治疗肾病的复方药物的制作方法

专利名称：治疗肾病的复方药物的制作方法
技术领域：
本发明与治疗肾病的阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物有关。
背景技术：
市售的宝盛康牌阿魏酸哌嗪具有抗凝、抗血小板聚集、扩张微血管、增加冠脉流量、解除血管痉挛的作用，适用于各类伴有镜下血尿和高凝状态的肾小球疾病，如肾炎、慢性肾炎、肾病综合症早期尿毒症以及冠心病、脑梗死、脉管炎等的辅助治疗。市售的阿魏酸钠，为非肽类内皮素受体拮抗剂，可拮抗内皮素引起的血管收缩、升压及血管平滑肌；抑制血小板聚集，抗凝血、改善血液流变学特征。本品亦可抑制胆固醇的合成，降低血脂，清除自由基，防治脂质过氧化损伤；影响补体，增强免疫机能，并具有一定的镇痛作用。适用于动脉硬化、冠心病、脑血管病、肾小球疾病、肺动脉高压、糖尿病血管病变、脉管炎等血管性疾病的辅助治疗以及白细胞和血小板减少，亦可用于偏头痛、血管性头痛的治疗。
随着人类医学水平的发展，将蛋白尿作为独立的指标所起的作用以及早期检测和防治肾病和糖尿病的治疗目标，国际肾脏病学会宣布的“白蛋白对健康和疾病的影响”越来越重要。阿魏酸哌嗪及阿魏酸钠分别在长期的临床应用中，能显著降低蛋白尿，减轻肾脏损害和改善肾脏功能，治疗或辅助治疗糖尿病肾病、高血压肾病和原发性肾小球疾病等。两药作用机理既有相同之处，又各具特点，阿魏酸哌嗪对慢性肾炎、糖尿病肾病及慢性肾功能不全的患者有减轻尿蛋白和延缓肾脏疾病的作用，其疗效确切；阿魏酸钠在糖尿病肾病、肾间质纤维化中发挥治疗作用。

发明内容
本发明的目的是为了提供一种早期降低微量白蛋白尿和蛋白尿，中晚期抗肾脏纤维化，能增强治疗肾小球疾病，安全有效，便于携带，服用方便的治疗肾病的复方药物。
本发明的是这样来实现的本发明治疗肾病的复方药物，由下列重量份的原料制成阿魏酸钠 0.5～1.5，阿魏酸哌嗪1～3，
淀粉 0.3～0.5，白糖粉0.3～0.5，糊精 0.1～0.3。
上述的复方药物下列重量份的原料制成阿魏酸钠 1，阿魏酸哌嗪2，淀粉 0.4，白糖粉0.4，糊精 0.2。
上述的药物剂型为片剂或颗粒剂或胶囊剂，便于携带，服用方便。
本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物可以采用常规的方法制备或片剂、颗粒剂、胶囊剂或其它剂型。
本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物能早期降低微量白蛋白尿和蛋白尿，中锡期抗肾脏纤维化，能增强治疗肾小球疾病，安全有效，便于携带，服用方便。
下面是本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物在药理及临床观察的记录。
一，5/6肾切除大鼠肾组织CD44和CD54的变化及本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物的干预作用；CD44是H一细胞黏附分子超家族(H-CAM)成员之一，主要介导细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性黏连，与肾小球肾炎时白细胞浸润、细胞增埴及细胞外基质的增加有关。CD44(ICAM-1)为免疫球蛋白超家族之一，CD54在多种组织细胞中均可促进中性粒细胞向炎症部位浸润，并可作为共刺激信号的一部分参与T细胞的活化，从而在促进炎症和免疫反应中起着重要作用。利用5/6肾切除大鼠为慢性肾衰竭模型，观察细胞黏附分子CD44、CD54的表达，旨在探讨CD44、CD54在慢性肾脏疾病中的作用及阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物干预治疗的影响。
材料与方法1模型制备 6～8周龄、体重180-200g雄性Wister大鼠。水合氯醛麻醉大鼠，经腹部切口，分离右肾，行上下极切除法，切除2/3，止血后残肾还纳入腹腔，1周后切除左肾。假手术组(正常对照组)与模型组同期行2次手术，但只打开腹腔，暴露肾脏后缝合腹腔。
2动物分组及给药方法 用于实验的5/6肾切除大鼠54只，假手术大鼠18只。按随机法将5/6肾切除大鼠分为模型组、阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗组，每组各18只。阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物70mg/Kg/d，给药方法均为灌胃，模型组和假手术组每日予等量生理盐水灌胃。
3尿蛋白、生化指标检测 实验的第12周收集24h尿，采用双缩脲法测定24h尿蛋白。经心脏采血，测定血清中尿素氮、肌酐、总蛋白、白蛋白。
4肾脏病理检查 肾组织经固定，包埋，切片厚2μm，行HE染色检查肾小球硬化。肾小球硬化的定义为毛细血管腔塌陷和(或)玻璃样变。采用Raij等半定量方法评估肾小球硬化程度，每张切片至少观察40个肾小球，根据肾小球硬化灶所占肾小球比例分为0～++++，0表示肾小球无病变，+表示1个肾小球25％受损，++表示26％～50％受损，+ ++表示51％～75％受损，+++ +表示76％～100％受损。然后计算肾小球硬化指数(glomeru-losclemsisindex，GIS)，如40个肾小球中有5个肾小球为+，5个为+++，其他30个正常，其GIS＝[(1×5/40)+(3×5/40)]×100＝50。采用Oikawa法半定量肾小管间质纤维化的程度，即0正常或＜25％；+病变面积为25％～50％；++＞50％～75％；+++＞75％。400倍光镜下，每张切片随机选择5个不含肾小球的视野，计数肾间质内浸润的炎细胞数(单核巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞)。结果以(炎细胞数/HP×400)表示。
5残肾组织CD44CD54免疫组织化学染色采用SP法检测肾组织中细胞黏附分子的表达(CD44和CD54的单克隆抗体及SP试剂盒均为武汉博士德公司产品)。将石蜡包埋的肾组织标本切成3μm厚切片，小鼠抗大鼠CD44单克隆抗体，稀释度为1∶100；小鼠抗大鼠的CD54单克隆抗体，稀释度为1∶200。按双盲法参照Floege法半定量肾小球免疫组织化学染色，按染色区和染色强度分为0～4分，即0分为无染色或染色及弱；1分为局部弱染、染色区＜25％；2分为局部染色趋强、染色区25％～49％；3分为50％～75％；4分为＞75％。参照Huge法半定量肾小管间质免疫组织化学染色，200倍光镜下目测每片15-25个视野，计数组化染色阳性肾小管或被胞外、胞内染色阳性间质所包围的肾小管的百分率分为0～4分，即0分为0％～5％，1分为6％-25％，2分为26％～50％，3分为51％-75％，4分为＞75％。
6统计学方法统计学处理采用Stx3S t0.0统计软件，4组间比较用多组单因素方差分析(ANoVA)，组间两两比较用LSD法，所有数据均以(j±S)表示，残肾组织CD4和cDs4的表达与炎细胞浸润的相关分析用Pearson法，P＜0.05为有统计学意义。
结果1尿蛋白、血生化指标见表1。
表1

注与假手术组比较，P＜0.01；与模型组比较，P＜0.012各组大鼠肾脏病理改变3模型组肾组织出现肾小球系膜增殖，局灶节段性肾小硬化，间质有较多炎细胞的浸润，部分肾小球扩张，可见蛋白管型。阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗组肾小球硬化和间质纤维化程度以及间质炎细胞的浸润比，模型组明显减轻。见表2。
表2

注与假手术组比较，P＜0.01；与模型组比较，P＜0.014免疫组化检测CD44和CD54的表达假手术组肾小管上皮细胞有CD44、CD54的弱阳性表达，模型组肾小球及肾小管间质都呈阳性表达，而阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物组治疗以后CD44和CD54的表达明显减少。见表3。
表3

注与假手术组比较，P＜0.01；与模型组比较，P＜0.014残肾组织CD44和CD54与炎细胞浸润的相关分析5/6肾切除残肾组织CD44的表达与肾间质炎细胞的浸润相关(r＝0.758)，CD 4的表达与肾间质炎细胞的浸润相关(r＝0.706)。
讨论Romero等证明了5/6肾切除为经典的肾小球进行性硬化和慢性肾衰竭模型。
本研究中，大鼠在5/6肾切除术后12周尿蛋白排泄明显增加，肾功能恶化，残肾病理改变为肾小球硬化和间质纤维化，成功建立了慢性肾衰竭模型。
免疫组织化学染色显示，假手术组肾小球和小管间质的局部有CD44、CD54的弱阳性表达。5/6肾切除组CD44、CD54表达明显增加，且CD44和CD54表达与肾间质炎细胞的浸润相关(r＝0.758，r＝0.706)。研究表明肾组织浸润的炎细胞尤其是单核巨噬细胞释放炎症介质和细胞因子如IL-1、TNF-α、血小板源性生长因子(PDGF)、TGF-β可以导致肾小球和小管间质的损伤，加快肾小球硬化及肾间质纤维化的进程。CD44和CD54的表达与肾间质炎细胞浸润相关说明它可能促进炎细胞向肾组织浸润从而造成肾脏损伤。本研究给予阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗12周后，大鼠的肾功能改善，残肾组织病理常规提示肾小球硬化程度及数目明显减少，系膜细胞增殖及系膜基质加宽改善，肾小管扩张或萎缩性变化趋于好转，管腔蛋白管型形成减少，小管间质炎细胞浸润改善。免疫组化结果提示治疗后残肾组织中的CD44和CD54的表达与对照组相比明显下调。
总之，通过上述可能的机制，在应用本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物复方药物后，5/6肾切除残肾组织CD44和CD54的表达明显减少，残肾纤维化的程度减轻，尿蛋白减少，BUN和血肌酐亦明显降低。表明本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物能在该模型中对肾脏有明显保护作用。
二，本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物延缓大鼠5/6肾切除慢性肾功能衰竭的实验研究慢性肾脏疾病(CKD)进程中常伴有肌成纤维细胞(Myo-FB)生成增多。Myo-FB是肾间质纤维化细胞外基质(ECM)沉积的主要原因。研究证实Myo-FB可由肾小管上皮细胞转分化而来，还可能来源于血管周围平滑肌细胞的迁移、局部增生、成纤维细胞转分化。慢性肾功能衰竭(CRF)进程中伴有内皮素-1(ET-1)合成及ET-1mRNA表达增多。内皮素可收缩肾血管，引起肾脏缺血、缺氧，还可刺激肾小球系膜细胞增殖和肾小管上皮细胞分化；内皮素受体拮抗剂可延缓肾功能衰竭的进展。阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物是新型的非肽类内皮素受体拮抗剂，是中药当归、川芎中的有效成分，可减少ET生成；其苯烯基可与ET结合，拮抗ET的病理生理作用。本实验采用5/6肾切除诱导大鼠慢性肾功能衰竭模型，观察阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物对CRF的作用及机制，为临床上应用本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗CRF提供实验依据。
1.材料与方法1.1动物 雄性Wistar大鼠，6～8周龄，体重200±20g，由四川大学华西医学中心实验动物中心提供。
1.2药物及试剂 本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物，由本申请人提供，科素亚，杭州默沙东公司。苏木素一伊红(HE)。α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)鼠单克隆抗体(1∶200)，增殖细胞核抗原(PCNA)鼠单克隆抗体(Pc10，1∶100)，兔抗鼠内皮素-1(ET-1)单克隆抗体(1∶100)，小鼠抗大鼠IgG(1∶100)，二甲基邻苯二胺(DAB)显色试剂盒(1∶100)，均购自武汉博士德公司。SP试剂盒辣根酶标记链霉卵白素工作液(1∶100)，北京中山生物技术公司。PBS液为自配3％溶液。
1.3仪器 格兰氏微波炉。日立7170A型自动生化分析仪。奥林巴斯光学显微镜。切片机。
1.4分组、建模及给药 实验共分5组假手术组、5/6肾切除组、阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物灌胃组和科素亚组。每组18只大鼠。动物适应环境后，用5％水合氯醛皮下注射麻醉大鼠，开腹，分离右肾，切除上下极，明胶海绵止血，关腹。1周后切除左肾。假手术组同期行两次手术，每次仅打开腹腔暴露肾脏，关腹。各组术后予青霉素预防感染3d。治疗组予阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物300mg/kg或科素亚20mg/kg，灌胃。假手术组和5/6肾切除组每天予等剂量的自来水灌胃。
1.5标本采集 造模后于第4、8、12周，每组随机选取6只大鼠处死。处死前将大鼠置于代谢笼中，收集24h尿液，称量大鼠体重。水合氯醛麻醉大鼠，心脏穿刺取血，切除残肾备用。血液收集后经离心，分离出血清。血清及尿液均保存于一20℃冰箱，待所有标本收集完后一次性检测。
1.6检测指标1.6.1血、尿生化指标 血肌酐测定采用去蛋白苦味酸比色法；尿蛋白测定采用磺硫酸比浊法。
1.6.2病理指标 经10％中性福尔马林固定后的肾组织经脱水、包埋，切成4μm厚石蜡切片。做HE染色，200倍光镜下观察肾小球硬化及问质损害程度。
肾小球硬化程度采用Raij等的半定量法，肾小球硬化定义为毛细血管管腔塌陷和(或)玻璃样变，每张切片至少观察50个肾小球。病度程度分0～3级0级，一，正常或病变面积＜25％；1级，+，病变面积25％～50％；2级，++，病变面积50％～75％；3级，卅，病变面积＞75％。肾小球硬化指数(GSI)的计算采用公式GSI＝[(1×n1+2×n2+3×n3)/每片肾小球总数]×100％(n1表示评分为1级的肾小球个数，n2表示评分为2级的肾小球个数，n3表示评分为3级的肾小球个数)。
问质病理损害程度的评定根据肾小管扩张、肾小管萎缩、肾小管上皮细胞空泡变性、肾小管上皮细胞坏死、问质纤维化及肾间质炎症细胞浸润程度分为0～3级0级，一，正常或病变面积＜25％；1级，+，病变面积25％～50％；2级，++，病变面积50％～75％；3级，卅，病变面积＞75％。
1.6.3d-平滑肌肌动蛋白(d-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、ET-1的表达采用免疫组织化学染色法检测。免疫组织化学染色按试剂盒说明进行。肾组织免疫组织化学染色评定采用Floege半定量法。按染色区和染色强度分为0～4级0级，无染色或染色极弱；1级，局部弱染色，染色区＜25％；2级，局部染色趋强，染色区25％～49％；3级，染色区50％～75％；4级，染色区＞75％。
1.7数据处理 数据用x±s表示，结果采用SPSS10.0统计软件处理。组间差异采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，计数资料用秩和检验。各指标之问的关系判断用Pearson单因素相关分析。
2结果2.1血肌酐、尿蛋白变化 5/6肾切除组术后4、8、12周尿蛋白、血肌酐水平较假手术组明显增加(P＜0.05)，本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗组和科素亚治疗组尿蛋白、血肌酐水平较5/6肾切除组显著降低(P＜0.05)。阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗组与科素亚治疗组比较，血肌酐、尿蛋白水平无显著性差异(P＞0.05)。见表3。
2.2肾脏病理改变 5/6肾切除组早期即出现肾小球硬化及间质损害，随着时间延长，肾小球硬化及间质损害程度逐渐加重，12周时GSI达184.67±6.11，间质损害程度达++——+++者为83.33％。本发明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物组和科素亚治疗组肾小球硬化较5/6肾切除组明显减轻(P＜0.05)。阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗组和科素亚治疗组肾小球硬化及间质损害程度无显著性差异(P＞0.05)。见表4。
表3 5/6肾切除、阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物和科素亚治疗对大鼠血肌酐及尿蛋白的影响(-x±s，n＝6)


注与假手术组比较，P＜0.05；与5/6肾切除组比较，P＜0.05。
表4 5/6肾切除、阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物和科素亚治疗观察大鼠肾小球硬化(-x±s)及间质损害程度(n＝6)


注与假手术组比较，P＜0.05；与5/6肾切除组比较，P＜0.052.3残肾组织Ot-SMA、PCNA、ET-1表达的变化成 免疫组织化学染色显示，5/6肾切除组残肾组织中α-SMA、PCNA、ET-1表达较假手术组明显增多(P＜0.05)；阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物和科素亚治疗组残肾组织中α-SMA、PCNA表达较5/6肾切除组明显减少(P＜0.05)；阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗组ET-1表达较5/6肾切除组明显减少(P＜0.05)；科素亚组ET-1表达与5/6肾切除组比无明显差异(P＞0.05)。见表5。
表5 5/6肾切除、阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物和科素亚治疗大鼠残肾组织中α-SMA、PCNA、ET-1表达的变化(x±s.n＝6)


注与假手术组比较，P＜0.05；与5/6肾切除组比较，P＜0.05。
2.4GSI、Ot-SMA、PCNA、ET-1表达与血肌酐24h尿蛋白定量与GSI和PCNA、Ot-SMA、ET-1水平、尿蛋白相关性分析GSI与PCNA、α-SMA、ET-1表达百分数呈正相关(R分别为0.612、0.894、0.924，P＜0.001)；血肌酐水平、24h尿蛋白定量与GSI与PCNA、α-SMA、ET-1表达百分数呈正相关(P＜0.001)。ET-1表达与PCNA、α-SMA表达百分数呈正相关(R分别为0.898、0.881，P＜0.001)。
3讨论肾间质纤维化(RIF)是多种肾脏疾病发展至终末期肾功能衰竭的共同通路。RIF时可见肾小管上皮细胞转分化成具有特异性标志物-α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性的Myo-Fb，这种细胞增殖能力增强，同时产生大量ECM，是ECM积聚的主要原因。研究表明，Myo-Fb有部分是由肾小管上皮细胞转分化而来。如何阻止或逆转肾小管上皮细胞转分化，为临床防治肾纤维化提出了新课题。
α-SMA表达水平与肌成纤维细胞数量呈正相关。增多的肌成纤维细胞可能来源于小管上皮细胞转分化，肌成纤维细胞的数量与肾功能损害程度明显相关。本实验显示，5/6肾切除组小管间质、系膜区α-SMA表达增多，随着病程进展，α-SMA表达逐渐增多，说明5/6肾切除组肌成纤维细胞数量增多，这一结果与文献报道一致。
PCNA表达水平反映了细胞增殖的程度。本实验中5/6肾切除组于肾小管间质区、系膜区表达PCNA的细胞数增多，说明该组间质细胞增殖明显。本实验结果中α-SMA、PCNA表达与GSI、血肌酐水平、24h尿蛋白定量呈正相关，表明肌成纤维细胞数量、间质细胞增殖在肾纤维化及肾功能损害中起着重要的作用。
ET是迄今发现的缩血管性最强的肽类物质，亦是细胞有丝分裂激动剂；ET水平升高在CRF进行性肾小球硬化中起着重要作用。ET释放增加，启动了肾小球系膜细胞增殖和ECM的超量合成；ET可降低肾血流量和肾小球滤过率，促进肾小球硬化及CRF的进展。Oriso S等发现，CRF时肾局部ET-mRNA表达增强，ET合成增加，导致血中ET水平增高，而肾损害时ET受体也增加，这增加了肾脏对ET的敏感性。ET能促进系膜细胞的分裂，促进其合成ECM。研究发现，使用ET受体拮抗剂可拮抗ET的生物学作用，其作用呈剂量依赖性。本实验中，5/6肾切除组ET-1表达升高，α-SMA表达百分数、PCNA表达百分数与ET-1表达百分数呈正相关，表明ET-1合成、分泌的多少与肌成纤维细胞数量、肾间质细胞增殖有关系，ET-1介导了肌成纤维细胞生成、促进了细胞增殖。
CRF非透析治疗的根本在于保护残存肾单位，尽早地采取干预措施延缓CRF的进展。本研究显示，阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物和科素亚治疗组残肾肾小球硬化受到明显抑制，肾间质损害减轻，血肌酐水平降低，尿蛋白减少，表明阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物和科素亚均能抑制肾小球硬化和肾纤维化，保护肾功能。科素亚是血管紧张素II(Ang II)受体I拮抗剂，它从受体水平选择性地抑制Ang II，延缓肾小球硬化的进展，保护肾功能。阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物与科素亚作用机理不同，阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物是中药川芎、当归的主要成分，其结构为3-甲氧基-4-羟基-苯丙烯酸。阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物的酚羟结构可与ET结合，拮抗ET的病理生理作用。本实验结果显示，阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物可抑制ET-1合成及分泌，抑制肌成纤维细胞生成和间质细胞增殖。
阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物除了通过上述机制抑制肾小球硬化和肾纤维化外，可能还通过以下途径保护肾功能，阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物的苯烯结构可与已生成的ET结合，阻止ET与其受体结合，使ET不能发挥生物学功能；阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物的酚羟结构可清除自由基，阻止自由基对组织的损伤；阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物是一种有效的活血化瘀药物，可提高红细胞的变形能力，增加局部组织供氧，改善肾组织的缺氧状态，减少炎症介质生成，提高局部组织抗损伤能力；阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物还具有免疫调节功能，提高机体抗损伤的能力。
本研究结果显示，在肾纤维化的过程中，肌成纤维细胞起着重要的作用。阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物与科素亚均可抑制肾小球硬化和肾间质纤维化，降低血肌酐水平、减少尿蛋白生成。阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物可能通过抑制ET-1合成及分泌，抑制肾小球硬化和肾间质纤维化，保护肾功能。
三，阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗轻中度慢性肾衰竭的临床观察慢性肾衰竭(chronic renal failure，CRF)是各种原因所慢性肾脏损害进行性恶化的结果，治疗方面十分棘手。一般强调在轻中度肾衰竭及时治疗，以减轻病人症状，提高生存质量，延缓病情进展，延迟进入尿毒症期为主要目的。应用内皮素受体拮抗剂阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物治疗轻中度慢性肾衰竭患者，观察治疗前后肾功能、血红蛋白、白蛋白及血脂的变化，疗效满意，报告如下资料与方法1研究对象 87例CRF患者均为住院病人，均排除急性肾衰竭的可能，符合CRF的诊断，血肌酐(Scr)＞133μmol/L且＜442μmol/L。其中男42例，女45例；年龄19岁～82岁，平均(45±19.5)岁；病程2个月～38年，平均(8.0±4，6)年。对照组43例，男21例，女22例；慢性肾炎19例，糖尿病11例，高血压病13例。治疗组44例，男21例，女23例；慢性肾炎18例，糖尿病肾病10例，高血压肾病16例。两组临床资料相似，具有可比性(P＜0，05)。
2治疗方法对照组患者给予低盐低磷优质低蛋白饮食及常规治疗，如降血压、纠正电解质紊乱酸碱失衡、利尿等，治疗组患者在此基础上给予阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物，900mg，Tid，30d为1疗程。
3检测内容及指标 治疗前后分别检测尿素氮(BuN)、Scr、内生肌酐清除率(Ccr)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、血浆白蛋白(Hb)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)等项日，并随访1月，严密观察，以评估其不良反应及副作用。
4统计学方法 实验数据均以(-x±s)表示。治疗前后比较采用自身配对t检验，两组间比较采用方差分析，P＜0，05为有统计学意义。
结果1临床疗效标准 依据1987年全国肾衰保守疗法专题学术会议拟定标准显效临床症状减轻或消失，血肌酐下降≥30％；有效临床症状减轻或消失，血肌酐下降≥20％；无效不符合显效或无效判定标准者。
2检测指标的变化 两组治疗前后BUN、Scr、Ccr、RBC、Hb、Alb、TC、TG的变化见表1。
表6两组治疗前后BUN、Scr、Ccr、RBC、Hb、Alb、TC、TG的变化(-x±S)


注与治疗前比较.P＜0.053临床疗效统计 见表7。治疗组疗效显著优于对照组(P＜0.05)。
表7两组临床疗效统计例(％)

注与对照组比较，P＜0.054不良反应及副作用 治疗中及治疗后随访1月未发现任何不良反应及毒副作用。
讨论内皮素(ET)是一类由21个氨基酸组成的作用强大的缩血管多肽。近年来，ET在肾脏疾病的病理生理过程中的作用越来越受到人们的重视。现已知ET有ET-1、ET-2、ET-3三种异构体，生理学效应ET-1最强，是迄今发现的最强的血管收缩剂。ET-1在人体的分布是最广泛的，同时也是血浆中主要的内皮素形式。
ET在正常情况及病理生理状态下均可产生，在人体血浆及尿中均能检测到，对肾脏生理功能及慢性肾脏疾病进展均有重要作用。(1)ET对血流动力学的影响ET对血管有强大的收缩作用，而肾血管对ET的反应尤为敏感。ET对肾小球出球小动脉的收缩作用强于人球小动脉，且不能被血管紧张素转换酶抑制剂所阻断，从而使肾小球毛细血管内压升高，还可收缩肾小球系膜细胞，使肾小球滤过面积和超滤系数(Kf)减少，并可剂量依赖性的减少肾血流量(RPF)，降低肾小球滤过率。(2)ET对系膜细胞(MC)功能的调节ET-1以自分泌和旁分泌的形式结合于MC上不同的受体，激活各种信号传递系统，引起各种短期或长期效应，包括直接引起MC收缩和分泌前列腺素类物质，刺激MC的增殖，增加细胞外基质(ECM)蛋白基因的表达，促进ECM成分堆积。(3)ET对肾小管功能的作用动物实验表明ET-1可改变肾小球基底膜通透性，增加肾近曲小管上皮细胞管腔侧的Na-HCO3交换及基底侧的Na-HCO3一协同转运，在内髓集合管强烈抑制精氨酸加压素的cAMP积聚和Na-K-ATP酶活性。(4)其他ET-1还有促进血管平滑肌及肾髓质问质细胞增殖及间质纤维化，直接或间接刺激醛固酮分泌，影响肾素活性、参与应激及促炎症作用。
实验研究发现5/6肾切除大鼠术后8周尿蛋白量进行性增高，Ccr降低伴肾皮质ET-1mRNA及ETA受体mRNA表达增加。Brochu等提出肾衰竭大鼠与其血浆ET-1增多有关。许多临床研究证实CRF患者血浆ET-1水平明显高于正常，且随着肾功能减退而进行性升高，与Scr、BUN、平均动脉压呈明显正相关。BrOhta等认为尿中ET是肾小管损伤的标志之一。余学清等发现CRF患者尿中ET含量明显升高，表明CRF时肾脏ET合成和分泌增多，同时还发现尿中ET与尿NAG、MG、LYS有明显相关关系，因而认为尿中ET的增多可能与肾小管的损伤有一定关系。CRF患者血尿及肾组织ET水平升高，升高的ET进一步改变肾脏血流动力学，使MC增殖，加快肾间质纤维化和肾小球硬化，恶化肾功能。
阿魏酸是一类新的非肽类内皮素受体拮抗剂，其化学成分是3-甲氧基-4羟基-苯丙烯酸，可拮抗ET-1的致收缩和致增殖效应，可竞争性拈抗ET-1与其受体的结合，阻断球内系膜细胞、血管平滑肌细胞的收缩和增殖，抑制系膜细胞合成ECM，同时具有保护血管内皮、调节血管舒缩功能、平衡凝血纤溶机制的作用及抗血小板活性和抗炎、调节免疫等多种药理作用，具有与国外内皮素受体拮抗剂Bosentan极其相似的药理特性。系统的氨基酸(aa)取代实验表明，第8、10、11、13、14、21位对于ET和内皮素受体(ETA R)的结合是必不可缺的。阿魏酸具有与第13(Tyr)和第14(Phe)位高度相似的结构，只是以苯烯双键代替了后两者相应位的单键，从而竞争性抑制了ET与ETR结合的位点。
通过阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物对44例CRF治疗前后的临床观察比较，发现阿魏酸钠阿魏酸哌嗪复方药物可有效保护肾功能，改善贫血、低蛋白血症、高脂血症，延缓慢性肾衰竭的进展，疗效优于单纯西药组，且无明显毒副作用，为临床治疗慢性肾衰竭提供了一条新的有效途径。
四，本发明阿魏酸哌嗪阿魏酸钠复方药物联合治疗糖尿病肾病的报告1.临床资料和方法1.1对象60例糖尿病肾病患者，年龄40-68岁，均合并蛋白尿，尿蛋白定量0.86-7.47/24h；不伴有糖尿病急性代谢紊乱、泌尿系统及严重心、肝、脑疾病。
1.2方法60例早期糖尿病患者随机分为两组，常规治疗组稿30例，年龄40-63岁，病程度3.1-9.5年，给予常规降血糖治疗；阿魏酸哌嗪阿魏酸钠复方药物联合组，年龄40-68岁，在常规降血糖治疗的同时给予阿魏酸钠阿魏酸哌嗪300mg/次，口服，Tid，15天为一个疗程，共2个疗程。以上两组的性别和年龄具有可比性。
1.3观察项目治疗前后的空腹血糖、糖化血红蛋白、血清血红蛋白、血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白、尿白蛋白及尿ET-1。
1.4统计学处理实验数据以(x±s)表示。用SAS6.12统计软件进行治疗前后、组间差异t检验。P＜0.05有显著性差异。
2.结果2.1两组治疗前后血糖、血脂变化，见表8。
表8

P＜0.05与治疗前比较 △P＜0.05与A组比较(t检验)2.2两组治疗前后HbAIC、UA、ET-1变化，见表2。
表9

P＜0.05与治疗前比较 △P＜0.05与A组比较(t检验)3.讨论糖尿病肾病是糖尿病严重的微血管慢性并发症，在2型糖尿病患者中，随着年龄增加及病程延长糖尿病肾病的危险性也随之增加，发病10年后累积发病率为25-50％。糖尿病肾病的发病机理是多因素综合作用的结果。而ET-1在糖尿病肾病的发生发展过程中起重要的作用，尤其是ET-1不仅干扰血糖代谢，加剧患者的糖代谢紊乱，而且还是最强的缩血管活性肽，引起收缩效应与促增殖效应，导致肾脏血流动力学改变(早期高过滤逐渐至肾小球过滤下降)和系膜增生、细胞外基质形成、刺激肿瘤坏死因子-α(transforming growth factor--αTNF-α)等生长因子合成释放，逐渐致肾小球硬化及其他肾结构破坏。
本组资料中两组糖尿病肾病患者治疗后FPG、HbAIC水平均较治疗前有显著降低。阿魏酸哌嗪阿魏酸钠复方药物联合组在常规降血糖治疗基础上，治疗后的FPG、HbAIC水平比较无显著性差异，表明阿魏酸哌嗪阿魏酸钠复方药物联合组无改善血糖的作用，但UA较治疗前显著下降，而常规治疗组UA与治疗前比较无显著性差异，表明阿魏酸哌嗪阿魏酸复方药物钠联合组具有降低肾脏尿微量白蛋白的排泄，使早期糖尿病肾病得以改善的作用。同时，经阿魏酸哌嗪阿魏酸钠复方药物联合组治疗后血清TG和TC均显著降低，而且HDL显著增高，对于2型糖尿病肾病患者脂代谢的改善非常有益。
具体实施例方式本发明阿魏酸哌嗪阿魏酸钠治疗肾病的复方药物实施例见表10。
表10 采用常规的方法将上述各实施例药物制成片剂、颗粒剂、胶囊剂或其它剂型。
上述实施例是对本发明的上述内容作进一步的说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于上述实施例。凡基于上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
权利要求
1.治疗肾病的复方药物，由下列重量份的原料制成阿魏酸钠0.5～1.5，阿魏酸哌嗪 1～3，淀粉0.3～0.5，白糖粉 0.3～0.5，糊精0.1～0.3。
2.如权利要求1所述的治疗肾病的复方药物，其特征在于由下列重量份的原料制成阿魏酸钠1，阿魏酸哌嗪 2，淀粉0.4，白糖粉 0.4，糊精0.2。
3.如权利要求1或2所述的治疗肾病的复方药物，其特征在于所述的药物剂型为片剂或颗粒剂或胶囊剂。
全文摘要
本发明治疗肾病的复方药物，由下列重量份的原料制成阿魏酸钠0.5～1.5，阿魏酸哌嗪1～3，淀粉0.3～0.5，白糖粉0.3～0.5，糊精0.1～0.3。本发明复方药物能早期降低微量白蛋白尿和蛋白尿，中晚期抗肾脏纤维化，能增强治疗肾小球疾病，安全有效，便于携带，服用方便。
文档编号A61K9/48GK1903202SQ200610021579
公开日2007年1月31日 申请日期2006年8月11日 优先权日2006年8月11日
发明者罗凡, 唐楷 申请人:四川亨达药业经营有限公司