专利名称：减肥组合物的制作方法
技术领域：
本发明是关于一种减肥组合物，更具体地是关于一种含有茶氨酸(theanine)以及选自由咖啡因、染料木黄酮(genistein)、L-肉碱和儿茶素(catechin)所组成的组中的至少一种物质的减肥组合物。本发明的组合物含有茶氨酸以及咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素中的一种或几种，具有分解脂肪、水解脂质和去除脂肪团的特性。
背景技术：
人体具有大约20000000000个在体内储存和释放能量的脂肪细胞。能量在体内的储存和释放具有复杂的机制，当能量的供应量大于消耗量时，能量就会在脂肪细胞(脂细胞)中作为中性脂肪(脂质)储存下来；当需要能量时，脂肪就会被水解成用作能量的脂肪酸和葡萄糖。当上述机制的能量平衡被打破并且多余的能量积累起来时，就会出现肥胖症，结果脂肪细胞增大或者脂肪细胞的数目增加。
据报道，大约30-40％的现代人患有肥胖症，并且由于肥胖症经常伴随着老年疾病如高血压、高血脂、动脉硬化、心脏病、糖尿病等，因此肥胖症的治疗至关重要。另外，人们关注肥胖症的治疗及良好身体状况和体形的保持不仅是为了健康，还为了美丽。为了美丽，对能够有效去除多余的皮下脂肪、或改善皮肤的坚韧性或者弹性的减肥和抗脂肪团化妆品的需求也日益增长。
由于脂肪及其代谢废物的积累，在皮肤和皮下脂肪中形成脂肪团，脂肪团使皮肤粗糙得像橘子皮。即使肥胖症不是产生脂肪团的直接原因，但是当脂肪细胞的体积或数目变大时脂肪团就会增加，因此将脂肪细胞中的脂肪分解并去除，对于维持良好的体形和皮肤状况是非常有效的。
因此，为了健康或者美丽，人们开展了大量关于各种治疗肥胖症方法的研究。常规治疗肥胖症的方法包括减少能量摄入量或增加能量消耗量的节食疗法、锻炼疗法、外科手术疗法或药物疗法。然而，由于这些方法不能完全解决肥胖问题并且具有严重的副作用，因此效力和安全性仍难以得到保证。另外，为了美丽，肥胖症的治疗不仅要去除脂肪，还应当注意改善皮肤状况，因此上述方法尚显不足。因此，亟需找到具有与现有物质类似或更好的功效并且没有副作用的新物质。
考虑到肥胖症的病因及其诱发的疾病，减少机体脂肪比简单地降低体重更重要。因此，需要找到一种促进体内积累的非必需脂肪分解或燃烧的方法。
本发明的发明人研究寻找能够增进脂肪分解或水解并促进脂肪燃烧的安全物质，并最终发现茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素具有有效水解脂质、去除脂肪团并分解脂肪的性能；并且发现茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素能够有助于身体保持良好的弹性和坚韧性。
发明内容
本发明提供了茶氨酸的新用途，所述茶氨酸能够增进中性脂肪的分解并且能够促进β3肾上腺素受体的表达而有助于脂肪的燃烧；咖啡因的新用途，所述咖啡因能够抑制磷酸二酯酶的表达而增进脂肪的分解，所述磷酸二酯酶为一种抑制脂肪在脂肪细胞中分解的酶；染料木黄酮的新用途，所述染料木黄酮能够促进脂肪的分解和燃烧；L-肉碱混合物的新用途，所述L-肉碱混合物能够促进染料木黄酮分解脂肪的功能；儿茶素的新用途，所述儿茶素能够抑制脂肪细胞(脂细胞)的分化。
本发明还提供了一种外用减肥组合物，该组合物含有茶氨酸以及咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素中的至少一种物质。本发明提供的组合物具有分解脂肪、水解脂质、去除脂肪团以及降低由脂肪团引发的皮肤粗糙的特性，从而能够增强或恢复皮肤的坚韧性和弹性。
此外，本发明提供了去除身体脂肪的方法，该方法通过在皮肤上施用上述减肥组合物来分解脂肪。
为了实现本发明的目的，本发明的减肥组合物含有茶氨酸以及选自由咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素所组成的组中的至少一种物质，该组合物通过促进脂肪细胞的新陈代谢来增进脂肪的分解。
下面将详细描述本发明。
术语“减肥”是指抑制和减轻肥胖症并减少脂肪团而使体形变好，使皮肤变得坚韧、光滑、有弹性。
茶氨酸是一种呈现出绿茶的特殊味道的氨基酸，据报道，当一个人服用茶氨酸时，α波(α-ray)就会增加，使人身心放松、情绪稳定(NipponNogeikagaku Kaishi.72(2)，153-157，1998)。本发明的茶氨酸包括从绿茶中提取的L型以及合成的L-茶氨酸、D-茶氨酸和DL-茶氨酸，以及可以在此使用的任何类型的茶氨酸。
作为脂肪分解促进剂的阳性对照而著称的咖啡因是一种显示出脂肪分解性质的甲基黄嘌呤，甲基黄嘌呤能抑制磷酸二酯酶的表达、增加细胞中的环磷酸腺苷(cAMP)，所述磷酸二酯酶是脂肪分解中的重要物质(Astrup，A等，Am J.Clin.Nutr.51759，1990)。
染料木黄酮是一种经常在大豆中含有的异黄酮，是与具有各种生理活性的雌性激素相类似的植物激素。据报道，染料木黄酮具有控制脂细胞中脂肪代谢(J.Steroid Biochem Mol Biol.75(4-5)265-71，2000)和降低血液胆固醇(J.Nutr.Jan；126(1)43-50，1996)的特性。
L-肉碱是在肝脏或肾脏中合成的必需营养素，一般在食物尤其是红肉中含有。据报道，当L-肉碱不足时，线粒体中的脂肪酸浓度就会降低，因此能量的生成量就会降低，L-肉碱具有多种功能，如抗衰老作用、降低血脂、增强心脏的功能等(Robert Crayhon，M.S.，Camitine miracle)。
儿茶素是绿茶的重要成分，具有多种药理作用，如抗氧化作用、抗癌作用或抑制心脏疾病。至今报道的多种儿茶素包括(+)儿茶素(C)、(-)表儿茶素(EC)、(-)表儿茶素-3-没食子酸盐(EGCG)、(+)表儿茶素(EGC)、(-)表儿茶素没食子酸盐(ECG)。本发明的儿茶素是从绿茶中提取的，其主要成分包括但不限于EC、EGC、EGCG、ECG。
提取本发明的有效成分的方法并没有限定，可以毫无限制的使用本领域中的各种已知的方法。
本发明的组合物含有茶氨酸以及咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素中的一种或几种，具有分解脂肪细胞中中性脂肪的良好功效。更具体地，本发明的组合物通过将脂细胞(脂肪细胞)中的甘油三酸酯水解成游离脂肪酸和甘油而促进脂肪的分解。这是因为本发明的组合物能增进分化成脂细胞的3T3-L1细胞中的β3肾上腺素受体的表达，从而增强并维持甘油三酸酯的水解，并且该组合物还具有增进与脂肪的分解或燃烧相关的酶的表达。
因此，当将本发明的含有茶氨酸以及咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素中的至少一种物质的组合物施用在皮肤上时，该组合物就会通过选择性地去除皮下脂肪而有助于使身体变得坚实、光滑、有弹性。
此外，本发明的组合物具有良好的抑制脂肪细胞(脂细胞)分化和脂肪细胞中脂肪累积的作用。即本发明的组合物能够抑制脂肪细胞体积和数目的增大。这是因为本发明的组合物能够降低分化成脂细胞的3T3-L1细胞中甘油-3-磷酸酯脱氢酶(GPDH)的活性，所述GPDH是脂肪细胞分化的标记成分。因此，当将本发明的含有茶氨酸以及咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素中的至少一种物质的组合物施用到皮肤上时，就能通过抑制脂肪细胞的生成和增大，从而有效地抑制机体脂肪的增加。
除了减少脂肪，还可以通过将本发明的组合物施用到由脂肪细胞增大引起的脂肪团部位上，将本发明的组合物用作抗脂肪团的外用组合物，用来治疗粗糙的皮肤，使皮肤变得坚韧、光滑而有弹性。尤其是由于该组合物的成分是从绿茶和大豆中提取的，因此它不会给皮肤造成副作用或伤害。
除了分解和去除在成熟脂肪细胞中过量积累的脂肪，本发明的组合物还有助于游离脂肪酸的燃烧而减轻或抑制肥胖症。与传统的只关注于一个特性如分化脂肪细胞或促进脂肪分解的方法或组合物相反，本发明的组合物能够分解脂肪细胞中已经生成的脂肪，并且能够彻底去除分解的副产物而防止脂肪重新积累，从而提供了一种新的直接预防肥胖症的方法和组合物。
可以使用任何常规的方法混合本发明组合物的组分茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素，本领域的技术人员可以容易地对这些方法进行更改。此外，可以没有限定地使用一些添加剂，比如使混合更加容易的添加剂。
在本发明中，茶氨酸以及咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素中的至少一种物质的量优选占所述组合物总重量的0.0001-20重量％，但并不限于此。
本发明的外用组合物含有茶氨酸以及咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素中的至少一种物质，因此，当施用到皮肤上时，该组合物能够减少皮下脂肪使体形苗条，并且具有通过分解皮下脂肪而去除脂肪团并使体形坚韧的作用。
本发明的含有茶氨酸以及咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素中的至少一种物质的组合物的外用制剂，并不局限于该组合物用来分解和燃烧脂肪、使皮肤坚韧有弹性的情况。例如，除了包括洗液、药膏、凝胶、霜、贴片、喷雾剂等之外，所述制剂还包括皮肤软化剂、营养液、营养洗液、按摩霜、营养霜、涂敷剂、凝胶、皮肤粘合型制剂。
在上述皮肤施用制剂中，除了有效成分茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素之外，本领域的技术人员可以选择并加入其它任何合适的成分。通过添加合适的成分，可以实现协同效应。
图1是表示来自绿茶中的成分茶氨酸分解中性脂肪(甘油三酸酯)的作用的图表；图2是表示来自绿茶中的成分茶氨酸控制β3肾上腺素受体表达的作用的图表，A对照B用0.005％咖啡因处理C用0.005％茶氨酸处理；图3是表示来自绿茶中的成分儿茶素阻止脂肪细胞分化的作用的图表；图4是表示茶氨酸和儿茶素抑制脂肪细胞中中性脂肪累积的协同作用的实验结果的图表；图5是表示茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮和L-肉碱增进脂肪分解的协同作用的实验结果的图表；图6是表示本发明的减肥组合物使皮下脂肪减少的速度的图表；图7是表示使用本发明的含有茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素的减肥组合物之后，用肉眼观察皮肤坚韧度改善的图表。
具体实施例方式
下面通过实施例和实验实施例更详细地描述本发明，但是本发明的范围并不限于此。描述这些实验实施例和实验实施例是为了举例说明本发明，本领域技术人员清楚本发明的范围不限于这些实施例和实验实施例。
以下实施例和实验实施例中所用的茶氨酸购自Taiyokagaku(日本)，咖啡因、染料木黄酮和L-肉碱购自Sigma(美国)。
制备实施例1儿茶素的提取将2千克绿茶叶在10升80℃水中浸泡5小时，得到提取液并收集所得溶液。另外，将滤渣在5升80℃水中浸泡3小时，再次得到溶液，并将两次的溶液混合。用滤纸将溶液过滤，并用乙酸乙酯处理得到乙酸乙酯提取物，之后用氯仿处理去除咖啡因，然后浓缩。将得到的溶液通过琼脂糖凝胶柱，并用二氯甲烷和甲醇(1∶1)的混合物淋洗，然后将淋洗液在40℃下浓缩得到儿茶素粉。
参考实施例1脂肪细胞(脂细胞)的分离将从雄性SD大鼠分离出的附睾脂肪组织切成小块，并加入0.1重量％胶原酶(DMEM培养液中，未加酚红)，在37℃培养2小时后，过滤得到脂细胞(脂肪细胞)。
然后，为了证实每种成分对雄性SD大鼠的脂细胞中的中性脂肪分解的促进能力，使用上述得到的脂细胞进行实验。将1×106个细胞/孔，在含有0.5％牛血清白蛋白(BAS)且不含脂肪酸的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(DMEM(Dulceco’s modified eagles medium))中培养2小时，并在每个实验中使用。
参考实施例2脂肪细胞(脂细胞)的分化将大鼠的纤维原细胞细胞系3T3-L1细胞以1×105个细胞/孔接种到6孔的培养平板中，并在含有10％胎牛血清(FBS)的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(DMEM，GIBCO BRL，Life Technologes)中培养。培养两天后，将培养基换成新的DMEM(含10％FBS)，再培养两天。然后将培养细胞放在含1微克/毫升胰岛素、0.5毫摩尔/升的IBMX和0.25微摩尔/升地塞米松(dexamethasone)的新DMEM中(含10重量％FBS)诱导分化，两天后，将培养基换成含胰岛素的新DMEM并培养5天。培养5天后，将培养基换成正常的DMEM(含10％FBS)并观察，直到细胞变成脂肪细胞(脂细胞)。
参考实施例3脂肪分解的测定方法通过测定从脂肪细胞分离到培养基中的甘油的浓度，观测脂肪的分解程度。使用从Sigma(St.Louis，MO，U.S.A.)购买的GPO-trinder试剂盒，运用发色反应方法定量测定甘油，并使用酶联免疫分析测读仪(ELISA reader)测定540纳米时的吸光值，然后将对照的数据设为100％来计算各种成分的结果。对照是在没有实验物质或比较物质的条件下培养的，另一方面，将茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素添加到样品中，每个有效成分的浓度为10微摩尔/升。
实验实施例1茶氨酸促进脂肪分解的功效为了测定茶氨酸促进脂肪细胞的中性脂肪分解的效果，使用在参考实施例2分化的3T3-L1脂肪细胞。
用磷酸盐缓冲盐水(PBS)将3T3-L1脂肪细胞洗涤两次，然后往其中加入含有0.5重量％牛血清白蛋白(BAS)且不含脂肪酸的DMEM。从KuridaKogyo(日本)购买茶氨酸(大于97％)，使用从Sigma(St.Louis，MO，U.S.A.)购买的GPO-trinder试剂盒，运用发色反应方法定量测定甘油，并使用酶联免疫分析测读仪(ELISA reader)测定540纳米时的吸光值。在没有实验物质或比较物质的条件下培养对照，然后将对照的数据设为100％来计算各种成分的结果。另外，将由相同浓度咖啡因处理过的样品用作阳性对照，通过测定从脂肪细胞分离到培养基中的甘油的浓度，观测脂肪的分解程度。结果如图1所示。
从图1可以看出，与对照相比，在由从绿茶提取的茶氨酸处理的样品中，从脂肪细胞分离到培养基中的甘油浓度增加了。另外，茶氨酸在高浓度时不会引起细胞毒性，并且分解脂肪的效果优于已知具有分解脂肪作用的阳性比较对照咖啡因。
实验实施例2茶氨酸控制β3肾上腺素受体表达的功效为了证实茶氨酸促进中性脂肪分解的机制，使用在参考实施例2中分化的3T3-L1脂肪细胞。使用0.005％购自KuridaKogyo(日本)的茶氨酸(大于97％)和对比物质(咖啡因，对照)处理细胞，24小时后，从细胞中提取RNA并进行反转录PCR(RT-PCR)。结果如图2所示。RT-PCR试剂盒购自TaKaRa，β3肾上腺素受体的引物购自Bioneer。
从图2可以看出，用茶氨酸处理使β3肾上腺素受体的表达增加了，而β3肾上腺素受体的表达是脂肪细胞中脂肪分解的信号，因此证实茶氨酸分解脂肪的作用是由于受体表达的增加。
实验实施例3儿茶素抑制脂肪细胞分化的功效为了测定儿茶素促进脂肪细胞中中性脂肪分解的功效，使用纤维原细胞细胞系进行培养和测定吸收值的实验。
将参考实施例2中分化的3T3-L1脂肪细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤三次，并用提取缓冲液(20毫摩尔/升的三羟甲基氨基甲烷(Tris)，1毫摩尔/升的乙二胺四乙酸(EDTA)和1毫摩尔/升的2-巯基乙醇)收获。在冰基上将收获的细胞通过G26针六次，在4℃、15000离心加速度(Xg)下离心3分钟，收集上清液得到细胞提取物。
为了测定甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)的表达，将含有0.1摩尔/升三乙醇胺、2.5毫摩尔/升EDTA、0.1毫摩尔/升2-巯基乙醇、125微摩尔/升烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH，还原型)和100微摩尔/升脱氢丙酮磷酸盐(DHAP)的GPDH化验缓冲液加入到上述细胞提取物中，然后在340纳米下2分钟内测定吸收值的减少。以每毫克的dA/分钟为单位来表示变化量。在没有实验物质或比较物质的条件下培养对照，然后将对照的数据设为100％来计算各种成分的结果。结果如图3所示。
如图3所示，与对照相比，在细胞分化过程中将儿茶素添加到3T3-L1细胞中能显著抑制分化。
实验实施例4茶氨酸和儿茶素抑制中性脂肪的功效为了测定茶氨酸和儿茶素影响中性脂肪生成的功效，使用纤维原细胞细胞系进行培养和测定吸收值的实验。
使用从Sigma(St.Louis，MO，U.S.A.)购买的GPO-trinder试剂盒对得到的与实验实施例3相同的细胞提取物中的中性脂肪进行发色反应，并使用ELISA reader测定540纳米时的吸光值。结果如图4所示。
从图4可以看出，与对照相比，当在细胞分化过程中用茶氨酸和儿茶素处理3T3-L1细胞时，中性脂肪量降低，并且当上述两种成分一起使用时，累积的中性脂肪的减少会更明显。
实验实施例5茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮和L-肉碱分解脂肪的协同效应为了证实在分解脂肪时各自具有不同机制的茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮和L-肉碱在分解脂肪时是否表现出协同效应，用上述物质的每一种及其混合对通过参考实施例1分离的SD大树脂肪细胞进行处理。当单独处理时，茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮和L-肉碱的浓度均为40微摩尔/升，当一起处理时，考虑到浓度平衡，每种成分的浓度均为10微摩尔/升。结果如图5所示。
从图5可以看出，与单独处理相比，当使用四种成分一起处理时，分离的甘油量显著降低。考虑到实验实施例1-4的脂肪分解结果，图5中得到的增加不仅仅是由于有效成分的量增加，而且还是因为各个成分的机制之间的相互作用引起的协同效应。
实验实施例6茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素对皮肤刺激的测定通过观察新西兰白兔皮肤上的浮肿和红斑，测定由茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素引起的皮肤刺激。
将赋形剂、10％茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱、儿茶素或其混合物施用到新西兰白兔的皮肤上，4天每大涂抹2次，一共施用8次。施用之后，通过将浮肿和红斑的分值相加，计算总的皮肤刺激指数。依据表1测定皮肤刺激指数，结果如表2所示。依据Draize氏现状皮肤刺激指数(Draize’sskin Primary Irritation Index)(PI.I.)(Draize，J.H.，Appraisal of the safety ofchemical in foods，drugs and cosmetics)计算皮肤刺激指数。
表1
表2
从表2可以看出，与对照相比，茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素没有引起皮肤刺激。
实施例1-8和比较例1-2按照下表3和4，制备实施例1-8和比较例1-2的减肥/抗脂肪团洗液。
表3
表4
实验实施例7组合物的减肥功效为了验证实施例1-8和比较例1-2中制备的组合物的减肥功效，选择100位20-30岁的成年女性(每组10位)，这些女性没有代谢问题并且BMI(身体质量指数，(体重(千克)/身高(米))2)为23-25。然后通过按摩将实施例1-8和比较例1-2中制备的洗液组合物施用到大腿内侧，每天2次，施用8周。在使用洗液前和使用8周后测量皮下脂肪厚度，验证功效。
使用具有超声波的Ultrasound-EuB 415 US扫描仪测定皮下脂肪的厚度(单位毫米)，使用t检验法(Student t test)处理数据作为阳性验证，比较使用组合物前后的结果，分析统计显著性(显著性p＜0.05)。结果如图6所示。
如图6所示，与不含有效成分的比较例1和只含茶氨酸的比较例2相比，含有多种有效成分的实施例1-8显示更显著的减小皮下脂肪厚度的功效。特别是含有全部5种有效成分的实施例1表现出最显著的功效。
实验实施例8组合物的坚韧性功效为了验证实施例1-8和比较例1-2中制备的组合物的坚韧性功效，用肉眼观察皮肤坚韧度。观察者1-9为皮肤坚韧度打分，比较使用组合物前后的分值，用Wilcoxon检验分析统计显著性(显著性α＝0.05)。结果如图7所示。
从图7可以看出，含有有效成分的实施例1增加了皮肤坚韧度。
如上所述，本发明的组合物含有茶氨酸、咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素，并具有分解脂肪细胞中的中性脂肪、通过将脂细胞(脂肪细胞)中的甘油三酸酯水解成游离脂肪酸和甘油而促进脂肪分解的良好作用，并且能够抑制肥胖、减少脂肪团，使皮肤和体形更加坚韧光滑。因此，本发明的组合物可以用于减肥和抗脂肪团的化妆品组合物，促进化妆品产业的发展。
尽管参照实施例对本发明进行了描述，但是在本发明的范围内，本领域的技术人员可以对本发明进行修改，修改的发明也明显在本发明的范围之内。
权利要求
1.一种减肥组合物，该组合物含有茶氨酸以及选自由咖啡因、染料木黄酮、L-肉碱和儿茶素所组成的组中的至少一种物质作为有效成分，该组合物促进脂肪细胞中的脂肪分解。
2.根据权利要求1所述的组合物，所述茶氨酸为选自由L-茶氨酸、D-茶氨酸和DL-茶氨酸所组成的组中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的组合物，所述儿茶素为选自由(+)儿茶素(C)、(-)表儿茶素(EC)、(-)表儿茶素-3-没食子酸盐(EGCG)、(+)表儿茶素(EGC)和(-)表儿茶素没食子酸盐(ECG)所组成的组中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的组合物，所述茶氨酸增进β3肾上腺素受体的表达，促进脂肪分解。
5.根据权利要求1所述的组合物，所述成分的含量为组合物总量的0.0001-20重量％。
全文摘要
本发明是关于一种减肥组合物，更具体地是关于一种含有茶氨酸(theanine)以及选自由咖啡因、染料木黄酮(genistein)、L－肉碱和儿茶素(catechin)所组成的组中的至少一种物质的减肥组合物。本发明的组合物含有茶氨酸以及咖啡因、染料木黄酮、L－肉碱和儿茶素中的一种或几种，具有分解脂肪、水解脂质和去除脂肪团的特性。
文档编号A61P3/00GK1777418SQ200480010726
公开日2006年5月24日 申请日期2004年4月23日 优先权日2003年4月24日
发明者金知贤, 安秀美, 李钟澯, 金英京, 李炳坤, 金宣姈, 朴智银, 朴贤宇, 李尚骏, 姜鹤熙 申请人:株式会社太平洋