一种中药注射制剂的质量控制方法

专利名称：一种中药注射制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，属于医药技术的领域。
背景技术：
随着人类文明的发展，人们生活水平的提高，冠心病、心绞痛等心脑血管疾病已成为人类的第二大杀手。开发心脏病类药物已成为制药业一项刻不容缓的艰巨任务。本申请人将灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬进行组配后研制了一种注射剂，包括直接用于注射给药的注射液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液、直接供静脉滴注的静脉输液以及用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物，由灯盏花素0.001～150份、人参10～1000份与麦冬10～3000份经提取精制并加适当辅料制作而成，或是由相应重量份药材经提取精制后得到的提取物与相应重量份的灯盏花素加适当辅料制作而成。为了有效的控制产品的质量，满足生产的要求、保证生产的药物安全、可靠和疗效准确，本申请人建立了其质量标准。已知的灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬的化学成分有几十种。如果用其一、二种活性成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，更不用说无药效性的指标成分了，因此，不仅选取了灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬的活性成分进行含量测定，以其含量的多少来判定质量，更建立了指纹图谱，对其物质群整体予以控制，从整体上有效的表征其质量。中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，对于有效控制中药材或中成药的质量，具有重要的意义。日本汉方药主要生产企业在20世纪80年代就已经在企业内部采用高效液相指纹图谱控制质量。德国、法国在对银杏叶提取物联合开发的过程中，发现银杏叶提取物的医疗作用是提取物所得物质群的整体作用结果，而对这样一个整体的质量控制，亦采用高效液相色谱法。美国FDA制定的职务草药指南中已经明确将指纹图谱作为混合物质群的质量控制方法。指纹图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已经成为共识。

发明内容
本发明的目的是通过提供一种以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，利用本发明人提供的这种方法，能够有效控制以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的质量，对药品的生产进行具体的指导同时提供的这种方法简单，精密度高，重现性好。
本发明是这样构成的以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，包括以下全部或部分内容(1)指纹图谱测试，包括以党参成分特征为主的指纹图谱、以红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱、以麦冬成分特征为主的指纹图谱中的一种或几种；(2)灯盏花素、红参或人参或党参药材、麦冬药材、野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、党参炔苷、苍术内酯III等中全部或部分成分的鉴别测试方法；(3)人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、总皂苷、总多糖、党参炔苷、苍术内酯III等全部或部分成分的含量测试方法。
所述的以党参成分特征为主的指纹图谱、以红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱、以麦冬成分特征为主的指纹图谱测试方法是a、采用液相色谱法测试红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量红参或人参和麦冬药材中的主要活性成分对照品，包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、麦冬皂苷D′中的一种或几种，用水或甲醇、乙醇溶解稀释至合适浓度，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料流动相为20％～99％乙腈或20％～99％甲醇0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-300nm范围内的一个或几个，柱温为20～60℃范围内；(4)以红参或人参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中红参或人参和麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；b、采用液相色谱法测试党参成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量党参药材中的主要活性成分对照品，包括党参炔苷、苍术内酯III中的一种或几种，用水或甲醇、乙醇溶解稀释至合适浓度，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料流动相为5％～99％∶95％～5％乙腈或甲醇-水或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-300nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温为20～60℃范围内；(4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；c、采用液相色谱法测试麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量麦冬药材中的主要活性成分对照品，包括麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、麦冬皂苷D′中的一种或几种，用水或甲醇、乙醇溶解稀释至合适浓度，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料流动相为20％～99％乙腈或20％～99％甲醇0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-300nm范围内的一个或几个，柱温为20～60℃范围内；(4)以麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00。
所述的以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法包括如下指纹图谱中的一种或几种a、采用液相色谱法测定以红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备精密称取本品适量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水80∶20，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至65分钟，流动相B的比例由64％升至80％，从65分钟至75分钟，流动相B的比例由80％降至25％；流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；(4)以红参或人参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测参脉注射剂中红参或人参和麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测参脉注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；b、采用液相色谱法测试党参成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量党参药材中的主要活性成分苍术内酯III，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料流动相为甲醇水67∶33，流速为1.0ml/min、蒸发光检测器检测，漂移管温度30℃，载气流量2.2L/min，柱温为30℃；(4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；c、采用液相色谱法测定以麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备精密称取麦冬皂苷B适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水80∶20，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至65分钟，流动相B的比例由64％升至80％，从65分钟至75分钟，流动相B的比例由80％降至25％；流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；(4)以麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。
所述的以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的鉴别方法是以下全部或部分内容
a、注射剂中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取野黄芩苷对照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～60∶0.2～10∶0.3～5或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.3～10％三氯化铝乙醇或0.3～10％三氯化铝甲醇溶液，90～130℃烘1～15分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；b、注射剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氢钠(1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0)梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；c、注射剂中麦冬药材的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加正丁醇或醋酸乙酯或氯仿提取，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬对照药材，同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以苯或甲苯或氯仿-甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸或水8～300∶0.5～100∶0.01～30或醋酸乙酯或甲酸乙酯-吡啶-水0.2～10∶0.1～5∶0.2～10为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或254nm下检视或喷以10％硫酸或香草醛试剂或50％硫酸或5％香荚兰醛试剂或茴香醛试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；
d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用水提取后用正丁醇和乙醚或醋酸乙酯萃取，萃取液蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′，分别加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯或氯仿-甲醇-水3～50∶1～15∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；e、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；f、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加0.5～38％硫酸或盐酸水解，调节pH至中性，蒸干，残渣用氯仿或醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，分别加氯仿或醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以正己烷或甲醇-醋酸乙酯或氯仿或甲酸乙酯-水0.2～15∶0.2～40∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；g、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的液相色谱鉴别取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或盐酸水解，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿或醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；h、注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用正丁醇或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；取红参或人参对照药材，加氯仿回流提取，弃去氯仿液，残渣加水饱和正丁醇提取，提取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品，分别加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下层溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂或50％硫酸试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；i.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加水或甲醇或流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为200～350nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；
j、注射剂中党参炔苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加水溶解，用正丁醇或醋酸乙酯或氯仿萃取，萃取液浓缩至干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液，或置C18或C8固相萃取小柱中，依次用5％～50％甲醇、甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板，正丁醇-冰醋酸或甲酸或乙醇或无水乙醇-水1～35∶0.1～10∶0.05～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％～30％硫酸乙醇溶液，80～150℃加热1～30分钟，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；k、注射剂中党参炔苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或乙醇或流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰。
所述的以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的鉴别方法是以下的一种或几种a、注射剂中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加醋酸乙酯提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，甲苯醋酸乙酯-甲酸-水10∶5∶1∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，105℃烘5分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；b、注射剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；c、注射剂中麦冬的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加三氯甲烷-甲醇7∶3混合溶液提取，滤过，滤液挥干，残渣加氯仿溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬对照药材，同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸80∶5∶0.1为展开剂，展开，置紫外灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用水溶解后用正丁醇萃取，萃取液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水15∶5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；e、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；f、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加3％硫酸水解4小时，调节pH至中性，蒸干，残渣用氯仿溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，分别加氯仿或醋酸乙酯等溶剂制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯或-水1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，90℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；g、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的液相色谱鉴别取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解，用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；h、注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用正丁醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；取红参或人参对照药材，加氯仿回流提取，弃去氯仿液，残渣加水饱和正丁醇提取，提取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶1010℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；i.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；j、注射剂中党参炔苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，置C18固相萃取小柱(500mg，用甲醇、20％甲醇各10ml预洗)中，依次用20％甲醇、甲醇各5ml洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水7∶1∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热5分钟，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；k、注射剂中党参炔苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰。
所述的以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂含量的测试方法应包括以下中的一种或几种a、注射剂中野黄芩苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氢钠(1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0)梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于6.0mg；b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为200～350nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.5mg；c.注射剂中总皂苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取适量，至量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2～4ml，高氯酸0.5～5ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴冷却0.5～10分钟，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′作为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547±10nm的波长处测定吸收度，以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′计，不得少于18.0mg；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含麦冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的总和的限度不得少于0.11mg；e、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或盐酸水解，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测检测波长为200～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含假叶树皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.03mg；f、注射剂中党参炔苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含党参炔苷的限度不得少于0.1mg；g.注射剂中总多糖含量测定单糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖)，由此折算出每瓶单糖的含量；总糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加稀硫酸25ml，加热回流1～4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于70.0mg。
所述的以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂含量的测试方法是以下一种或几种方法a、注射剂中野黄芩苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相等溶剂至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于6.0mg；b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在10～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.5mg；c.注射剂中总皂苷的含量测定
取各制剂适量，置10ml量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴冷却2分钟，精密加冰醋酸至25ml，摇匀，以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以人参皂苷Rg1计，不得少于18.0mg；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含麦冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的总和的限度不得少于0.11mg；e、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解后用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含假叶树皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.03mg；f、注射剂中党参炔苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含党参炔苷的限度不得少于0.1mg；g.注射剂中总多糖含量测定单糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖)，由此折算出每瓶单糖的含量；总糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加稀硫酸25ml，加热回流1～4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于70.0mg。
所述的以灯盏花素、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于按照重量百分比计算，所述注射剂中所有可测成分包括野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、总皂苷、总多糖、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、党参炔苷、苍术内酯III中的全部或部分的总含量占制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量不低于25％。
与现有技术相比，本发明能更加完善的控制以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂产品的质量。中药成分复杂，如果只用其中一、两种成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，更无法判断无药效的指标成分。因此本申请人制定了以红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱和以党参成分特征为主的指纹图谱来全面控制注射剂的质量。但是由于本发明涉及注射液中的各药材之间所含的化学成分复杂，对指纹图谱的制定造成干扰，导致各部分指纹图谱特征不稳定，所以必须控制流动相等色谱条件，才能得到良好的指纹图谱。也就是说，本发明涉及注射液的指纹图谱不是将红参或人参或党参和麦冬药材或制剂的指纹图谱简单叠加就能得到的，由于处方中四种药材所含成分相互之间的干扰影响，导致本发明涉及注射液中党参部分、红参或人参和麦冬部分的指纹图谱特征峰发生改变，而只有采用本发明的条件，才能得到理想的指纹图谱。
通过实验证明，本发明质量控制方法对以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂产品的质量控制更为有效，方法精密度、稳定性均较高。
实验例1以红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱的制备a、实验仪器、试剂及样品对照品人参皂苷Rg1中国药品生物制品检定所；b、色谱条件与系统适应性实验1.色谱柱的选择研究过程中，选用了常规的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱，分别试用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均为C18，4.6mm×200mm，5μm)三种牌号的色谱柱，结果显示三种牌号的色谱柱均可达到较好的分离效果，其中Diamonsil ODS色谱柱分离效果最好，柱效最高，可以达到5400(以参照物人参皂苷Rg1计算)。故最终选用Diamonsil ODS色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)为实验研究柱。
2.流动相的选择研究过程中分别考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶80)，(3)乙腈-水(梯度洗脱)(4)A为50mmol.L-1KH2PO4溶液，B为乙腈-水(80∶20)(梯度洗脱体积配比为从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至65分钟，流动相B的比例由64％升至80％，从65分钟至75分钟，流动相B的比例由80％降至25％)四种流动相系统。结果显示流动相(1)条件下，峰形较差，1小时内出峰较少，仍有不少组分滞留在后出峰；流动相(2)流动相条件下，峰形较差，分离不好；(3)条件下，峰拖尾严重，出峰不完全；流动相(4)条件下，峰形较好，出峰完全且分布均匀，故而最终被选用。
3.检测波长的确定研究中在A为50mmol.L-1KH2PO4溶液，B为乙腈-水(80∶20)(梯度洗脱)流动相条件下，分别考察了在不同波段典型波长203、210、230、254下的色谱峰情况，结果显示，在203nm下色谱峰较多，峰形较好，故最终选用203nm作为检测波长。
4.仪器、色谱柱及积分参数4.1仪器参数选用了液相色谱分析领域主流配置和性能良好的Agilent1100系列高效液相色谱仪，Chemstation色谱工作站。色谱柱为Diamonsil ODS(4.6mm×200mm，5μm)；柱温40℃，流速1.0ml/min。
4.2积分参数Slope Sensitivity1，peak width0.05，最小峰面积为参照物(S)峰峰面积的5％，最小峰高为S峰峰高的5％。如此设定可以避免一些很小面积的色谱峰(单峰面积占总峰面积小于0.5％)的计算，同时保证与参照物的相关性。
5.供试品溶液的制备精密称取本品适量，加水制成每1ml含50mg的溶液，即得.
6.参照物溶液的制备人参皂苷Rg1为红参或人参主要活性成分之一，其积分面积在指纹图谱中所占比例较大且较稳定，同时兼顾中间体和药材的研究，因此选定人参皂苷Rg1作为参照物。
7.指纹图谱及技术参数根据10批样品制定标准指纹图谱，将供试品指纹图谱与标准指纹图谱比较，相似度均在0.90～1.00之间。
实验例2鉴别及含量测定本发明涉及注射剂中灯盏花素的薄层色谱鉴别方法为了突出灯盏花素的特征，选择了野黄芩苷作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与野黄芩苷结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对野黄芩苷进行了展开条件 问题醋酸乙酯-甲酸-水(15-5-1)硅胶G薄层板对照品展开至前沿醋酸乙酯-甲酸-水(15-3-1)硅胶H薄层板对照品未分开，阴性有干扰醋酸乙酯-乙酸-水(10-5-1)硅胶G薄层板对照品展开至前沿苯-醋酸乙酯-甲酸-水(10-5-1-0.5)硅胶G薄层板 对照品未分开，阴性有干扰甲苯-醋酸乙酯-乙酸-水(10-5-1-0.5)硅胶G薄层板 对照品未分开，阴性有干扰甲苯-甲酸乙酯-甲酸-水(13-3-1-0.5)硅胶G薄层板 对照品未分开，阴性有干扰确定条件甲苯-醋酸乙酯-乙酸-水(10-5-1-0.5)硅 分离清晰，Rf值适中阴性无干胶G薄层板 扰经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以甲苯-醋酸乙酯-乙酸-水(10-5-1-0.5)为展开剂，在此条件下，野黄芩苷的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。
本发明涉及注射剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法为了突出灯盏花素的特征，选择了野黄芩苷作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与野黄芩苷结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对野黄芩苷进行了分离条件 问题甲醇-水(80∶20)十八烷基硅烷键合硅胶出峰时间过快乙腈-水(40∶60)十八烷基硅烷键合硅胶阴性有干扰甲醇-0.2％冰醋酸水溶液(30∶70)八烷基硅烷键 阴性有干扰合硅胶甲醇-四氢呋喃-0.2％磷酸水溶液(14∶14∶72) 峰形不太对称十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-四氢呋喃-0.2％磷酸水溶液(14∶14∶72) 峰有分叉，二烷基硅烷键合硅胶甲醇-水(40∶60)阴性有干扰八烷基硅烷键合硅胶乙腈-0.1％磷酸水溶液(20∶80) 保留时间适中，峰行尖锐，对称，十八烷基硅烷键合硅胶 阴性无干扰经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-0.1％磷酸水溶液(20∶80)为流动相，在此条件下，野黄芩苷保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。
本发明涉及注射剂中麦冬的薄层色谱鉴别方法为了突出麦冬的特征，选择了麦冬对照药材作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对麦冬进行了展开
条件 问题苯-甲醇-冰醋酸(50-10-3)硅胶GF254薄层板 对照品未分开，阴性有干扰甲苯-甲醇-冰醋酸(50-10-3)硅胶H薄层板 对照品未分开，阴性有干扰氯仿-乙醇-甲酸(50-20-5)硅胶G薄层板对照品展开至前沿氯仿-甲醇-甲酸(50-20-5)硅胶G薄层板对照品展开至前沿醋酸乙酯-吡啶-水(5-3-5)硅胶H薄层板对照品未分开，阴性有干扰苯-乙醇-甲酸(60-10-2)硅胶G薄层板 对照品未分开，阴性有干扰确定条件甲苯-甲醇-冰醋酸(80∶5∶0.1)分离清晰，Rf值适中阴性无干扰硅胶GF254薄层板经过筛选，确定了以硅胶GF254薄层板为固定相，以甲苯-甲醇-冰醋酸(80∶5∶0.1)为展开剂，在此条件下，主斑点的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。
本发明涉及注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法为了突出麦冬皂苷的特征，选择了麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对麦冬进行了展开条件 问题醋酸乙酯-甲醇-水(10-10-0.5)硅胶G薄层 对照品展开至前沿板氯仿-甲醇-水(10-10-0.5)硅胶H薄层板 对照品展开至前沿醋酸乙酯-甲醇-水(10-3-0.2)硅胶G薄层板对照品未分开，阴性有干扰氯仿-甲醇-水(15-10-2)硅胶GF254薄层板对照品展开至前沿醋酸乙酯-甲醇-水(20-3-1)硅胶GF254薄层板 对照品未分开，阴性有干扰醋酸乙酯-甲醇-水(20-8-1)硅胶G薄层板 对照品未分开，阴性有干扰确定条件以醋酸乙酯-甲醇-水(15∶5∶1) 分离清晰，Rf值适中阴性无干扰硅胶G薄层板经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以醋酸乙酯-甲醇-水(15∶5∶1)为展开剂，在此条件下，麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′斑点的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。
本发明涉及注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的液相色谱鉴别方法为了突出麦冬皂苷的特征，选择了麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′进行了分离条件 问题甲醇-水(99∶1)十八烷基硅烷键合硅胶出峰时间过快乙腈-水(95∶5)十八烷基硅烷键合硅胶出峰时间过快甲醇-2％冰醋酸水溶液(95∶5) 阴性有干扰八烷基硅烷键合硅胶甲醇-0.2％磷酸酸水溶液(95∶5) 阴性有干扰十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-1％冰醋酸水溶液(95∶5) 峰有分叉，八烷基硅烷键合硅胶乙腈-0.5％磷酸酸水溶液(95∶5) 阴性有干扰十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-水(90∶10)十八烷基硅烷键合硅胶 保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-水(90∶10)为流动相，在此条件下，麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。
本发明涉及注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法为了突出麦冬皂苷元的特征，选择了假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对麦冬进行了展开
条件问题甲醇-氯仿-水(5-3-2)硅胶G薄层板 对照品展开至前沿正己烷-醋酸乙酯-水(5-3-1)硅胶H薄层板对照品展开至前沿正己烷-甲酸乙酯-水(3-2-2)硅胶GF254薄层板 对照品未分开，阴性有干扰甲醇-醋酸乙酯-水(2-1-1)硅胶G薄层板 对照品未分开，阴性有干扰甲醇-甲酸乙酯-水(1-1-1)硅胶H薄层板 对照品未分开，阴性有干扰甲醇-甲酸乙酯-水(2-1.5-0.5)硅胶H薄层板 对照品未分开，阴性有干扰确定条件正己烷-醋酸乙酯-水(1∶1∶1) 分离清晰，Rf值适中阴性无干扰硅胶G薄层板经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以正己烷-醋酸乙酯-水(1∶1∶1)为展开剂，在此条件下，假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。
本发明涉及注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的液相色谱鉴别方法为了突出麦冬皂苷元的特征，选择了假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元进行了分离条件 问题甲醇-水(99∶1)十八烷基硅烷键合硅胶出峰时间过快乙腈-水(95∶5)十八烷基硅烷键合硅胶出峰时间过快甲醇-2％冰醋酸水溶液(95∶5) 阴性有干扰八烷基硅烷键合硅胶甲醇-0.2％磷酸酸水溶液(95∶5) 阴性有干扰十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-1％冰醋酸水溶液(95∶5) 峰有分叉，八烷基硅烷键合硅胶乙腈-0.5％磷酸酸水溶液(95∶5) 阴性有干扰十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-水(90∶10) 保留时间适中，峰行尖锐，对称，十八烷基硅烷键合硅胶 阴性无干扰经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-水(90∶10)为流动相，在此条件下，麦假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。
本发明涉及注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法为了突出红参或人参的特征，选择了人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对麦冬进行了展开条件 问题氯仿-甲酸乙酯-甲醇-水(20∶60∶40∶10)10对照品展开至前沿℃以下放置的下层溶液硅胶G薄层板正丁醇-甲酸乙酯-水(10-1-5)上层溶液硅胶H对照品展开至前沿薄层板氯仿-甲酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10对照品未分开，阴性有干扰℃以下放置的下层溶液硅胶G薄层板氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(10∶40∶15∶5)10℃ 对照品未分开，阴性有干扰以下放置的下层溶液硅胶G薄层板正丁醇-甲酸乙酯-水(5-1-5)上层溶液 对照品未分开，阴性有干扰硅胶G薄层板正丁醇-甲酸乙酯-水(2-1.5-0.5)上层溶液 对照品未分开，阴性有干扰硅胶H薄层板确定条件氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶ 分离清晰，Rf值适中阴性无干22∶10)10℃以下放置的下层溶液硅胶G薄层板 扰经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，在此条件下，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。
本发明涉及注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的液相色谱鉴别方法为了突出红参或人参的特征，选择了人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re进行了分离条件 问题甲醇-水(99∶5) 出峰时间过快十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-水(95∶5) 出峰时间过快十八烷基硅烷键合硅胶甲醇-2％冰醋酸水溶液(80∶20) 阴性有干扰八烷基硅烷键合硅胶甲醇-0.2％磷酸酸水溶液(80∶20) 阴性有干扰十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-1％冰醋酸水溶液(90∶10) 阴性有干扰八烷基硅烷键合硅胶乙腈-0.5％磷酸酸水溶液(85∶15) 阴性有干扰十八烷基硅烷键合硅胶乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为 保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，干扰从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％十八烷基硅烷键合硅胶经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％，在此条件下，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。
实验例3含量测定项目方法学考察一、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量1.仪器与试药(1)仪器Agilent1100高效液相色谱仪，chemstationsys工作站。TU-1800SPC紫外分光光度计。
(2)试药人参皂苷Rg1、人参皂苷Re中国药品生物制品检定所；2.检测波长的选择精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re，分置10ml量瓶中，加甲醇稀释制成每1ml含0.5mg的溶液，在200-400nm波长范围扫描。人参皂苷Rg1、人参皂苷Re均在203nm处有最大吸收，因此选择203nm作为含量测定的检测波长。
3.色谱条件Dikma ODS(4.6mm×250mm，5um)；流动相乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；检测波长为203nm；流速1.0ml/min。
4.对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1和人参皂苷Re适量，精密称定，分别加甲醇稀释至刻度，摇匀，得每1ml含人参皂苷Rg1 0.30mg，人参皂苷Re0.24mg的溶液。
5.供试品溶液的制备取本品约0.5g，精密称定，置5ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
在此条件下，阴性样品不干扰样品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的测定，且分离度好。
6.人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的线性关系精密称取人参皂苷Rg110.20mg、人参皂苷Re10.72mg，共置10ml量瓶中，加流动相定至刻度，摇匀，作为对照品溶液(每1ml中含人参皂苷Rg11.02mg，人参皂苷Rb11.01mg，含人参皂苷Re1.072mg)，精密量取2.5ml，置10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照品稀释溶液。(每1ml中含人参皂苷Rg10.255mg，含人参皂苷Re0.268mg)精密吸取对照品溶液3μl、6μl、10μl；对照品稀释溶液2μl、5μl、10μl；注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的量为横坐标做图，绘制标准曲线。
人参皂苷Rg1线性关系

回归方程Y＝351.97X-61.521决定系数r＝0.9996人参皂苷Rg1在0.510～10.20μg范围内线性关系良好。
人参皂苷Re线性关系

回归方程Y＝290.94.97X-43.21决定系数r＝0.9995人参皂苷Re在0.536～10.72μg范围内线性关系良好。
7.对照品精密度试验精密吸取标准曲线项下人参皂苷Rg1和人参皂苷Re对照品稀释溶液(每1ml中含人参皂苷Rg10.255mg，含人参皂苷Re0.268mg)10μl，注入液相色谱仪，连续进样测定5次，考察对照品溶液的精密度。
人参皂苷Rg1和人参皂苷Re对照品精密度试验

结果表明，人参皂苷Rg1和人参皂苷Re对照品溶液精密度良好。
8.稳定性试验8.1.对照品稳定性试验 精密吸取标准曲线项下人参皂苷Rg1和人参皂苷Re对照品稀释溶液(每1ml中含人参皂苷Rg1 0.255mg，含人参皂苷Re0.268mg)10μl，注入液相色谱仪，在0、6、12、24、48小时进样测定。
对照品稳定性试验结果

结果表明，人参皂苷Rg1和人参皂苷Re对照品溶液稳定性良好。
8.2.供试品溶液稳定性试验 精密吸取供试品10μl，注入液相色谱仪，分别在0、6、12、24、48小时进样测定。
供试品溶液稳定性试验结果

结果表明，供试品溶液稳定性良好。
9.重复性试验取本品装量差异项下粉针5瓶，取内容物，研细，从中取约0.5g，精密称定，置5ml量瓶中，加流动相使溶解并定至刻度，摇匀，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
重复性试验

10.加样回收率试验采用加样回收法，精密称取人参皂苷Rg19.54mg，人参皂苷Re5.08mg，共置10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，精密量取1ml；取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约0.5g，精密称定，共置5ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明涉及注射剂中人参皂苷Rg1含量0.1921％本发明涉及注射剂中人参皂苷Re含量0.1014％人参皂苷Rg1加样回收率试验

人参皂苷Rg1平均回收率＝98.32％；RSD＝0.50％
人参皂苷Re加样回收率试验

人参皂苷Re平均回收率＝97.66％；RSD＝0.48％三批中试样品含量测定取本品样品三批，按正文所述方法处理，进样测定。
三批样品含量测定结果

二、人参总皂苷仪器、试药仪器普析通 TU-1810SPC 紫外/可见分光光度仪SARTORIUS BP211D电子分析天平试药香草醛 分析纯 天津市光复精细化工研究所甲醇 色谱纯 J.T.Baker冰醋酸 分析纯 上海试剂一厂高氯酸 分析纯 天津市鑫源化工厂纯净水 娃哈哈方法与结果检测波长的选择 精密称取人参皂苷Rg1 6.11mg，置100ml量瓶中，加适量甲醇超声处理(功率 250W，频率 33KHz)使溶解，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1.2ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，在700～400nm波长范围内进行扫描，结果表明，人参皂苷Rg1在547nm处有最大吸收，空白无干扰，因此选择547nm为分光光度法测定本发明涉及注射剂中人参总皂苷的检测波长。
线性关系的考察 精密称取人参皂苷Rg1对照品6.85mg，置100ml量瓶中，加甲醇适量超声处理(功率 250W，频率 33KHZ)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VA)，在547nm的波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标，人参皂苷Rg1的量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。
回归方程Y＝0.0049X-0.0077；r＝0.999人参皂苷Rg1在27.4～137.0μg范围线性良好。
人参皂苷Rg1标准曲线测定数据

精密度试验 精密称取人参皂苷Rg1对照品6.85mg，置100ml量瓶中，加甲醇适量超声处理(功率 250W，频率 33KHZ)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1.2ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，按正文测定法项下操作，连续测定5次。
人参总皂苷精密度实验

稳定性试验对照品溶液的稳定性试验 精密称取人参皂苷Rg1对照品7.27g，置100ml量瓶中，加甲醇适量超声处理(功率 250W，频率 33KHZ)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1.2ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，即得按正文测定法项下操作，分别在0、10、20、40、60分钟时测定。
人参总皂苷对照品溶液稳定性实验

供试品溶液的稳定性实验 取本品装量差异项下粉针5瓶，取内容物，研细，精密称取125.35mg，置10ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.2ml，按正文测定法项下进行操作，分别在0、10、20、40、60分钟时测定。
人参总皂苷供试品溶液稳定性实验

重复性试验 取本品装量差异项下粉针5瓶，取内容物，研细，从中取约100mg，置10ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.2ml，按正文测定法项下进行操作。
人参总皂苷重复性实验

回收率试验 采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物，研细，从中取约50mg，精密称定；另取人参皂苷Rg1对照品约2mg，精密称定，共置10ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.2ml，置10ml具塞试管中，按正文测定法项下进行操作，以随行溶剂为空白，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的含量，计算，即得。
本发明涉及注射剂中总皂苷的含量4.26％人参总皂苷加样回收率实验

平均回收率＝97.74％ RSD＝0.92％
三批中试样品含量测定取本品样品三批，按正文所述方法处理，进样测定。
三批样品含量测定结果

三、野黄芩苷1 仪器与试药1.1 主要仪器高效液相色谱仪 LC-2010AHTSHIMADZU紫外/可见分光光度仪 TU-1810SPC北京普析通用仪器有限公司电子分析天平 BP211DSARTORIUS超声波清洗机 KQ250DB 昆山市超声仪器有限公司1.2 试药野黄芩苷中国药品生物制品检定所甲醇分析纯北京化工厂乙腈色谱纯迪马公司磷酸分析纯北京化学试剂公司2 野黄芩苷 由中国药品生物制品检定所提供野黄芩苷，经高效液相色谱法(归一化法)测定纯度为96.40％，符合含量测定用对照品要求(在测定中，按照96.40％的纯度进行折算)。
3 检测波长的选择 取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.0463mg的溶液，在190～400nm波长范围内扫描。结果表明，野黄芩苷在284nm及335nm处有最大吸收，根据《卫生部药品标准中药成方制剂》相关品种并结合文献报道，选择335nm作为野黄芩苷含量测定的检测波长。
4 色谱条件色谱仪SHIMADZU LC-2010AHT；色谱柱Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；流动相乙腈-0.1％磷酸(20∶80)；流速1.0ml/min；柱温30℃；进样量10μl；
检测波长335nm。
对照品溶液的制备 精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末约40mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量超声处理(功率 250W，频率 33KHz)5min，取出，放至室温，加甲醇定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
根据上述色谱条件得到野黄芩苷对照品、供试品色谱图，其理论板数n均大于5000，野黄芩苷色谱峰与相近峰分离清晰完全，分离度均大于1.5，溶剂无干扰。
5 提取时间的选择 取本品粉末约40mg(共6份)，精密称定，分置25ml量瓶中，加甲醇适量，分别超声处理(功率250W，频率33KHz)5、10、20min，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
提取时间考察

结果表明，超声处理5min即可提取完全。
6 线性关系考察 精密量取野黄芩苷对照品溶液(C＝0.978mg/ml)0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。以峰面积为纵坐标，野黄芩苷的量(μg)为横坐标作图，绘制标准曲线。
野黄芩苷标准曲线测定结果

回归方程Y＝3259091.50x-1830.06相关系数γ＝0.9999结果表明野黄芩苷在0.1886μg～0.9428μg范围内线性良好。
经计算，野黄芩苷的标准曲线过原点，因此选用外标一点法测定野黄芩苷的含量。
7 精密度实验 精密吸取野黄芩苷对照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，测定5次，考察对照品溶液精密度，测定结果见表33。
精密度试验

结果表明，对照品溶液精密度良好。
8 稳定性实验8.1 对照品溶液的稳定性实验 精密吸取野黄芩苷对照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，分别在0、2、4、8、24小时进样测定。
对照品溶液稳定性试验

结果表明，对照品溶液24小时内稳定性良好。
8.2 供试品溶液的稳定性实验 精密吸取供试品溶液(1.3759mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、4、8、24小时进样测定。
供试品溶液稳定性实验

结果表明，供试品溶液24小时内稳定性良好。
9 重复性实验 取本品，按正文供试品溶液的制备和测定法项下进行操作。
重复性实验

10 加样回收率实验 采用加样回收法，取本品粉末约85mg(共6份)，精密称定，分置25ml量瓶中，分别精密加入野黄芩苷对照品溶液(C＝1.104mg/ml)0.6ml、0.8ml和1.0ml(各两份)，加甲醇适量超声处理(功率250W，频率33KHz)5min，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明涉及注射剂中野黄芩苷的含量为0.94％。
加样回收率实验

平均回收率＝98.44％，RSD＝0.67％11 样品含量测定 取本品三批样品，按照正文供试品溶液的制备和测定法项下的操作。
野黄芩苷含量测定

四、总多糖单糖 取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中取约500mg，精密称定，置碘量瓶中，加蒸馏水60ml使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)，由此折算出每瓶单糖的含量。
总糖 取装量差异项下本品5瓶，取内容物，混匀，从中取约500mg，精密称定，置碘量瓶中，加蒸馏水20ml使溶解，加稀硫酸25ml，加热回流4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)，以此计算出样品每瓶中总糖的含量。
标准曲线 精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品50.24mg、101.87mg、149.58mg、201.36mg、252.81mg、300.79mg，分置碘量瓶中，加蒸馏水60ml使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)。以样品消耗滴定液体积(ml)为横坐标，以无水葡萄糖的量(mg)为纵坐标做图，绘制标准曲线。
无水葡萄糖标准曲线

重复性实验 取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约500mg(5份)，按正文测定法项下操作，测定，即得。
重复性实验

回收率实验 采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约250mg(6份)，分置碘量瓶中；取在105℃干燥至恒重的无水葡萄糖约50mg，精密称定，分置上述碘量瓶中，加蒸馏水60ml使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖(C6H12O6)。
本发明涉及注射剂单糖含量22.54％。
无水葡萄糖加样回收率试验

平均回收率＝97.54％；RSD＝1.00％。
样品的含量测定 取本品中试样品三批，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作。
总多糖含量测定结果

具体实施方式
实施例1指纹图谱a、采用液相色谱法测试红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量红参或人参和麦冬药材中的主要活性成分对照品，包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、麦冬皂苷D′中的一种或几种，用水或甲醇、乙醇溶解稀释至合适浓度，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料流动相为20％～99％乙腈或20％～99％甲醇0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-300nm范围内的一个或几个，柱温为20～60℃范围内；(4)以红参或人参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中红参或人参和麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；b、采用液相色谱法测试党参成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量党参药材中的主要活性成分对照品，包括党参炔苷、苍术内酯III中的一种或几种，用水或甲醇、乙醇溶解稀释至合适浓度，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料流动相为5％～99％∶95％～5％乙腈或甲醇-水或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-300nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温为20～60℃范围内；(4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；c、采用液相色谱法测试麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量麦冬药材中的主要活性成分对照品，包括麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、麦冬皂苷D′中的一种或几种，用水或甲醇、乙醇溶解稀释至合适浓度，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料流动相为20％～99％乙腈或20％～99％甲醇∶0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-300nm范围内的一个或几个，柱温为20～60℃范围内；(4)以麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00。
实施例2指纹图谱a、采用液相色谱法测定以红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱
(1)供试品溶液的制备精密称取本品适量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水80∶20，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至65分钟，流动相B的比例由64％升至80％，从65分钟至75分钟，流动相B的比例由80％降至25％；流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；(4)以红参或人参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测参脉注射剂中红参或人参和麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测参脉注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；b、采用液相色谱法测试党参成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量党参药材中的主要活性成分苍术内酯III，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料流动相为甲醇水67∶33，流速为1.0ml/min、蒸发光检测器检测，漂移管温度30℃，载气流量2.2L/min，柱温为30℃；(4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；
c、采用液相色谱法测定以麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备精密称取麦冬皂苷B适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水80∶20，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至65分钟，流动相B的比例由64％升至80％，从65分钟至75分钟，流动相B的比例由80％降至25％；流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；(4)以麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。
实施例3鉴别a、注射剂中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取野黄芩苷对照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～60∶0.2～10∶0.3～5或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.3～10％三氯化铝乙醇或0.3～10％三氯化铝甲醇溶液，90～130℃烘1～15分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；b、注射剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氢钠(1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0)梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；c、注射剂中麦冬药材的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加正丁醇或醋酸乙酯或氯仿提取，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬对照药材，同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以苯或甲苯或氯仿-甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸或水8～300∶0.5～100∶0.01～30或醋酸乙酯或甲酸乙酯-吡啶-水0.2～10∶0.1～5∶0.2～10为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或254nm下检视或喷以10％硫酸或香草醛试剂或50％硫酸或5％香荚兰醛试剂或茴香醛试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用水提取后用正丁醇和乙醚或醋酸乙酯萃取，萃取液蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′，分别加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯或氯仿-甲醇-水3～50∶1～15∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；e、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；f、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加0.5～38％硫酸或盐酸水解，调节pH至中性，蒸干，残渣用氯仿或醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，分别加氯仿或醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以正己烷或甲醇-醋酸乙酯或氯仿或甲酸乙酯-水0.2～15∶0.2～40∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；g、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的液相色谱鉴别取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或盐酸水解，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿或醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；h、注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用正丁醇或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；取红参或人参对照药材，加氯仿同流提取，弃去氯仿液，残渣加水饱和正丁醇提取，提取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品，分别加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下层溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂或50％硫酸试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；i.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加水或甲醇或流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为200～350nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；j、注射剂中党参炔苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加水溶解，用正丁醇或醋酸乙酯或氯仿萃取，萃取液浓缩至干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液，或置C18或C8固相萃取小柱中，依次用5％～50％甲醇、甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板，正丁醇-冰醋酸或甲酸或乙醇或无水乙醇-水1～35∶0.1～10∶0.05～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％～30％硫酸乙醇溶液，80～150℃加热1～30分钟，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；k、注射剂中党参炔苷的液相色谱鉴别方法
取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或乙醇或流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰。
实施例4鉴别a、注射剂中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加醋酸乙酯提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，甲苯醋酸乙酯-甲酸-水10∶5∶1∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，105℃烘5分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；b、注射剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；c、注射剂中麦冬的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加三氯甲烷-甲醇7∶3混合溶液提取，滤过，滤液挥干，残渣加氯仿溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬对照药材，同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF251薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸80∶5∶0.1为展开剂，展开，置紫外灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法
取各制剂适量，用水溶解后用正丁醇萃取，萃取液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水15∶5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；e、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间致的色谱峰，阴性无干扰；f、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加3％硫酸水解4小时，调节pH至中性，蒸干，残渣用氯仿溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，分别加氯仿或醋酸乙酯等溶剂制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯或-水1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，90℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；g、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的液相色谱鉴别取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解，用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；
h、注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用正丁醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；取红参或人参对照药材，加氯仿回流提取，弃去氯仿液，残渣加水饱和正丁醇提取，提取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶1010℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；i.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间-致的色谱峰，阴性无干扰；j、注射剂中党参炔苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，置C18固相萃取小柱(500mg，用甲醇、20％甲醇各10ml预洗)中，依次用20％甲醇、甲醇各5ml洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水7∶1∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热5分钟，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；k、注射剂中党参炔苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰。
实施例5含量测定a、注射剂中野黄芩苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氢钠(1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0)梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于6.0mg；b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为200～350nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.5mg；c.注射剂中总皂苷的含量测定
取各制剂适量，置量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取适量，至量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2～4ml，高氯酸0.5～5ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴冷却0.5～10分钟，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′作为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547±10nm的波长处测定吸收度，以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′计，不得少于18.0mg；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含麦冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的总和的限度不得少于0.11mg；e、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或盐酸水解，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测检测波长为200～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含假叶树皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.03mg；f、注射剂中党参炔苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含党参炔苷的限度不得少于0.1mg；g.注射剂中总多糖含量测定单糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖)，由此折算出每瓶单糖的含量；总糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加稀硫酸25ml，加热回流1～4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于70.0mg。
实施例6含量测定a、注射剂中野黄芩苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相等溶剂至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于6.0mg；b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在10～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.5mg；c.注射剂中总皂苷的含量测定取各制剂适量，置10ml量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴冷却2分钟，精密加冰醋酸至25ml，摇匀，以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以人参皂苷Rg1计，不得少于18.0mg；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含麦冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的总和的限度不得少于0.11mg；e、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解后用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含假叶树皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.03mg；f、注射剂中党参炔苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含党参炔苷的限度不得少于0.1mg；g.注射剂中总多糖含量测定单糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖)，由此折算出每瓶单糖的含量；总糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加稀硫酸25ml，加热回流1～4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；
以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于70.0mg。
权利要求
1.一种以灯盏花素、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括以下全部或部分内容(1)指纹图谱测试，包括以党参成分特征为主的指纹图谱、以红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱、以麦冬成分特征为主的指纹图谱中的一种或几种；(2)红参或人参或党参药材、麦冬药材、野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、党参炔苷、苍术内酯III中全部或部分成分的鉴别测试方法；(3)人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、总皂苷、总多糖、党参炔苷、苍术内酯III全部或部分成分的含量测试方法。
2.按照权利要求1所述的以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下指纹图谱中的一种或几种a、采用液相色谱法测试红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量红参或人参和麦冬药材中的主要活性成分对照品，包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、麦冬皂苷D′中的一种或几种，用水或甲醇、乙醇溶解稀释至合适浓度，作为参照物溶液(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料∶流动相为20％～99％乙腈或20％～99％甲醇∶0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-300nm范围内的一个或几个，柱温为20～60℃范围内；(4)以红参或人参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中红参或人参和麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；b、采用液相色谱法测试党参成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量党参药材中的主要活性成分对照品，包括党参炔苷、苍术内酯III中的一种或几种，用水或甲醇、乙醇溶解稀释至合适浓度，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料∶流动相为5％～99％∶95％～5％乙腈或甲醇-水或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-300nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温为20～60℃范围内；(4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00；c、采用液相色谱法测试麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量麦冬药材中的主要活性成分对照品，包括麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、麦冬皂苷D′中的一种或几种，用水或甲醇、乙醇溶解稀释至合适浓度，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料∶流动相为20％～99％乙腈或20％～99％甲醇∶0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钾溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-300nm范围内的一个或几个，柱温为20～60℃范围内；(4)以麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.80～1.00。
3.按照权利要求2所述的以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下指纹图谱中的一种或几种a、采用液相色谱法测定以红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备精密称取本品适量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水80∶20，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至65分钟，流动相B的比例由64％升至80％，从65分钟至75分钟，流动相B的比例由80％降至25％；流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；(4)以红参或人参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测参脉注射剂中红参或人参和麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测参脉注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；b、采用液相色谱法测试党参成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备取适量党参药材中的主要活性成分苍术内酯III，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料∶流动相为甲醇水67∶33，流速为1.0ml/min、蒸发光检测器检测，漂移管温度30℃，载气流量2.2L/min，柱温为30℃；(4)以党参成分特征为主的标准指纹图谱的制定精密吸取供试品溶液及参照物溶液适量，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中党参成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00；c、采用液相色谱法测定以麦冬成分特征为主的指纹图谱(1)供试品溶液的制备取灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂适量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备精密称取麦冬皂苷B适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；(3)色谱条件色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为乙腈-水80∶20，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至5分钟，流动相B的比例为25％，从5分钟至40分钟，流动相B的比例由25％升至64％，从40分钟至50分钟，流动相B的比例为64％，从50分钟至65分钟，流动相B的比例由64％升至80％，从65分钟至75分钟，流动相B的比例由80％降至25％；流速为1.0ml/min，检测波长为203±2nm，柱温为40℃；(4)以麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的制定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，依据所测得的图谱，制定标准指纹图谱；(5)以上述方法作为待测注射剂中麦冬成分指纹图谱的测试手段；(6)将待测注射剂指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，计算相似度，应为0.90～1.00。
4.按照权利要求1所述的以灯盏花素、红参或人参或党参和麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于所述注射剂的鉴别方法是以下全部或部分内容a、注射剂中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取野黄芩苷对照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～60∶0.2～10∶0.3～5或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.3～10％三氯化铝乙醇或0.3～10％三氯化铝甲醇溶液，90～130℃烘1～15分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；b、注射剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氢钠(1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0)梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；c、注射剂中麦冬药材的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加正丁醇或醋酸乙酯或氯仿提取，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬对照药材，同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以苯或甲苯或氯仿-甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸或水8～300∶0.5～100∶0.01～30或醋酸乙酯或甲酸乙酯-吡啶-水0.2～10∶0.1～5∶0.2～10为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或254nm下检视或喷以10％硫酸或香草醛试剂或50％硫酸或5％香荚兰醛试剂或茴香醛试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用水提取后用正丁醇和乙醚或醋酸乙酯萃取，萃取液蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′，分别加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯或氯仿-甲醇-水3～50∶1～15∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；e、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；f、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加0.5～38％硫酸或盐酸水解，调节pH至中性，蒸干，残渣用氯仿或醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，分别加氯仿或醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以正己烷或甲醇-醋酸乙酯或氯仿或甲酸乙酯-水0.2～15∶0.2～40∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；g、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的液相色谱鉴别取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或盐酸水解，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿或醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；h、注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用正丁醇或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；取红参或人参对照药材，加氯仿回流提取，弃去氯仿液，残渣加水饱和正丁醇提取，提取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品，分别加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下层溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂或50％硫酸试剂，90℃～130℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；i.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加水或甲醇或流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为200～350nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；j、注射剂中党参炔苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加水溶解，用正丁醇或醋酸乙酯或氯仿萃取，萃取液浓缩至干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液，或置C18或C8固相萃取小柱中，依次用5％～50％甲醇、甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板，正丁醇-冰醋酸或甲酸或乙醇或无水乙醇-水1～35∶0.1～10∶0.05～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％～30％硫酸乙醇溶液，80～150℃加热1～30分钟，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；k、注射剂中党参炔苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或乙醇或流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰。
5.按照权利要求4所述的以灯盏花素、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于所述注射剂的鉴别方法是以下的一种或几种a、注射剂中野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加醋酸乙酯提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；再取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，甲苯醋酸乙酯-甲酸-水10∶5∶1∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，105℃烘5分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；b、注射剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；c、注射剂中麦冬的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加三氯甲烷-甲醇7∶3混合溶液提取，滤过，滤液挥干，残渣加氯仿溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬对照药材，同法制成对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸80∶5∶0.1为展开剂，展开，置紫外灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用水溶解后用正丁醇萃取，萃取液蒸干，残渣用甲醇溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水15∶5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；e、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；f、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加3％硫酸水解4小时，调节pH至中性，蒸干，残渣用氯仿溶解，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元，分别加氯仿或醋酸乙酯等溶剂制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯或-水1∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，90℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；g、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的液相色谱鉴别取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解，用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；h、注射剂中红参或人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，用正丁醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；取红参或人参对照药材，加氯仿回流提取，弃去氯仿液，残渣加水饱和正丁醇提取，提取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶1010℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；i.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re的液相色谱鉴别取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰；j、注射剂中党参炔苷的薄层色谱鉴别方法取各制剂适量，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，置C18固相萃取小柱(500mg，用甲醇、20％甲醇各10ml预洗)中，依次用20％甲醇、甲醇各5ml洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；另取党参对照药材，同法制成对照药材溶液；再取党参炔苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水7∶1∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热5分钟，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰；k、注射剂中党参炔苷的液相色谱鉴别方法取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰。
6.按照权利要求1所述的以灯盏花素、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于所述注射剂含量的测试方法应包括以下中的一种或几种a、注射剂中野黄芩苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氢钠(1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0)梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于6.0mg；b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为200～350nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.5mg；c.注射剂中总皂苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取适量，至量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2～4ml，高氯酸0.5～5ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴冷却0.5～10分钟，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′作为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547±10nm的波长处测定吸收度，以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′计，不得少于18.0mg；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含麦冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的总和的限度不得少于0.11mg；e、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或盐酸水解，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测检测波长为200～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含假叶树皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.03mg；f、注射剂中党参炔苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液为流动相，检测波长为200～410nm范围内的一个或几个，柱温20～50℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含党参炔苷的限度不得少于0.1mg；g.注射剂中总多糖含量测定单糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖)，由此折算出每瓶单糖的含量；总糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加稀硫酸25ml，加热回流1～4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于70.0mg。
7.按照权利要求6所述的以灯盏花素、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于所述注射剂含量的测试方法是以下一种或几种方法a、注射剂中野黄芩苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇或流动相等溶剂至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80为流动相，检测波长为335nm，柱温30℃；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于6.0mg；b.注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至35分钟，乙腈的比例为19％，从35分钟至55分钟，乙腈的比例由19％上升至29％，从55分钟至70分钟，乙腈的比例为29％，从70分钟至100分钟，乙腈的比例由29％升至40％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在10～50℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人参皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于2.5mg；c.注射剂中总皂苷的含量测定取各制剂适量，置10ml量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴冷却2分钟，精密加冰醋酸至25ml，摇匀，以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以外标法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以人参皂苷Rg1计，不得少于18.0mg；d、注射剂中麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含麦冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麦冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麦冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′的总和的限度不得少于0.11mg；e、注射剂中假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元含量测定取各制剂适量，置圆底烧瓶中，加水溶解后用3％硫酸回流4小时，取出，放至室温，调pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水90∶10为流动相，检测波长为203nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含假叶树皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蓣皂苷元的限度不得少于0.01mg；含鲁斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元的总和的限度不得少于0.03mg；f、注射剂中党参炔苷的含量测定取各制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方比例称取其它药味及辅料，同法制成阴性对照溶液；以党参炔苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水22∶78为流动相，检测波长为267nm，柱温30℃；以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含党参炔苷的限度不得少于0.1mg；g.注射剂中总多糖含量测定单糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖)，由此折算出每瓶单糖的含量；总糖 取各制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解，加稀硫酸25ml，加热回流1～4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入碘液(0.1mol/L)25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘液(0.1mol/L)相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算出样品每瓶中总糖的含量；以总糖的含量减去单糖的含量即得每瓶中总多糖的含量；各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于70.0mg。
8.按照权利要求6或7所述的以灯盏花素、红参或人参或党参、麦冬制成的中药注射剂的质量控制方法，其特征在于按照重量百分比计算，所述注射剂中所有可测成分包括野黄芩苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、总皂苷、总多糖、麦冬皂苷B、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D′、假叶树皂苷元、薯蓣皂苷元、鲁斯可皂苷元、党参炔苷、苍术内酯III中的全部或部分的总含量占制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量不低于25％。
全文摘要
本发明涉及一种由灯盏花素、人参(或红参、党参)、和麦冬制成的中药注射制剂的质量控制方法，该质量控制方法包括该中药注射制剂中灯盏花素、人参(或红参、党参)和麦冬的指纹图谱测试方法和/或鉴别测试方法和/或含量测定方法，本发明的方法为该注射制剂的质量控制提供了一种可靠、稳定、全新的方法，使该制剂的质量更加稳定，检测更为科学。
文档编号A61P9/00GK1919307SQ20051009285
公开日2007年2月28日 申请日期2005年8月22日 优先权日2005年8月22日
发明者于文风 申请人:北京奇源益德药物研究所