对结合性y1α，25-二羟基维生素D3对[3H]1α，25-二羟基维生素D3和VDR的结合的50％阻碍浓度x本发明的维生素D衍生物对[3H]1α，25-二羟基维生素D3和VDR的结合的50％阻碍浓度产业的应用本发明的通式(1)表示的维生素D衍生物、通式(2)表示的维生素D衍生物，都是新型化合物，表现出优良的生理活性，有作为肾性骨疾患、副甲状腺机能低下症、骨质疏松症等药物的可能性。
权利要求
1.通式(1)表示的维生素D衍生物，式中R1和R2表示可以被羟基取代的直链或支链低级烷基。
2.权利要求1记载的维生素D衍生物，R1表示可以被羟基取代的碳原子数2-6的直链烷基，R2表示可以被羟基取代的碳原子数1-12的直链或支链烷基。
3.权利要求1记载的维生素D衍生物，R1表示可以被羟基取代的碳原子数2-4的直链烷基，R2表示可以被羟基取代的碳原子数3-10的直链或支链烷基。
4.通式(2)表示的维生素D衍生物，式中R1表示2-羟乙基或3-羟丙基，R3表示4-羟基-4-甲基戊基或4-乙基-4-羟基己基。
5.权利要求4记载的维生素D衍生物，其中R1为3-羟丙基，R3为4-羟基-4-甲基戊基。
全文摘要
本发明的目的是提供一种在2α位具有取代基的新型维生素D衍生物。本发明提供的维生素D衍生物由下式(1)表示，其中，R
文档编号A61P3/02GK1398254SQ01804618
公开日2003年2月19日 申请日期2001年2月27日 优先权日2000年2月28日
发明者高山浩明, 橘高敦史, 须原义智, 藤岛利江 申请人:中外制药株式会社