专利名称：预防并减少细菌粘附于口腔表面的口腔用组合物的制作方法
预防并减少细菌粘附于口腔表面的口腔用组合物 相关申请的交叉引用
本领域中已经建议i午多种类的药物以阻止蚀斑形成且防 止与蚀斑形成有关的口腔感染和牙病的产生。0005虽然许多先有技术涉及抗菌洁牙剂和口腔用组合物，但 本领域仍需要制备一种能够提高阻止牙菌斑积聚效应的产品。 发明简述0006
本发明包括一种含有抗粘着剂(anti-adhesion agent)，优 选半胱氨酸蛋白酶且最优选无花果蛋白酶的口腔用组合物。另一方 面，半胱氨酸蛋白酶与一种或多种成分例如抗菌剂和表面活性剂联 用。抗粘着剂减緩口腔表面和牙菌斑形成物质例如细菌之间的相互作 用。发明详述0007] 本发明提供一种特定类型的酶，用于预防、阻止或至少 抑制牙菌斑形成物质包括生物物质、化学物质、微生物及细菌结合、 粘附或附着到口腔表面。本发明使用的酶抑制形成牙菌斑的细菌层的 生成。确信这种酶通过附着到口腔表面包括柔软组织从而抑制牙菌斑 的生长或其进一步生长。文中术语"抗粘着"与"抗附着，，可互换使 用。本发明中所用适当的酶包括抗粘着蛋白酶，优选半胱氨酸蛋白酶 且最优选选自无花果蛋白酶、番木瓜蛋白酶和南极磷虾蛋白酶(krillase) 的蛋白酶。优选的，抗粘着剂包含无花果蛋白酶和一种或多种其它 酶，例如其它抗粘着酶或另一类型的酶例如菠萝蛋白酶、糜蛋白酶、 alcalase、淀粉酶(amalysecs)、葡萄糖氧化酶、纤维素酶(cellusases)、月旨 肪酶(lipsases),和/或除抗粘着半胱氨酸蛋白酶外的其它蛋白酶。0008本发明所用的无花果蛋白酶可通过本领域已知的任何方 法制备(Ficin for use in the invention may be obtained by any means from the .)。优选通过将无花果属(F/cw力植物包括F/a^ g/a6ra"的乳汁干燥 并过滤得到。
例如可如下制备糊剂搅拌下在常规混合器中将润湿剂 (例如甘油、山梨醇、丙二醇和聚乙二醇)分散在水中。向分散体中加入 酶或酶有机增稠剂(例如黄原胶)、任何阴离子聚羧酸盐、任何盐(例如 氟化钠防龋药剂)、焦磷酸钠、三聚磷酸钠防牙垢盐及任何增甜剂，搅 拌所得混合物直至形成均匀凝胶相。向凝胶相中加入色素(例如TiO》及 任何所需酸或碱以调节pH。混合这些成分直到得到均匀相。然后将该 混合物转移至高速/真空混合器中，其中向此混合物中加入无机二氧化 硅增稠剂和表面活性剂。在这时加入低油吸收的二氧化硅研磨剂与组 合物中使用的其它研磨剂。然后在约20-50毫米汞柱真空，优选约30 毫米汞柱下高速混合该混合物5-30分钟。所得产物为均匀的、半固 体、可挤出的糊剂或凝胶产物。
为检验牙膏配方中活性物质的效力，唾液包被的羟基磷 灰石(hydropxyapatite) (SHAP)圆盘作为人造牙齿，由人口腔中主要细菌 组成的细菌培养物以与人体内唾液一致的速度流过系统。然后将每次 处理的8个圆盘放进恒化器流动池中，使口腔细菌培养物流过圆盘过 夜(20-24小时)，从而判断包被在圆盘表面的活性物质是否阻止生物膜 形成。24小时后移开SHAP圆盘并测定细菌的量。然后测定并分析溶 液的ABS61。。用此结果估计附着在SHAP圆盘上的细菌量。根据这个 值，评价这种糊剂相对于匹配的阴性对照的抗粘着效力百分数。对这 三种蛋白酶中每种检验两个蛋白酶浓度，即0.226%重量和0.065%重 量。人造口腔抗粘着实验表明在对三种蛋白酶中每一种所测试的两个 浓度下，平均来说，所有三种的效力都大于不含有任何酶的阴性对照 糊剂。但是基于统计学分析，未证明南极磷虾蛋白酶的效力。番木瓜 蛋白酶和无花果蛋白酶在0.226%浓度下显示出效力。无花果蛋白酶在 0.065%和0.226%显示相似的效力。基于这些结果，制备用于证明初步 临床研究的GMP批量制品。体外结果显示无花果蛋白酶优于番木瓜蛋 白酶，番木瓜蛋白酶又优于匹配的安慰剂糊剂。 实施例III:体内临床评价[0018
进行两种人临床研究以试验产品相对于匹配的阴性对照 糊剂的抗粘着效力。下文指明了用牙菌斑减少所带来的最终收益来评 判抗粘着效力的临床程序。A. 改良的龈缘牙菌斑指数测定(MGMPI)-试验产品0.226%无花果 蛋白酶和匹配的阴性对照[00191 在这个临床研究中募集并招收15(15)名居家(in-house)受 试者。14(14)名完成此3周的研究。 一名受试者由于患需要抗生素治疗 的轻度疾病而排除出该项研究。所有人员到牙科诊所进行口腔检查和 医疗史考查。所有可接受的受试者接受预防(牙齿清洗)并用Colgate GreatRegular开始为期一周的清洗。在临床研究的治疗阶段，各受试者 在指定的早晨到牙科诊所报告。他们接受彻底洗牙和预防从而清除所 有牙石和牙菌斑。在此步骤期间使用显示液以证实彻底清除了所有牙 菌斑和牙石。受试者然后使用1.5gm的指定的洁牙剂，刷60秒然后用 10ml水清洗5秒。然后指示受试者24小时内不进行所有口腔卫生处 理，24小时结束时返回口腔诊所用显示液清洗并对其牙菌斑打分。牙 菌斑打分完成后受试者使用清洗制品恢复正常口腔卫生护理(每天刷整 个口腔2次)。结果显示如下。牙菌斑得分酶牙膏(0.226%无匹配的安慰剂牙膏(MGMPI)花果蛋白酶)24小时平均得分14.55 ±8.50*30.38 ±17.99*与安慰剂比较的统计学显著性(p0.05)使用t-检验确定产品间存在的差异(p0.05)。酶洁牙剂(0.226%无花果蛋白酶)与匹配的安慰剂相比具有统计学差异。含有无花果蛋白酶洁牙剂显示通过抗粘着作用模式减少了临床上的牙菌斑。B.改良的龈缘牙菌斑指数测定(MGMPI)-试验产品0.226%番木瓜蛋白酶和匹配的阴性对照0020除在此试验中招收14名受试者并均完成研究外，临床步骤与上述无花果蛋白酶所述相同。__牙菌斑得分酶牙膏 (0.226%匹配的安慰剂牙膏""" (MGMPI) 无花果蛋白酶)24小时平均得分 17.07 ±7.03*30.38 ±17.95 一*与安慰剂比较的统计学显著性(p〈0.05) 使用t-检验确定产品间存在的差异(p0.05)。酶洁牙剂(0.226%番木瓜蛋 白酶)与匹配的安慰剂相比具有统计学差异。含有番木瓜蛋白酶洁牙剂 显示通过抗粘着作用模式减少了临床上的牙菌斑。比较这两个临床结 果，进一步总结出含有无花果蛋白酶洁牙剂的特异性抗粘着效力优于
含有番木瓜蛋白酶洁牙剂。[0021GMP制成的批量产物在49°C下存放6周。每种酶的酶 活性与起始活性相比几乎没有改变。 实施例IV:含有抗粘着酶和抗菌剂的洁牙剂制剂[0022除了减少水的量并用相应量的示例性抗菌剂CPC代替 外，重复上面实施例I的步骤。相应的如表1中，水减至重量的 16.7%，对于三种制剂中每种含有的CPC为重量的0.3%。
权利要求
1.一种包含含有无花果蛋白酶的抗粘着剂的口腔用组合物，所述抗粘着剂以有效减缓受试者口腔与牙菌斑形成物质之间相互作用的量存在。
2. 权利要求1的组合物，其中，口腔用组合物按100重量份 计，则抗粘着剂的量最高至约10份。
3. —种包含按重量计每100份组合物中至少占0.01份的抗粘 着剂的口腔用组合物，其中所述抗粘着剂包含凝乳活性高于番木瓜蛋 白酶的半胱氨酸蛋白酶。
4. 权利要求3的组合物，其中，口腔用组合物按100重量份 计，则抗粘着剂的量为约0.01-约10份。
5. 权利要求3的组合物，其中，口腔用组合物按100重量份 计，则抗粘着剂的量为至少约0.05份。
6. 权利要求3的组合物，其中，口腔用组合物按100重量份 计，则抗粘着剂的量为约0.03-约0.3份。
7. 权利要求3的组合物，其中抗粘着剂包含多于一种半胱氨 酸蛋白酶。
8. 权利要求7的组合物，其中半胱氨酸蛋白酶包含与番木瓜 蛋白酶和南极磷坏蛋白酶中至少一种联用的无花果蛋白酶。
9. 权利要求7的组合物，其进一步包括至少一种不同于半胱 氨酸蛋白酶的酶。
10. 权利要求9的组合物，其中所述不同的酶是至少一种选自 淀粉酶、脂肪酶、核酸酶和其它蛋白酶的酶。
11. 一种减少受试者口腔中牙菌斑生长的方法，所述方法包括 使口腔与有效量的抗粘着蛋白酶接触，从而减緩受试者口腔与牙菌斑 形成物质之间的相互作用。
12. —种包含抗粘着剂的口腔用组合物，所述抗粘着剂包含无 花果蛋白酶和抗菌剂。
13. 权利要求1的组合物，其中抗粘着剂进一步包含至少一种 番木瓜蛋白酶和南极磷虾蛋白酶。
14. 权利要求l的组合物，其中抗菌剂包含阳离子抗菌剂。
15. 权利要求l的组合物，其中抗菌剂包含季铵化合物。
16. 权利要求1的组合物，其中抗菌剂包含卤化烷基吡啶输。
17. —种口腔用组合物，所迷组合物具有至少一种包括十六烷 基吡啶输的抗菌剂及至少 一种凝乳活性高于番木瓜蛋白酶的抗粘着蛋 白酶。
全文摘要
本发明涉及一种含有抗粘着剂，优选半胱氨酸蛋白酶且最优选无花果蛋白酶的口腔用组合物。另一方面，半胱氨酸蛋白酶与一种或多种成分例如抗菌剂和表面活性剂联用。抗粘着剂减缓受试者口腔和牙菌斑形成物质之间的相互作用。
文档编号A61K8/66GK101119769SQ200580048166
公开日2008年2月6日 申请日期2005年11月28日 优先权日2004年12月16日
发明者H·M·特里维迪, K·帕纳利干, 韬 徐 申请人:高露洁-棕榄公司