治疗病毒性疾病和肝纤维化的干扰素药物治疗的制作方法

专利名称：治疗病毒性疾病和肝纤维化的干扰素药物治疗的制作方法
技术领域：
本发明涉及黄病毒感染、尤其是西尼罗病毒感染和丙肝病毒感染领域，并涉及肝纤维化领域。
背景技术：
目前美国西尼罗病毒感染的人数正在上升。像丙肝病毒一样，西尼罗病毒是α样黄病毒属的成员。大多数α样病毒，包括丙肝病毒和脊髓灰质炎病毒，对I型干扰素治疗是高度敏感的。西尼罗病毒的美国似乎将成为地方性的，因为它具有鸟类宿主并通过蚊子传播。西尼罗病毒可以造成严重的自限性发热、身体疼痛、脑肿胀、昏迷、瘫痪和死亡。尽管通常认为西尼罗病毒疾病导致死亡的概率仅有1/40,000，在美国死亡率似乎较高。尤其是，最近报道在路易斯安那州有5名死者。可能美国的菌株毒性更强，或者美国人群在遗传上易患更严重的临床病程。在中东国家，几个世纪以来，西尼罗病毒已经成为地方性的，这样可允许自然选择产生具有病毒抗性的人群。对这种疾病现在还没有有效治疗。
在美国，丙肝病毒(HCV)感染是最常见的慢性血液传播感染。虽然新的感染数在减少，但慢性感染的负担是相当大的，疾病控制中心估计在美国有三百九十万感染的人(1.8％)。慢性肝病是引起美国成人死亡的第10个主要原因，每年大约有25,000人死亡，或占所有死亡人数的约1％。研究表明40％的慢性肝病是HCV相关的，每年估计导致8000-10000人死亡。与HCV相关的末期肝病是成人中肝移植的最常见的指征。
近十年来快速地发展了慢性丙肝的抗病毒疗法，在治疗效果上已经得到了明显的改善。不过，即使用PEG化的IFN-α加上三氮唑核苷的组合疗法，仍有40-50％患者治疗失败，即为无应答者或复发者。这些患者目前没有有效的替代疗法。特别是在肝活组织检查中发现晚期纤维化或肝硬化的患者处于形成晚期肝病的并发症的显著危险，包括形成腹水、黄疸、静脉曲张出血、脑病和进行性肝衰竭，以及肝细胞癌的风险明显增加。
慢性HCV感染的高流行对于美国未来的慢性肝脏疾病的负担是一个重要的公共健康问题。来自国家健康和营养检测调查(NHANES III)的数据表明从20世纪60年代后期到20世纪80年代初期，特别在20-40岁的人中，新的HCV感染率大幅度上升。据估计患有20年或更长的长期HCV感染的人数从1990年到2015年会上升4倍多，从750,000到三百万以上。30或40岁感染的人的比甚至更多。由于HCV相关的慢性肝病的风险与感染的持续时间有关，对于感染20年以上的患者具有肝硬化进行性增加的危险，这将导致在1965-1985年间感染的患者中，与肝硬化有关的发病率和死亡率明显增加。
由于对肝脏的慢性毒损伤，如丙肝病毒(HCV)感染、自体免疫损伤和长期暴露于毒物，如酒精会引发肝纤维化。慢性毒损伤导致肝细胞损伤和伴随慢性炎症的修复的重复循环。在不定的时段里，由于宿主创伤修复反应的结果使异常的细胞外基质进行性地积累。留下未检测的导致纤维物质沉积增加，直至肝脏结构被扭曲，并危及肝脏的再生能力。瘢痕组织在肝脏内进行性地积聚最终引起组织病理学上所描绘的肝硬化，定义为纤维间隔的形成，它遍布于具有小结节形成的肝脏。
本领域需要治疗黄病毒感染，例如西尼罗病毒感染、丙肝病毒感染、登革热病毒感染、黄热病毒感染，以及治疗肝纤维化的改进方法。本发明旨在解决该需求。
文献METAVIR(1994)Hepatology 2015-20；Brunt(2000)Hepatol.31241-246；Alpini(1997)J.Hepatol.27371-380；Baroni等，(1996)Hepatol.231189-1199；Czaja等，(1989)Hepatol.10795-800；Grossman等，(1998)J.Gastroenterol.Hepatol.131058-1060；Rockey和Chung(1994)J.Invest.Med.42660-670；Sakaida等，(1998)J.Hepatol.28471-479；Shi等，(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9410663-10668；Baroni等，(1999)Liver 19212-219；Lortat-Jacob等，(1997)J.Hepatol.26894-903；Llorent等，(1996)J.Hepatol.24555-563；美国专利No.5,082,659；欧洲专利申请EP294,160；美国专利No.4,806,347；Balish等，(1992)J.Infect.Diseases 1661401-1403；Katayama等，(2001)J.ViralHepatitis 8180-185；美国专利No.5,082,659；美国专利No.5,190,751；美国专利No.4,806,347；Wandl等，(1992)Br.J.Haematol.81516-519；欧洲专利申请No.294,160；加拿大专利No.1,321,348；欧洲专利申请No.276,120；Wandl等，(1992)Sem.Oncol.1988-94；Balish等，(1992)J.Infectious Diseases 1661401-1403；Van Dijk等，(1994)Int.J.Cancer 56262-268；Sundmacher等，(1987)Current EyeRes.6273-276；美国专利Nos.6,172,046；6,245,740；5,824,784；5,372,808；5,980,884；公开的国际专利申请W096/21468；WO96/11953；Torre等，(2001)J.Med.Virol.64455-459；Bekkering等，(2001)J.Hepa tol.34435-440；Zeuzem等，(2001)Gastroenterol.1201438-1447；Zeuzem(1999)J.Hepatol.3161-64；Keeffe和Hollinger(1997)Hepatol.26101S-107S；Wills(1990)Clin.Pharmacokinet.19390-399；Heathcote等，(2000)New Engl.J.Med.3431673-1680；Husa和Husova(2001)Bratisl.Lek.Listy 102248-252；Glue等，(2000)Clin.Pharmacol.68556-567；Bailon等，(2001)Bioconj.Chem.12195-202；以及Neumann等，(2001)Science 282103；Zalipsky(1995)Adv.Drug Delivery ReviewsS.16，157-182；Mann等，(2001)Lancet 358958-965；Zeuzem等，(2000)NewEngt.J.Med.3431666-1672；美国专利Nos.5,985,265；5,908,121；6,177,074；5,985,263；5,711,944；5,382,657和5,908,121；Osborn等，(2002)J.PharmaCol.Exp.Therap.303540-548；Sheppard等，(2003)Nat.Immunol.463-68；Chang等，(1999)Nat.Biotechnol.17793-797；Adolf(1995)Multiple Sclerosis增补本1，1S44-S47。
发明概述本发明提供了治疗α病毒感染的方法；治疗丙肝病毒(HCV)感染的方法；治疗西尼罗病毒感染的方法；治疗登革热病毒感染的方法；治疗黄热病毒感染的方法；减少肝纤维化的方法；在患有肝纤维化的个体中增加肝功能的方法；降低与HCV和肝硬化相关的并发症的发病率的方法；以及在受病毒感染的患者中降低病毒负荷、或减少病毒清除的时间、或降低临床发病率或死亡率的方法。这些方法通常包括给予治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗病毒感染或肝纤维化。
发明特征本发明的特征是治疗α病毒感染的方法，所述方法通常包括共施用给个体IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂，其剂量能有效缓解此病的临床病程。本发明另一特征是通过给予个体协同有效量的IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂，以缓解此病的临床病程从而治疗α病毒感染的方法。
本发明的特征是治疗西尼罗病毒感染的方法，所述方法通常包括给予个体I型或III型干扰素受体激动剂、IFN-γ或同时给予IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂，其剂量能有效减少病毒清除时间，或降低临床发病率或死亡率。本发明另一特征是通过给予个体协同性有效剂量的IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂，以减少病毒清除时间或降低临床发病率或死亡率从而治疗西尼罗病毒感染的方法。
本发明的特征是治疗登革热病毒感染的方法，所述方法通常包括给予个体I型或III型干扰素受体激动剂、IFN-γ或同时给予IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂，其剂量能有效减少病毒清除时间，或降低临床发病率或死亡率。本发明另一特征是通过给予个体协同性有效剂量的IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂，以减少病毒清除时间或降低临床发病率或死亡率从而治疗登革热病毒感染的方法。
本发明的特征是治疗黄热病毒(YFV)感染的方法，所述方法通常包括给予个体I型或III型干扰素受体激动剂、IFN-γ或同时给予IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂，其剂量能有效减少病毒清除时间，或降低临床发病率或死亡率。本发明另一特征是通过给予个体协同性有效剂量的IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂，以减少病毒清除时间或降低临床发病率或死亡率从而治疗YFV感染的方法。
本发明的特征是治疗丙肝病毒(HCV)感染的方法，所述方法通常包括共施用给个体IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂，其剂量能有效获得持续病毒应答。本发明另一特征是通过给予个体协同有效量的IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂以实现持续病毒应答，从而治疗HCV感染的方法。
本发明的特征是减少个体肝纤维化的方法，所述方法通常包括同时给予减少肝纤维化有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。任选地，本发明的方法包括与由I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗实现的增强抗纤维化效应或减少肝纤维化有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物一起，给予患者I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ的组合物。本发明的另一个特征是通过给予协同有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ来减少个体肝纤维化的方法，任选包括同时给予患者由I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗实现的增强抗纤维化效应或减少肝纤维化有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物。在一些实施方案中，肝纤维化的程度通过肝活组织检查的预处理和后处理分阶段测定，其中在将预处理的肝活组织检查与后处理的活性检查相比时，如通过标准化的评分系统所测定的，肝纤维化的阶段减少至少一个单位。
本发明的特征是在患有肝纤维化的个体中增加肝功能的方法，所述方法通常包括同时给予增加肝功能有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。任选地，本发明的方法包括与由I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗实现的增加肝功能有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物一起，给予患者I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ的组合物。本发明的另一个特征是通过给予协同有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ来增加肝功能的方法，任选包括同时给予患者由I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗实现的增强抗纤维化效应和增加肝功能有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物。肝功能可通过测定选自血清转氨酶水平、凝血酶原时间、血清胆红素水平、血小板数、血清白蛋白水平、门静脉压的改善、腹水的减少、脑病水平的下降和内静脉曲张的程度下降等参数来显示。
本发明的特征是减少肝硬化并发症发病率的方法，所述方法通常包括同时给予减少肝硬化并发症发病率有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。任选地，本发明的方法包括与由I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗实现的减少肝硬化并发症发病率有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物一起，给予患者I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ的组合物。本发明的另一个特征是通过给予协同有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ来减少肝硬化并发症发病率的方法，任选包括同时给予患者由I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗实现的减少肝硬化并发症发病率有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物。肝硬化并发症的例子是门静脉压高压症、进行性肝功能不全和肝细胞癌。
如上所述，实施联合治疗个体α病毒感染、丙肝病毒感染、西尼罗病毒感染、登革热病毒感染、YFV感染和/或肝纤维化的方法时，给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。在一些实施方案中，在同一制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。在其它实施方案中，以分开的制剂给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。当以分开的制剂给予时，基本上可同时给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，或可在24小时内顺次给予。在许多实施方案中，皮下多剂给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。任选地，以受控药物输送装置给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。任选地，基本上连续地或经可控药物输送装置连续地给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。任选地，此受控药物输送装置是一种可植入的灌注泵，此灌注泵可通过皮下灌注向个体输送I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
在一些采用联合疗法的实施方案中，在I型或III型干扰素受体激动剂治疗的整个过程期间给予IFN-γ。在其它实施方案中，给予IFN-γ的时间与I型或III型干扰素受体激动剂治疗时间重叠。例如，IFN-γ治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂治疗开始前开始，并在I型或III型干扰素受体激动剂治疗结束前结束；IFN-γ治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂治疗开始后开始，并在IFN-γ治疗结束后结束；IFN-γ治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂开始后开始，并在I型或III型干扰素受体激动剂结束前结束；或IFN-γ治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂治疗开始前开始，并在I型或III型干扰素受体激动剂治疗结束后结束；或IFN-γ治疗可在IFN-α治疗开始前开始并在I型或III型干扰素激动剂治疗结束后结束。在一些采用共同给予吡非尼酮或吡非尼酮类似物的实施方案中，可在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗的连续时间可与吡非尼酮或吡非尼酮类似物治疗的持续时间共同存在。在其它实施方案中，用吡非尼酮或吡非尼酮类似物治疗的过程可与I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗的过程重叠，例如，吡非尼酮或吡非尼酮类似物治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗开始前开始，并在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗结束前结束；吡非尼酮治疗可在IFN-α和/或IFN-γ治疗开始后开始，并在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗结束前结束；或吡非尼酮治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ开始前开始，并在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗结束后结束。
在其它实施方案中，三氮唑核苷与I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ共同给予。再在其它实施方案中，三氮唑核苷与I型或III型干扰素受体激动剂、IFN-γ和吡非尼酮(或特定的吡非尼酮类似物)共同给予。
在许多实施方案中，上述任何方法包括给予IFN-α和IFN-γ。在这些实施方案中，所述方法包括共同给予三氮唑核苷、IFN-α和IFN-γ。在其它实施方案中，所述方法包括共同给予IFN-α、IFN-γ和吡非尼酮或吡非尼酮类似物。
在许多实施方案中，上述任何方法包括给予聚乙二醇化的(PEG化的)IFN-α偶联物。在一些实施方案中，PEG化IFN-α偶联物是单PEG化的IFN-α。在其它实施方案中，单PEG化IFN-α偶联物是通过IFN-α多肽的赖氨酸残基或N-末端氨基酸残基共价连接于单一PEG部分。在其它实施方案中，单PEG化IFN-α偶联物是IFN-α多肽，通过其赖氨酸残基的ε-氨基或α-氨基与PEG部分的活化羧基之间的酰胺键共价连接于一个PEG部分。在其它实施方案中，该单PEG化IFN-α偶联物是IFN-α多肽共价连接于一个线性PEG部分。在其它实施方案中，该单PEG化IFN-α偶联物是IFN-α多肽共价连接于一个线性30kD PEG部分(“单PEG(30kD，线性)化的IFN-α”)。在其它实施方案中，单PEG化IFN-α偶联物是IFN-α多肽通过其赖氨酸残基的ε-氨基或α-氨基与PEG部分的活化羧基之间的酰胺键共价连接于一个线性30kDPEG部分。在其它实施方案中，单PEG化IFN-α偶联物是IFN-α多肽通过其赖氨酸残基的ε-氨基或α-氨基与PEG部分的活化丙酰基之间的酰胺键共价连接于一个线性30kD PEG在。其它实施方案中，单PEG化IFN-α偶联物是IFN-α多肽共价连接于一个线性单甲氧基-PEG(mPEG)。在其它实施方案中，单PEG化IFN-α偶联物是IFN-α多肽和线性琥珀酰亚胺丙酸酯活化的30kD mPEG之间缩合反应的产物。在采用PEG化IFN-α偶联物的上述任何方法中，IFN-α多肽可以是共有干扰素(CIFN)多肽。在采用PEG化IFN-α偶联物的上述任何方法中，IFN-α多肽可以是干扰素alfacon-1的CIFN多肽。
附图简述

图1描述了在皮下注射西尼罗病毒前一天给予干扰素-αB/D和AmpligenTM对4-5周龄的雌性BALB/c小鼠血浆WNV滴度的影响。血浆在感染后3天收集。
图2描述了A549细胞中IFN-alfacon 1和IFN-γ1b抗VSV的剂量效应。
图3描述了A549细胞中干扰素的细胞毒测定结果。
图4a和4b描述了A549细胞中IFN-alfacon 1/IFN-γ1b的组合物(图4a比例为1∶120；图4b比例为1∶60)抗VSV的直接抗病毒效应。
图5a和5b描述了VSV/A549模型中对IFN-alfacon 1和IFN-γ1b组合物(图5a比例为1∶120；图5b比例为1∶60)抗病毒活性的EC-50、EC-75和EC 90浓度进行等效线图(isobologram)分析。
定义本文使用的术语“肝纤维化”指在慢性肝炎感染中发生的肝脏中瘢痕组织的生长。
术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”本文可互换使用，指哺乳动物，包括但不限于灵长动物，包括猿猴和人。
本文使用的术语“α病毒”及其语法上的变体指具有以下特征的一组病毒(i)RNA基因组，(ii)在宿主细胞的细胞质中的病毒复制，和(iii)病毒复制周期中出现的非DNA阶段。
本文使用的术语“肝功能”指肝的正常功能，包括但不限于，合成功能，包括但不限于，合成蛋白质，如血清蛋白(如白蛋白，凝固因子，碱性磷酸酶，氨基转移酶(如丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶)，5’-核苷酶，γ-谷氨酰胺酰转肽酶等)，合成胆红素，合成胆固醇和合成胆酸；肝的代谢功能，包括，但不限于，碳水化合物代谢，氨基酸和氨代谢，激素代谢和脂肪代谢；外源药物的去毒；血液动力学功能，包括内脏和门静脉的血液动力等。
术语“持续病毒应答”(SVR；也称作“持续应答”或“持久应答”)在这里是指个体对HCV感染治疗方案的反应，用血清HCV滴度表示。通常，“持续病毒应答”指在治疗结束后的至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月或至少约6个月的一段时间在患者血清内未发现可检测的HCV RNA(例如，每毫升血清小于约500、小于约200或小于约100个基因组拷贝)。
“治疗失败患者”在这里通常是指在对以前的HCV治疗无反应的HCV感染者(称为“无应答者”)，或最初对以前的治疗有反应但治疗效果无法持续的HCV感染者(称为“复发者”)。以前的治疗通常可包括用IFN-α单独疗法或IFN-α联合疗法进行治疗，所述联合疗法可包括给予IFN-α和一种抗病毒剂，如三氮唑核苷。
本文使用的术语“治疗”、“治疗的”指获得所需药理和/或生理效果。该效果就完全或部分预防疾病或其症状来说可能是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或由该疾病引起的副作用来说可能是治疗性的。本文使用的术语“治疗”包括对哺乳动物，特别是人的疾病的治疗，包括(a)预防可能易患疾病但尚未诊断出患有此病的受试者中出现的疾病；(b)抑制疾病，即阻止其发展；和(c)减轻疾病，即使疾病消退。
本文交替使用的术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”指哺乳动物，包括，但不限于，鼠、猿、人、哺乳动物家畜、哺乳动物和哺乳动物宠物。
“特定的吡非尼酮类似物”及其所有语法上的变化是指，但不限于，表1中列出的每个和所有的吡非尼酮类似物。
本文所用术语“I型干扰素受体激动剂”，指人的I型干扰素受体的任何天然产生的或非天然产生的、能通过受体结合并引起信号转导的配体。I型干扰素受体激动剂包括的干扰素有天然产生的干扰素、修饰的干扰素、合成的干扰素、PEG化干扰素、含有干扰素和异源蛋白的融合蛋白、改组的干扰素、对干扰素受体特异的抗体、非肽化学激动剂等。
本文所用术语“III型干扰素受体激动剂”指人IL-28受体α(“IL-28R”)的任何天然产生的或非天然产生的配体，其氨基酸序列见Sheppark等人描述，能通过该受体结合并引起信号转导。
本文的术语“给药事件”指对需要的患者给予抗病毒剂，该事件涵盖来自药物分发装置的一个或多个抗病毒剂的发放。这样，本文使用的术语“给药事件”包括，但不限于连续输递装置的安装(如，泵或其它控释的可注射系统)；和单皮下注射接着连续输递系统的安装。
本文所用术语“连续输送”(如“向某组织连续输送”)，意思指将药物运送至要输送的部位，如组织中；其方式是，在所选时间段向该组织不断输送所需量的药物，在所选时间段期间患者每分钟接受大约相同量的药物。
本文所用“可控性释放”(如“可控性药物释放”)，意为基本上不受使用环境影响以选择的速度或可控制的速度、间隔、和/或剂量释放药物(如I型或III型干扰素受体激动剂，如IFN-α)。因此“可控性释放”包括但不一定限于基本上持续地递送和模式递送(如一段时间的间歇性输送，定期或不定期间隔)。
本文所用“模式的”或“暂时的”指通常以基本上有规律的模式在预先选择的时间内输送药物(如除了与例如推注相关的时间)。“模式的”或“暂时的”药物输送，包括以递增、递减，基本恒定或脉冲性速度输送药物(如每单位时间的给药量、每单位时间给药的体积)，还包括持续或基本上持续或长期输送药物。
术语“可控药物输送装置”指包括其中含有的药物或其它所需物质受该装置本身的控制或决定而释放(如释放速度、时间)，并且基本上不受用药环境影响，或在用药环境中以可重复性速度释放药物的任何装置。
本文所用“基本上持续性”，例如“基本上持续性输注”或“基本上持续性输送”指输送药物的方式是在预定的药物输送期间基本上不停顿地输送药物，患者在该预定期间任何8小时间隔内所接受的药量从不下降至零。另外，“基本上持续性”药物输送还可包括以基本恒定的、预先选择的速度或速度范围(如每单位时间的输药量，单位时间输药的体积)输送药物，在所选的药物输送期间基本上不停顿地输药。
“基本稳定状态”在这里用于可随时间变化的生物学参数，指在一段时程后具有基本恒定值的生物学参数，这样，由时程中任何8小时内作为时间函数的生物学参数值确定的曲线下面积(AUC8小时)不会比时程中8小时内生物学参数的曲线下面积(AUC8小时平均)高或低约20％，优选不会高或低约15％，最优选不会高或低约10％。AUC8小时平均被定义为整个时程内生物学参数曲线下的面积(AUC总和)与时程内8小时间隔数(t总和1/3天)的商(q)，即q＝(AUC总和)/(t总和1/3天)。例如，在药物的血清浓度范围，当时程中任何8小时内药物血清浓度曲线下面积(AUC8小时)不比时程中8小时内药物血清浓度曲线下的平均面积(AUG8小时平均)高或低20％，即就药物血清浓度与时程而言，AUC8小时不比AUC8小时平均高或低20％，则药物的血清浓度在时程中基本保持在稳定状态。
在进一步阐述本发明前，应当理解，本发明不为描述的特定实施方案所限定，当然可以有所变化。也应当理解，本文使用的术语仅供阐述特定的实施方案，并非用来限定，因为本发明的范围仅由所附的权利要求书限定。
在提供了数值范围的情况下，应当理解，除非文中清楚地指出，否则各个居中值，直到下限单位的十分之一，在该范围的上限和下限之间，并且在该设定范围中的任何设定或居中值包含于本发明的范围内。可独立地包含在较小范围里的这些较小范围的上限和下限也包含在本发明中，它们服从于任何设定范围里特定的排除性限定。当设定的范围包括一个或两个限定值，排除两个包含的限定值中的任何一个的范围也包括在本发明中。
除非另作定义，本文所有的科技术语与本发明所属技术领域里常用的含义相同。虽然在实施或试验本发明时也可使用与本文所述的相似或等同的任何方法和材料，但现在描述的是优选的方法和材料。本文所提及的所有出版物引入以做参考，以揭示和描述与引用的出版物有关的方法和/或材料。
必须注意到，除非文中清楚地指出，本文和权利要求所用的单数形式“一种”和“该”包括复数。因此，例如，“一种方法”包括多个这类方法，“一种剂量”包括本领域熟练的技术人员已知的一种或多种剂量和其等价物，等等。
本文仅提供在本发明申请之日前公开的出版物。根据先前的发明，文中没有任何内容用于解释承认本发明没有资格在这些出版物之前的时间里提交。此外，提供的出版日期可能与实际的出版日期不同，这需要单独确认。
发明详述本发明提供了治疗α病毒感染的方法，包括治疗西尼罗病毒感染的方法、治疗登革热病毒感染的方法、治疗YFV感染的方法和治疗HCV感染的方法；以及治疗肝纤维化的方法，包括减少临床肝纤维化，降低肝纤维化发生的可能性，降低与肝纤维化有关的参数。这些方法通常涉及对需要的个体给予有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。在许多实施例中，特别感兴趣的是治疗人。
肝纤维化是与肝硬化有关的并发症，如门静脉高压症、进行性的肝功能不全和肝细胞癌等的先兆。降低肝纤维化因此可降低这类并发症的发病率。因此，本发明进一步提供了降低个体形成与肝硬化有关的并发症的可能性的方法。
本方法一般包括给予治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂或IFN-γ以治疗西尼罗病毒感染。本文使用的“治疗有效量的”I型或III型干扰素受体激动剂或IFN-γ表示治疗西尼罗病毒感染有效量的I型或III型干扰素受体激动剂或IFN-γ。
本发明的其它方法一般包括给予治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。本文使用的“治疗有效量的”I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ表示这样的量，它能有效治疗α病毒感染，或治疗西尼罗病毒感染，或治疗HCV感染，或在HCV感染中获得持续病毒应答，或减少肝纤维化，或降低个体发展成肝纤维化的可能性，或降低与肝纤维化有关的参数，或减少与肝硬化有关的疾病。
在某些实施方案中，本方法包括给予协同有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。本文使用的与具体疾病的联合治疗中使用的“协同有效量的”I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，以及其任何语法上的等价形式，表示这样的量，当这种量的I型或III型干扰素受体激动剂和这种量的IFN-γ联合使用时，其效果高于用于疾病单一疗法的相同量的I型或III型干扰素受体激动剂和用于疾病单一疗法的相同量的IFN-γ的简单相加效果。
例如，在某些实施方案中，这些方法涉及给予协同有效量的IFN-α和IFN-γ。本文使用的“协同有效量的”IFN-α和IFN-γ，以及其任何语法上的等价形式，表示这样的量，当这种量的IFN-α和这种量的IFN-γ联合使用时，其效果高于用于疾病单一疗法的相同量的IFN-α和用于疾病单一疗法的相同量的IFN-γ的简单相加效果。
在本发明的一些实施方案中，当用于疾病的联合疗法时，选择量的I型或III型干扰素受体激动剂和选择量的IFN-γ是有效的，但当用于疾病单一疗法时，所述选择量的I型或III型干扰素受体激动剂和/或选择量的IFN-γ是无效的。因此，本发明包括(1)一种治疗方案，其中，当用于疾病的联合疗法时，选择量的IFN-γ增强了选择量的I型或III型干扰素受体激动剂的疗效，其中所述选择量的IFN-γ当用于疾病单一疗法时未提供治疗益处，(2)一种治疗方案，其中，当用于疾病的联合疗法时，选择量的I型或III型干扰素受体激动剂增强了选择量的IFN-γ的疗效，其中所述选择量的I型或III型干扰素受体激动剂当用于疾病单一疗法时未提供治疗益处，(3)一种治疗方案，其中，当用于疾病的联合疗法时，选择量的I型或III型干扰素受体激动剂和选择量的IFN-γ提供了治疗益处，而当选择量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ分别单独用于疾病单一疗法时未提供治疗益处。本文使用的“协同有效量的”I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，以及其任何语法上的等价形式，应该理解为包括上述(1)-(3)任一项所述的任何方案。
α病毒本发明提供了治疗α病毒感染的方法。该方法一般包括给予个体改善疾病临床病程有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
所述方法是否可有效治疗α病毒感染可通过住院期次数或长度的减少、病毒清除时间的减少或临床发病率或死亡率的降低、或疾病应答的其它指标来确定。
总之，有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是这样的量，它能有效(i)减少病毒清除时间，(ii)降低疾病临床病程中的发病率或死亡率，或(iii)降低患者的病毒负荷。
西尼罗病毒本发明提供了治疗西尼罗病毒感染的方法。该方法一般包括给予个体减少个体内病毒清除时间和/或改善疾病临床病程有效量的I型或III型干扰素受体激动剂，或IFN-γ，或I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
所述方法是否可有效治疗西尼罗病毒感染可通过住院期次数或长度的减少、病毒清除时间的减少或临床发病率或死亡率的降低、或疾病应答的其它指标来确定。
总之，有效量的I型或III型干扰素受体激动剂，有效量的IFN-γ，或有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是这样的量，它能有效减少病毒清除时间，或有效降低疾病临床病程中的发病率或死亡率。
登革热病毒本发明提供了治疗登革热病毒感染的方法。该方法一般包括给予个体减少个体内病毒清除时间和/或改善疾病临床病程有效量的I型或III型干扰素受体激动剂，或IFN-γ，或I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
所述方法是否可有效治疗登革热病毒感染可通过住院期次数或长度的减少、病毒清除时间的减少或临床发病率或死亡率的降低、或疾病应答的其它指标来确定。
总之，有效量的I型或III型干扰素受体激动剂，有效量的IFN-γ，或有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是这样的量，它能有效减少病毒清除时间，或有效降低疾病临床病程中的发病率或死亡率。
黄热病毒本发明提供了治疗黄热病毒(YFV)感染的方法。该方法一般包括给予个体减少个体内病毒清除时间和/或改善疾病临床病程有效量的I型或III型干扰素受体激动剂，或IFN-γ，或I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
所述方法是否可有效治疗YFV感染可通过住院期次数或长度的减少、病毒清除时间的减少或临床发病率或死亡率的降低、或疾病应答的其它指标来确定。
总之，有效量的I型或III型干扰素受体激动剂，有效量的IFN-γ，或有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是这样的量，它能有效减少病毒清除时间，或有效降低疾病临床病程中的发病率或死亡率。
丙肝病毒本发明提供了治疗HCV感染的方法。该方法一般包括给予个体减少个体内病毒负荷并实现持续病毒应答有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
所述方法是否可有效治疗HCV感染可通过测量病毒负荷，或通过测量与HCV感染有关的参数，包括但不限于肝纤维化、血清转氨酶水平的升高以及肝脏中坏死炎性活性(necroinflammatory activity)来确定。肝纤维化的指标将在下面详细讨论。
病毒负荷可通过测量血清中的病毒滴度或水平来测定。这些方法包括，但不限于，定量聚合酶链式反应(PCR)和分支DNA(bDNA)试验。已经开发了测量HCV RNA的病毒负荷(滴度)的定量测定法。许多此类测定法可通过商业获得，其中包括定量反转录PCR(RT-PCR)(Amplicor HCV MonitorTM，Roche Molecular Systems，新泽西)；和分支DNA(脱氧核糖核酸)信号扩增测定(QuantiplexTMHCV RNA Assay(bDNA)，Chiron公司，Emeryville，加州)。参见，例如，Gretch等，(1995)Ann.Intern.Med.123321-329。
总之，有效量的IFNα和IFNγ是这样的量，它能降低病毒负荷到不可检测的水平，例如，到小于约5000、小于约1000、小于约500或小于约200基因组拷贝/mL血清。在一些实施方案中，有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ是可有效降低病毒负荷至小于100基因组拷贝/mL血清的量。在许多实施方案中，本发明的方法实现了持续病毒应答，例如，在治疗结束后的至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月或至少约6个月病毒负荷被降低至不可检测的水平。
所述方法是否可有效治疗HCV感染可通过测量与HCV感染有关的参数(如肝纤维化)来确定。测量肝纤维化程度的方法将在下面详细讨论。在一些实施方案中，肝纤维化的血清标记水平说明了肝纤维化的程度。
作为一个非限制性的实施例，用标准测定法测量了血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平。总之，ALT水平小于约45国际单位被认为是正常的。在一些实施方案中，有效量的IFNα和IFNγ是能有效将ALT水平降低至小于约45U/ml血清的量。
治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是这样的量，与未经治疗的个体或接受安慰剂治疗的个体的标记物水平相比，它能将肝纤维化标记物的血清水平有效降低至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％或至少约80％，或更多。测量血清标记物的方法包括基于免疫学的方法，例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定等，采用对所给血清标记物特异的抗体。
纤维化用I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗是否能有效地降低肝纤维化通过许多成熟的检测肝纤维化和肝功能的任何技术来测定。是否减少了肝纤维化通过分析肝活组织检查样品来决定。肝的活组织检查的分析包括评估两个主要部分通过“分级”评估坏死炎症来测定疾病的严重程度和进展中的疾病活动性，通过分“阶段”来评估纤维化的损害和实质或脉管改变的损伤以反应长期疾病的进展。参见，如Brunt(2000)Hepatol.31241-246；和METAVIR(1994)Hepatology 2015-20。基于肝活组织检查的分析可给出评分。有许多标准化的评分系统，它们可定量地评估纤维化的程度和严重性。这些评分系统包括METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig和Ishak评分系统。
METAVIR评分系统基于肝活组织检查的各种特征分析，包括纤维化(门静脉纤维化、小叶中心纤维化和硬化)；坏死(粉碎性和裂片性坏死，嗜酸性收缩和气胀变性)；炎症(门静脉管炎症、门静脉淋巴聚合和门静脉炎症的分布)；胆管改变；和Knodell指数(对外周门静脉坏死、小叶坏死、门静脉炎症、纤维化和总体疾病活性的评分)。METAVIR系统中的每个阶段的定义如下0分，没有纤维化；1分，门静脉管星状扩张但没有形成隔膜；2分，门静脉管扩张，有少量隔膜形成；3分，有许多隔膜，没有硬化；4分，硬化。
Knodell评分系统也称为肝炎活性指数，根据组织学特征分为4类I.外周门静脉和/或桥坏死；II.小叶内变性，灶性坏死；III.门静脉炎症；和IV.纤维化。在Knodell分阶段系统中，评分如下0分，没有纤维化；1分，轻度纤维化(纤维性门静脉扩张)；2分，中度纤维化；3分，严重纤维化(桥纤维化)；4分，硬化。分数越高，肝组织损伤越严重。Knodell(1981)Hepatol.1431。
Scheuer评分系统的评分如下0分，没有纤维化；1分，扩大的、纤维化的门静脉管；2分；外周门静脉或门静脉一门静脉隔膜，但具有完整的结构；3分，纤维化，结构被扭曲，但没有明显的硬化；4分，可能或肯定硬化。Scheuer(1991)J.Hepatol.13372。
Ishak评分系统如Ishak(1995)J.Hepatol.22696-699所述。阶段0，没有纤维化；阶段1，一些门静脉区域纤维性扩张，有或没有短纤维隔膜；阶段2，大多数门静脉区域有纤维性扩张，有或没有短纤维隔膜；阶段3，大多数门静脉区域有纤维性扩张，偶有门静脉到门静脉(P-P)桥；阶段4，门静脉区域纤维性扩张，有明显的p-p桥和门静脉到中心(P-C)桥；阶段5，明显的p-p和P-C桥，偶有小节结(不完全硬化)；阶段6，硬化，可能的或肯定的。抗纤维疗法的益处也可用Child-Pugh评分系统进行测定和评估，该评分系统包括一个多组成点系统，该系统基于血清胆红素水平异常，血清白蛋白水平异常，凝血酶原时间异常，腹水的存在和严重程度，和脑病的存在和严重程度。根据这些参数异常性的存在和严重程度，患者可分为三类A、B或C，其严重程度递增。
在一些实施方案中，治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是能使治疗前和治疗后肝活组织检查比较中纤维化阶段改变一个单位或更多单位的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ的量。在特定的实施方案中，治疗有效量I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ能减少肝纤维化程度至少一个单位(METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig或Ishak评分系统中的单位)。
次要的或非直接的肝功能指数也可用来评估I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗的效果。根据特定的胶原质着色和/或肝纤维化的血清标记对肝脏纤维化定量程度的形态测定计算机化的半自动评估也可作为受试者治疗方法的效果的指征进行测定。次要的肝功能指数包括，但不限于，血清转氨酶水平、凝血酶原时间、胆红素水平、血小板数、门静脉压、白蛋白水平和Child-Pugh评分的评估。
与未治疗的个体或安慰剂治疗的个体的肝功能指数相比，有效量的IFN-α和IFN-γ是使肝功能指数增加至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，或至少约80％或更多的量。本领域的熟练的技术人员可使用标准的分析方法(许多都可市售，且在临床上常规使用)容易地测得这类肝功能指数。
肝纤维化的血清标记也可作为受试者治疗方法的效果的指征进行测量。肝纤维化的血清标记物包括，但不限于，透明质酸盐、N-末端前胶原III肽、7S域的IV型胶原、C-末端前胶原I肽和层粘连蛋白。另外的肝纤维化的生物化学标记物包括α-2-巨球蛋白、结合珠蛋白、γ球蛋白、载脂蛋白A和γ谷氨酰转肽酶。
与未治疗个体或用安慰剂治疗的个体的肝纤维化的标记物的血清水平相比，治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是使标记物的血清水平降低至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，或至少约80％或更多的量。本领域熟练的技术人员可使用标准的分析方法(许多都可市售，且在临床上常规使用)容易地测得这类肝纤维化的血清标记物。测量血清标记物的方法包括基于免疫的方法，如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫分析等，它们使用对给定的血清标记物具有特异性的抗体。
也可使用功能性肝保留的定量试验来评估用I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗的效果。这些试验包括靛蓝清除(ICG)、半乳糖消除能力(GEC)、氨基比林呼吸试验(ABT)、安替比林清除试验、单乙基甘氨酸-二甲代苯胺(MEG-X)清除试验和咖啡因清除试验。
本文使用的“与肝硬化有关的并发症”指失代偿性肝病的后遗症的疾病，即它们在肝纤维化后发生，并是肝纤维化发展的结果，它们包括，但不限于，形成腹水、静脉曲张出血、门静脉高压、黄疸、进行性肝功能不全、脑病、肝细胞癌、肝衰竭需要肝移植和与肝有关的死亡。
治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是与未治疗个体或安慰剂治疗的个体相比，能有效减少与肝硬化有关的疾病(如个体形成这些疾病的可能性)的发病率至少约10％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约55％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，或至少约80％或更多的量。
用I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗是否能有效地减少与肝硬化有关的疾病的发病率可由本领域熟练的技术人员容易地测定。
肝纤维化减少能增加肝功能。因此，本发明提供了提高肝功能的方法，一般涉及给予治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。肝功能包括，但不限于，合成蛋白质，如血清蛋白(如白蛋白，凝固因子，碱性磷酸酶，氨基转移酶(如丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶)，5’-核苷酶，γ-谷氨酰胺酰转肽酶等)，合成胆红素，合成胆固醇和合成胆酸；肝的代谢功能，包括，但不限于，碳水化合物代谢，氨基酸和氨代谢，激素代谢和脂肪代谢；外源药物的去毒；血流动力功能，包括内脏和门静脉血流动力学等。
肝功能是否增加可由本领域熟练的技术人员使用成熟的肝功能试验容易地确定。这样，如白蛋白，碱性磷酸酶，丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、胆红素等肝功能标记物的合成可通过用标准的免疫和酶分析测量血清中这些标记物的水平进行评估。用标准方法通过门静脉楔入压和/或耐受力可测量内脏循环和门静脉血流动力学。代谢功能可通过测量血清中氨水平进行测定。
肝脏通常分泌的血清蛋白是否在正常的范围内可通过使用标准的免疫和酶分析方法测量这类蛋白质的水平来确定。本领域熟练的技术人员知道这类血清蛋白的正常范围。下列是非限制性实施例。丙氨酸转氨酶的正常范围是约45单位/升血清。天冬氨酸转氨酶的正常范围是约5-40单位/升血清。胆红素用标准分析测量。正常的胆红素水平通常低于约1.2mg/dL。血清白蛋白水平用标准分析测量。正常的血清白蛋白范围是约35-55g/L。用标准分析测定凝血酶原时间的延长。正常的凝血酶原时间比对照长约不足4秒。
治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是能有效提高肝功能至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％或更多的量。例如，治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ是能将肝功能的血清标记物的升高水平有效减少至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％或更多的量，或将肝功能的血清标记物水平降低到正常范围里。治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ也是能将肝功能的血清标记物的降低水平有效增加至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％或更多的量，或将肝功能的血清标记物水平提高到正常范围内。
I型干扰素受体激动剂在上述任一方法中，某些实施方案给予I型干扰素受体激动剂，I型干扰素受体激动剂包括IFN-α、IFN-β、IFN-τ、IFN-ω、对I型干扰素受体特异的抗体激动剂；和包括非多肽激动剂的任何其它I型干扰素受体激动剂。
干扰素-α任何已知的IFN-α可用于本发明。本文所用术语“干扰素-α”指能抑制病毒复制和细胞增殖及调节免疫应答的相关多肽家族。术语“IFN-α”包括天然产生的IFN-α、合成的IFN-α、衍生的IFN-α(如PEG化IFN-α、糖基化IFN-α等)和天然产生或合成的IFN-α类似物；基本上具有天然产生的IFN-α所述抗病毒性能的任何IFN-α。
合适的α干扰素包括但不限于天然产生的IFN-α(包括但不限于天然产生的IFN-α2a、IFN-α2b)、重组IFN-α2b，如Schering公司(Kenilworth，NJ)的Intron-A干扰素、Hoffmann Roche，Nulley NJ的重组IFN-α2a，如Roferon干扰素；BoehringerIngelheim制药公司(Ridgefield，Conn)的重组IFN-α2c，如Berofor α2干扰素；日本Sumitomo的天然α干扰素的纯化混合的IFNα-n1，如Sumiferon或Glaxo-Wellcome公司(英国伦敦)的Wellferon IFNα-n1(INS)和Interferon Sciences制备的可从Purdue Frederick公司，Norwalk Conn购得的天然IFN-α的IFNαn3混合物，其商标名为Alferon。
术语“IFN-α”，还包括共有IFN-α。共有IFN-α(也称为“CIFN”和“IFN-con”和“共有干扰素”)包括但不限于美国专利4,695,623和4,897,471中所公开的命名为IFN-con1、IFN-con2和IFN-con3的氨基酸序列，和通过测定天然产生的IFN-α的共有序列而确定的共有干扰素(如Infergen，InterMune公司，Brisbane，Caiif)。IFN-con1是Infergenalfacon-1产品中的共有干扰素制剂。Infergen共有干扰素产品本文以其商品名(Infergen)或以其属名(IFN-alfacon 1)称呼。可如上述专利所述或其它标准方法合成编码IFN-con的DNA序列。特别感兴趣采用CIFN。
也适用于本发明的是含IFN-α和异源多肽的融合多肽。合适的IFN-α融合多肽包括但不限于Albuferon-αTM(一种人白蛋白和IFN-α的融合产品；人GenomeSciences；见例如Osborn等，J Pharmacol Exp.Therap 303540-548.2002)。也适合用于本发明的是IFN-α的基因改组形式，见例如Masci等，Curr.Oncol Rep，5108-113.2003。
PEG化IFN-α术语“IFN-α”，还包括IFN-α的衍生物，它们是衍生的(如化学修饰的)而改变某些性能如血清半衰期。因此，术语“IFN-α”包括糖基化IFN-α、聚乙二醇衍生的IFN-α(PEG化IFN-α)等。PEG化IFN-α及其制备方法见例如美国专利5,382,657；5,981,709和5,951,974。PEG化IFN-α包括PEG和上述IFN-α分子任一的偶联物，包括但不限于PEG与IFN-α-2a(Referon Hoffman La-Roche，Nutley，新泽西州)、IFN-α-2b(Intro，Schering-Plough，Madison，新泽西州)、IFN-α2c(Berofor-α，Boehriager Ingelheim，Ingelheim，德国)偶联；以及与通过测定天然产生的IFN-α的共有序列所确定的共有干扰素(Infergen，InterMune Inc，Brisbane，Caiif)偶联。
上述任何IFN-α多肽可用一个或多个聚乙二醇部分修饰，即PEG化。PEG化IFN-α多肽的PEG部分偶联于IFN-α多肽的一个或多个氨基酸侧链。一些实施方案中，PEG化IFN-α只在一个氨基酸上含有PEG部分。其它实施方案中，PEG化IFN-α在二个或多个氨基酸上含有PEG部分，如该IFN-α含有结合于2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或者10个不同氨基酸残基的PEG部分。
IFN-α可通过氨基、巯基、羟基或羧基直接与PEG偶联(即无接头基团)。
在某些实施方案中，PEG化IFN-α是在IFN-α多肽的氨基端(N-端)或附近PEG化。例如，PEG部分偶联于IFN-α多肽的氨基酸1-4或氨基酸5-10的1个或多个氨基酸残基。
其它实施方案中，PEG化IFN-α是在约10-28位的一个或多个氨基酸残基上被PEG化。
在其它实施方案中，PEG化IFN-α是IFN-α多肽的羧基端(C-端)或附近的PEG化，例如，氨基酸156-166或150-155位的一个或多个残基处的PEG化。
其它实施方案中PEG化IFN-α是氨基酸100-114位的一个或多个氨基酸残基的PEG化。
IFN-α蛋白质的受体结合域和/或活性位点域中或附近的氨基酸残基的聚乙二醇化衍生，可能破坏这些结构域的功能。本发明的某些实施方案中，要避免被PEG化的氨基酸，包括氨基酸30-40位的氨基酸残基和氨基酸113-149位的氨基酸残基。
某些实施方案中，PEG通过接头基团结合于IFN-α。此种接头基团是任何生物相容的接头基团。其中“生物相容性”表示此化合物或基团无毒性，可用于体外或体内但不引起损伤、恶心、疾病或死亡，例如，PEG可通过醚键、脂键、硫醇键或胺键与该接头基团结合。合适的生物相容性接头基团包括但不限于酯基、酰胺基、氨甲酰基、羧基、羟基、糖基、琥珀酰亚胺基(例如包括琥珀酰亚胺琥珀酸(SS)、琥珀酰亚胺丙酸(SPA)、琥珀酰亚胺丁酸(SBA)、琥珀酰亚胺羧甲醇盐(SCM)、琥珀酰亚胺琥珀酰胺(SSA)或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS))、环氧基、氧羰咪唑基(例如，包括羰基二咪达唑(CDI))、硝苯基(例如包括硝基苯碳酸盐(NPC)或三氯苯碳酸盐(TPC))、trysylate、醛基、异氰酸基、乙烯砜基、酪氨酸基、半胱氨酸基、组氨酸基或伯氨基。
制备琥珀酰亚胺丙酸(SPA)和琥珀酰亚胺丁酸(SBA)酯活化的PEG的方法见美国专利5,672,662(Harris等)和WO97/03106所述。
使PEG连接于IFN-α多肽的方法是本领域已知的，可采用任何已知的方法，参见例如Park等，Anticancer Res.，1373-76，1981；Zaplipsky和Lee，《聚乙二醇化学生物技术和生物医学应用》(Polyethylene Glycol Chemistry；Biotechnicaland Biomedical Applications)，J.M.Harris编；Plenum Press NY.第21章，1992；美国专利5,985,265；5,672,662(Harris等，)和WO97/03106。
PEG化IFN-α及其制备方法见美国专利5,382,657；5,981,709；5,985,265和5,951,974中所述。PEG化IFN-α包括PEG与任何上述IFN-α分子的偶联物，包括但不限于PEG与IFN-α-2a(Referon，Hoffman.LaRoche，Nutley，N.J.)偶联，此PEG化的Roferon称为Pegasys(Hoffman LaRoche)；与IFN-α-2b(Intron，Schering-plough，Madison，N.J)偶联，此PEG化Intron称为PEG-Intro(Schering-Plough)；与IFNα-2c(Berofor Alpha，Boehringer Ingelheim，Ingelheim，德国)偶联，以及与通过测定天然产生的IFN-α的共有序列所确定的共有干扰素CIFN(Infergen，InterMune公司，Brisbane，Calif)偶联，此PEG化Infergen称为PEG-Infergen。
许多实施方案中，此PEG是能与IFN-α多肽上的伯氨基反应的单甲氧PEG分子。用单甲氧PEG通过还原性烷化修饰多肽的方法是本领域已知的，可参见如Chamow等，Bioconj Chem，5133-140，1994。
在一非限制性实施例中，PEG通过SPA接头基与IFN-α连接。PEG的SPA酯及其制备方法见美国专利5,672,662中所述。SPA键提供了在IFN-α多肽上与游离胺基连接。
例如，PEG部分通过PEG的丙基和IFN-α多肽中表面暴露的赖氨酸残基的ε氨基之间的酰胺键的键而共价连接。这类键可通过例如PEG的α甲氧基，ω丙酸活化酯的缩合而形成(mPEGspa)。
作为一非限制性实施例，优选用于本文的一种单PEG化CIFN偶联物具有约30kD的线性PEG部分，通过共价键连接于CIFN多肽，其中的共价键是PEG部分的丙酰基和CIFN多肽中表面暴露的赖氨酸残基的ε氨基之间的酰胺键，其中表面暴露的赖氨酸残基选自lys31、lys50、lys71、lys84、lys121、lys122、lys134、1ys135和lys165，通过PEG的α甲氧基，ω丙酸活化酯的缩合而形成酰胺键。
聚乙二醇适合与IFN-α多肽偶联的聚乙二醇是室温时水溶性的，具有通式R(O-CH2-CH2)nO-R，其中R是氢或烷基或链烷醇基等保护基，n是1-1000的整数。其中R是通常1-8个碳的保护基团。
许多实施方案中，PEG至少具有一个羟基如末端羟基，可修饰此羟基以产生与氨基如赖氨酸残基的ε氨基，多肽的N端游离氨基或其它任何氨基如天冬酰胺、谷氨酰胺，精氨酸或组氨酸的氨基反应的功能基团。
其它实施方案中，衍生PEG，使其与IFN-α多肽中的游离羧基，如IFN-α多肽羧基端的游离羧基反应。与IFN-α羧基端的游离羧基反应的合适的PEG衍生物包括但不限于PEG的PEG胺和肼衍生物(如PEG-NH-NH2)。
其它实施方案中，衍生PEG，使其含有末端硫代羧酸基-COSH，它选择性地与氨基反应产生酰胺衍生物。由于硫羰酸的反应特性，可实现某些氨基的对其它氨基的选择性。例如-SH在适合的PH条件下显示与N端氨基反应中充分离去基团能力，这样质子化了赖氨酸中的ε氨基并保留了非亲核性。另一方面，在合适的PH条件下反应可选择性使一些可接近的赖氨酸残基反应。
其它实施方案中，PEG含有反应性酯，如PEG链末端处的N-羟基琥珀酰酸酯。这类含N-羟基琥珀酰酸酯的PEG分子能在特定PH，如中性6.5-7.5条件下，与选择的氨基反应。例如，可在中性PH条件下选择性修饰N端氨基。然而，如果该试剂的反应性极强，也可与赖氨酸的游离-NH2基反应。
可将PEG直接或通过一接头偶联于IFN-α多肽。某些实施方案中，在IFN-α多肽上加一接头，形成接头修饰的IFN-α多肽。这类接头提供了多种官能度，如巯基、胺基或羧基以将PEG试剂与接头修饰的IFN-α多肽相偶联。
某些实施方案中，偶联于IFN-α多肽的PEG是线性的。其它实施方案中，偶联于IFN-α多肽的PEG是分支的。分支PEG衍生物见美国专利5,643,575中所述。“星形PEG(star-PEG)”和多臂PEG(multi-armed PEG)见Shearwater Polymers有限公司的目录“聚乙二醇衍生物1997-1998”中所述。本领域包括美国专利6,046,305中描述的星形PEG。
通常所用的PEG部分量范围为约2kDa-100kDa。在PEG之后，术语“约”指聚乙二醇制剂中某些分子的分子量高于或略低于标明的分子量，例如适合于与IFN-α偶联的PEG的分子量约2kDa-5kDa，约5kDa-10kDa，约10kDa-15kDa，约15kDa-20kDa，约20kDa-25kDa，约25kDa-30kDa，约30kDa-40kDa，约40kDa-50kDa，约50kDa-60kDa，约60kDa-70kDa，约70kDa-80kDa，约80kDa-90kDa，约90kDa-100kDa。
制备PEG-IFN-α偶联物如上所述，PEG部分可直接或通过一接头与IFN-α多肽N端或附近，内部或C端或附近的氨基酸残基连接。可在溶液中或固相中进行偶联。
N-末端连接使PEG部分连接于IFN-α多肽N端或附近的氨基酸残基的方法是本领域已知的，例如见美国专利5,985,265。
一些实施方案中，采用了已知的选择性获得N端化学修饰的IFN-α的方法。例如，可采用还原性烷化修饰蛋白质的方法，使具体蛋白质中可用于衍生的不同类型伯氨基(赖氨酸对的N端)发生差异反应性。在适当的反应条件下可实现该蛋白质N端与含羰基聚合物的基本上选择性衍生。此反应在有利于赖氨酸残基的ε氨基和蛋白质N端残基的α氨基之间存在pKa差异的PH条件下进行。通过这种选择性衍生可控制PEG部分与IFN-α的连接，与聚合物的偶联优先发生在IFN-α的N端，而其它反应基团如赖氨酸侧链氨基不发生明显修饰。
C-末端连接美国专利5,985,265描述的N端特异性偶联方法提供了占优势的单PEG化产物。然而，纯化方法的目的是去除过量的试剂和少量的多种PEG化产物，去除N端封闭的多肽。就治疗而言，这种方法使制造成本明显增加。例如，对表征良好的InfergenAlfacon-1CIFN多肽氨基酸序列结构的检测，揭示羧基端的剪修约为5％，因而只有一条主要的C端序列。因此，在一些实施方案中未采用N端PEG化的IFN-α，代替的是C端PEG化的IFN-α多肽。
因此预想获得单PEG化Infergen产品的有效合成和治疗方法如下可选择性制备C端有或没有间隔的PEG试剂。如一端为甲酯另一端具有氨基功能的修饰的聚乙二醇可用作起始材料。
可制备或获得水溶性碳二亚胺作为缩合剂。用水溶性碳二亚胺作为缩合剂偶联IFN-α(如InfergenAlfacon-1 CIFN或共有干扰素)，通常在具有合适缓冲液最优PH值的水介质中进行，能有效形成酰胺键。可将高分子量PEG共价地加到蛋白质上以提高分子量。
试剂选择取决于方法优化研究。合适试剂的非限制性例子是EDAC或1-乙基-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺。EDAC的水溶性允许直接加入反应物中无需先溶解有机溶剂。过量试剂和形成的交联反应副产品异脲都是水溶性的，可通过透析或凝胶过滤容易去除。制备浓缩的EADC水溶液有利于在反应物中加入小摩尔量EDAC。鉴于试剂的水不稳定性，制备贮备液并立即使用。文献中大多数合成方案提出最佳反应介质的PH在4.7-6.0之间。然而缩合反应在高达PH7.5时进行，产量不会明显损失。可用水作为溶剂。鉴于考虑采用Infergen，优选介质为预先滴定到PH4.7-6.0之间的2-(N-吗啉)乙烷磺酸缓冲液。然而由于产品溶于同一缓冲液中，也可采用PH7-7.5的0.1M磷酸缓冲液。优化PEG胺与IFN-α分子的比例，使C端羧基残基选择性地PEG化以产生单PEG化衍生物。
即使采用上述名称或结构的PEG胺，这类衍生物只是示范性的，其它基团如肼基衍生物PEG-NH-NH2也可与IFN-α蛋白质的羧基缩合。除水相外，反应也可在固相上进行。可从分子量300-40000范围的化合物清单中选择聚乙二醇。也可根据偶联效率、纯化衍生物的体外和体内生物性能，即循环时间、抗病毒活性等来选择不同的聚乙二醇。
此外，可将合适的试剂间隔加入蛋白的C端。间隔可含有反应基团如SH、NH2或COOH，能与适当的PEG偶联提供高分子量IFN-α衍生物。可涉及联合的固/液相方法来制备C端PEG化干扰素。例如用Gly-Gly-Cys-NH2间隔在固相上延伸IFN-α的C端，然后用适当分子量的活化二硫吡啶基PEG试剂在溶液中单PEG化。由于C端偶联不依赖于N端封闭，设想的方法和产品在成本上(不象N端PEG化方法要浪费1/3蛋白质)有利，并对治疗慢性丙肝感染、肝纤维化等的经济疗法有贡献。
除IFN-α的C端-COOH基团外，在与PEG试剂反应导致单PEG化或导致多种PEG化的分子中，某位点的氨基酸残基可能有更具反应性的羧基。预想这些反应最好是由于分子C端的空间自由度和碳二亚胺及如在支链分子中PEG试剂施加的空间位阻，将是最小的。因此Infergen和类似的在宿主系统中天然或表达的蛋白质的优选PEG修饰模式，其N端可能不同程度被封闭，以提高效率和保持较高的体内生物活性。
获得C端PEG化的另一方法如下；可采用能排斥与埋藏在IFN-α螺旋中或内部的羧基残基反应的空间位阻试剂，获得C末端PEG化的选择性。例如，一种这样的试剂可以是分子量约40KD的支链PEG，此试剂可按以下方法合成用合适的试剂，如二环已基碳二亚胺或水溶性EDC，缩合OH3C-(CH2CH2O)n-CH2CH2NH2+谷氨酸(即HOCO-CH2CH2CH(NH2)-COOH)以得到支链PEG 试剂OH3C-(CH2CH2O)nCH2CH2NHCOCH(NH2)CH2OCH33-(CH2CH2O)n-CH2CH2NHCOCH2。
此试剂可过量使用，将氨基与IFN-α的游离和挠性羧基偶联形成肽键。
如需要可用任何已知方法使PEG化的IFN-α与末PEG化的IFN-α分开。这些方法包括但不限于离子交换层析、大小排阻层析、或二者联合。例如，当PEG-IFN-α偶联物是单PEG化IFN-α时，先用离子交换层析分离产物得到具有单PEG化物质的电荷特征的物质(可能存在具有相同表观电荷的其它多种PEG化物质)，然后用大小排阻层析分离单PEG化物质。
IFN-β术语干扰素-β(“IFN-β”)包括天然产生的，非天然产生的IFN-β多肽及保留了亲代天然产生的或非天然产生的IFN-β抗病毒活性的类似物。
可通过本发明连续输送方法输送各种IFN-β中任何一种。合适的β干扰素包括但不限于天然产生的IFN-β；IFN-β1a，如Avonex(Biogen Inc.)和Rebif(Serono.SA)；IFN-β1b(Betaseron，Berlex)等。
IFN-β制剂可含有N-端封闭的种类，其中N-端氨基酸被一酰基如甲酰基、乙酰基、丙二酰基等酰化。也适合采用共有IFN-β。
可用任何已知方法生产IFN-β多肽，可用标准方法合成编码IFN-β的DNA序列。许多实施方案中，IFN-β多肽是制备的DNA序列转化或转染细菌宿主如大肠杆菌或真核宿主细胞(如酵母菌、哺乳动物细胞如CHO细胞等)后表达的产物。这些实施例中，IFN-β是“重组IFN-β”，宿主细胞是细菌宿主细胞，IFN-β被修饰而含有N-端甲硫氨酸。
已知如本文所述IFN-β可含有一个或多个修饰的氨基酸如糖基化、化学修饰等。
IFN-τIFN-τ包括天然产生的、非天然产生的IFN-τ多肽、及保留了亲代天然产生的或非天然产生的IFN-τ的抗病毒活性的类似物。
合适的τ干扰素包括但不限于天然产生的IFN-τ；Tauferon(Pepgen公司)等。
IFN-τ可含有GenBank登录号P15696，P56828，P56832，P56829，P56831，Q29429，Q28595，Q28594，S08072，Q08071，Q08070，Q08053，P56830，P28169，P28172和P28171中任何一项所示的氨基酸序列。可用本领域已知的各种方法改变任何已知的IFN-τ多肽的序列，以产生序列中的寻靶变化。变体多肽通常基本上类似于本文提供的序列，即至少有一个氨基酸不同，可能至少有二个但不超过10个氨基酸不同。序列变化可以是取代、插入或缺失。保守性氨基酸取代通常包括以下组内的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(丝氨酸、苏氨酸)；(赖氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改变一级氨基酸序列的感兴趣修饰，包括多肽的化学衍生，如乙酰化或羧化；导入或去除糖基化位点的氨基酸序列变化；使蛋白质易于PEG化的氨基酸序列变化等。还包括糖基化修饰，如合成和加工期间改变多肽的糖基化模式，或在进一步加工步骤中如使多肽接触能影响糖基化的酶(如哺乳动物糖基化或去糖基化酶)，改变多肽的糖基化模式。还包括具有磷酸化氨基酸残基如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸的序列。
IFN-τ制剂可含有N-封闭的种类，其中N-端氨基酸被一酰基，如甲酰基、乙酰基、丙二酰基等酰化，也适合采用共有IFN-τ。
可用任何已知方法生产IFN-τ多肽。可用标准方法合成编码IFN-τ的DNA序列。许多实施方案中，IFN-τ多肽是制备的DNA序列转化或转染入细菌宿主如大肠杆菌或真核宿主细胞(如酵母菌、哺乳动物细胞如CHO细胞等)中表达的产物。这些实施例中，IFN-τ是“重组IFN-τ”。宿主细胞是细菌宿主细胞时，IFN-τ被修饰而含有N-端甲硫氨酸。
已知如本文所述IFN-τ可含有一个或多个修饰的氨基酸残基如糖基化、化学修饰等。
IFN-ω干扰素ω(“IFN-ω”)包括天然产生的、非天然产生的IFN-ω多肽、及保留了亲代天然产生的或非天然产生的IFN-ω的抗病毒活性的类似物。任何已知的ω干扰素可通过本发明的连续输送方法输送。合适的IFN-ω包括但不限于天然产生的IFN-ω、重组的IFN-ω，如Biomed 510(BioMedicines)等。
IFN-ω可含有GenBank登录号NP_002168或AAA70091所示的氨基酸序列。可以本领域域已知的各种方法改变任何已知IFN-ω多肽的序列。变体多肽通常具有与上述序列基本上相似的序列，即至少一个氨基酸不同，可能至少二个但不超过10个氨基酸不同。序列变化可以是取代、插入或缺失。保守性氨基酸取代通常包括以下组内的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(丝氨酸、苏氨酸)；(赖氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改变一级氨基酸序列的感兴趣修饰，包括多肽的化学衍生，如乙酰化或羧化；导入或去除糖基化位点的氨基酸序列变化；使蛋白质易于PEG化的氨基酸序列变化等。还包括糖基化修饰，如合成和加工时改变多肽的糖基化模式，或在进一步加工步骤如使多肽接触能影响糖基化的酶(如哺乳动物糖基化或去糖基化酶)中，改变多肽的糖基化模式。还包括具有磷酸化氨基酸残基如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸的序列。
IFN-ω制剂可含有N-封闭的种类，其中N-端氨基酸被一酰基，如甲酰基、乙酰基、丙二酰基等酰化，也适合采用共有IFN-ω。可用任何已知方法生产IFN-ω多肽。
可用标准方法合成编码IFN-ω的DNA序列。许多实施方案中，IFN-ω多肽是制备的DNA序列转化或转染入细菌宿主如大肠杆菌或在真核宿主细胞(如酵母菌、哺乳动物细胞如CHO细胞等)中表达的产物。在这些实施例中，IFN-ω是“重组IFN-ω”。宿主细胞是细菌宿主细胞时，IFN-ω被修饰而含有N-端甲硫氨酸。
已了解如本文所述IFN-ω可含有一个或多个修饰的氨基酸残基如糖基化、化学修饰等。
III型干扰素受体激动剂在任何上述的方法或装置中，干扰素受体激动剂在一些实施方案中是III型干扰素受体激动剂(如“III型干扰素激动剂”)。III型干扰素激动剂包括IL-286多肽、IL-28a多肽、IL-29多肽、III型干扰素受体的特异性抗体、和任何其它III型干扰素受体激动剂包括非肽激动剂。
IL-28A、IL-28B和L-29(本文统称为“III型干扰素”或“III型IFN”)见Sheppard等，Nature 463-68，2003所述。各多肽能结合由IL-10受体β链和IL-28受体α链组成的异二聚体受体。(Sheppard等，Nature 463-68.2003)。可分别在GenBank登录号NP_742150、NP_742151和NP_742152中找到IL-28A、IL-28B和IL-29的氨基酸序列。
可用本领域已知的各种方法改变III型IFN多肽的氨基酸序列，以产生序列中的靶向变化。变体多肽通常基本上类似于本文提供的序列，即至少一个氨基酸不同，可能至少有二个但不超过10个氨基酸不同。序列变化可以是取代、插入或缺失。系统地倒入丙氨酸或其它残基的扫描突变可用来确定关键氨基酸。感兴趣的特定氨基酸取代包括保守性和非保守性改变。保守性氨基酸取代通常包括以下组内的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(丝氨酸、苏氨酸)；(赖氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改变一级氨基酸序列的感兴趣修饰包括多肽的化学衍生，如乙酰化或羧化；导入或去除糖基化位点的氨基酸序列变化；使蛋白质易于PEG化的氨基酸序列变化等。还包括糖基化修饰，如合成和加工期间改变多肽的糖基化模式，或在进一步加工步骤中如使多肽接触能影响糖基化的酶(如哺乳动物糖基化或去糖基化酶)，改变多肽的糖基化模式。还包括具有磷酸化氨基酸残基如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸的序列。
本发明包括用常规化学技术修饰多肽，以改进其对蛋白酶降解的抗性、优化溶解性能或使它们更适合用作治疗药物。例如，可环化肽的骨架以提高稳定性(见Friedler等，J.Biol.Chem，27523783-9.2000)。可采用的类似物包括天然产生的L氨基酸以外的残基，如D-氨基酸或非天然产生的合成氨基酸。可PEG化此蛋白以提高稳定性。可将多肽与白蛋白融合。
可用本领域已知的常规方法如重组方法，体外合成制备此多肽；或可从导入的细胞或天然产生此蛋白的细胞分离此多肽。具体序列和制备方式可根据方便性、经济性、纯度要求等确定。如需要，可在合成或表达期间在多肽中导入各种基团，使其与其它分子或表面连接。这样，可利用半胱氨酸制备硫醚，利用组氨酸与金属离子复合物连接，利用羧基形成酰胺或酯键，利用氨基形成酰胺键等。
干扰素-γ可从公共数据库，如Genbank，杂志出版物等得到编码IFN-γ多肽的核酸序列。虽然对各种哺乳动物的IFN-γ多肽感兴趣，但对于治疗人体疾病，一般使用人蛋白。人IFN-γ编码序列可在Genbank中找到，登记号为X13274；V00543和NM_000619。在Genbank中可发现相应的基因组序列，登记号J00219；M37265和V00536。参见，例如，Gray等(1982)Nature 295501(Genbank X13274)和Rinderknecht等(1984)J.B.C.2596790。
IFN-γ1b(Actimmune；人干扰素)是140个氨基酸的单链多肽。它在大肠杆菌中重组制备，且是未糖基化的。Rinderknecht等(1984)J.Biol.Chem.2596790-6797。
用于本发明方法的IFN-γ可为任何天然的IFN-γ、重组IFN-γ及其衍生物，只要它们具有IFN-γ活性，特别是人IFN-γ活性即可。如本技术领域所知，人IFN-γ显示了抗病毒和抗增殖性质，干扰素的特性，以及许多其它免疫调节活性。虽然IFN-γ基于上述提供的序列，但蛋白质的形成和蛋白酶解加工可导致加工其变体。由Gray等(同上)提供的未加工的序列由166个氨基酸(aa)构成。虽然在大肠杆菌中产生的重组IFN-γ最初被认为有146个氨基酸(在氨基酸20开始)，但接着发现天然的人IFN-γ在残基23后酶切，产生143个氨基酸的蛋白质，或144个氨基酸(若如细菌表达所需存在末端甲硫氨酸)。在纯化过程中，成熟蛋白质在残基162(参见Gray等序列)后的C末端处酶切，得到139个氨基酸的蛋白质或140个氨基酸的蛋白质(若存在起始的甲硫氨酸，如若需要细菌表达)。N-末端的甲硫氨酸是由mRNA翻译的“起始”信号AUG编码的人工制品，AUG在大肠杆菌表达的具体情况下不会被加工而损失。在其它的微生物系统或真核表达系统中，可除去甲硫氨酸。
对于用于患者的方法，可使用任何天然的IFN-γ肽、它们的修饰物和变体，或一种或多种肽的组合。感兴趣的IFN-γ肽包括片段，并可在相对于全序列的羧基末端进行各种截断。只要氨基酸24-约149(从未加工的多肽残基开始计数)存在，这类片段就继续展示人γ干扰素的特性。在氨基酸155后可用外来的序列代替氨基酸序列而不会丧失活性。参见，例如美国专利5,690,925，在此引入供参考。天然IFN-γ部分包括分别从氨基酸残基24-150；24-151；24-152；24-153；24-155和24-157扩展出来的分子。任何这些变体，和本领域已知且具有IFN-γ活性的其它变体可用于本发明的方法。
IFN-γ多肽序列可用本领域已知的各种方法进行改变，以产生序列中靶向的变化。变体多肽通常与这里提供的序列基本上相似，即至少一个氨基酸不同，或可能至少两个氨基酸不同，但不超过约10个氨基酸。序列改变可以是取代、插入或缺失。系统地引入丙氨酸或其它残基的扫描变化可用来测定关键的氨基酸。感兴趣的特定氨基酸替代包括保守和非保守的改变。保守氨基酸替代典型地包括下列基团(甘氨酸，丙氨基)；(缬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸)；(天冬氨酸，谷氨酸)；(天冬酰胺，谷氨酰胺)；(丝氨酸，苏氨酸)；(赖氨酸，精氨酸)；或(苯丙氨酸，酪氨酸)。
可以或不能改变初级氨基酸序列的感兴趣的修饰包括多肽的化学衍生作用，如乙酰化或羧基化；引入或除去糖基化位点的氨基酸序列的改变；使蛋白质对PEG化敏感的氨基酸序列的改变等。在一个实施方案中，本发明考虑使用具有一个或多个天然产生的糖基化和/或聚乙二醇化位点的IFN-γ变体，改变IFN-γ变体以提供具有减少血清清除率的糖基和/或PEG衍生的多肽。如国际专利出版号WO01/36001描述的IFN-γ多肽变体。还包括糖基化修饰，如通过在其合成和加工过程中或进一步加工的步骤中修饰多肽的糖基化方式进行的修饰，例如，通过将多肽暴露于影响糖基化的酶，如哺乳动物糖基化或去糖基化的酶。也包含具有磷酸化氨基酸残基的序列，如，磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸。
包括在本发明中是业已用普通化学技术修饰的多肽，以改进它们对蛋白水解降解的耐受性，使其溶解度最优化，或使它们更适合作为治疗剂。例如，可环化肽的骨架以增加稳定性(参见Friedler等(2000)J.Biol.CHem.27523783-23789)。可使用的类似物包括非天然产生的L-氨基酸残基，如D-氨基酸或非天然产生的合成氨基酸。蛋白质可被PEG化以增加稳定性。
使用本领域已知的常规方法，通过重组方法体外合成制备多肽，或从诱导的或天然产生蛋白质的细胞中分离得到多肽。具体的序列和制备方法可由其方便性、经济性、所需的纯度等来决定。如果需要，在合成期间或表达期间可向多肽中引入各种基团，这可使其与其它分子或表面连接。这样，半胱氨酸可用来制备供与金属离子络合物连接的硫醚、组氨酸，形成酰胺或酯的羧基，形成酰胺的氨基等等。
也可根据常规的重组体合成方法来分离和纯化多肽。可从表达宿主中制备溶解产物，用HPLC、排阻层析、凝胶电泳、亲和层析或其它纯化技术来纯化溶解产物。大多数情况下，使用的组合物包含至少20％重量的所需产品，更通常的是至少约75％重量，优选的是至少95％重量的所需产品，对于治疗用组合物，相对于制备和纯化方法中产生的污染来说，通常包含至少约99.5％重量的所需产品。通常情况下，百分数是基于总蛋白的百分数。
吡非尼酮及其类似物吡非尼酮(5-甲基-1-苯基-2-(1H)-吡啶酮)和吡非尼酮类似物已被揭示可用于治疗纤维变性疾病。“纤维变性疾病”是一种应该通过给予具有抗纤维化活性的化合物来治疗的症状。
吡非尼酮 吡非尼酮类似物 对取代基R1、R2、X的描述R1碳环(饱和和不饱和的)、杂环(饱和或不饱和的)、烷基(饱和和不饱和的)。其例子包括苯基、苄基、吡啶基、萘基、吲哚基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、环己基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、环己烯基、丁间二烯基等。
R1还可以包括在碳环或杂环部分上有以下取代基的取代基，如卤素、硝基、氨基、羟基、烷氧基、羧基、氰基、硫代、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基以及它们的组合，例如4-硝基苯基、3-氯苯基、2，5-二硝基苯基、4-甲氧基苯基、5-甲基-吡咯基、2，5-二氯环己基、胍基-环己烯基等。
R2烷基、碳环、芳基、杂环。其例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、苯基、4-硝基苯基、噻吩基等。
X可以是碳环或杂环上任意数目(1-3)的取代基。这些取代基可以是相同或不同的。所述取代基可包括氢、烷基、杂烷基、芳基、杂芳基、卤代、硝基、羧基、羟基、氰基、氨基、硫代、烷氨基、卤代芳基等。
所述取代基还可任选被1-3个选自以下一组的取代基取代烷基、芳基、硝基、烷氧基、羟基和卤代基团。其例子包括甲基、2，3-二甲基、苯基、对-甲苯基、4-氯苯基、4-硝基苯基、2，5-二氯苯基、呋喃基、噻吩基等。
具体的例子包括表1
美国专利3,974,281；3,839,346；4,042,699；4,052,509；5,310,562；5,518,729；5,716,632和6,090,822描述了合成和制备适合用于本发明所述方法的药物组合物中的吡非尼酮和吡非尼酮类似物的方法。
剂量、配方和给药途径I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ可与药学上可接受的赋形剂一起配制给予个体。本技术领域已知各种药学上可接受的赋形剂，在此不需要详细讨论。药学上可接受的赋形剂在各种公开物(如A.Gennaro(2000)，《雷明顿制药科学与实践》(RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy)，第20版，Lippincott，Williams，&Wilkins；《药物剂型和药物传递系统》(Pharmaceutical Dosage Formsand Drug Delivery Systems)，(1999)H.C.Ansel等编，第7版，Lippincott，Williams，&Wilkins和《药物赋形剂手册》(Handbook of Pharmaceutical Excipients)(2000)A.H.Kibbe等编，第3版，Amer.Pharmaceutical Assoc.)中业已作了大量的描述。
药学上可接受的赋形剂如运载体、辅佐剂、载体或稀释剂公众不难获得。此外药学上可接受的辅助物质，如PH调节和缓冲剂、渗透调节剂、稳定剂、湿润剂等公众也不难获得。
本文中，可采用能产生所需治疗效果的任何方便方法给予宿主此活性药物，可将这些药物加入到治疗用的各种配方中。更具体说，本发明的制剂可与适当的药学上可接受的载体或稀释剂组合配制成药物组合物，可配制成固体、半固体、液体或气体形式的制品，如片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、软膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂和气雾剂。
因此，可以各种途径实现该制剂的给药，包括口服、含服、直肠、非肠胃道、腹膜内、皮内、皮下、肌肉内、透皮、气管内等给药。一些实施方案中，可采用两种不同途径给药。一些实施方案中，皮下给予IFN-α，并经口给予吡非尼酮或吡非尼酮类似物。
可采用标准方法和装置；如针头和注射器、皮下注射罐输送系统等进行I型或III型干扰素受体激动剂的皮下给药。参见美国专利3,547,119；4,755,173；4,531,937；4,311,137和6,017,328。将IFN-α通过贮罐给予个体的皮下注射罐和装置组合，本文称为“皮下注射罐输送系统”。一些实施方案中，可通过针头和注射器输送药物，然后用连续输送系统组合进行皮下给药。
一些实施方案中，通过连续输送系统输送I型或III型干扰素受体激动剂。本文中术语“连续输送系统”可与“可控输送系统”互换使用。包括持续(可控的)输送装置(如泵)与导管注射装置和本领域已知的各种各样装置的组合。
机械泵或电子机械灌注泵也可适合用于本发明。这类装置的例子包括例如美国专利4,692,147；4,360,019；4,487,603；4,360,019；4,725,852；5,820,589；5,643,207；6,198,966等中所述的装置。总之，可用各种可再填装泵系统进行本发明的药物输送方法。泵可按时间提供均匀一致的可控性药物释放。通常，此制剂(I型或III型干扰素受体激动剂，例如IFN-α)以液体剂型装在药物不能渗透的贮罐中连续输送给个体。
一实施方案中，此药物输送系统至少是一种可部分植入的装置，可用本领域熟知的方法和设备将此可植入装置植入在适合植入的部位。植入部位是患者体内导入和安置药物输送装置的部位。可植入部位包括但不一定限于真皮下，皮下、肌肉内或患者体内其它适合的部位。通常优选皮下植入部位，因为植入和取出该药物输送装置很方便。
适合用于本发明的药物释放装置可依据各种操作模式之任何一种。例如，此药物释放装置可依据一种扩散系统、传送系统或易腐蚀系统(如基于腐蚀的系统)。例如，此药物释放装置可以是电子化学泵、渗透泵、电子渗透泵、蒸气压力泵或渗透崩裂基质。如当将药物加入一聚合物中，随着充满药物的聚合物材料(如生物可降解性充满药物的多聚体材料)降解的同时，此聚合物释放出药物制剂。其它实施方案中，此药物释放装置依据电子扩散系统，一种电解泵、发泡泵、压电泵、水解系统等。
以机械或电子机械灌注泵为基础的药物释放装置也适合用于本发明。此装置的例子包括例如美国专利4,692,147；4,360,019；4,487,603；4,725,852等中所述的装置。总之，可采用各种可再填充的、非互换泵系统进行本发明的药物输送方法。通常优选泵和其它传递系统，因为它们可按时间提供均匀一致的可控性释放。特别优选渗透泵，因为它们联合了更一致的可控释放和较小体积二种优点(例如见PCT出版物WO97/27840和美国专利5,985,305和5,728,396)。适合用于本发明的示范性渗透压驱动装置包括但不一定限于美国专利3,760,984；3,845,770；3,916,899；3,923,426；3,987,790；3,995,631；3,916,899；4,016,880；4,036,288；4,111,202；4,111,203；4,203,440；4,203,442；4,210,139；4,327,725；4,627,850；4,865,845；5,507,318；5,059,423；5,112,614；5,137,727；5,234,692；5,234,693；5,728,396等中所述装置。
一些实施方案中，此药物输送装置是一种可植入装置。可用本领域熟知的方法和设备将此可植入装置植入在适合植入的部位。植入部位是患者体内导入和安置药物输送装置的部位。可植入部位包括但不一定限于表皮下，皮下、肌肉内或患者体内其它适合的部位。
一些实施方案中，用可植入药物输送系统，如可编程的给予I型或III型干扰素受体激动剂的系统，输送I型或III型干扰素受体激动剂。示范性的可编程系统包括可植入入灌注泵。用于与此类泵连接的示范性可植入泵或装置见例如美国专利4,350,155；5,443,450；5,814,019；5,976,109；6,017,328；6,171,276；6,241,704；6,464,687；6,475,180和6,512,954中所述。其它可能适用于本发明的示范性装置是同步灌注泵(Medtronic)。
药物剂量形式中，此制剂可以其药学上可接受的盐形式给药，它们可单独使用或与其它药物学活性化合物组合使用。以下方法和赋形剂只是示范性而非任何方式限于这些方法。
对于口服制品，此制剂可单独服用或与适当的添加剂制成片剂、粉剂、颗粒剂或胶囊剂组合服用。例如常规添加剂有乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉、土豆淀粉；粘合剂有结晶纤维素、纤维素衍生物、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；崩解剂如玉米淀粉、土豆淀粉或羧甲基纤维素钠；润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁。如需要可加入稀释剂、缓冲剂、防腐剂和调味剂。
此制剂可配制成注射用制品，通过溶于悬浮于或乳化于水或非水溶液中，如植物油或其它类似的油，合成的脂肪酸甘油脂，高级脂肪酸或丙乙醇脂中。如需要可加入常规的添加剂，如助溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂。
另外，此制剂通过与各种碱如乳化碱或水溶性碱混合可制成栓剂，可通过栓剂直肠给予本发明的化合物。栓剂可含有运载体如可可脂、Carbowax、聚乙二醇，它们在体温时融化，在室温中仍为固体。
可提供口服或直肠给药的单位剂型如糖浆剂、酏剂和悬液。例如，每剂量单位为一茶匙，一大汤匙，片剂或栓剂，含有预先定量的此组合物和一种或多种抑制剂。与此相似，注射或静脉给药的单位剂型在组合物中含有抑制剂，为无菌水、生理盐水或其它药学上可接受载体的溶液。
本文中术语“单位剂型”指适合人与动物患者一次剂量的物理上分开的单位，各单位含有经计算预先定量的本发明化合物。当与药学上可接受的稀释液、载体或运载体合用时，此含量能充分产生所需的效应。本发明的新的单位剂型的确定，取决于所用的具体化合物和要达到的效果及各化合物在宿主中的相关药物的动力学。
一些实施方案中，给予至少一个剂量的IFN-γ，同时，给予至少一个剂量的I型或III型干扰素受体激动剂。本文所用术语“同时”，表示IFN-α和I型或III型干扰素受体激动剂分别给予，和相互间隔约5-15秒、约15-30秒、约30-60秒、约1-5分钟、约5-15分钟、约15-30分钟、约30-60分钟、约1-2小时、约2-6小时、约6-12小时、约12-24小时、约24-48小时内给予。
一些实施方案中，在I型或III型干扰素受体激动剂治疗整个期间，给予IFN-γ。其它实施方案中，给予IFN-γ的时间与I型或III型干扰素受体激动剂治疗相重叠。例如，IFN-γ治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂治疗开始前开始，并在I型或III型干扰素受体激动剂治疗结束前结束；IFN-γ治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂治疗开始后开始，并在I型或I II型干扰素受体激动剂治疗结束后结束；IFN-γ治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂开始后开始，并在IFN-γ治疗结束后结束；IFN-γ治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂治疗开始后开始，并在I型或III型干扰素受体激动剂治疗结束前结束，或IFN-γ治疗可在I型或III型干扰素受体激动剂治疗开始前开始，并在I型或III型干扰素受体激动剂治疗结束后结束。
与本文所述每一种方法有关，本发明提供的实施例中，以可控药物输送装置给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ。一些实施方案中，通过可控药物输送装置基本上持续地或持续地向个体输送I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ。任选地，采用可植入性灌注泵向个体基本上持续地或持续地皮下灌注输送I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ。
其它实施方案中，给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ，以达到和维持I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ的理想每日平均血清浓度，使其在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗期间，处于基本上稳定的状态。任选地，采用可植入性灌注泵向个体皮下灌注输送I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ。以达到和维持I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ的理想每日平均血清浓度，使其在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗期间，处于基本上稳定的状态。
IFN-γ的有效量范围约0.5-500μg/m2，通常为1.5-200μg/m2，取决于个体的块头大小；其活性为每50微克蛋白质106国际单位(U)。可每日一次、隔天一次、一周三次或基本上持续地或持续地给予IFN-γ。
感兴趣的特别实施例中，给予个体的IFN-γ单位剂型为约25-500μg，约50-400μg，约100-300μg，在具体感兴趣实施例中，此剂量约为200μg IFN-γ。许多感兴趣实施例中，给予IFN-γ1b。
当每剂的剂量为200μg IFN-γ时，每单位体重的IFN-γ给药量(估计体重为约45-135kg)范围约4.4-1.48μg IFN-γ/kg体重。
患者的体表面积范围通常是约1.33-2.50m2。因此，许多实施方案中，IFN-γ的剂量范围是约150-20μg/m2。例如IFN-γ的剂量范围约20-30μg/m2、30-40μg/m2、40-50μg/m2、50-60μg/m2、60-70μg/m2、70-80μg/m2、80-90μg/m2、90-100μg/m2、100-110μg/m2、110-120μg/m2、120-130μg/m2、130-140μg/m2、140-150μg/m2。一些实施方案中，此剂量范围约25-100μg/m2。其它实施方案中，此剂量范围约25-50μg/m2。
每日、隔天一次、一周一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持续地或持续地给予I型或III型干扰素受体激动剂。
一些实施方案中，I型干扰素受体激动剂是IFN-α，其有效剂量范围是约1-30μg、3-27μg、1-20 MU、3-10 MU、约90-180μg或约18-90μg。
Infergen共有IFN-γ的有效剂量，包括每剂药物约3、6、9、15、18、27μg。IFN-α2a和IFN-α2b的有效剂量范围每剂3百万单位(MU)到10MU。PEG化IFN-α2a的有效剂量含有每剂约90-180μg或约135μg的量。PEG化IFN-α2b的有效剂量每剂约0.5-1.5μg/kg体重的药量。PEG化共有干扰素(PEG-CIFN)的有效剂量含有每剂约18-90μg、或约27-60μg、或约45μg的CIFN氨基酸量。可每日一次、隔天一次、一周一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持续地或持续地给予IFN-α。
一些实施方案中，以第一剂量方案，然后以第二剂量方案给予I型或III型干扰素受体激动剂。I型或III型干扰素受体激动剂的第一剂量方案(也称为“诱导方案”)通常涉及给予较高剂量的I型或III型干扰素受体激动剂。例如，Infergen共有IFN-γ(CIFN)，其第一剂量方案包括给予约9、15、18或约27μg的CIFN。此第一剂量方案可包括单剂或至少二剂或更多剂。I型或III型干扰素受体激动剂的第一剂量方案可每日一次、隔天一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持续地或持续地给予。
给予I型或III型干扰素受体激动剂的第一剂量方案一段时间，此时间至少约4周、至少约8周、或至少约12周。
I型或III型干扰素受体激动剂的第二剂量方案(“维持剂量”)通常涉及给予较低剂量的I型或III型干扰素受体激动剂。例如。CIFN，其第二剂量方案包括给予至少约3μg、至少约9μg、至少约15μg、至少约18μg CIFN，此第二剂量可包括单剂或至少二剂或更多剂。
I型或III型干扰素受体激动剂的第二剂量方案可每日一次、隔天一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持续地或持续地给予。
一些实施方案中，给予I型或III型干扰素受体激动剂的“诱导/维持”剂量方案时，包括给予“致敏”剂量的IFN-γ。这些实施例中，给予IFN-γ的时间在开始用I型或III型干扰素受体激动剂前约1-14天、约2-10天或约3-7天给予。此段时间称为“致敏”期。在若干这些实施例中，在用I型或III型干扰素受体激动剂治疗的整个期间，持续给予IFN-γ治疗。其它实施方案中，在用I型或III型干扰素受体激动剂治疗结束前停止IFN-γ治疗。这些实施例中，用IFN-γ治疗的总时间(包括“致敏“期)是约2-30天、约4-25天、约8-20天、约10-18天、约12-16天。其它实施方案中，一旦开始I型或III型干扰素受体激动剂治疗即停止IFN-γ治疗。
其它实施方案中，以单剂方案给予I型或III型干扰素受体激动剂。例如CIFN，其剂量范围一般约3-15μg、或约9-15μg。通常每日一次、隔天一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持续地或持续地给予单一剂量的I型或III型干扰素受体激动剂。给予I型或III型干扰素受体激动剂的时间，例如可以至少约24-48周或更长。
一些实施方案中，给予I型或III型干扰素受体激动剂的单剂方案包括给予“致敏”剂量的IFN-γ。这些实施例中，在开始用I型或III型干扰素受体激动剂治疗前给予IFN-γ约1-14天、约2-10天、约3-7天，此段时间称为“致敏”期。在若干这些实施例中，在用I型或III型干扰素受体激动剂治疗的整个期间持续给予IFN-γ治疗。其它实施方案中，在用IFN-α治疗结束前停止IFN-γ治疗。在这些实施方案中，在用IFN-γ治疗的总时间(包括“致敏”期)约2-30天、约4-25天、约8-20天、约10-18天、约12-16天。其它实施方案中，一旦开始I型或III型干扰素受体激动剂治疗即停止IFN-γ治疗。
本领域技术人员不难理解，此剂量水平可以改变，视具体化合物、患者症状的严重程序和对副作用的易感性而变化。本领域技术人员可通过各种方法不难确定某给定化合物的优选剂量。
本领域技术人员不难理解，此剂量水平可以改变，视具体化合物、患者症状的严重程序和对副作用的易感性而变化。本领域技术人员可通过各种方法不难确定某给定化合物的优选剂量。优选方法是测定某给定化合物的生理性潜能。
一些实施方案中，在同一制剂中同时给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。其它实施方案中，分别例如在分开的制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。在若干这些实施例中，分别或同时给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。其它实施方案中，IFN-γ和I型或III型干扰素受体激动剂分别给予，和相互间隔约5-15秒、约15-30秒、约30-60秒、约1-5分钟、约5-15分钟、约15-30分钟、约30-60分钟、约1-2小时、约2-6小时、约6-12小时、约12-24小时、约24-48小时内给予。
可给予多剂I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。例如，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ可每月一次、每月二次、每月三次、每周一次、每周二次、每周三次、每周四次、每周五次、每周6次，或每天、一天至一周、二周至四周、一月至二月、二月至四月、四月至6月、6至8月、8月至1年、1年至2年、2年至4年或更多给药。在特别感兴趣的实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ在约48周内每周给药三次。
某些实施方案中，给予IFN-α和IFN-γ联合治疗，将IFN-α和IFN-γ共同配制在一液体制剂中，其含有药物输送装置所用的一贮存器。因此，本发明提供的一种药物制剂含单一剂量的IFN-α和单一剂量的IFN-γ。本发明提供的药物贮存器或其它容器，它们装有共同配制在液体中的IFN-α和IFN-γ，该制剂中存在的IFN-α和IFN-γ量适合于每次一剂。此剂量如本文所述。可以任何形式提供贮存器，包括但不限于药盒、针筒、连续输送装置的贮存器等。本发明还提供贮存器中含有预先装有单一剂量的IFN-α和单一剂量的IFN-γ的液体制剂的药物输送装置。示范性非限制药物输送装置包括注射装置如笔式注射器、针头/针筒装置、连续输送装置等。任何剂量包括本文所述用于该药物制剂、贮存器或药物输送装置中的协同有效量。
其它实施方案中，给予IFN-α和IFN-γ联合治疗，IFN-α和IFN-γ是装在同一药物输送装置中不同贮存器的分开的药物制剂。本发明还提供预先装载有分开的贮存器的药物输送装置，一贮存器装有含一个剂量的IFN-α的液体制剂，另一贮存器装有含一个剂量的IFN-γ的液体制剂。在该药物制剂、贮存器、或药物输送装置中可采用任何剂量，包括本文所述的协同有效量。
本文所述治疗方法的一些实施方案中，干扰素受体激动剂是IFN-α，本方法在IFN-α治疗期间还共施用给个体有效量的IFN-γ。一实施方案中，通过推注给予个体IFN-α。另一实施方案中，通过药物输送装置给予IFN-α和IFN-γ。任选地，用这种装置向个体基本上连续地或连续地给药输送IFN-α，并通过tiw、biw、qod、或qd作药液主处心积向个体输送IFN-γ。任选地，用此装置，以相同给药方式，如基本上连续地或持续地向个体输送IFN-α和IFN-γ。任选地，IFN-α和IFN-γ含在此药物输送装置的不同贮存器中。任选地，将IFN-α和IFN-γ共同配制在一液体制剂中，装在该药物输送装置的一贮存器中。
其中，该药物是多肽、多核苷酸(如编码I型或III型干扰素受体激动剂或IFN-γ的多核苷酸)，可通过许多方法，包括病毒感染、显微注射、或载体融合将其导入组织或宿主细胞。也可用喷射注射进行肌肉内给药，见Furth等，Anal.Biochem.205365-368，1992。可将DNA涂在金微粒上并用文献中所述的粒子轰击装置或“基因枪”皮内输送(见例如Tang等，Nature，356152-154，1992)，其中，涂有治疗性DNA的金微粒被轰入皮肤细胞。在这些实施方案中，特别感兴趣的是使用肝脏特异性启动子以驱动操作性连接的IFN-α和IFN-γ编码序列在肝细胞中优先转录。
其它治疗药物在一些实施方案中，本发明方法还包括给予吡非尼酮或吡非尼酮类似物。吡非尼酮或吡非尼酮类似物可每月一次、每月二次、每月三次、每周一次、每周二次、每周三次、每周四次、每周五次、每周6次、每天给药，或将日剂量分为每天一次至每天5此，为期一天至一周、二周至四周、一月至二月、二月至四月、四月至6月、6至8月、8月至1年、1年至2年、或2年至4年或更长时间。
吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物的有效剂量包括一种基于体重的剂量，其范围约5mg/kg/天-125mg/kg/天，或是一种固定的剂量，每天约400mg-3600mg，或每天约800mg-2400mg，或每天约1000mg-1800mg，或每天约1200mg-1600mg，所述剂量经口给予。适合治疗纤维化疾病的吡非尼酮和特定的吡非尼酮类似物的其它剂量和制剂描述在美国专利5,310,562；5,518,729；5,716,632和6,090,822中。
在一些实施方案中，吡非尼酮或吡非尼酮类似物在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗的整个阶段都给予。在其它实施方案中，吡非尼酮或吡非尼酮类似物未在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗整个阶段给予，例如，仅在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗的第一阶段给予，仅在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗的第二阶段给予，或I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗方案的其它一些阶段。
一些实施方案中，此方法还包括给予三氮唑核苷，即1-β-D-核糖呋喃糖基-1H-1，2，4-三唑-3-酰胺，可从ICM制药公司(Costa，Mesa，Calif)购得，见Merck索引，化合物NO.8199，第11版中所述。其制造和配方见美国专利4,211,711中所述。本发明还考虑采用三氮唑核苷的衍生物(见美国专利6,277,830)。以胶囊或片剂形式，或以与I型或III型干扰素受体激动剂相同或不同的给药形式和相同或不同的途径口服给予三氮唑核苷。当然，此三种药物的其它给药方式如果可行，如鼻喷雾、经皮、静脉内、栓剂、缓释剂型等也可考虑，只要能输送适当剂量而不破坏活性成分，任何给药的形式都会其作用。
三氮唑核苷通常给药量范围是每kg体重每日约30-60mg、约60-125mg、约125-200mg、约200-300mg、约300-400mg、约400-1200mg、约600-1000mg、约700-900mg、或每日约10mg/kg。
在一些实施方案中，三氮唑核苷在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗的整个阶段都给予。在其它实施方案中，三氮唑核苷未在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗整个阶段给予，例如，仅在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗的第一阶段给予，仅在I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗的第二阶段给予，或I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ治疗方案的其它一些阶段。
治疗方法1.治疗α病毒感染本发明提供了通过给予有此需要的个体治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ来治疗α病毒感染的方法。用本发明方法治疗的个体包括临床诊断为感染α病毒的个体，以及已出现临床感染的一种或多种体症和症状，但尚未诊断为α病毒感染的个体。
在上述个体内开展α病毒感染的联合疗法时，给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。一些实施方案中，在同一制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。其它实施方案中，在分开的制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。当在分开的制剂中给药时，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ可基本上同时给予，或可彼此在约24小时内给予。许多实施方案中，可同时多剂给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
I型或III型干扰素受体激动剂可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持续地或持续地给予。
一些实施方案中，I型干扰素受体激动剂是IFN-α。IFN-α的有效剂量范围约1-30μg、约3-27μg、约1MU-20MU、约3MU-10MU、约90-180μg、约18-90μg。
Infergen共有IFN-α的有效剂量每剂含有约3、9、15、18或27μg的药量。有效剂量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每剂约3百万单位(MU)-10百万单位(MU)的药量。有效剂量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每剂约90-180μg或约135μg的药量。有效剂量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每剂约0.5-1.5μg/kg体重的药量。有效剂量的PEG化共有干扰素(PEG-CIFN)可含有每剂约18-90μg或约27-60μg或约45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN药量。
许多实施方案中，给予I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ的时间约1-7天，约1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可给予更长时间。剂量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月给予。
一些实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗患者的α病毒感染。一些实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α和IFN-γ治疗患者的α病毒感染。一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的α病毒感染。
一般，适用于本发明方法的协同有效量的共有干扰素(CIFN)和IFN-γ，以剂量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均为非PEG化和非糖基化的。
一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的α病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-30μg药量的INFERGEN剂量，每日一次(qd)、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的α病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-9μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的α病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-50μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的α病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约有9μg药量的INFERGEN剂量物，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约90-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的α病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约30μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约200-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的α病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约4-60μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的α病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约18-24μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约100-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
通常，适用于本发明方法的协同有效剂量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的剂量比为一百万单位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μgIFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；联用的IFN-γ剂量含每剂约30-600μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约3MU的IFN-α2a；联用的每周IFN-γ剂量含每剂约100μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约10MU的IFN-α2a；联用的IFN-γ剂量含每剂约300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月给予患者每剂含约90-360μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月给予患者每剂含约180μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗α病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约。0.75-3.0μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗α病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约1.5μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
本发明还提供了治疗α病毒感染的方法，其中在上述任何I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法中加入了三氮唑核苷治疗。在一些实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服10mg三氮唑核苷/kg体重的三氮唑核苷疗法。三氮唑核苷的日剂量可每天一剂给予或分剂给予，包括每天一、二、三或四剂。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的25μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的200μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的25μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(monoPEG)(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd或tiw给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了α病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予α病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
2.治疗西尼罗病毒感染本发明提供了通过给予有此需要的个体治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ来治疗西尼罗病毒感染的方法。用本发明方法治疗的个体包括临床诊断为感染西尼罗病毒的个体，以及已出现临床感染的一种或多种体症和症状，但尚未诊断为西尼罗病毒感染的个体。
在上述个体内开展西尼罗病毒感染的单一疗法时，给予需要这种治疗的个体I型或III型干扰素受体激动剂或IFN-γ。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
I型或III型干扰素受体激动剂可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持续地或持续地给予。
一些实施方案中，I型干扰素受体激动剂是IFN-α。IFN-α的有效剂量范围约1-30μg、约3-27μg、约1MU-20MU、约3MU-10MU、约90-180μg、约18-90μg。
Infergen共有IFN-α的有效剂量每剂含有约3、9、15、18或27μg的药量。有效剂量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每剂约3百万单位(MU)-10百万单位(MU)的药量。有效剂量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每剂约90-180μg或约135μg的药量。有效剂量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每剂约0.5-1.5μg/kg体重的药量。有效剂量的PEG化共有干扰素(PEG-CIFN)可含有每剂约18-90μg或约27-60μg或约45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN药量。许多实施方案中，给予IFN-α或IFN-γ的时间约1-7天，约1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可给予更长时间。剂量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月给予。一些实施方案中，所述剂量是皮下给予的。
在上述个体内开展西尼罗病毒感染的联合疗法时，给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。一些实施方案中，在同一制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。其它实施方案中，在分开的制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。当在分开的制剂中给药时，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ可基本上同时给予，或可彼此在约24小时内给予。许多实施方案中，可同时多剂给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
Infergen共有IFN-α的有效剂量每剂含有约3、9、15、18或27μg的药量。有效剂量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每剂约3百万单位(MU)一10百万单位(MU)的药量。有效剂量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每剂约90-180μg或约135μg的药量。有效剂量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每剂约0.5-1.5μg/kg体重的药量。有效剂量的PEG化共有干扰素(PEG-CIFN)可含有每剂约18-90μg或约27-60μg或约45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN药量。许多实施方案中，给予IFN-α和/或IFN-γ的时间约1-7天，约1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可给予更长时间。剂量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月给予。
一些实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗患者的西尼罗病毒感染。一些实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α和IFN-γ治疗患者的西尼罗病毒感染。一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的西尼罗病毒感染。
一般，适用于本发明方法的协同有效量的共有干扰素(CIFN)和IFN-γ，以剂量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均为非PEG化和非糖基化的。
一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的西尼罗病毒(WNV)感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-30μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的WNV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-9μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的WNV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-50μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的WNV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有9μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约90-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的WNV感染，包括皮下给予患者每剂含有约30μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约200-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的WNV感染，包括皮下给予患者每剂含有约4-60μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的WNV感染，包括皮下给予患者每剂含有约18-24μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约100-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
通常，适用于本发明方法的协同有效剂量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的剂量比为一百万单位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μg IFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗WNV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约1MU-20 MU的IFN-α2a或2b或2c；联用的IFN-γ剂量含每剂约30-600μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗WNV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约3MU的IFN-α2a；联用的每周IFN-γ剂量含每剂约100μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、b iw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗WNV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约10MU的IFN-α2a；联用的IFN-γ剂量含每剂约300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗WNV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月给予患者每剂含约90-360μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗WNV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约180μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗WNV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约。0.75-3.0μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗WNV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约1.5μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
本发明还提供了治疗WNV感染的方法，其中在上述任何I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法中加入了三氮唑核苷治疗。在一些实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服10mg三氮唑核苷/kg体重的三氮唑核苷疗法。日剂量可每天一剂给予或分剂给予，包括每天一、二、三或四剂。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的50μgActimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的100μgActimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μgActimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的25μgActimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的200μgActimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的25μgActimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd或tiw给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了WNV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予WNV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
3.治疗登革热病毒感染本发明提供了通过给予有此需要的个体治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ来治疗登革热病毒感染的方法。用本发明方法治疗的个体包括临床诊断为感染登革热病毒的个体，以及已出现临床感染的一种或多种体症和症状，但尚未诊断为登革热病毒感染的个体。
在上述个体内开展登革热病毒感染的单一疗法时，给予需要这种治疗的个体I型或III型干扰素受体激动剂或IFN-γ。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
I型或III型干扰素受体激动剂可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持续地或持续地给予。
一些实施方案中，I型干扰素受体激动剂是IFN-α。IFN-α的有效剂量范围约1-30μg、约3-27μg、约1MU-20MU、约3MU-10MU、约90-180μg、约18-90μg。
Infergen共有IFN-α的有效剂量每剂含有约3、9、15、18或27μg的药量。有效剂量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每剂约3百万单位(MU)-10百万单位(MU)的药量。有效剂量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每剂约90-180μg或约135μg的药量。有效剂量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每剂约0.5-1.5μg/kg体重的药量。有效剂量的PEG化共有干扰素(PEG-CIFN)可含有每剂约18-90μg或约27-60μg或约45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN药量。许多实施方案中，给予IFN-α或IFN-γ的时间约1-7天，约1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可给予更长时间。剂量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月给予。一些实施方案中，所述剂量是皮下给予的。
在上述个体内开展登革热病毒感染的联合疗法时，给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。一些实施方案中，在同一制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。其它实施方案中，在分开的制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。当在分开的制剂中给药时，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ可基本上同时给予，或可彼此在约24小时内给予。许多实施方案中，可多剂量皮下给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
Infergen共有IFN-α的有效剂量每剂含有约3、9、15、18或27μg的药量。有效剂量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每剂约3百万单位(MU)-10百万单位(MU)的药量。有效剂量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每剂约90-180μg或约135μg的药量。有效剂量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每剂约0.5-1.5μg/kg体重的药量。有效剂量的PEG化共有干扰素(PEG-CIFN)可含有每剂约18-90μg或约27-60μg或约45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN药量。许多实施方案中，给予IFN-α和/或IFN-γ的时间约1-7天，约1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可给予更长时间。剂量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月给予。
一些实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染。一些实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染。一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染。
一般，适用于本发明方法的协同有效量的共有干扰素(CIFN)和IFN-γ，以剂量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均为非PEG化和非糖基化的。
一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-30μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-9μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-50μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约有9μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约90-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约30μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约200-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约4-60μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的登革热病毒感染，包括皮下给予患者每剂含有约18-24μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约100-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
通常，适用于本发明方法的协同有效剂量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的剂量比为一百万单位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μg IFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗登革热病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；联用的IFN-γ剂量含每剂约30-600μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗登革热病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约3MU的IFN-α2a；联用的每周IFN-γ剂量含每剂约100μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗登革热病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约10MU的IFN-α2a；联用的IFN-γ剂量含每剂约300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗登革热病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约90-360μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗登革热病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约180μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗登革热病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约。0.75-3.0μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗登革热病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约1.5μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
本发明还提供了治疗登革热病毒感染的方法，其中在上述任何I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法中加入了三氮唑核苷治疗。在一些实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服10mg三氮唑核苷/kg体重的三氮唑核苷疗法。日剂量可每天一剂给予或分剂给予，包括每天一、二、三或四剂。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的25μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的200μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的25μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd或tiw给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了登革热病毒感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予登革热病毒感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
4.治疗黄热病毒感染本发明提供了通过给予有此需要的个体治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ来治疗黄热病毒(YFV)感染的方法。用本发明方法治疗的个体包括临床诊断为感染YFV的个体，以及已出现临床感染的一种或多种体症和症状，但尚未诊断为YFV感染的个体。
在上述个体内开展YFV感染的单一疗法时，给予需要这种治疗的个体I型或III型干扰素受体激动剂或IFN-γ。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
I型或III型干扰素受体激动剂可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持续地或持续地给予。
一些实施方案中，I型干扰素受体激动剂是IFN-α。IFN-α的有效剂量范围约1-30μg、约3-27μg、约1MU-20MU、约3MU-10MU、约90-180μg、约18-90μg。
Infergen共有IFN-α的有效剂量每剂含有约3、9、15、18或27μg的药量。有效剂量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每剂约3百万单位(MU)-10百万单位(MU)的药量。有效剂量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每剂约90-180μg或约135μg的药量。有效剂量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每剂约0.5-1.5μg/kg体重的药量。有效剂量的PEG化共有干扰素(PEG-CIFN)可含有每剂约18-90μg或约27-60μg或约45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN药量。许多实施方案中，给予IFN-α或IFN-γ的时间约1-7天，约1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可给予更长时间。剂量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月给予。一些实施方案中，所述剂量是皮下给予的。
在上述个体内开展YFV感染的联合疗法时，给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。一些实施方案中，在同一制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。其它实施方案中，在分开的制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。当在分开的制剂中给药时，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ可基本上同时给予，或可彼此在约24小时内给予。许多实施方案中，可同时多剂给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
Infergen共有IFN-α的有效剂量每剂含有约3、9、15、18或27μg的药量。有效剂量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每剂约3百万单位(MU)-10百万单位(MU)的药量。有效剂量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每剂约90-180μg或约135μg的药量。有效剂量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每剂约0.5-1.5μg/kg体重的药量。有效剂量的PEG化共有干扰素(PEG-CIFN)可含有每剂约18-90μg或约27-60μg或约45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN药量。许多实施方案中，给予IFN-α和/或IFN-γ的时间约1-7天，约1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可给予更长时间。剂量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月给予。
一些实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗患者的YFV感染。一些实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α和IFN-γ治疗患者的YFV感染。一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的YFV感染。
一般，适用于本发明方法的协同有效量的共有干扰素(CIFN)和IFN-γ，以剂量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均为非PEG化和非糖基化的。
一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的YFV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-30μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的YFV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-9μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的YFV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-50μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的YFV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有9μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约90-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的YFV感染，包括皮下给予患者每剂含有约30μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约200-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的YFV感染，包括皮下给予患者每剂含有约4-60μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的YFV感染，包括皮下给予患者每剂含有约18-24μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约100-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
通常，适用于本发明方法的协同有效剂量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的剂量比为一百万单位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μg IFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；联用的IFN-γ剂量含每剂约30-600μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约3MU的IFN-α2a；联用的每周IFN-γ剂量含每剂约100μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约I0MU的IFN-α2a；联用的IFN-γ剂量含每剂约300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月给予患者每剂含约90-360μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月给予患者每剂含约180μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗YFV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约。0.75-3.0μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗YFV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者每剂含约1.5μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
本发明还提供了治疗YFV感染的方法，其中在上述任何I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法中加入了三氮唑核苷治疗。在一些实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服10mg三氮唑核苷/kg体重的三氮唑核苷疗法。日剂量可每天一剂给予或分剂给予，包括每天一、二、三或四剂。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的50μgActimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的100μgActimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μgActimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的25μgActimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的200μgActimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的25μgActimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd或tiw给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
一实施方案中，本发明提供了YFV感染的治疗方法，包括在所需治疗期内给予YFV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法。
5.治疗丙肝病毒感染本发明提供了通过给予有此需要的个体治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ来治疗丙肝病毒感染的方法。用本发明方法治疗的个体包括临床诊断为感染丙肝病毒的个体。被HCV感染的个体被定义为在他们的血液中具有HCV RNA，和/或在他们的血清中具有抗-HCV抗体。
临床诊断为感染HCV的个体包括天然个体(例如以前未对HCV进行治疗的个体)和在以前的HCV治疗中失败的个体(“治疗失败”患者)。治疗失败患者包括无应答者(例如，通过以前的HCV治疗其HCV滴度未显著或充分降低的个体)；和复发者(例如，以前接受HCV治疗的个体，其HCV滴度降低，但随后又升高)。
特别感兴趣的实施方案中，个体的HCV滴度至少为每毫升血清有约5×105，或至少约106，或至少约2×106个HCV基因组拷贝。患者可被任何HCV基因型(基因型1，包括1a和1b，2，3，4，6等，以及亚型(例如2a，2b，3a等))感染，尤其难治疗的基因型如HCV基因型1，特别是HCV亚型和准种。
同样感兴趣的还有HCV阳性个体(如上所述)，该个体由于慢性HCV感染而具有严重纤维化或早期肝硬化(非失代偿性的，Child-Pugh级别A或更低)，或程度更加严重肝硬化(失代偿性的，Child-Pugh级别B或C)，并且无论以前是否用基于IFN-α的疗法进行抗病毒治疗或者该个体无法耐受基于IFN-α的疗法或该个体对这种疗法具有禁忌症，它都出现病毒血症症状。在特别感兴趣的实施方案中，根据METAVIR评分系统，处于第三或第四阶段的HCV阳性个体适合用本发明的方法治疗。在其它实施方案中，适合用本发明的方法治疗的个体是具有失代偿性肝硬化临床表现的患者，包括肝硬化程度非常严重的患者，包括那些等待肝移植的患者。再在其它实施方案中，适合用本发明的方法治疗的个体包括具有轻微肝硬化程度的患者，包括那些早期肝硬化患者(METAVIR、Ludwig和Scheuer评分系统中的阶段1和2；或Ishak评分系统中的阶段1、2或3)。
在上述个体内开展丙肝病毒感染的联合疗法时，给予个体I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。一些实施方案中，在同一制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。其它实施方案中，在分开的制剂中给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。当在分开的制剂中给药时，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ可基本上同时给予，或可彼此在约24小时内给予。许多实施方案中，可同时多剂给予I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
I型或III型干扰素受体激动剂可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持续地或持续地给予。
一些实施方案中，I型干扰素受体激动剂是IFN-α。IFN-α的有效剂量范围约1-30μg、约3-27μg、约1MU-20MU、约3MU-10MU、约90-180μg、约18-90μg。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
Infergen共有IFN-α的有效剂量每剂含有约3、9、15、18或27μg的药量。有效剂量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每剂约3百万单位(MU)-10百万单位(MU)的药量。有效剂量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每剂约90-180μg或约135μg的药量。有效剂量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每剂约0.5-1.5μg/kg体重的药量。有效剂量的PEG化共有干扰素(PEG-CIFN)可含有每剂约18-90μg或约27-60μg或约45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN药量。许多实施方案中，给予IFN-α和/或IFN-γ的时间约1-7天，约1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可给予更长时间。剂量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月给予。
某些实施方案中，用于治疗HCV患者的具体药物治疗方案是根据患者所表现出来的某些疾病参数(如病毒负荷、患者的HCV感染基因型、肝脏组织学和/或患者肝纤维化阶段)来选择的。一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别肝纤维化程度处于如Knodell评分3或4所测定的晚期或严重阶段的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的IFN-α和IFN-γ，为期约24周-60周，或约30周-1年，或约36周-50周，或约40周-48周，或至少约24周，或至少约30周，或至少约36周，或至少约40周，或至少约48周，或至少约60周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别肝纤维化程度处于如Knodell评分3或4所测定的发展阶段或严重阶段的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约40周-50周，或约48周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒负荷大于2百万个病毒基因组拷贝/毫升患者血清的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约24周-60周，或约30周-1年，或约36周-50周，或约40周-48周，或至少约24周，或至少约30周，或至少约36周，或至少约40周，或至少约48周，或至少约60周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒负荷大于2百万个病毒基因组拷贝/毫升患者血清的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约40周-50周，或约48周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒负荷大于2百万个病毒基因组拷贝/毫升患者血清，且如Knodell记分0、1或2所测的没有或早期阶段的肝纤维化的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约24周-60周，或约30周-1年，或约36周-50周，或约40周-48周，或至少约24周，或至少约30周，或至少约36周，或至少约40周，或至少约48周，或至少约60周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒负荷大于2百万个病毒基因组拷贝/毫升患者血清，且如Knodell记分0、1或2所测的没有或早期阶段的肝纤维化的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约40周-50周，或约48周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒负荷小于或等于2百万个病毒基因组拷贝/毫升患者血清的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约20周-50周，或约24周-48周，或约30周-40周，或至多20周，或至多24周，或至多30周，或至多36周，或至多48周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒负荷小于或等于2百万个病毒基因组拷贝/毫升患者血清的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约20周-24周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒负荷小于或等于2百万个病毒基因组拷贝/毫升患者血清的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约24周-48周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型2或3的感染的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约24周-60周，或约30周-1年，或约36周-50周，或约40周-48周，或至少约24周，或至少约30周，或至少约36周，或至少约40周，或至少约48周，或至少约60周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型2或3的感染的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约20周-50周，或约24周-48周，或约30周-40周，或至多20周，或至多24周，或至多30周，或至多36周，或至多48周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型2或3的感染的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约20周-24周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型2或3的感染的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期至少约24周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型4的感染的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约24周-60周，或约30周-1年，或约36周-50周，或约40周-48周，或至少约24周，或至少约30周，或至少约36周，或至少约40周，或至少约48周，或至少约60周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型5、6、7、8或9中任一种的感染的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期约20周-50周。
另一实施方案中，本发明提供了治疗HCV感染的方法，该方法包括以下步骤(1)鉴别具有HCV基因型5、6、7、8或9中任一种的感染的患者，然后(2)给予患者治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ，为期至少约24周，至多约48周。
对上述具有特定HCV基因型和/或最初病毒负荷的患者采用本发明的方法时，临床上将给予在治疗期间获得持续病毒应答有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。一实施方案中，该方法在所需治疗期内用皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的约3μg、约9μg、约15μg、约18μg或约27μg INFERGEN共有IFN-α的IFN-α疗法，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的25μg-300μg IFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者。
另一实施方案中，该方法在所需治疗期内用皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的约3μg、约9μg、约15μg、约18μg或约27μg INFERGEN共有IFN-α的IFN-α疗法，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的100μg-200μg IFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者。
另一实施方案中，该方法在所需治疗期内用皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的约3百万单位(MU)-10MU IFN-α2a或IFN-α2b的IFN-α疗法，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的25μg-300μgIFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者。
另一实施方案中，该方法在所需治疗期内用皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的约3百万单位(MU)-10MU IFN-α2a或IFN-α2b的IFN-α疗法，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的100μg-200μgIFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者。
另一实施方案中，该方法在所需治疗期内用PEGASYSPEG化的IFN-α2a的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的25μg-300μg IFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者，每剂皮下qw、qow、每月三次或每月一次给予的PEGASYSPEG化的IFN-α2a提供约90μg-180μg，或约135μg药量。
另一实施方案中，该方法在所需治疗期内用PEGASYSPEG化的IFN-α2a的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的100μg-200μg IFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者，每剂皮下qw、qow、每月三次或每月一次给予的PEGASYSPEG化的IFN-α2a提供约90μg-180μg，或约135μg药量。
另一实施方案中，该方法在所需治疗期内用皮下qw、qow、每月三次或每月一次给予的约0.5μg PEG-INTRONPEG化的IFN-α2b/千克体重-1.5μg PEG-INTRON/千克体重的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的25μg-300μg IFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者。
另一实施方案中，该方法在所需治疗期内用皮下qw、qow、每月三次或每月一次给予的约0.5μg PEG-INTRONPEG化的IFN-α2b/千克体重-1.5μg PEG-INTRON/千克体重的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的100μg-200μg IFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者。
另一实施方案中，该方法在所需治疗期内用PEG化的共有干扰素(PEG-CIFN)的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的25μg-300μg IFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者，每剂皮下qw、qow、每月三次或每月一次给予的PEG-CIFN提供约18μg-90μg，或约27μg-60μg，或约45μg CIFN氨基酸药量。
另一实施方案中，该方法在所需治疗期内用PEG化的共有干扰素(PEG-CIFN)的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次给予的100μg-200μg IFN-γ的IFN-γ疗法来治疗患者，每剂皮下qw、qow、每月三次或每月一次给予的PEG-CIFN提供约18μg-90μg，或约27μg-60μg，或约45μg CIFN氨基酸药量。
在一些实施方案中，本发明提供了用协同有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗丙肝病毒感染患者的方法。在一些实施方案中，本发明提供了用协同有效量的IFN-α和IFN-γ治疗丙肝病毒感染患者的方法。一实施方案中，本发明提供了用协同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治疗丙肝病毒感染患者的方法。
一般，适用于本发明方法的协同有效量的共有干扰素(CIFN)和IFN-γ，以剂量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均为非PEG化和非糖基化的。
一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的丙肝病毒(HCV)感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-30μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的HCV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1-9μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的HCV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有1μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约10-50μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的HCV感染，包括皮下给予患者每剂含有约有9μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约90-100μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的HCV感染，包括皮下给予患者每剂含有约30μg药量的INFERGEN剂量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予，与之联用的IFN-γ剂量为每剂含有约200-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的HCV感染，包括皮下给予患者每剂含有约4-60μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法，采用协同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治疗患者的HCV感染，包括皮下给予患者每剂含有约18-24μg CIFN氨基酸药量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；与之联用的IFN-γ每周总剂量为分剂每周含有约100-300μg的IFN-γ药量，在所需的治疗期间，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持续地或持续地给予。
通常，适用于本发明方法的协同有效剂量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的剂量比为一百万单位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μg IFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；联用的IFN-γ剂量含每剂约30-600μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约3MU的IFN-α2a；联用的每周IFN-γ剂量含每剂约100μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治疗HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地皮下给予患者每剂含IFN-α2a或2b或2c约10MU的IFN-α2a；联用的IFN-γ剂量含每剂约300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月给予患者每剂含约90-360μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治疗HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月给予患者每剂含约180μg的PEGASYS药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月给予患者每剂含约。0.75-3.0μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约30-1000μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
另一实施方案中，本发明提供的方法采用协同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治疗HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月给予患者每剂含约1.5μg/kg体重的PEG-INTRON药量；联用的IFN-γ每周总剂量含每周约100-300μg的IFN-γ药量，在所需治疗期内皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持续地或持续地分剂给予。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的25μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw给予的200μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的25μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下qd或tiw给予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw给予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd或tiw给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的100μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的150μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α，和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和经口qd给予的三氮唑核苷的疗法，治疗期为48周。该实施方案中，三氮唑核苷的给药量为个体体重小于75千克为1000mg，个体体重大于等于75千克为1200mg。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
一实施方案中，本发明提供了HCV感染的治疗方法，包括给予HCV感染的个体皮下每10天或qw给予的200μg单PEG(30kD，线性)化的共有IFN-α；和皮下tiw给予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的疗法，治疗期为48周。
任何上述治疗方案可施用于对以前的HCV感染治疗失败的个体(“治疗失败患者”，包括无应答者和复发者)。因此，在一些实施方案中，本发明提供了在治疗失败的患者内治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，为期48周。在其它实施方案中，本发明提供了在治疗失败的患者内治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，为期48周。在其它实施方案中，本发明提供了在无应答患者内治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，为期48周。在其它实施方案中，本发明提供了在无应答患者内治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，为期48周。其它实施方案中，本发明提供了在复发者内治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，为期48周。在其它实施方案中，本发明提供了在复发者内治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，为期48周。
任何上述治疗方案可施用于被HCV基因型1感染的未经治疗的患者。因此，在一些实施方案中，本发明提供了在被HCV基因型1感染的未经治疗的患者中治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，为期48周。在其它实施方案中，本发明提供了在被HCV基因型1感染的未经治疗的患者中治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，为期48周。
任何上述治疗方案可施用于被HCV基因型4感染的未经治疗的患者。因此，在一些实施方案中，本发明提供了在被HCV基因型4感染的未经治疗的患者中治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，为期48周。在其它实施方案中，本发明提供了在被HCV基因型4感染的未经治疗的患者中治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，为期48周。
任何上述治疗方案可施用于被HCV基因型1感染的未经治疗的患者，所述患者具有高病毒负荷(HVL)，这里“HVL”表示高于2×106个HCV基因组拷贝/mL血清的HCV病毒负荷。因此，在一些实施方案中，本发明提供了在被HCV基因型1感染并具有高病毒负荷的未经治疗的患者中治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，为期48周。在其它实施方案中，本发明提供了在被HCV基因型1感染并具有高病毒负荷的未经治疗的患者中治疗HCV感染的方法，该方法包括给予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，为期48周。
本发明还提供了治疗HCV感染的方法，其中在上述任何I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法中加入了三氮唑核苷治疗。在一些实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷疗法。在其它实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ联合疗法经过改进，包括在特定的治疗阶段qd口服10mg三氮唑核苷/kg体重的三氮唑核苷疗法。日三氮唑核苷剂量可每天一剂给予或分剂给予，包括每天一、二、三或四剂。
7.治疗肝纤维化适合用本发明的方法治疗的肝纤维化个体包括临床诊断为肝纤维化的个体，以及被认为具有发展成肝纤维化的风险但临床上尚未发展成肝纤维化的个体。这种个体包括，但不限于，感染HCV的个体；感染HBV的个体；感染曼森血吸虫(Schistosonianiaizsoni)的个体；曾接触已知会导致肝纤维化的化学试剂的个体；被诊断为威尔逊病的个体；被诊断为血色素沉着病的个体；以及酒精性肝病个体；非酒精性脂肪肝个体；自身免疫性肝炎个体；原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬变、或α-1-抗胰蛋白酶缺乏个体。
一方面，本发明提供了治疗肝纤维化患者的方法，包括给予该患者有效减少肝纤维化量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。任选地，本发明的方法包括与由I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗实现的增强抗纤维化效应或减少肝纤维化有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物一起，给予患者I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ的组合物。
另一方面，本发明提供了增强肝纤维化患者肝功能的方法，包括给予该患者有效增强肝功能量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。任选地，本发明的方法包括与由I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗实现的增强抗纤维化效应或增强肝功能有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物一起，给予患者I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ的组合物。
另一方面，本发明提供了降低肝纤维化患者肝硬化并发症发病率的方法，包括给予患者降低肝硬化并发症发病率有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ。任选地，本发明的方法包括与由I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ治疗实现的增强抗纤维化效应或降低肝硬化并发症发病率有效量的吡非尼酮或吡非尼酮类似物一起，给予患者I型或III型干扰素受体激动剂和IFN-γ的组合物。
IFN-γ的有效剂量范围每剂约25-300μg、约有10-100μg、或约100-1000μg。
I型或III型干扰素受体激动剂可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持续地或持续地给予。
一些实施方案中，I型干扰素受体激动剂是IFN-α。IFN-α的有效剂量范围约1-30μg、约3-27μg、约1MU-20MU、约3MU-10MU、约90-180μg、约18-90μg。
一实施方案中，上述本发明的治疗肝纤维化的方法可通过皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予患者IFN-γ剂量和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予患者INFERGEN共有IFN-α剂量来进行，所述IFN-γ剂量每剂含有约25-300μg、或约100μg-200μg药量的IFN-γ，INFERGEN共有IFN-α剂量每剂含有约3μg、约9μg、约15μg、约18μg或约27μg药量的INFERGEN。这种方案的抗纤维化效应或其它治疗效果可通过在IFN-α和IFN-γ治疗期间经口qd同时给予患者约5mg/kg体重-125mg/kg体重基于体重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物剂量，或约400mg-3600mg、或约800mg-2400mg、或约1000mg-1800mg、或约1200mg-1600mg固定剂量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物来增强。
另一实施方案中，上述本发明的治疗肝纤维化的方法可通过皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予患者IFN-γ剂量和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予患者IFN-α2a或IFN-α2b剂量来进行，所述IFN-γ剂量每剂含有约25-300μg、或约100μg-200μg药量的IFN-γ，IFN-α2a或IFN-α2b剂量每剂含有约3百万单位(MU)-10MU药量的IFN-α2a或IFN-α2b。这种方案的抗纤维化效应或其它治疗效果可通过在IFN-α和IFN-γ治疗期间经口qd同时给予患者约5mg/kg体重-125mg/kg体重基于体重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物剂量，或约400mg-3600mg、或约800mg-2400mg、或约1000mg-1800mg、或约1200mg-1600mg固定剂量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物来增强。
另一实施方案中，上述本发明的治疗肝纤维化的方法可通过皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予患者IFN-γ剂量和皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者PEGASYSPEG化的IFN-α2a剂量来进行，所述IFN-γ剂量每剂含有约25-300μg、或约100μg-200μg药量的IFN-γ，PEG化的IFN-α2a剂量每剂含有约90μg-180μg、或约135μg药量的PEGASYS。这种方案的抗纤维化效应或其它治疗效果可通过在IFN-α和IFN-γ治疗期间经口qd同时给予患者约5mg/kg体重-125mg/kg体重基于体重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物剂量，或约400mg-3600mg、或约800mg-2400mg、或约1000mg-1800mg、或约1200mg-1600mg固定剂量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物来增强。
另一实施方案中，上述本发明的治疗肝纤维化的方法可通过皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予患者IFN-γ剂量和皮下qw、qow、每月三次、每月给予患者INTRONPEG化的IFN-α2b剂量来进行，所述IFN-γ剂量每剂含有约25-300μg、或约100μg-200μg药量的IFN-γ，PEG化的IFN-α2b剂量每剂含有约0.5μg-1.5μg药量的INTRON。这种方案的抗纤维化效应或其它治疗效果可通过在IFN-α和IFN-γ治疗期间经口qd同时给予患者约5mg/kg体重-125mg/kg体重基于体重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物剂量，或约400mg-3600mg、或约800mg-2400mg、或约1000mg-1800mg、或约1200mg-1600mg固定剂量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物来增强。
另一实施方案中，上述本发明的治疗肝纤维化的方法可通过皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持续地或持续地给予患者IFN-γ剂量和皮下qw、qow、每月三次或每月给予患者PEG化的共有干扰素(PEG-CIFN)剂量来进行，所述IFN-γ剂量每剂含有约25-300μg、或约100μg-200μg药量的IFN-γ，PEG-CIFN剂量每剂含有约18μg-90μg、或约27μg-60μg、或约45μg药量的CIFN氨基酸。
这种方案的抗纤维化效应或其它治疗效果可通过在IFN-α和IFN-γ治疗期间经口qd同时给予患者约5mg/kg体重-125mg/kg体重基于体重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物剂量，或约400mg-3600mg、或约800mg-2400mg、或约1000mg-1800mg、或约1200mg-1600mg固定剂量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物来增强。
在许多实施方案中，I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ的用药期约1天-7天、或约1周-2周、或约2周-3周、或约3周-4周、或约1个月-2个月、或约3个月-4个月、或约4个月-6个月、或约6个月-8个月、或约8个月-12个月、或至少1年，并且可用药更长时间。在共同施用吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物的实施方案中，吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物的治疗期可与I型或III型干扰素受体激动剂和/或IFN-γ的治疗期相一致。
实施例列出了以下实施例为本领域的一般技术人员提供如何制造和使用本发明的完整揭示和描述，这些实施例不是要限制发明者认为是其发明的本发明的范围，也不是说以下实验是所有或唯一使用的实施例。发明者尽量确保所用数值(如量、温度等)的准确性，但一些试验误差和偏差是可以理解的。除非另有说明，份是以重量表示的份，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，压力是或接近大气压。
实施例1CIFN和IFN-γ的抗病毒活性特征材料和方法使Hela细胞生长在补充有10％热失活血清(按需要使用牛血清或胎牛血清)(Hyclone Laboratories公司，Logan，UT)、L-谷氨酰胺(2mM)、链霉素(100μg/ml)和青霉素(100u/ml)的DMEM或RPMI-1640培养基中。使细胞在37℃、5％CO2湿润培养箱中生长。加入病毒之前用IFN处理Hela细胞(96孔微量滴定板的每孔2×104个细胞)24小时。加入MOI为0.1的病毒并再将平板培育48小时。此时，用以20％(体积比)甲醇配的0.5％结晶紫染色细胞单层。所有细胞病变效应(CPE)抑制测定一式两份。1单位IFN被定义为以50％抑制CPE的IFN量。用NIH标准人IFN-α(Namalwa/Sendai)(Ga23-901-532)测量所有IFN的活性。
结果测定数据列在下面的表2中。
表2Infergen、Intron A和Actimmune抗西尼罗病毒的活性
*这里所用的值来自独立毒性研究，由于已经被充分稀释，故无需在该平板上证实毒性作用。
EC50＝有效浓度。表示抗病毒功效IC50＝抑制浓度。只用于药物而不用于病毒。表示药物的毒性。
SI＝选择指数。IC50/EC50。高SI是某种药物值得进一步测试的标准指标。
HeLa/VSV的测定结果表明，Infergen和IFN-γ对西尼罗病毒具有高度协同的抗病毒生长抑制活性。考虑到自然发生的干扰素在免疫系统中的作用，可能干扰素的抗病毒特性不特异于或限于特殊的病毒。我们认为Infergen(和其它干扰素-α)和IFN-γ将对丙肝病毒和其它α病毒具有协同的抗病毒活性。
实施例2IFN-α和干扰素诱导物在细胞培养物和小鼠及仓鼠模型中对西尼罗病毒的作用材料和方法病毒和动物使用WNV的纽约乌鸦脑分离物(NY，CDC996625，V1 D3 11/10/1999)。用含有5％胎牛血清(FBS)、0.1％NaHCO3的199培养基，在非洲绿猴肾(Vero 76，ATCCCCL1587)细胞中增殖登革热病毒、黄热病毒和西尼罗病毒。在抗病毒测定中用含有1％FBS、0.1％NaHCO3和50μg/mL庆大霉素(Sigma，St.Louis，MO)的MEM维持细胞。在96孔微量滴定板内亚融合(subconfluent)的Vero细胞中滴定病毒。使用雌性4-5周龄的BALB/c小鼠(Simonsen Laboratories，Gilroy，CA或Harlan Sprague Dawley，Indianapolis，IN)和雌性4-5周龄或大于7周龄的叙利亚金仓鼠。用稀释在MEM中的10450％细胞培养物感染剂量(CCID50)皮下激发动物。动物被随机分组。
化合物人杂合干扰素-αB/D(IFN-αB/D)获得自David Gangemi博士(ClemsonUniversity)或Johnson Lau博士(Ribapharm公司，Costa Mesa，加利福尼亚)。已知IFN-αB/D对小鼠具有活性。Wintergerst等，(1999)Antiviral Res44(1)75-8；Gangemi等，(1989)9(3)275-83；Brooks等，(1999)Antiviral Res 41(1)57-64；和Gangemi等，(1989)9(2)227-37。InfergenTM(#P002586，干扰素alfacon-1，Intermune公司，Brisbane，CA)是第二代细胞因子，它在非等位干扰素α亚型中含有出现频率最高的氨基酸。在细胞培养物模型中，与天然产生的1型干扰素相比，Infergen确实比较有效，在与天然产生的1型干扰素的对比临床试验中，它是丙肝病毒复制更有效的抑制剂。Infergen对仓鼠具有活性，但对小鼠没有活性。Fish等，(1986)Antimicrob Agents Chemother 30(1)52-6。干扰素-α2b(IFN-α2b)和干扰素-γ(IFN-γ)也都来自Intermune公司。为进行联合研究，将适当剂量的Infergen和三氮唑核苷混合在同样的注射瓶中，并在试验过程中保存于4℃。皮下同时注射药物。AmpligenTM水溶液(30μg/mL)获自William M.Mitchell(Vanderbilt大学医学病理学学院)。AmpligenTM是一种由双链polyIpolyC12U构成的RNA样分子，其中，polyC链中的尿苷酸取代产生了非氢键区。AmpligenTM诱导2-5A合成酶产生和活化，这种酶反过来可激活RNA酶L，从而破坏病毒RNA。由于AmpligenTM是一种RNA样的分子，需要注意使用不含RNA酶的物质和DEPC处理的水以防止被RNA酶污染。Ampligen被等分并冷冻直到使用。AldaraTM(咪喹莫特；一种刺激制造干扰素的化合物)获自制药厂，为局部使用的乳膏，每250mg包装乳膏中含有12.5mg咪喹莫特。将一个包装的乳膏涂抹在9只小鼠或10只仓鼠切开的背部，涂抹面积为2.2cm2。这样可分别在小鼠和仓鼠内产生1.4和1.3mg/2.2cm2的剂量。
细胞培养测定法WNV的细胞病变效应(CPE)测定法已经描述过。Morrey等，(2002)55107-116；Smee等，(1988)10253-262。简言之，在96孔微板中亚融合的Vero76细胞中加入测试化合物的连续稀释液，之后加入5-50％细胞培养物感染剂量(CCID50)的WNV和50CCID50黄热病毒和登革热病毒。每个96孔板上的对照是未感染的细胞、被感染但使用药物的细胞和未感染但用药物处理的细胞。每种药物浓度的毒性对照有两份，测试样品有三份。在视觉上对细胞进行CPE评分。采用每种化合物浓度的平均CPE效价进行回归分析来计算50％有效浓度(EC50)和50％抑制毒性浓度(IC50)。用IC50÷EC50来计算选择指数(SI)。用中性红(NR)活体染料来鉴别视觉CPE测试以及提供更加量化的结果。Morrey等，(2002)，同上；和Smee等，(1988)，同上。视觉阅读CPE之后，将细胞与中性红染料一起在37℃培养2-3小时。从孔中洗去游离染料，并用微板阅读器(Bio-Tek EL 1309，BioTek，Burlington，VT)在540和405nm吸光度下量化吸取的染料。吸光值表示为占对照的百分比，并通过回归分析计算IC50和EC50值。
用病毒生产细胞培养物测定法(Morrey等，(2002)，同上)来测定组织或血浆的病毒滴度，其中，特定体积的组织匀浆或血浆被加入一系列稀释试管中的第一个试管中。进行连续稀释并加到Vero细胞中。6天后用CPE来鉴别感染终点。Sidwell等，(1971)22797-801。用四个复制品来计算每毫升血浆或每克组织的感染剂量。
攀登试验将仓鼠置于42°的斜坡(4英寸宽、6英寸高)下端。记录仓鼠在15秒的指定时间内通过的距离。在晚上和白天对未经感染的仓鼠进行测量，测量之前先摇晃笼子以唤醒仓鼠，两次测量结果是类似的。包括有病的仓鼠在内，所有仓鼠似乎都具有走上斜面的动机。该测试反映了疾病体征，如肌无力、打转、平衡和后肢麻痹。Xiao等，(2001)Emerg Infect Dis，7(4)714-21；和Chowers等，(2001)Emerg InfectDis.7(4)675-8。
注射病毒后-1天或-4至-6小时对小鼠的治疗在-1dpi(注射病毒后天数)，雌性BALB/c小鼠(4-5周龄)用隔天(eod)腹膜内(ip)给予的Ampligen(13mg/kg)治疗直到9dpi，用局部给予的咪喹莫特治疗(1.4mg/2.2cm2)，qd×7天，或用ip IFN-αB/D治疗(6.5×107U/kg)(Johnson Lau，Ribapharm公司)，qd×7天。用盐水作为Ampligen和IFN-αB/D的载体。WNV感染组和未感染未治疗组中分别有10个动物，毒性对照组中有6个动物。基于11dpi仍然存活的动物数计算百分存活率。
在-4至-6hpi(注射病毒后小时数)，雌性BALB/c小鼠(4-5周龄)也用隔天(eod)ip给予的Ampligen(15或4.8mg/kg)治疗直到6dpi，或用ip给予的IFN-αB/D治疗(1.5×107或1.5×106U/kg)(David Gangemi，Clemson University)，qd×5天。用盐水作为载体。基于13dpi仍然存活的动物数计算百分存活率。
-4至-6hpi对仓鼠的治疗在-4至-6hpi，雌性仓鼠(4-5周龄)用隔天(eod)ip给予的Ampligen(10或3.2mg/kg)治疗，直到6dpi，或用sc给予的Infergen治疗(10或1μg/kg)，qd×7天。用盐水作为载体对照组。分别基于13dpi仍然存活的动物数和-2和7dpi之间的差异来计算百分存活率和重量变化。每个治疗试验的最高剂量组和感染的盐水对照组有9只仓鼠。较低剂量组和毒性对照组有7只仓鼠。
Infergen和三氮唑核苷的联合研究病毒侵袭2天后(2dpi)开始对仓鼠进行皮下治疗。基于3和7dpi的重量差异来计算平均增重，并确定直至12dpi的存活率。将Infergen(5、0.5、0.05和0μg/kg)和三氮唑核苷(75、7.5和0mg/kg)的所有组合物一起皮下注射给每组中10只7-8周龄的仓鼠。试验1中用安慰剂感染的对照组中有17个动物。每组有3只仓鼠的未感染的对照组包括5、0.5和0μg/kg Infergen和三氮唑核苷(75和0mg/kg)的所有组合。用5μg/kg Infergen和75mg/kg三氮唑核苷将试验过程重复一次(试验2)。
结果当在病毒侵袭之前1天给予干扰素时**，通过视觉CPE测定和NR测定发现，干扰素在培养物中具有抗WNV的活性(表3)。
表3.采用Vero 76细胞，干扰素抗黄病毒、西尼罗病毒、登革热病毒和黄热病毒的活性。
aWNV-西尼罗病毒，DV-登革热病毒，YFV-黄热病毒疫苗b50％有效浓度c50％细胞毒浓度d选择指数(IC50÷EC50)Infergen是最具活性的，其平均EC50＝0.026ng/mL。IFN-αB/D和IFN-α2b的活性比Infergen低3-5倍。IFN-γ是干扰素中活性最低的，其EC50＝2.8ng/μL。核苷类似物6-氮尿苷(表3)具有与IFN-γ一样的活性级别。三氮唑核苷的活性最低。在Vero细胞中，相同的活性模式与其它黄病毒、登革热病毒和黄热病毒类似(表3)，即相比IFN-αB/D，Infergen对这些病毒更有活性。已知这些干扰素在细胞培养物中是有活性的，用Infergen和IFN-αB/D进行动物研究。动物中的剂量和治疗方案是基于以前发表的在仓鼠中对Infergen的研究(Fish等，(1996)Antimicrob AgentsChemoher。30(1)52-6)；在小鼠中对IFN-αB/D的研究(Gangemi等，(1989)JInterferon Res.9(3)275-83；和Gangemi等，(1989)J Interferon Res.9(2)277-37)；在小鼠中对Ampligen的研究(Leyssen等，(2003)Antimicrob AgentsChemother.47(2)777-82；和Sidwell等(1994)Antiviral Res.25(2)105-22)；以及咪喹莫特的药品说明书。
在皮下注射病毒1天前开始腹膜内给予IFN-αB/D(6.5×107U/kg)和Ampligen(13mg/kg)可防止小鼠100％死亡(P≤0.01)，而用盐水治疗的感染的对照小鼠的死亡率分别为20％和10％。已知当局部给予时可诱导IFN-α、IFN-β和其它细胞因子的生物反应调节物咪喹莫特可有效防止70％受感染的小鼠死亡(P≤0.01)(表4)表4.皮下注射西尼罗病毒前1天给予干扰素-αB/D和干扰素诱导物对4-5周龄的雌性BALB/c小鼠存活率的影响
a直至病毒感染后11天b治疗从-1dpi(注射病毒后天数)开始，qd(每日一次)，eod(隔天)c与用盐水ip，-1dpi，eod治疗的感染的盐水对照动物的统计学比较**与相应的感染对照相比，P≤0.01在注射病毒3天后收集的用IFN-αB/D或Ampligen治疗的小鼠的血浆病毒滴度，将病毒滴度降低至低于检出限(P≤0.001)与药物功效相关。而盐水安慰剂样品则为5log WNV滴度。
在一个也采用BALB/c小鼠的独立实验中，-4至-6hpi(注射病毒后小时数)腹膜内给予的IFN-αB/D或Ampligen没有统计学上提高存活率(表5)，尽管用Ampligen(15和4.8mg/kg)和较低两个剂量的IFN-αB/D(1.5×106U/kg)治疗的小鼠的存活率都略有提高。但在-4至-6hpi中，将治疗延迟-1dpi大大减少了IFN-αB/D和Ampligen的功效。
表5.皮下注射西尼罗病毒4-6小时前给予干扰素-αB/D和Ampligen对4～5周龄的雌性BALB/c小鼠存活率的影响
a直至病毒感染后13天b治疗从hpi(注射病毒后小时数)开始，qd(每日一次)，eod(隔天)感染的治疗动物与感染的对照动物无统计学差异与盐水安慰剂对照相比，-4至-6hpi给予的Infergen、Ampligen和咪喹莫特可提高4-5周龄仓鼠的存活率，然而，只有咪喹莫特组的存活率(66％)与盐水对照的存活率(11％)是有统计差异的(P≤0.05)(表6)。
表6.皮下注射西尼罗病毒4-6小时前给予Infergen，Ampligen and咪喹莫特对4-5周龄的雌性仓鼠存活率和重量变化的影响
a治疗从hpi(注射病毒后小时数)开始，qd(每日一次)，sc(皮下)，ip(腹膜内)，eod(隔天)b直至病毒感染后13天c通过比较-2和7dpi时仓鼠的个体重量进行统计分析。未跟踪每个个体的重量，因此无法确定每个个体的平均重量变化*采用x方分析，与盐水感染的对照相比P≤0.05
当受病毒感染时，仓鼠的体重降低很大，这是检测药物功效的一个有用参数。与盐水对照组相比，所有治疗都改善了重量变化(表6)。用Ampligen和咪喹莫特治疗的动物的重量变化与对照相比是统计学上有差异的。仓鼠的重量变化是除存活率之外证实这些治疗抗WNV效果的另一个参数。
为确定注射病毒之后给予的IFN-α对发病率和死亡率的影响，在注射WNV2天后给予7-8周龄的仓鼠Infergen。使用年龄较大的仓鼠是因为与较年轻的小鼠或仓鼠相比他们具有更显著的疾病体征。Xiao等，(2001)Emerg Infect Dis.7(4)714-21。在该研究中评价了联合使用三氮唑核苷。Infergen和三氮唑核苷(在注射病毒2天后同时皮下给予)的联合治疗未协同性地提高存活率、攀登斜坡的能力或重量变化(表7)。
表7.皮下注射西尼罗病毒+2天后皮下给予Infergen和三氮唑核苷对大于7周龄的雌性叙利亚金仓鼠的存活率和疾病体征的影响的联合研究
a将Infergen和三氮唑核苷混合在一起单次皮下注射，qd×7天，从注射病毒后+2天开始b直至12dpic注射病毒后7天和3天之间的重量(g)变化d15秒内在42°斜坡上通过的英寸数与感染的安慰剂对照值相比，*P≤0.05，**P≤0.01，***P≤0.001
然而，在没有三氮唑核苷时，将Infergen的治疗剂量增加至5μg/kg具有改善所有测定参数的剂量-反应趋势。用最高剂量(5μg/kg)Infergen治疗的仓鼠有90％存活，而那些用安慰剂治疗的仓鼠的存活率仅为59％，但这种差异不是统计显著的。当从2dpi开始治疗时，为证实Infergen的明显活性，以及为证实三氮唑核苷在受感染动物中明显的有害作用，进行了第二次试验。与试验1相比，在试验2中观察到了Infergen治疗的动物接近90％的相同存活率以及安慰剂治疗的动物50％的存活率，这证实了Infergen治疗的功效。
用低剂量三氮唑核苷(7.5mg/kg)和5μg/kg Infergen治疗的动物的重量损失较对照动物少(P≤0.001)(表7)。不使三用氮唑核苷，用5或0.5μg/kg Infergen治疗的动物能比对照动物明显地更好爬上42°的斜坡(P≤0.01)。总之，Infergen治疗改善了死亡率和发病率。然而，所有用最高剂量三氮唑核苷(75mg/kg)治疗的组都有明显高于所有其它组的死亡率。当用最高剂量的三氮唑核苷治疗感染WNV的动物时，存活率低得多。试验2证实了这一结果(表7)。死亡率增加不是由于三氮唑核苷在未感染动物中的毒性，这是因为与未感染且未经治疗的对照相比，未感染但经过治疗的动物也有同样的存活率、重量增加和攀登能力。
在试验2中，测定了血浆、脑、肾和脾内的WNV滴度以确定这些参数是否与Infergen的疗效有关。在3dpi获自Infergen治疗的仓鼠的血浆WNV滴度(＜3.9log10细胞培养物感染单位/mL)低于用盐水治疗的动物的滴度(6.2log10细胞培养物感染单位/mL)(表8)。
表8.皮下注射西尼罗病毒+2天后皮下给予Infergen和三氮唑核苷对大于7周龄的雌性叙利亚金仓鼠的病毒滴度的影响个体WNV滴度-log10细胞培养物感染单位/血浆的毫升数或组织的克数(平均值)
a将Infergen和三氮唑核苷混合在一起单次注射，qd×7天，从注射病毒后+2天开始b在3dpi和治疗开始后1天采集的血浆c在7dpi采集的组织d斜体表示滴度低于检出限。由加入细胞单层的血浆或匀浆组织的毒性得到的细胞培养物的滴度是有限的的在Infergen治疗的动物中观察到在7dpi获得的WNV阳性组织的滴度和数目略微降低的趋势，尽管差异不是统计学上显著的。血浆和组织WNV滴度似乎与Infergen治疗有关。
实施例3IFN alfacon 1(IFN-alfacon 1)和IFNγ1b(IFN-γ1b)的组合活性材料和方法干扰素得到的干扰素alfacon-1或IFN alfacon 1，IFN alfacon 1(Intermune，Brisbane，CA)是一种无菌、澄清、无色、不含防腐剂的液体，其药物浓度为30μg/mL(填装体积为0.5mL)。得到的干扰素γ-1b或IFNγ1b(Intermune，Brisbane，CA)是一种无菌。澄清、无色溶液，其药物浓度为200μg/mL(填装体积为0.5mL)。
细胞毒性和稳定性研究为建立剂量连续稀释液，我们分别采用基于100μg和15μg剂量的IFN-γ1b和IFN-alfacon 1的Cmax浓度。这些Cmax浓度是在人类一期临床研究中确定的。在设计用来测试两种IFN的组合的试验中使用这些数据以进行细胞毒性研究，对IFNalfacon 1和IFNγ1b都采用100倍Cmax浓度的剂量。用Celltiter 96Aqueous单溶液细胞增殖测定法来确定细胞毒性测定中活细胞的数目(Promega，Madison，Wisconsin)。按照制造商的说明，在96孔板内的A549细胞中加入各种浓度的IFNalfacon 1和IFNγ1b以及它们的组合，然后加入MTS。将细胞处理24小时。
细胞培养方法将大约4×104个A549细胞接种到96孔板，并维持在补充有10％胎牛血清(GibcoBRL)、青霉素G(100U/ml)和链霉素(100ug/ml)的培养基，在37℃、5％CO2下培养。
病毒原液的制备该研究所用的水泡性口炎印第安纳病毒是Indiana大学的微生物学教授MiltonTaylor博士惠赠的。病毒原液是通过以下方法获得的将VERO细胞单层培养在75cm2组织培养烧瓶中，以1∶500的比例将病毒稀释在1ml DMEM/10％FBS中。产生细胞病变效应(CPE)后，通过小心的移液收获细胞和上清液。离心除去细胞碎片，将病毒上清液等分并保存在-80℃。
病毒滴定用VERO细胞作为宿主，通过嗜菌斑测定法滴定病毒产物。将VERO细胞接种到在含有10％FBS的DMEM中的6孔(6×105细胞/孔)平板上，在37℃放置24小时。除去培养基并将病毒上清液的连续稀释液加入含有5％FBS的DMEM中，1小时后在37℃培育。吸收步骤结束时加入含有5％FBS和1％低熔点琼脂糖(3ml/孔，用于6孔平板)的DMEM，并将该平板在37℃培育30-48小时。当病毒形成肉眼可见的嗜菌斑时，除去琼脂糖塞子并用含有1％结晶紫溶液的20％乙醇简单将平板染色。以PFU/毫升来确定病毒浓度。
活细胞感染和抑制测定接种后1天，用PBS洗涤细胞一次，并用含有各种剂量浓度的IFN alfacon 1(从40pg/ml 1∶2连续稀释至0.3125pg/ml)和IFNγ1b(从4800pg/ml 1∶2连续稀释至18.75pg/ml)的培养基代替原来的培养基，进行单剂量研究。为进行联合研究，以1∶120和1∶60的比例加入IFN alfacon 1和IFNγ1b。培养24小时后，细胞用PBS洗涤三次，并在各个平板中加入VSV，M.0.1.＝0.1。每种治疗方案重复四次。
RT-PCR的寡核苷酸设计引物和探针设计用Primer Express寡核苷酸设计软件(Appiied Biosystems，Foster City，加利福尼亚)来识别与VSV序列相当的引物/探针对。采用这些引物和探针可知，VSV印第安那血清型(J02428)扩增子位于核苷酸1764和1810之间，具有以下引物/探针组正向引物5’CGG CCA AGG ATT GAA GTC A(SEQ ID NO01)，反向引物ATA ACC TAA GAACTG GCC CAT AAC TC(SEQ ID NO02)，探针6FAM-ATT GAT TAC GAA AAA TGG AAT AACCAC CAA AGG A-MGBNFQ(SEQ ID NO03)。(MGBNFQ分子沟结合非荧光染料猝灭剂)。
RNA提取和标准病毒RNAVSV病毒RNA收获自不同浓度感染的细胞，并用QIAamp Viral RNA Kit(Qiagen公司，Valencia，加利福尼亚)按照制造商的说明来提取总的RNA。病毒滴度表示为嗜菌斑形成单位(PFU)/ml，该值等于每毫升的拷贝数。用受感染的Hela细胞的VSVRNA样品的连续稀释液作为标准。通过嗜菌斑测定已经预先将这些样品的病毒滴度确定在6和6×106pfu/ml(10)之间。
实时定量RT-PCR采用实时PCR，用等分的5μL VSV病毒RNA来定量。采用TaqMan Gold RT-PCR试剂盒(Applied Biosystems，Foster City，加利福尼亚)进行单试管反应。对RNA标准物和样品进行重复三次的反应，每次反应有50μl体积和5μl病毒RNA。RT步骤为48℃30分钟，然后95℃10分钟，再然后95℃15秒、60℃1分钟循环40次。
协同作用的分析对数据进行分析，假设药物是相互不排斥的，即两种药物有不同的或非依赖型的作用机制。通过测量与它们各自的对照相比的病毒拷贝数来计算病毒复制抑制百分比用于每种组合和单一疗法组合。试验至少重复三次以验证结果。采用Chau-Talalay法(11)，用CalcuSyn(Biosoft，英国剑桥)软件来确定组合指数(Combination Indice，CI)，以分析抗病毒剂的协同作用、累加作用或拮抗作用。CI值＜0.1表示有非常强的协同作用，CI值在0.1-0.3之间表示有强协同作用，CI值在0.3-0.7之间表示有协同活性。CI＝1的药物组合有累加作用，而CI值＞1表示有拮抗作用。CI值的大小直接与组合中相互作用的量成比例。为更完整地分析所有作用表面，还用保守的等效线图解法分析了数据以将协同作用或拮抗作用的程度量化。具体地说，选择一种具体的作用水平(包括最大值的50％、75％和90％)，并将得到这种作用的IFN alfacon1和IFNγ1b的剂量(单独进行)作为轴点在笛卡儿图上标出。连接IFN alfacon 1和IFNγ1b的向上凸起的曲线(保守的)是简单相加的组合中能产生这种作用的区域。如果组合数据点落在曲线上，表示有累加作用；如果点落在左下方，表示有协同作用；如果点落在右上方，表示有拮抗作用。
结果对VSV的研究在VSV/A549系统中，用IFN-alfacon 1和IFN-γ1b单一疗法的剂量反应示于图2中。
由图2可见，IFN-alfacon 1和IFN-γ都能对VSV感染的A549细胞产生剂量反应，IFN alfacon 1的50％有效浓度(EC-50)约为5pg/mL，IFN-γ1b的EC-50约为300pg/mL。为证实IFN-alfacon 1和IFN-γ1b的表观抗病毒效应不是由于这些细胞因子的直接抗增殖作用，在与抗病毒测定所用相同的浓度下进行细胞增殖测定。重要的是，约90％的最大抑制(1log10降低)是在每种IFN单一疗法的最高剂量时获得的，任何剂量的单一疗法在24小时时间点都无法获得＞90％的降低值。
图3证实，用于抗病毒测定的各IFN剂量都没有见到抗增殖作用，表明对VSV的抗病毒应答是由于各IFN对直接抗病毒状态的诱导。
为确定IFN-alfacon 1和IFN-γ1b的组合是否会产生协同作用、累加作用或拮抗作用，以1∶120和1∶60的比例将这两种IFN组合，并在VSV/A549抗病毒测定系统中进行评价(图4a和4b)。
由图4a和4b可见，IFN-alfacon 1和IFN-γ的联合疗法可在体外在A549细胞内抵抗VSV，结果产生了惊人的剂量反应效应。更具体地说，与单一疗法不同，可获得大于1log10的降低值。例如，当比例为1∶120时可得到2、3和5log10的降低值(见图4a)。
用Chau-Talalay法在VSV/A549系统中对IFN-alfacon 1和IFN-γ1b的组合协同作用的分析证实在一定剂量范围内有非常强的协同作用(所有观测的CI小于0.1)。在这种方法中，Chau-Talalay分析计算了组合指数(CI)值。CI值＜1说明是协同性组合，而CI值＞1说明有拮抗作用。进一步而言，CI＜0.01说明协同作用非常强，而CI值＜0.1说明协同作用强。对VSV/A549测定的IFN-alfacon 1和IFN-γ1b剂量范围(图4a和4b)计算的CI值列在下面的表9中
由表9可见，VSV/A549系统中，比例为1∶120(IFN-alfacon 1IFN-γ1b)和1∶60(IFN-alfacon 1IFN-γ1b)的IFN-alfacon 1和IFN-γ1b的组合使所得CI值都小于1。在这些剂量范围内，所有值都说明有非常强的协同作用或强协同作用(表9)。
除Chau-Talalay分析，在评价协同作用时可采用等效线图解法绘图以确定治疗剂的组合是否是累加的、协同的或拮抗的。图5a和5b是VSV/A549抗病毒活性模型中EC-50、EC-75和EC 90浓度的IFN-alfacon 1和IFN-γ1b组合的等效线图解绘图。EC值落在每种IFN剂量浓度线之下(左下)被认为是协同浓度，落在线上表示是累加的，落在线之上则的拮抗的。由图5a和5b可见，在比例为1∶120(IFN-alfacon1IFN-γ1b)和1∶60(IFN-alfacon 1IFN-γ1b)时，所有的EC值都落在单一疗法剂量反应曲线之下，表明通过等线条图解法分析，这两种药物有强协同作用。
虽然本发明参照其特定的实施方案进行了描述，本领域技术人员应当理解，在不背离本发明的真实精神和范围的情况下可进行各种改变和替代等价物。此外，可进行许多修改以使具体的情况、材料、组成、方法、加工步骤或步骤适应本发明的目的、精神和范围。所有这种修改都在本发明权利要求的范围内。
序列表<110>L.M.布拉特(Blatt，Lawrence M.)H.H.苏(HSU，HENRY H.)<120>治疗病毒性疾病和肝纤维化的干扰素药物治疗<130>INTM-021W02<140>未指定<141>2003-12-23<150>US03/32539<151>2003-10-14<150>US03/06687<151>2003-02-28<160>3<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>1cggccaagga ttgaagtca 19<210>2<211>26<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>2ataacctaag aactggccca taactc 26<210>3<211>34<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>探针<400>3attgattacg aaaaatggaa taaccaccaa agga 3权利要求
1.一种在个体中减少肝纤维化的方法，其特征在于，所述方法包括给予减少肝纤维化的有效量的IFN-α和IFN-γ。
2.一种在个体中治疗丙肝病毒感染的方法，其特征在于，所述方法包括给予实现持续病毒应答有效量的IFN-α和IFN-γ。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，肝纤维化的程度通过分阶段测定，如通过标准化的评分系统所测定的，肝纤维化的阶段减少至少一个单位。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25μg-300μg的量皮下给予，IFN-α以约3μg-27μg的量皮下给予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是同时给予的。
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25μg-300μg的量皮下给予，IFN-α以约3μg-27μg的量皮下给予，且其中所述IFN-α和IFN-γ的给药间隔在24小时之内。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25μg-300μg的量皮下给予，IFN-α以约3μg-27μg的量皮下给予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是以多剂量给予的。
7.一种增强肝纤维化个体肝功能的方法，其特征在于，所述方法包括给予增强肝功能有效量的IFN-α和IFN-γ。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述肝功能可通过测定选自血清转氨酶水平、凝血酶原时间、血清胆红素水平、血小板数、病毒负荷和血清白蛋白水平的参数来显示。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25μg-300μg的量皮下给予，IFN-α以约3μg-27μg的量皮下给予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是以连续剂量给予的。
10.一种降低肝硬化并发症的发病率的方法，其特征在于，所述方法包括给予肝纤维化个体降低肝硬化并发症的发病率有效量的IFN-α和IFN-γ的组合。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25μg-300μg的量皮下给予，IFN-α以约3μg-27μg的量皮下给予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是以多剂量给予的。
12.一种在个体内治疗丙肝病毒(HCV)的方法，其特征在于，所述方法包括给予治疗有效量的IFN-α和IFN-γ。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述丙氨酸转氨酶的水平被降低至每毫升血清低于约45国际单位。
14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述个体的病毒负荷被降低至每毫升血清低于约500个HCV基因组拷贝。
15.如权利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25μg-300μg的量皮下给予，IFN-α以约3μg-27μg的量皮下给予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是同时给予的。
16.如权利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25μg-300μg的量皮下给予，IFN-α以约3μg-27μg的量皮下给予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是独立给予的。
17.如权利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每剂约25μg-300μg的量皮下给予，IFN-α以约3μg-27μg的量皮下给予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是以连续剂量给予的。
18.一种降低丙肝病毒个体病毒负荷的方法，其特征在于，所述方法包括给予降低病毒负荷有效量的IFN-α和IFN-γ。
19.一种在个体内治疗丙肝病毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤(a)鉴别被基因型1丙肝病毒(HCV)感染，且最初的病毒负荷大于2百万个HCV基因组拷贝/毫升血清的个体，和(b)给予个体有效量的IFN-α和IFN-γ，为期约48周。
20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中对个体的鉴别还要求个体无肝纤维化或处于早期肝纤维化，如Knodell评分0、1或2所测定。
21.一种在个体内治疗丙肝病毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤(a)鉴别被基因型1丙肝病毒(HCV)感染，且最初的病毒负荷小于或等于2百万个HCV基因组拷贝/毫升血清的个体，和(b)给予个体有效量的IFN-α和IFN-γ，为期约24-48周。
22.一种在个体内治疗丙肝病毒的方法，包括以下步骤(a)鉴别被基因型2或3的丙肝病毒(HCV)感染的个体；和(b)给予个体有效量的IFN-α和IFN-γ，为期约24-48周。
23.如权利要求12-22中任一项所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是共有干扰素。
24.如权利要求12-23中任一项所述的方法，还包括在IFN-α和IFN-γ治疗期间共施用给个体有效量的三氮唑核苷。
25.如权利要求12-24中任一项所述的方法，个体接受了协同量的IFN-α和IFN-γ。
26.如权利要求12-25中任一项所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是PEG化的IFN-α。
27.如权利要求12-26中任一项所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是通过泵控连续输注皮下给予的。
28.一种在个体内治疗α病毒感染的方法，其特征在于，所述方法包括给予个体有效量的IFN-α和IFN-γ。
29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述个体接受了协同量的IFN-α和IFN-γ。
30.如权利要求28或29所述的方法，还包括在IFN-α和IFN-γ治疗期间共施用给个体有效量的三氮唑核苷。
31.如权利要求28-30中任一项所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是共有干扰素。
32.如权利要求28-31中任一项所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是PEG化的IFN-α。
33.一种治疗感染西尼罗病毒的个体的方法，其特征在于，所述方法包括给予个体有效量的共有干扰素(CIFN)。
34.一种治疗感染西尼罗病毒的个体的方法，其特征在于，所述方法包括给予个体有效量的IFN-γ。
35.一种治疗感染西尼罗病毒的个体的方法，其特征在于，所述方法包括给予个体有效量的IFN-α和IFN-γ。
36.如权利要求35所述的方法，其特征在于，所述个体接受了协同量的IFN-α和IFN-γ。
37.如权利要求35或36所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是共有干扰素。
38.如权利要求35-37中任一项所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是PEG化的IFN-α。
39.如权利要求33-38中任一项所述的方法，还包括在IFN-α或IFN-γ治疗期间共施用给个体有效量的三氮唑核苷。
40.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其特征在于，所述个体接受协同量的IFN-α和IFN-γ。
41.如权利要求40所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是共有干扰素。
42.如权利要求40或41所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是PEG化的IFN-α。
43.如权利要求1和40-42中任一项所述的方法，还包括在IFN-α和IFN-γ治疗期间共施用给个体有效量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮类似物。
全文摘要
本发明提供了治疗α病毒感染的方法；治疗丙肝病毒(HCV)感染的方法；治疗西尼罗病毒感染的方法；治疗登革热病毒感染的方法；治疗黄热病毒感染的方法；减少肝纤维化的方法；在患有肝纤维化的个体中增加肝功能的方法；降低与HCV和肝硬化有关的并发症的发病率的方法；以及在受病毒感染的患者中降低病毒负荷、或减少病毒清除的时间、或降低临床发病率或死亡率的方法。这些方法通常包括给予治疗有效量的I型或III型干扰素受体激动剂和IFN－γ来治疗病毒感染或肝纤维化。
文档编号A61K38/21GK1764475SQ200380110241
公开日2006年4月26日 申请日期2003年12月23日 优先权日2003年2月28日
发明者L·M·布拉特, H·H·苏 申请人:印特缪恩股份有限公司