专利名称：酸枣仁油的提取和软胶囊的制备及对中枢神经系统的作用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药品的制备工艺及其用途，特别涉及酸枣仁油的提取和软胶囊的制备及对中枢神经系统的作用。
背景技术：
酸枣仁是常用于养心安神的中药材，多用于中药复方。一般认为，酸枣仁的水溶性部位——酸枣仁总苷是酸枣仁对中枢神经作用的有效部位。酸枣仁油经常作为无效部位被丢弃。现有的专利申请1)酸枣仁油降脂滴丸的配方及其制备方法(94107184)，内容包括酸枣仁油滴丸的制备和调节血脂的用途；2)超临界二氧化碳萃取法提取酸枣仁油和酸枣仁粉(00104496)，内容包括酸枣仁油的提取方法。上述专利存在着工艺成本高等缺点，且超临界二氧化碳萃取法需要特殊的设备。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提取及制备工艺简单的酸枣仁油的提取和软胶囊的制备方法。
本发明的另一目的在于验证了酸枣仁油软胶囊对中枢神经系统的作用。
为达到上述目的本发明采用的提取工艺为首先将去除水分和核壳的酸枣仁破碎成粗粉，放压榨机上压榨，榨到无油流出为止，得到酸枣仁的残渣和粗品油；将酸枣仁的残渣与石油醚按体积比为1∶2.5的比例混合，提取1.5小时，回收石油醚，得到精制油脂；将压榨得到的粗品油加入4倍体积的石油醚中进行溶解过滤，回收石油醚至无味，弃去残渣得到精制油脂；将二部分精制油脂合并，得到一种黄色澄清的粘稠油状液体——酸枣仁油，酸枣仁油置于蒸发锅中在110℃下加热2小时，挥去残留溶剂和水分，即得精制浅黄色澄明的酸枣仁油。
酸枣仁油软胶囊的制备工艺为首先将200份明胶用350份的纯净水浸泡后移置烧瓶中置水浴中以55～65℃加热，均匀搅拌10分钟，得到溶胶；在溶胶中加入80份甘油和0.03份对羧基苯甲酸乙酯，在室温下静置30min后，在600～650mmHg的减压真空中刮去上浮泡沫，过滤制成胶液待用；将胶液制成胶板，再将500份酸枣仁油置于二块胶板之间，用钢模压制，由填充泵瘃啄准确控制每粒酸枣仁油胶囊含酸枣仁油0.5g，将制得的酸枣仁油胶囊置于27～29℃、相对湿度40％的条件下干燥24h，即得每粒胶丸内含酸枣仁油500mg。
本发明通过对酸枣仁油的药理、毒理学研究验证了酸枣仁油具有镇静、催眠、促进学习记忆和抗焦虑作用，可用于治疗神经衰弱和失眠症。
具体实施例方式
1.确定酸枣仁油是酸枣仁中枢神经系统作用的有效部位对酸枣仁油进行了皂化甲酯化，脂肪油与白桦酯酸的提取分离，得到酸枣仁油的非皂化产物、甲酯化产物、脂肪油和白桦酯酸结晶；对酸枣仁油的上述产物进行镇静作用的药理活性筛选，结果表明，除酸枣仁油的非皂化产物无活性外，脂肪油、白桦酯酸在酸枣仁油的同比剂量时均具有镇静作用，表明酸枣仁镇静催眠的有效部位可能是脂肪酸和及其溶解于脂肪酸中的白桦酯酸，实验结果见表1。
表1 酸枣仁油非皂化物、甲酯化产物和白桦酯酸对小鼠自发活动的影响给药前 给药后剂量组别 活动数 活动数 变化率(/kg)(次/10min) (次/10min)
水 -- 827.75±95.19 834.75±92.20 0.02±0.20赋形剂 -- 856.75±76.28 835.25±88.41 -0.02±0.13地面泮 1.65mg 882.25±162.30355.00±129.12**-0.60±0.13**IIIA(脂肪油) 0.7ml 797.25±216.74575.50±116.91**-0.34±0.14**IIIB(白桦酯酸) 0.77mg(同比量) 896.75±76.95 625.00±131.46*-0.31±0.10**I组(非皂化) 0.175ml 716.0±204.6 800.5±147.1 0.15±0.22II组(甲酯化)0.175ml 692.0±193.9 748.5±74.5*0.02±0.29*0.35ml 793.0±102.6 515.6±154.7**-0.26±0.13**x±s(n＝12)；II组、IIIA组、IIIB组与赋形剂组比较。I组、地西泮组与水对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。
表1表明，酸枣仁的脂肪油、甲酯化产物和白桦酯酸可降低小鼠的自发活动，具有镇静作用；而非皂化物不具有镇静作用，说明酸枣仁油及其脂溶性物质(白桦酯酸)是酸枣仁中枢神经系统作用的有效部位，而酸枣仁的非皂化部分(水溶性部分)不具有镇静作用。
2.酸枣仁油的提取工艺酸枣仁油提取过程依次为榨取、提取和精制，本发明的提取工艺成本低廉，提取率高，无明显环境污染。
1)榨取 将除去水分和核壳的酸枣仁破碎成粗粉，放压榨机上压榨，榨到无油流出为止，得到酸枣仁的残渣和粗品油；2)提取 应用正交实验设计对提取过程进行了优化研究，以溶剂、剂量、提取时间为工艺考察对象，以酸枣仁油提取率为指标，采用极差法和方差分析法进行数据处理，优选酸枣仁油的提取工艺。研究表明，以1∶2.5的体积比用石油醚对酸枣仁残渣提取1.5小时为最佳提取条件，回收石油醚，得到精制油脂；提取中温度对提取无明显影响；3)精制 将压榨得到的粗品油加入4倍体积的石油醚中进行溶解过滤，回收石油醚至无味，弃去残渣得到精制油脂。将二部分精制油脂合并，得到一种黄色澄清的粘稠油状液体——酸枣仁油，将酸枣仁油置于蒸发锅中以110℃加热2小时，挥去残留溶剂和水分，即得精制浅黄色澄明精制油。
2.酸枣仁油软胶囊的制备工艺；采用压制法1)配方比例酸枣仁油500份、明胶200份、甘油80份、对羧基苯甲酸乙酯0.03份、纯净水350份；2)溶胶制备制备前先将200份明胶加入350份纯净水中浸泡后移置带夹层锅的烧瓶中置水浴中加热，加热温度为55～65℃，均匀搅拌10分钟，当明胶溶化后加入80份甘油和0.03份对羟基苯甲酸乙酯，搅拌使溶化成为均匀胶液，在常温下静置30min，在600～650mmHg的减压真空中刮去上浮泡沫，测得胶液粘度为27000mpa·S，过滤制成胶液待用；3)酸枣仁油软胶囊之制备采用压榨法制备软胶囊制备将胶液制成胶板，再将酸枣仁油置于二块胶板之间，用钢模压制而成。连续生产，采用自动旋转扎囊机(RJNJ-2)，由机器自动制出的两条胶带以连续不断的形式，向相反方向移动，在达到旋转模之前逐渐接近，一部分经加压而结合，此时酸枣仁油则从填充泵经导管由楔形注入管压入两带之间，在室温21～25℃，相对湿度40％条件下，由旋转模的不停转动，遂将胶带与药液压入模的凹槽中，凹槽温度约为60℃，使胶带全部轧压结合，将药液包于其中而成酸枣仁油胶囊剂。由填充泵瘃啄准确控制酸枣仁油量0.5g，剩余的胶带即自动切割分离。
整丸与干燥整粒检查外观，应整洁，无粘结变形、破裂和脆裂现象，置温度27～29℃，相对湿度40％条件下将油丸干燥24h，即得每粒胶丸内含油500mg。
贮存应密闭并置阴凉干燥处贮存，贮存温度一般不宜超过25℃，相对湿度不超过45％。
结果性状本品为淡黄色透明软胶囊，除去胶丸外壳后，内容物为淡黄色油状液体；装量差异合格；崩解时限合格；含量99.5％；结论按本发明的工艺试制的样品，各项检测指标均符合要求，特别是外观美，囊壳压制均匀，不渗油。
用法和用量用于心神不宁和失眠健忘患者，口服一天2次，每次3丸；必要时睡前加服4丸。
酸枣仁油的主要药效学研究研究项目如下1)镇静作用(对小鼠自主活动的影响)①光电法(单次及反复给药)；②浮动法；③落砂法。
药效学结果表明用光电法、浮动法、落砂法进行了对小鼠自主活动的影响实验，结果表明酸枣仁油(0.35～1.4ml/kg，i.g.)，使小鼠呈现活动减少，具有一定的镇静作用，且连续使用10天无耐受性。见表2、表3、表4。
表2 酸枣仁油对小鼠自主活动(活动数次/10min)的影响 X±S(n＝14)组别 剂量 给药前 给药后(/kg) d1d5d10水20ml 991.0±25.5 955.5±27.2 933.3±23.6952.3±41.8(-3.6±1.8) (-5.7±4.8)(-3.9±4.6)乳液 20ml 967.3±44.7 971.4±73.4 928.7±101.3 980.0±63.8(2.4±0.4) (-2.8±1.3)(1.0±1.1)地西泮1.65mg976.0±53.6 284.3±55.4**210.0±73.3**237.4±23.0**(-70.6±7.0**) (-78.7±6.9**)(-75.7±2.1**)天麻 40mg 970.5±36.3 867.5±233.0659.3±90.6**765.8±158.3**(-10.3±25.5**)(-31.9±10.2**) (-20.8±18.0**)酸枣仁油 0.35ml963.0±34.6 794.8±150.1**610.3±144.8**575.3±53.9**(-17.3±16.7**)(-36.2±17.2**) (-42.7±9.2**)0.7ml 956.5±30.7 734.5±131.7**627.8±58.8**733.3±165.2**(-23.4±11.5**)(-34.4±5.4**)(-23.6±15.9**)1.4ml 974.3±75.3 802.8±197.2*624.3±110.1**468.5±53.9**(-17.63±19.2**) (-36.1±9.1**)(-51.9±4.6**)
酸枣仁总苷 0.2g 934.3±43.7 972.2±217.5 925.1±131.9 915.6±75.7(37.2±42.1) (-6.9±12.3) (21.5±17.6)括号( )内为变化率，地西泮组和天麻组与水对照组比较；酸枣仁油组与乳液组比较*P＜0.05，**P＜0.01表2所示实验结果表明酸枣仁油组(0.35、0.7、1.4ml/kg)小鼠的自主活动减少(P＜0.01)，且随给药时间的延长酸枣仁油的作用未见减弱，未表现出药物耐受性。提示酸枣仁油对小鼠有镇静作用，其镇静作用无耐受性。药物剂量与药效之间未呈现依赖关系。酸枣仁油大剂量组有些小鼠(4/12)随着给药时间延长开始出现静卧不动和短时间(10秒内)翻正反射消失现象，刺激后可苏醒。酸枣仁总皂苷(0.2g/kg)未表现出镇静作用，此剂量相当生药量25g/kg。可见酸枣仁油是酸枣仁养心安神和镇静催眠的主要有效部位，而酸枣仁总皂苷却不是。
表3 酸枣仁油对小白鼠自主活动曲线下面积(cm2)的影响(浮动法)给药后剂量 给药前n1d 2d3d赋形剂 16- 23±3 21.1±0.8 23±10 16±4苯巴比妥钠 1210mg/kg 27±4 10±10*2.8±2.6*0酸枣仁油121.4ml/kg26.4±2.5 8.1±2.9*2.9±1.8*6.9±2.7*酸枣仁油120.35ml/kg 25±8 17±3*6.0±1.1*8.0±3.1*x±s，与赋形剂相比，*P＜0.01表4 酸枣仁油对小白鼠自主活动落沙量(ml)的影响剂量给药后(d)N 给药前(/kg) 1 2 3赋形剂 16 20ml 8.4±0.6 7.4±1.16.4±1.15.5±0.7酸枣仁油12 1.4ml8.5±0.3 7.1±0.35.0±1.0**5.3±1.3酸枣仁油12 0.35ml 8.4±0.1 5.6±0.3**5.3±0.3**4.7±1.2*x±s与对照组相比，*P＜0.05，**p＜0.01。
表3、表4所示实验结果表明酸枣仁油(0.35，1.4ml/kg)能使小白鼠自主活动明显减少，与对照组比较有显著差异(P＜0.01)，说明酸枣仁油有明显的镇静作用。
2)催眠作用研究实验方法包括①协同戊巴比妥钠催眠时间；②再入睡实验；③诱导小鼠睡眠。
催眠作用研究结果表明①酸枣仁油(0.35～1.4ml/kg)可以延长戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠，并具有剂量依赖关系见表5；②同剂量酸枣仁油可使戊巴比妥钠小鼠醒后再入睡动物数增见表6，提示酸枣仁油与戊巴比妥钠有协同催眠作用；③酸枣仁油(1.4～5.6ml/kg)可使小鼠翻正反射消失，刺激后小鼠苏醒，说明酸枣仁油可直接诱导小鼠进入睡眠；连续给药10天，随着用药时间延长，小鼠诱导睡眠潜伏期逐渐缩短、睡眠时间逐渐延长，并具有一定的量效关系见表7，提示酸枣仁油具有镇静催眠作用，且久用无耐受性。
表5 酸枣仁油对戊巴比妥钠睡眠时间(min)的影响组别 例数剂量睡眠时间P水对照组 1420ml/kg 7.07±4.56 乳液对照组1420ml/kg 6.83±4.87 地西泮组 143.3mg/kg128.64±12.60 ＜0.01全天麻组 1440mg/kg 60.78±11.25 ＜0.01酸枣仁油小剂量140.35ml/kg 21.71±5.74 ＜0.01中剂量140.7ml/kg36.92±7.96 ＜0.01大剂量141.4ml/kg52.93±7.34 ＜0.01x±s，对比组，地西泮组和全天麻组与水对照组比较；酸枣仁油组与赋形剂组比较，用组间t检验进行统计分析并做量效关系分析。
表6 酸枣仁油对小鼠再入睡(只/50min)的影响x±s组别 n 剂量再入睡动物数P水对照组 1420ml/kg 1 乳液对照组1420ml/kg 0地西泮组 143.3mg/kg14 0.002全天麻组 1440mg/kg 60.08酸枣仁油小剂量 140.35ml/kg 30.27
中剂量140.7ml/kg6 0.0399大剂量141.4ml/kg7 0.0211表7 酸枣仁油对小鼠诱导入睡潜伏期和时间(min)的影响组别n剂量 给药后(/kg)d1d5d10诱导入睡潜伏期水对照组 14 - ∞ ∞ ∞赋形剂组 14 - ∞ ∞ ∞地西泮组 14 3.3mg17.5±5.8++29.1±6.1++38.6±3.7++天麻组14 80mg 30.5±6.6++**24.3±4.2++*25.4±8.9++**酸枣仁油小剂量组 14 1.4ml∞ 45.6±6.7++**40.3±10.7++**中剂量组 14 2.8ml∞ 31.4±4.9++31.1±5.9++**大剂量组 14 5.6ml41.6±6.4++**25.6±5.1++20.4±5.9++**诱导睡眠时间水对照组 14 - 000赋形剂组 14 - 000地西泮组 14 3.3mg46.6±11.2++32.4±5.0++18.1±4.0++天麻组14 80mg 8.1±2.9++13.9±4.5++**23.6±4.5++**酸枣仁油小剂量组 14 1.4ml07.1±3.1++**11.2±4.5++**中剂量组 14 2.8ml020.1±3.7++**29.4±6.1++**大剂量组 14 5.6ml5.7±2.9++**21.1±3.7++**40.3±4.5++**x±s，地西泮和天麻组与水对照比较，酸枣仁油与赋形剂组比较，++P＜0.01；与地西泮组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；由于含有不定值，宜用序值法进行数据处理。
表7所示，酸枣仁油使入睡潜伏期缩短，使睡眠时间延长，其作用具有一定的剂量依赖关系，而且反复用药作用趋于明显，说明酸枣仁油的催眠作用没有耐受性。地西泮反复用药后，作用趋于减弱，表现出产生耐受性的不良反应。
3)促进学习记忆作用①避喑法见表8；②跳台法见表9；采用避喑法和跳台法研究表明酸枣仁油(0.175～0.7ml/kg)可使正常和记忆障碍小鼠犯学习记忆错误的潜伏期延长，错误次数减少，提示酸枣仁油可以加强小鼠的学习记忆功能。两次实验均呈现中剂量作用较强，大、小剂量作用较弱的倒U型量效关系，说明使用酸枣仁油的促进学习记忆作用有一定的剂量范围。
表8 酸枣仁油对小鼠学习记忆的影响(避暗法) x±s(n＝14)剂量 训练前 训练后组别 (/kg)潜伏期 电击次数 潜伏期电击次数(sec) (次/5min) (sec) (次/5min)水对照组 -- 24.3±9.03.41±1.0399.7±33.6ΔΔ+1.83±1.07ΔΔ赋形剂组 -- 23.7±5.73.74±0.9592.4±38.7ΔΔ1.79±0.98ΔΔ安定组 -- 27.6±7.83.82±1.2430.7±17.2**3.16±0.98*天麻组40mg21.9±8.53.28±1.03190.7±81.4**0.83±0.37*酸枣仁油小剂量0.175ml 24.5±5.03.43±0.90165.5±78.3**1.33±0.94中剂量0.35ml 21.6±10.4 3.39±0.70179.2±110.7**0.83±0.69*大剂量0.7ml 22.7±4.23.47±0.93216.7±84.7**1.33±1.24与训练前比较，ΔΔP＜0.01；地西泮和天麻组与水对照比较，酸枣仁油与赋形剂组比较，*P＜0.05，**P＜0.01表9 酸枣仁油对小鼠学习记忆的影响(跳台法)x±s(n＝14)训练前 训练后组别 剂量(/kg) 错误次数潜伏期 变化率 错误次数 变化率(次/5min) (sec) (％)(次/5min) (％)水对照 --3.00±0.63212.6±24.9**1551.40±0.55**ΔΔ-53赋形剂 --3.16±0.93208.5±37.6**2651.27±0.64**ΔΔ-58模型 --3.12±1.2957.2±28.1 3.00±0.89全天麻 40ml 3.25±1.39258.4±22.1**3510.88±0.35**-70酸枣仁油小剂量0.175ml2.75±1.28237.4±55.8**3140.80±0.45**-73中剂量0.35ml 3.38±1.75263.6±42.1**3610.50±0.53**-83大剂量0.7ml 2.80±0.84257.8±40.3**3490.63±0.52**-79与训练前比较，配对t检验ΔΔP＜0.01；与模型组比较，非配对t检验**P＜0.014)抗焦虑作用①抗惊厥实验研究表明，观察酸枣仁油(0.35～1.4ml/kg)对士的宁和戊四氮惊厥的影响，未发现酸枣仁油明显的抗惊厥作用。
②将小鼠随机分为5组，每组8只生理盐水对照；阳性对照组(安定)；酸枣仁油大剂量(2ml/kg)、中剂量(1ml/kg)、小剂量(0.5ml/kg)组。给药后30分钟将小鼠置于板上，让其探究15s。此后，小鼠每当从一块板跨到另一块板时给予一次电击，电流强度0.35mA，持续0.5s。小鼠因此产生明显的逃避反应，通常穿过2块板或3块板。如小鼠继续跑，在此后的3min不给电击。记录10min内的电击数。电击可使小鼠运动活性显著减少，安定和酸枣仁油可显著性增高电击数，说明。酸枣仁油具有一定的抗焦虑作用见表10。
表10.酸枣仁油的抗焦虑作用研究(小鼠四板法实验)(X±S)组别 例数剂量 电激次数(10min)NS对照组 105ml/kg 5.50±1.92安定 101mg/kg 13.3±1.74**酸枣仁油 大剂量8 2ml/kg 9.88±2.42**中剂量8 1ml/kg 10.0±2.73**小剂量8 0.5ml/kg 9.13±2.80**5)其他作用研究表明，酸枣仁油还具有增强小鼠免疫功能作用，对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。
5.酸枣仁油的安全性研究小鼠急性毒性试验试验表明，用小鼠灌胃给药无法准确测得其LD50。酸枣仁油灌胃给药的小鼠最大给药剂量为286g(生药)/kg.d-1，按体重计算，相当成人(体重60kg)最大试用剂量29g/d的591倍。
长期毒性试验犬长期毒性试验研究表明连续90天大剂量应用酸枣仁油(2.0、6.0、20ml/kg)除引起明显中枢抑制和油性腹泻外，未观察到犬的明显毒性反应。大鼠长期毒性试验研究表明连续91天大剂量应用酸枣仁油(3.2、8.0、20ml/kg)未观察到大鼠的明显毒性反应。
一般药理学研究研究表明，除了中枢神经作用外，较大剂量的酸枣仁油(0.4～1.0ml/kg)对犬收缩血压和呼吸频率有一定降低作用，但降低低幅度较小，无明显的药理学和实验治疗学意义。酸枣仁油对犬心率、舒张压和呼吸深度无明显性影响。一般药理研究说明，酸枣仁油除了中枢抑制为主要药效作用外，未发现其它对心血管系统和呼吸系统的明显副作用或实验治疗作用。
权利要求
1.酸枣仁油的提取工艺，其特征在于1)榨取 首先将去除水分和核壳的酸枣仁破碎成粗粉，放压榨机上压榨，榨到无油流出为止，得到酸枣仁的残渣和粗品油；2)提取 将酸枣仁的残渣与石油醚按体积比为1∶2.5的比例混合，提取1.5小时，回收石油醚，得到精制油脂；3)精制 将压榨得到的粗品油加入4倍体积的石油醚中进行溶解过滤，回收石油醚至无味，弃去残渣得到精制油脂；4)混合 将二部分精制油脂合并，得到一种黄色澄清的粘稠油状液体——酸枣仁油，酸枣仁油置于蒸发锅中在110℃下加热2小时，挥去残留溶剂和水分，即得精制浅黄色澄明的酸枣仁油。
2.酸枣仁油软胶囊的制备工艺，其特征在于1)首先将200份明胶用350份的纯净水浸泡后移置烧瓶中置水浴中以55～65℃加热，均匀搅拌10分钟，得到溶胶；2)在溶胶中加入80份甘油和0.03份对羧基苯甲酸乙酯，在室温下静置30min后，在600～650mmHg的减压真空中刮去上浮泡沫，过滤制成胶液待用；3)将胶液制成胶板，再将500份酸枣仁油置于二块胶板之间，用钢模压制，由填充泵瘃啄准确控制每粒酸枣仁油胶囊含酸枣仁油0.5g，将制得的酸枣仁油胶囊置于27～29℃、相对湿度40％的条件下干燥24h，即得每粒胶丸内含酸枣仁油500mg。
3.有效成份用酸枣仁油制备的酸枣仁油软胶囊具有镇静、催眠、促进学习记忆和抗焦虑作用，可用于治疗神经衰弱和失眠症。
全文摘要
酸枣仁油的提取和软胶囊的制备及对中枢神经系统的作用，酸枣仁油的提取首先将酸枣仁放压榨机上压榨，得到酸枣仁残渣和粗品油；将残渣与石油醚混合，回收石油醚，得到精制油脂；将粗品油加入石油醚中溶解过滤，回收石油醚，弃去残渣得到精制油脂；将二部分精制油脂合并后置于蒸发锅中在加热，挥去残留溶剂和水分，即得酸枣仁油。酸枣仁油软胶囊的制备将明胶用水浸泡后置水浴中加热后加入甘油和对羧基苯甲酸乙酯，刮去上浮泡沫，过滤制成胶液；将胶液制成胶板，再将酸枣仁油置于二块胶板之间，用钢模压制即可；本发明通过对酸枣仁油的药理、毒理学研究验证了酸枣仁油具有镇静、催眠、促进学习记忆和抗焦虑作用，可用于治疗神经衰弱和失眠症。
文档编号A61K9/48GK1491693SQ03134558
公开日2004年4月28日 申请日期2003年9月10日 优先权日2003年9月10日
发明者袁秉祥 申请人:西安交通大学