专利名称：一种银杏达莫注射液的制备方法
技术领域：
本发明属于药品制剂制备方法技术领域，具体涉及一种银杏达莫注射液制备方法，更具体涉及一种以银杏提取物与双嘧达莫为主成分的小容量注射剂。
背景技术：
银杏达莫注射液是银杏叶提取物于双嘧达莫共同配制而成的水溶性制剂。银杏叶是银杏科植物银杏的干燥叶，其为传统的活血化瘀中药材，具有良好的治疗肺虚咳喘，冠心病，心绞痛，高血脂的药理作用。银杏叶提取物中含有总黄酮、总内酯等有效成分，总黄酮为银杏叶提取物的主要活性成分。总黄酮在银杏叶提取物中主要以甙形式存在，主要为槲皮素、山奈素与异鼠李素。银杏提取物可扩张血管，拮抗PAF活性，抑制血小板聚集，降低血液粘稠，增加缺血脏器血流量，改善微循环及血液流度，清除自由基，抑制细胞膜脂质发生过氧化反反应，防止自由基对机体造成血栓、动脉硬化、等损害，保护神经细胞，改善记忆功能，具有活血化瘀、理气、止痛、通脉舒络之功效。主要用于缺血性心脑血管疾病，冠心病，心绞痛，血栓塞，脑血管痉挛等。双嘧达莫又称潘生丁，具有防止血栓形成，加速冠脉侧枝循环，可预防心肌梗死等作用。
目前，国内市场上的银杏达莫注射液(银杏叶提取物与双嘧达莫混合制成的注射液，每1ml含银杏总黄酮应为0.90-1.10mg，双嘧达莫(C24H40N8O4)应为0.36-0.44mg)有多家企业生产，均采用传统工艺配制而成，其存在的产品质量稳定性差，药液刺激性强，澄明度不合格率高，PH值下降，含量下降，颜色加深，疗效不稳定等问题始终无法解决。其主要原因在于银杏叶提取物在制备过程中部分杂质如蛋白质、鞣质等无效成分未完全去除，本发明银杏达莫注射液工艺的突破从根本上解决了上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种银杏达莫注射液的制备方法。
本发明所述的制备方法包括如下步骤将银杏叶进行粉碎，用乙醇回流提取，提取液浓缩过滤，树脂吸附，乙醇洗脱，回收乙醇注射用水，冷藏，得滤液即为银杏提取液。取处方中的新鲜注射用水，调节PH值，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，冷藏，超滤，滤液备用。将上述两种药液在避光条件下混合，定容，调PH值，中间产品检验合格后，经终端过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
本发明所述的制备方法具体过程如下
A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，加入8～15倍量50～80％的乙醇，40～60℃回流提取两次，每次2～5小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至提取液体积的1/6～1/12，加入1～3倍浓缩液量的蒸馏水，在加入1～3％浓缩液量的助溶剂过滤，滤液经大孔树脂吸附，并用50～80％乙醇溶液解吸，解吸液加入配制量50～70％的新鲜注射用水，超声处理20～40分钟，0～10℃冷藏12～48小时，用截馏分子量1万的超滤膜超滤，得银杏叶提取液；B)取配制量10～30％、10～30℃的新鲜注射用水，调节PH值为1.0～2.0，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，0～10℃冷藏12～48小时，用截馏分子量5000～8000的超滤膜超滤，滤液备用；C)将上述两种药液避光条件下混合，定容，调PH3.5～5.5，中间产品检验合格后，将药液经终端0.22μm滤膜除菌过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
更为优选的制备方法包括如下步骤A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，加入10倍量70％的乙醇，50℃回流提取两次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至提取液体积的1/8，加入1.5倍浓缩液量的蒸馏水，在加入1.5％浓缩液量的助溶剂过滤，滤液经大孔树脂吸附，并用70％乙醇溶液解吸，解吸液加入配制量60％的新鲜注射用水，超声处理30分钟，4℃冷藏24小时，用截馏分子量1万的超滤膜超滤，得银杏叶提取液；B)取配制量20％20℃的新鲜注射用水，调节PH值为1.5，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，4℃冷藏24小时，用截馏分子量5000～8000的超滤膜超滤，滤液备用；C)将上述两种药液避光条件下混合，定容，调PH4.0～4.5，中间产品检验合格后，将药液经终端0.22μm滤膜除菌过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
上述制备方法中，所用的提取溶剂为50～80％乙醇，体积为药材的8～15倍量，提取温度为40～60℃，提取次数为两次，提取时间为2～5小时。
上述制备方法中，采用截流分子量为1万的超滤膜超滤，是所配制药液中无效成分的控制步骤，所用超滤膜为市售产品。其生产商应为行业认可的生产单位。
上述制备方法中，避光、通氮气条件是药液配制、灌装过程的关键步骤。
上述制备方法中，终端除菌过滤所使用的滤膜孔径为0.22μm。为使产品质量稳定，滤膜应尽可能由固定生产商供应。
上述制备方法中，冷藏温度为0～10℃，冷藏时间为12～48小时。
上述制备方法中，为使产品质量稳定，所用PH值调节剂为10％盐酸溶液。
上述制备方法中，双嘧达莫配制过程中的注射用水温度控制在10～30℃，PH值控制在1.0～2.0。
本发明所述之银杏达莫注射液临床应用时静脉滴注，静脉滴注，成人一次10～25ml，加入0.9％氯化钠注射液或5％～10％葡萄糖注射液500ml中，一日2次。
本发明所述之银杏达莫注射液具有调节血管的舒缩，清除自由基，拮抗PAF，保护神经元，可扩张动脉血管、降低血管壁通透性、改善水肿，降低缺血粘度、抑制血小板和红细胞的高聚集性、增加红细胞的变形性，减少心肌耗氧量、增强心肌细胞对缺血缺氧的耐受性，稳定细胞膜、维持正常的细胞结构和功能，直接保护神经元，加强神经传导、加快神经递质的更新等作用。主要适用于脑血栓、脑血管痉挛、急慢性脑功能不全，缺血性心脏病，缺血性视网膜病变，外周血管疾病等疾病的治疗。
本发明中银杏叶经回流提取、浓缩过滤、树脂吸附、洗脱、超声、超滤等技术处理，并有避光、充氮保护，确保了蛋白质、鞣质等无效成分被完全去除，避免了有效成分的降解，减少了制剂中的有关物质，使制成的制剂稳定性好，刺激性小，澄明度改善，疗效稳定。
具体实施例方式
下面用实施例进一步描述本发明，但所述实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明。
实施例1A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，加入8倍量60％的乙醇，50℃回流提取两次，每次3.5小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至提取液体积的1/8，加入3倍浓缩液量的蒸馏水，在加入1％浓缩液量的助溶剂过滤，滤液经大孔树脂吸附，并用60％乙醇溶液解吸，解吸液加入配制量50％的新鲜注射用水，超声处理30分钟，4℃冷藏24小时，用截馏分子量1万的超滤膜超滤，得银杏叶提取液。
B)取配制量10％10℃的新鲜注射用水，调节PH值为1.2，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，2℃冷藏48小时，用截馏分子量8000的超滤膜超滤，滤液备用。
C)将上述两种药液避光条件下混合，定容，调PH4.2，中间产品检验合格后，将药液经终端0.22μm滤膜除菌过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
实施例2
A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，加入12倍量80％的乙醇，45℃回流提取两次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至提取液体积的1/12，加入1.5倍浓缩液量的蒸馏水，在加入1.5％浓缩液量的助溶剂过滤，滤液经大孔树脂吸附，并用80％乙醇溶液解吸，解吸液加入配制量65％的新鲜注射用水，超声处理25分钟，6℃冷藏36小时，用截馏分子量1万的超滤膜超滤，得银杏叶提取液。
B)取配制量25％25℃的新鲜注射用水，调节PH值为1.5，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，5℃冷藏36小时，用截馏分子量6000的超滤膜超滤，滤液备用。
C)将上述两种药液避光条件下混合，定容，调PH4.0，中间产品检验合格后，将药液经终端0.22μm滤膜除菌过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
实施例3A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，加入15倍量50％的乙醇，40℃回流提取两次，每次2.5小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至提取液体积的1/6，加入2倍浓缩液量的蒸馏水，在加入2.5％浓缩液量的助溶剂过滤，滤液经大孔树脂吸附，并用70％乙醇溶液解吸，解吸液加入配制量60％的新鲜注射用水，超声处理20分钟，10℃冷藏12小时，用截馏分子量1万的超滤膜超滤，得银杏叶提取液。
B)取配制量15％30℃的新鲜注射用水，调节PH值为1.4，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，8℃冷藏12小时，用截馏分子量5000的超滤膜超滤，滤液备用。
C)将上述两种药液避光条件下混合，定容，调PH4.3，中间产品检验合格后，将药液经终端0.22μm滤膜除菌过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
实施例4A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，加入14倍量70％的乙醇，55℃回流提取两次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至提取液体积的1/7，加入2倍浓缩液量的蒸馏水，在加入3％浓缩液量的助溶剂过滤，滤液经大孔树脂吸附，并用50％乙醇溶液解吸，解吸液加入配制量55％的新鲜注射用水，超声处理35分钟，7℃冷藏24小时，用截馏分子量1万的超滤膜超滤，得银杏叶提取液。
B)取配制量30％20℃的新鲜注射用水，调节PH值为1.0，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，4℃冷藏24小时，用截馏分子量8000的超滤膜超滤，滤液备用。
C)将上述两种药液避光条件下混合，定容，调PH4.4，中间产品检验合格后，将药液经终端0.22μm滤膜除菌过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
实施例5A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，加入10倍量70％的乙醇，50℃回流提取两次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至提取液体积的1/8，加入1.5倍浓缩液量的蒸馏水，在加入1.5％浓缩液量的助溶剂过滤，滤液经大孔树脂吸附，并用70％乙醇溶液解吸，解吸液加入配制量60％的新鲜注射用水，超声处理30分钟，4℃冷藏24小时，用截馏分子量1万的超滤膜超滤，得银杏叶提取液。
B)取配制量20％20℃的新鲜注射用水，调节PH值为1.5，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，4℃冷藏24小时，用截馏分子量6000的超滤膜超滤，滤液备用。
C)将上述两种药液避光条件下混合，定容，调PH4.5，中间产品检验合格后，将药液经终端0.22μm滤膜除菌过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
实验例1本实验例为本发明实施例1～5所制备的银杏达莫注射液的性状、PH值、重金属及注射剂项下有关的各项规定项目的检测。
性状本品为黄色至棕黄色澄明液体，符合规定。
PH值取本品，依法测定(中国药典2000年版二部附录VIH)，PH值为3.5～5.5，符合规定。
重金属精密量取本品2ml，置坩锅中，水浴蒸干，依法检查(中国药典2000年版二部附录VIIIH第二法)，含重金属未超过百万分之五，符合规定。
其他符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版二部附录IB)。
实验例2本实验例为本发明实施例1～5所制备的银杏达莫注射液的定性测定。
鉴别(1)取本品2ml，加镁粉少许，加浓盐酸数滴，放置后渐显红色，符合规定。
(2)取本品2ml，乙醇10ml，即显绿色荧光，加稀盐酸后荧光消失，符合规定。
(3)在双嘧达莫和银杏总黄酮含量测定项下记录的图谱中，供试品峰的保留时间应与对照品相对应的峰保留时间一致，符合规定。
以下实验说明本发明所制备的银杏达莫注射液中含有确定的组分。
实验例3本实验例为本发明实施例1～3所制备的银杏达莫注射液的含量测定。
双嘧达莫 照高相液效色谱法(中国药典2000版二部附录VD)测定。
色谱条件与系统适用性实验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％磷酸二氢钠溶液〔用(1→3)磷酸溶液调节PH值至4.6〕-甲醇(25∶75)为流动相；流速为0.1ml/min；检测波长为290nm。理论板数按双嘧达莫峰计算应不低于2000重复进样5次，相对标准偏差(RSD)不大于2.0％。
对照品溶液的制备 精密称取双嘧达莫对照品适量，加80％甲醇溶液制成每1ml中含15μg的溶液。
供试品溶液的制备 精密量取本品2ml，置50ml容量瓶中，加80％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。
测定法 精密量取对照品溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
银杏总黄酮 照高效液相色谱法(中国药典2000版二部附录VD)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.4％磷酸溶液-甲醇(50∶50)为流动相；流速为1.2ml/min；检测波长为360nm；理论板数按槲皮素峰计算应不低于1500，相对标准偏差(RSD)应不大于2.0％。
对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品约12mg，置200ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液的制备 精密量取本品25ml，加硫酸溶液(5→100)15ml，加甲醇20ml，置水浴上回流4小时，移入100ml容量瓶中，加甲醇冲洗并至刻度，摇匀经滤膜(孔径不得大于0.45μm)滤过。
测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，其中最大的三个峰，按保留时间依次为槲皮素(Q)、山柰素(K)、异鼠李素(I)，按外标法计算Q、K、I，以下式计算总黄酮的含量Q×2.50+K×2.59+I×2.44标准规定每1ml中含银杏总黄酮应为0.90～1.10mg，双嘧达莫(C24H40N8O4)应为0.36～0.44mg。
实施例1～3的含量测定，结果见下表
实验例4本实验例为本发明实施例1～3所制备的银杏达莫注射液的安全性检查。
无菌取本品，依法检查(中国药典2000年版二部附录XIH)，符合规定。
热原取本品用10％葡萄糖注射液稀释1倍，依法检查(中国药典2000年版二部附录XID)，剂量按家兔体重每1kg缓缓注射稀释液3ml，符合规定。
长期毒性测定连续给药三个月观察血尿检查、病理检查均未见异常。
通过以上实验说明本发明所制备的银杏达莫注射液的安全性符合注射剂要求，无任何毒性作用，应用人体安全。
比较例1本比较例说明本发明实施例1～3所制备的银杏达莫注射液的澄明度优于用常规制备方法生产的。
澄明度判断标准(1)未发现有异物或仅带微量白点者，作合格论。
(2)每瓶含短于0.5cm的毛和0.1～0.2mm的白点、白块或色点总数未超过5个者，作合格论。
(3)不合格率未超过5％，该批产品作合格论。
有关概念白块系指用规定的检查方法，能看到有明显的平面或棱角的白色物质。
白点不能辨清平面或棱角的按白点计。
微量白点在规定的时间内仅见到3个或3个以下白点者。
异物包括玻璃屑、纤维、色点、色块及其它外来异物。
检查方法分别取采用本发明实施例1所制备的银杏达莫注射液和采用常规工艺制备的产品各200支，按《澄明度检查细则和判断标准》和以上标准检查，结果见下表。
通过以上实验说明本发明所制备的银杏达莫注射液的澄明度明显优于用常规制备方法生产的。
比较例2本比较例说明本发明实施例2所制备的银杏达莫注射液在临床应用时刺激性较小。
比较例3本比较例说明采用本发明实施例5所制备的银杏达莫注射液与采用常规制备方法生产的银杏达莫注射液通过六个月加速实验的稳性比较，结果见下表。
标准规定含量每1ml中含银杏总黄酮应为0.90～1.10mg，双嘧达莫(C24H40N8O4)应为0.36～0.44mg。
PH值应为3.5～5.5澄明度合格率应不低于95％颜色本品为黄色至棕黄色澄明液体。
通过以上实验可以看出，发明组在经过加速实验六个月后，其含量、PH值、澄明度、颜色并未发生明显变化，而常规组的含量、PH值均有明显降低，澄明度、颜色均不符合规定，表明本发明所制备的银杏达莫注射液明显优于采用常规制备方法生产的。
权利要求
1.一种银杏达莫注射液的制备方法，所述的制备方法具体过程如下A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，用乙醇回流提取，提取液浓缩过滤，树脂吸附，乙醇洗脱，回收乙醇注射用水，冷藏，得滤液即为银杏提取液；B)取处方中的新鲜注射用水，调节PH值，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，冷藏，超滤，滤液备用；C)将上述两种药液在避光条件下混合，定容，调PH值，中间产品检验合格后，经终端过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得双嘧达莫注射液成品。
2.根据权利要求书1所述的制备方法，其特征在于包括如下步骤A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，加入8～15倍量50～80％的乙醇，40～60℃回流提取两次，每次2～5小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至提取液体积的1/6～1/12，加入1～3倍浓缩液量的蒸馏水，在加入1～3％浓缩液量的助溶剂过滤，滤液经大孔树脂吸附，并用50～80％乙醇溶液解吸，解吸液加入配制量50～70％的新鲜注射用水，超声处理20～40分钟，0～10℃冷藏12～48小时，用截馏分子量1万的超滤膜超滤，得银杏叶提取液；B)取配制量10～30％10～30℃的新鲜注射用水，调节PH值为1.0～2.0，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，0～10℃冷藏12～48小时，用截馏分子量5000～8000的超滤膜超滤，滤液备用；C)将上述两种药液避光条件下混合，定容，调PH3.5～5.5，中间产品检验合格后，将药液经终端0.22μm滤膜除菌过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
3.根据权利要求书1所述的制备方法，其特征在于包括如下步骤A)银杏叶提取液的制备将银杏叶进行粉碎，加入10倍量70％的乙醇，50℃回流提取两次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液减压浓缩至提取液体积的1/8，加入1.5倍浓缩液量的蒸馏水，在加入1.5％浓缩液量的助溶剂过滤，滤液经大孔树脂吸附，并用70％乙醇溶液解吸，解吸液加入配制量60％的新鲜注射用水，超声处理30分钟，4℃冷藏24小时，用截馏分子量1万的超滤膜超滤，得银杏叶提取液；B)取配制量20％20℃的新鲜注射用水，调节PH值为1.5，在避光条件下加入处方中的双嘧达莫搅拌溶解，4℃冷藏24小时，用截馏分子量5000～8000的超滤膜超滤，滤液备用；C)将上述两种药液避光条件下混合，定容，调PH4.0～4.5，中间产品检验合格后，将药液经终端0.22μm滤膜除菌过滤，充氮灌装，灭菌，灯检，包装，即得银杏达莫注射液成品。
4.根据权利要求书1～3之一所述的制备方法，其特征在于所述的助溶剂可为钠沸石或滑石粉，其体积为浓缩液量的1～3％。
5.根据权利要求书1～3之一所述的制备方法，其特征在于所述的大孔树脂可为D101型树脂或HP-20型树脂。
6.根据权利要求书1～3之一所述的制备方法，其特征在于所述的提取溶剂为50～80％乙醇，体积为药材的8～15倍量，提取温度为40～60℃，提取次数为两次，提取时间为2～5小时。
7.根据权利要求书1～3之一所述的制备方法，其特征在于银杏叶提取时超滤所使用的超滤膜为截留分子量为1万的超滤膜。
8.根据权利要求书1～3之一所述的制备方法，其特征在于所述的冷藏温度为0～10℃，冷藏时间为12～48小时。
9.根据权利要求书1～3之一所述的制备方法，其特征在于双嘧达莫配制过程中的注射用水温度控制在10～30℃，PH值控制在1.0～2.0，PH调节剂为10％盐酸溶液。
10.根据权利要求书1～3之一所述的制备方法，其特征在于配制、灌装过程中的条件为避光、充氮。
全文摘要
本发明属于医用制剂领域，具体公开了一种抗血小板聚集，冠状动脉扩张药物银杏达莫注射液的制备方法。本发明方法将银杏叶粉碎后，经乙醇回流提取、浓缩过滤、树脂吸附、乙醇洗脱等技术处理，得到银杏叶提取液，在避光条件下与双嘧达莫共同配制、充氮灌装，再经灭菌、灯检、包装后制成银杏达莫小容量注射剂。本发明方法确保了蛋白质、鞣质等无效成分被完全去除，避免了有效成分的降解，减少了制剂中的有关物质，使制成的制剂稳定性好，刺激性小，澄明度改善，疗效稳定。经临床证明本品可静脉滴注，主要适用于脑血栓、脑血管痉挛、急慢性脑功能不全，缺血性心脏病，缺血性视网膜病变，外周血管疾病等疾病的治疗。
文档编号A61P7/00GK1939357SQ20051010487
公开日2007年4月4日 申请日期2005年9月27日 优先权日2005年9月27日
发明者张玉梅 申请人:巴里莫尔制药(通化)有限公司