专利名称：一种治疗糖尿病肾病的药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别是涉及一种治疗糖尿病肾病的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(diabetes mellitus，DM)常见的微血管并发症，是导致终末期肾病(ESRD)的主要原因，也是糖尿病导致死亡的主要因素，在欧美已成为导致终末期肾病的首要原因。在我国，糖尿病患者达4000万，其中约20～30％进展为DN，严重危害人类健康，近年来随着糖尿病的日益流行，DN发病率也呈迅速增长，成为目前的研究热点之一。肾小球基底膜增厚及系膜区细胞外基质(extraeellular matrix，ECM)进行性积聚导致的结节性或弥漫性肾小球硬化是其主要的特征性病理改变，因此又称糖尿病肾小球硬化症。研究发现DN的发生可能与生化代谢紊乱(多元醇途径、蛋白质非酶糖化及脂质代谢异常等)，蛋白激酶C活化、糖基化终末产物沉积，多种细胞因子异常分泌、肾小球血流动力学异常、氧化应激及遗传等多种因素密切相关。但是，对DN发病机理尚不完全清楚， 西医治疗糖尿病肾病主要采取降糖、降脂、血管紧张素转化酶抑制剂及血管紧张素受体阻断剂等药物进行治疗，这些治疗药物虽然对DN有一定疗效，可以延缓病情发展，但疗效并不十分理想，而且药物的不良反应较多，患者仍然会不可避免地发展至慢性肾衰，导致透析或死亡。中医药在DN的治疗中依据传统中医理论，根据患者具体病情进行辨证论治，具有明显特色与优势，本发明提取物以益气养阴，活血化瘀为主要治则，吸收与总结名老中医经验，通过长期临床实践而研制，对于DN有良好疗效。
发明内容
本发明目的在于提供一种治疗糖尿病肾病的药物组合物。
本发明目的在于提供一种治疗糖尿病肾病的药物组合物的制备方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的 本发明所述一种治疗糖尿病肾病的药物组合物是由如下原料药制成的 黄芪200-400重量份，生地50-200重量份，三七6-60重量份，制大黄20-100重量份，卫矛80-280重量份，山萸肉40-150重量份，枳壳30-180重量份。
上述治疗糖尿病肾病的药物组合物优选如下原料药制成的 黄芪250-350重量份，生地80-160重量份，三七10-50重量份，制大黄30-90重量份，卫矛100-200重量份，山萸肉60-120重量份，枳壳50-150重量份。
更优选地，本发明药物组合物是由如下原料药制成的 黄芪300重量份，生地120重量份，三七30重量份，制大黄60重量份，卫矛150重量份，山萸肉90重量份，枳壳100重量份。
更优选地，本发明药物组合物是由如下原料药制成的 黄芪260重量份，生地150重量份，三七20重量份，制大黄80重量份，卫矛120重量份，山萸肉110重量份，枳壳60重量份。
更优选地，本发明药物组合物是由如下原料药制成的 黄芪340重量份，生地90重量份，三七50重量份，制大黄40重量份，卫矛180重量份，山萸肉70重量份，枳壳140重量份。
卫矛记载于1963年药典一部。
本发明还提供了上述中药组合物制剂的制备方法，该方法为原料药按上述比例经常规工艺方法提取后加入药学可接受的辅料制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液或滴丸剂；所述常规工艺方法包括水提取或醇提取或先水提取再醇提取或先醇提取后再水提取，经上述常规提取后还可以过大孔树脂柱进一步富集有效成分；上述常规工艺水提取方法可以为提取1-4次，每次0.5-3小时，每次加水8-30重量倍；上述常规工艺醇提取方法可以为提取1-4次，每次提取0.5-2小时，每次加5-100％乙醇4-15重量倍；所述过大孔树脂柱方法为水提取或醇提取液滤过，滤液通过大孔树脂，先用4-6倍量水或20％以下浓度的乙醇洗脱，洗脱液弃取，再用10-90％乙醇1-10倍洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得纯化提取液。
优选地，本发明提供该药物组合物制备方法为黄芪、生地、三七、制大黄、卫矛、山萸肉、枳壳七味药加水煎煮1-3次，每次加水8-12倍量，煎煮0.5-2小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩得稠膏；按照常规工艺，加入常规辅料制成丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂等剂型。
更优选地，本发明药物组合物制备方法为黄芪、生地、三七、制大黄、卫矛、山萸肉、枳壳七味药加水煎煮2次，每次加水10倍量，煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩得稠膏。按照常规工艺，加入常规辅料制成丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂、注射剂等剂型。
上述药学可接受的辅料为填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括甜味剂及各种香精；防腐剂包括尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括PEG6000，PEG4000，虫蜡等。
本发明还提供上述中药组合物在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。所述治疗糖尿病为治疗1型或2型糖尿病。
下述实验例及实施例对本发明做进一步解释，但不构成本发明的限制。实验例1本发明药物组合物治疗1型糖尿病肾病的疗效研究 一、材料及方法 1实验动物 Wistar大鼠60只，SPF级，雄性，8周龄，体重180～220g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号SCXK(京)2007-0001.饲养于中日友好医院动物室屏障系统，许可证号SYXK(京)2005-0019.实验期间，大鼠给予普通饲料(中国医学科学院实验动物研究所提供)，自由饮水、进食. 2实验药物 本发明药物组合物制备为本发明提取物的方法为黄芪300g，生地120g，三七30g，制大黄60g，卫矛150g，山萸肉90g，枳壳100g加水煎煮3次，每次加10倍量，煎煮1小时，合并提取液，减压浓缩得稠膏，干燥，粉碎，得干粉；以蒸馏水按1.33g/kg和2.67g/kg的给药剂量配制成两种不同浓度的溶液，4℃保存，有效期3天，灌胃给药前取出放置至室温。
蒙诺片(福辛普利钠片，中美合资上海施贵宝制药有限公司，10mg/片×14片/盒，批号0704091)，使用时将药片研为细粉，用蒸馏水按0.833mg/kg的给药剂量配制成所需浓度的混悬液，4℃保存，有效期3天，灌胃给药前取出放置至室温。
3主要试剂 血糖试纸强生公司，批号2846475 考马斯亮蓝G250Sigma公司，批号128K1109 水合氯醛北京化学试剂公司，分析纯，批号T20070725 甲醛溶液国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号20080203 肌酐试剂盒北京北化康泰临床试剂公司，批号20071108 链脲佐菌素美国Sigma公司，批号060326 4实验动物模型的建立 60只动物购入后适应性喂养1周，进行基础状态测定，剔除血糖与尿蛋白异常的动物3只，其余动物先按体重随机分为假手术组和手术组，假手术组10只，手术组47只。
假手术组大鼠以3.3ml/kg腹腔注射10％水合氯醛麻醉，背部进行术前备皮，常规消毒，背部切口1～1.5cm，充分暴露右肾，剥离肾脏脂肪包膜，缝合切口。术后1周以4ml/kg的剂量腹腔注射0.1mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。
手术组大鼠麻醉、备皮及消毒处理同假手术组，背部切口1～1.5cm，暴露右肾，剥离肾脏脂肪及肾上腺，结扎右肾门血管，切除右肾，缝合切口。术后动物恢复1周后，按40mg/kg腹腔注射1％的链脲佐菌素，72小时后尾尖采血测血糖，以血糖高于16.7mmol/L做为模型成功标准。
5分组与给药 造模成功动物40只，按体重和血糖随机分为模型组，发明提取物大剂量组，发明提取物小剂量组和蒙诺组，具体分组与给药方案如下
各组大鼠分笼饲养，自由饮食进水，给药方式为灌胃给药，每日1次，于上午进行，连续给药20周。
6标本采集 造模后第0，4，8，12，16，20周，大鼠尾尖采血测血糖，同时将大鼠转入代谢笼内，禁食不禁水，收集24h尿液。于20周末禁食不禁水12h，以3.3ml/kg的剂量腹腔注射10％的水合氯醛麻醉动物，腹主动脉取血，分为两份，一份用EDTA抗凝管保存，一份离心后取血清，同时取出左肾，剥离肾包膜，纵剖为两片，取一片固定于10％中性甲醛溶液以进行组织病理学检查，另一片置液氮中保存。
7指标检测 7.1一般状态动物每周称体重，密切观察动物精神状态，反应性，毛发色泽，饮食及排泄状况。
7.2血生化指标用血糖仪测定各时间点血糖值，取血清，用全自动血生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。
7.3血液流变学指标用EDTA抗凝管保存的血浆用血液流变仪测定全血粘度(高切)、全血粘度(低切)及血浆粘度。
7.4尿蛋白/肌酐将各时间点收集的尿液以3000转/分离心10min，吸取上清，用考马斯亮蓝法检测尿蛋白浓度；苦味酸不除蛋白法检测尿肌酐浓度，计算尿蛋白/肌酐。
7.5组织病理学指标肾组织经10％福尔马林固定24h后，常规脱水，透明，石蜡包埋，经切片机分别切为3μm厚切片，进行PAS、Masson染色，光镜下观察肾组织病理学变化，并采用评分法对其进行半定量分析。
肾小球硬化指数每份样本在400倍光学显微镜下随机观察40个肾小球，根据肾小球损害程度进行半定量评分，正常肾小球记为0分，轻微肾小球损害，局部增生系膜基质和/或透明性变等硬化病变占整个小球25％以下记为1分，硬化病变占整个小球26～50％计为2分，51～75％记为3分，76～100％记为4分，肾小球硬化指数按下式计算 肾小球硬化指数＝(1×N1+2×N2+3×N3+4×N4)/(N0+N1+N2+N3+N4)Nx为肾小球硬化得分相应的肾小球的数目. 1.肾小管间质纤维化指数]每份标本100倍镜下随机观察不连续的10个肾小管间质视野，根据肾小管间质炎性细胞浸润、纤维化、肾小管扩张或萎缩及蛋白管型等损害程度，按照文献(1、Thallas-bonke V，Thorpe S R，Coughlan M T，et al.Inhibition of NADPH oxidase prevents advancedglycation end product-mediated damage in diabetic nephropathy througha protein kinase C-alpha-dependent pathway.[J].Diabetes，2008，57(2)460-469；2、Sebekova K，Eifert T，Klassen A，etal.Renal effects of S18886(Terutroban)，a TP receptor antagonist，in an experimental model of type 2 diabetes.[J].Diabetes，2007，56(4)968-974.)进行半定量评分，即小管间质无病变损伤为0分，上述病变轻度或相应视野区域＜25％者为1分，中度或相应视野区域为26％～50％者为2分，广泛或重度，相应视野区域＞50％者为3分。肾小管间质纤维化指数按下式计算 肾小管间质纤维化指数＝(1×N1+2×N2+3×N3)/(N0+N1+N2+N3)Nx为肾小管间质纤维化得分相应的视野区域数目。
8数据处理所有计量资料以均数±标准差(x±s)表示，应用统计软件SPSS13.0进行One-Way ANOVA单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验，P＜0.05表示组间差异有统计学意义。
二、实验结果 1一般状态 整个试验期间空白组大鼠精神状态良好，活动自如，反应灵敏，毛发有光泽，体重随实验时间稳步增长；模型组大鼠出现多饮多尿、多食，精神萎糜，反应迟钝，动作迟缓，毛发散乱无光泽，体型消瘦等症状，部分动物还出现局部溃疡，阴囊水肿及白内障等病理表现，体重从造模成功第0周开始与空白组比即有显著性差异，P＜0.01，随实验周期延长差异进一步加大，在实验结束第20周时体重差异达最高点，有3只动物因衰竭死亡；各给药组精神状况、活动及反应灵敏程度均明显优于模型组，且发明提取物小剂量组大鼠体重从实验第4周起至第20周与模型组相比显著增加，除第8周时P＜0.05外，其余时间点均为P＜0.01，发明提取物大剂量组和蒙诺组与模型组相比体重有增加趋势，但无统计学意义，实验过程中本发明组合物大剂量死亡1只，小剂量死亡2只，蒙诺组死亡1只。详细体重结果见附图1。
2.大鼠血糖的变化 造模成功后，即实验第0周模型组大鼠血糖与空白组相比显著升高(P＜0.01)，在之后的第4，8，12，16，20周各时间点均与空白组有极显著差异，均为P＜0.01；本发明组合物大、小剂量组及蒙诺组与模型组相比，血糖水平有降低趋势，但无统计学意义，实验结果见附图2。
3大鼠血脂水平的变化 由表1可见，与空白组比较，模型组血清TC(总胆固醇)与TG(甘油三酯)水平均显著升高(P＜0.01).本发明组合物大、小剂量组能显著降低模型组的TC与TG水平，蒙诺组TG水平与模型组相比有显著性差异，P＜0.05.而TC水平与模型组相比仅有降低趋势，而无显著性差异，表明本发明组合物在改善DN(糖尿病肾病)伴发的血脂紊乱方面效果优于蒙诺. 表1大鼠血脂水平的变化(x±s)
与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 4大鼠血液流变学指标的变化 各实验组大鼠全血粘度高切与低切均无显著性差异；模型组血浆粘度与空白组相比显著升高，P＜0.01，本发明组合物大剂量组能显著降低模型组大鼠的血浆粘度水平，P＜0.05，本发明组合物小剂量组和蒙诺组血浆粘度水平与模型组相比无统计学意义，结果见表2。
表2大鼠血液流变学指标的变化(x±s)
与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 5.大鼠尿蛋白/肌酐的变化 从附图3可以看出，与空白组比较，模型组尿蛋白/肌酐从实验第12周起开始显著升高(P＜0.01)，随实验周期的延长差异进一步加大，本发明组合物大剂量组和蒙诺组从第16周起能显著降低模型组的尿蛋白肌酐比值，均为P＜0.01，本发明组合物小剂量组在实验结束第20周时尿蛋白肌酐比值与模型组相比有显著性差异，P＜0.01。
6.大鼠血清总蛋白、白蛋白及肾功能的变化 各实验组血清总蛋白、白蛋白及肌酐水平无显著性差异，模型组血清尿素氮水平与空白组相比显著升高(P＜0.01)，各给药组对模型组大鼠血尿素氮水平无显著性影响，结果见表3。
表3大鼠血清蛋白及肾功能的变化(x±s)
与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 7.大鼠肾组织病理改变 空白组肾小球结构清晰，未见系膜基质增生及基底膜增厚，皮质和髓质肾小管结构正常，排列整齐，间质无炎症和纤维化。模型组大鼠肾脏明显增大，皮质变窄，髓质增宽。鲍曼氏囊囊壁明显增厚，肾小球球囊部分粘连，囊腔增大，肾小球内系膜基质中度至重度增生，呈弥漫性或结节状，基底膜增厚，部分区域出现局灶性肾小球硬化，肾小球毛细血管丛有分叶现象；皮质肾小管上皮细胞玻璃滴样和空泡变性，部分肾小管扩张，部分管腔内可见蛋白样物质或蛋白管型，肾小管上皮细胞脱落，微绒毛脱落，部分区域出现肾小管萎缩。髓质肾小管部分扩张或萎缩，间质可见散在或成片淋巴细胞和单核细胞浸润及纤维化。发明提取物大剂量组肾小球改变轻微，系膜轻度增生，少数皮质肾小管轻度扩张，皮质肾小管上皮细胞玻璃滴样和空泡变性较模型组明显减轻。少数散在髓质肾小管轻度扩张或萎缩，个别区域少量炎性细胞浸润，偶见蛋白管型，未见明显纤维化形成。发明提取物小剂量组与蒙诺组肾小球系膜轻至中度增生，部分肾小球球囊轻度粘连，少数肾小球有毛细血管分叶现象。皮质和髓质肾小管部分明显扩张，轻度灶状炎性细胞浸润，肾小管上皮细胞玻璃滴样和空泡变性程度界于模型组和发明提取物大剂量组之间，少数区域可见有小管萎缩。间质纤维化区域与模型组相比有所减轻，但没有发明提取物大剂量组改变明显(见附图4)。
8.肾组织病理评分结果 模型组大鼠肾小球硬化指数及肾小管纤维化指数与空白组相比显著升高，均为P＜0.01，本发明组合物大、小剂量组与蒙诺组均可显著降低模型组大鼠的肾小球硬化指数及肾小管纤维化指数，P＜0.01；结果见表4。
表4大鼠肾组织病理评分结果(x±s)
与模型组比，**P＜0.01 实验例2本发明药物组合物治疗2型糖尿病肾病的疗效研究 一、材料及方法 1.实验材料 1.1动物 雄性OLETF及LETO大鼠，SPF级，4周龄，体重90-110g，日本大冢制药有限公司德岛研究所惠赠；饲养于中日友好医院动物室屏障系统，许可证号SYXK(京)2005-0019。实验期间，大鼠给予普通饲料(中国医学科学院实验动物研究所提供)，自由饮水、进食。
1.2药物与试剂 本发明药物组合物制备为本发明药物组合物提取物的方法为黄芪300g，生地120g，三七30g，制大黄60g，卫矛150g，山萸肉90g，枳壳100g加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮1小时，合并提取液，减压浓缩得稠膏。干燥，粉碎，得干粉；以蒸馏水按1.60g/kg的给药剂量配制成溶液，4℃保存，有效期3天，灌胃给药前取出放置至室温。
蒙诺片(福辛普利钠片，中美合资上海施贵宝制药有限公司，10mg/片×14片/盒，批号0704091)，使用时将药片研为细粉，用蒸馏水按1.00mg/kg的给药剂量配制成所需浓度的混悬液，4℃保存，有效期3天，灌胃给药前取出放置至室温。
1.3主要试剂 同实验例1。
1.4主要溶液的配制 同实验例1。
1.5仪器 同实验例2。
2.实验方法 2.1分组与给药 大鼠适应性喂养2周后进行基础状态测定，将OLETF大鼠随机分为3组，LETO大鼠作为空白对照组，具体分组及给药剂量如下所示，各组动物从12周龄起进行灌胃给药，分别连续给药24周与44周。实验期间大鼠自由饮食饮水。
表5动物分组及给药情况
2.2标本采集 动物从给药开始每4周大鼠尾尖采血，测血糖值；将大鼠转入代谢笼内，收集24h尿液并记录尿量，进行24小时尿蛋白定量。给药24周空白组取10只，其余各组取7只，处死取材，进行各项指标测定；给药44周时各组剩余动物再行处死取材，取材前大鼠禁食不禁水12h，以3.33ml/kg剂量腹腔注射10％水合氯醛麻醉动物，腹主动脉取血分两份，一份用EDTA抗凝管保存，一份离心后取血清，备用；取左肾从肾门处纵剖为2片，一片固定于10％中性甲醛溶液，另一片置液氮中保存。
2.3指标检测 2.3.1一般状态 动物每周称体重，密切观察动物精神状态，反应性，毛发色泽，饮食及排泄状况。
2.3.224h尿蛋白定量 将各时间点收集的尿液混匀，取约1ml 3000r/min离心10min，取上清，用考马斯亮蓝法测定尿蛋白浓度；并根据动物24h尿量进行24h尿蛋白定量。
2.3.3血生化 用血糖仪测定各时间点血糖；取材血清用自动血生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。
2.3.4血液流变学指标 用EDTA抗凝管保存的血浆用血液流变仪测定全血粘度及血浆粘度。
2.3.5组织病理学 肾组织经10％福尔马林固定24h后，常规脱水，透明，石蜡包埋，经切片机分别切为3μm厚切片，进行PAS、Masson染色，光镜下观察肾组织病理学变化，并采用评分法对其进行半定量分析(同实验例1)。
3.统计学处理 所有计量资料以均数±标准差(x±s)表示，应用统计软件SPSS13.0进行One-Way ANOVA单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验，P＜0.05表示组间差异有统计学意义。
二、实验结果 1.一般状态 模型组动物从6周龄开始，体重与空白组相比即有显著性差异，随实验进行，动物出现多食，饮水量增加，肥胖，活动减少，毛发发黄，体重在40周龄时与空白组差异达最大，随后模型组与空白组体重差异减小，至52周龄时两组体重差异无统计学意义，但模型组动物状态较前期相比更差，毛发散乱，饮食与饮水量持续增加，尿量增加，少动，有2只动物出现溃疡，有3只动物死亡，发明提取物组在40，44及48周龄时与模型组相比体重显著降低。发明提取物与蒙诺组动物状态较模型组明显改善，发明提取物组死亡2只，蒙诺组死亡3只，结果见附图5。
2.大鼠血糖变化 模型组血糖水平与模型组比从6周龄起即显著升高，随实验周期的延长两组间血糖差异不断加大，至52周龄时差异达最高，发明提取物在52周龄和56周龄时对模型组血糖水平由显著降低作用，均为P＜0.01，而蒙诺组仅在52周龄时能显著降低模型组血糖水平，P＜0.05，表明发明提取物对模型大鼠糖代谢的改善作用优于蒙诺，结果见附图6。
3.大鼠24h尿蛋白变化 与空白组相比，模型组大鼠24h尿蛋白水平从6周龄起显著升高，且随时间推移不断升高，至56周龄实验结束时达到高峰，发明提取物组从36周龄起的各个时间点均能显著降低模型组大鼠24h尿蛋白，而蒙诺组在24周龄、36周龄和44周龄时有显著降低作用，其他时间点仅有降低趋势而无统计学差异，结果见附图7。
4.大鼠血脂水平的变化 模型组血清TC水平36周龄时与空白组相比无显著性差异，发明提取物组和蒙诺组对模型组TC无明显影响，56周龄时模型组血清TC水平与空白组相比显著升高，P＜0.01；发明提取物能显著降低模型组TC水平，P＜0.01，蒙诺组无降低趋势；在36周龄和56周龄两个时间点，模型组大鼠血清TG均显著升高，P＜0.01，蒙诺组在36周龄TG水平与模型组比显著降低，但在56周龄无统计学意义，发明提取物组对模型组大鼠TG水平仅有降低趋势，无统计学差异，结果见表6. 表6各实验组大鼠血脂的变化(x±s)
与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 5.大鼠血液流变学指标变化 各实验组在36周龄时全血粘度高切和全血粘度低切无显著性差异，56周龄时，模型组全血粘度高切、全血粘度低切与空白组相比显著升高，均为P＜0.01，发明提取物组能显著降低模型组大鼠全血粘度高切与全血粘度低切水平，蒙诺组对此两项指标无明显改善。模型组血浆粘度在36周龄和56周龄均显著高于空白组，均为P＜0.01，发明提取物组对模型组血浆粘度有显著降低作用，分别为P＜0.05，P＜0.01，蒙诺组血浆粘度与模型组比无明显差异，结果见表7。
表7各实验组大鼠血液流变学指标变化(x±s)
与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 6.大鼠血清总蛋白及白蛋白的变化 实验结果显示，各实验组大鼠在36周龄血清总蛋白和白蛋白水平无统计学差异，但模型组该两项指标有降低趋势。在56周龄时，模型组大鼠大鼠血清总蛋白与白蛋白水平与空白组相比显著降低，分别P＜0.01，P＜0.05；发明提取物组可显著升高模型组大鼠血清总蛋白与白蛋白水平，均为P＜0.01，蒙诺组仅有降低趋势，但无统计学意义，见表8。
表8各实验组大鼠血清总蛋白及白蛋白变化(x±s)
与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 7.大鼠肾功变化 由表9可以看出，36周龄时各实验组大鼠血清BUN无明显差异，56周龄时模型组BUN水平与空白组相比有显著性差异，P＜0.01，发明提取物组对模型组大鼠BUN仅有降低趋势，蒙诺组与模型组相比，BUN水平无差异。模型组血清肌酐水平在36周龄和56周龄均显著低于空白组，各给药组与模型组相比血清肌酐水平无显著性差异。
表9各实验组大鼠肾功变化(x±s)
与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 8.大鼠病理形态学改变 空白组肾小球结构清晰，肾小管结构正常，排列整齐，间质无炎症和纤维化。模型组大鼠在36周龄时鲍曼氏囊囊壁明显增厚，肾小球内系膜基质中度增生，呈弥漫性或结节状，基底膜增厚，部分区域出现局灶性肾小球硬化，皮质肾小管上皮细胞玻璃滴样和空泡变性，部分肾小管扩张或萎缩，管腔内可见蛋白样物质或蛋白管型，间质可见散在淋巴细胞和单核细胞浸润及纤维化。发明提取物组与蒙诺组肾小球改变轻微，系膜轻度增生，少数皮质肾小管轻度扩张，少数散在髓质肾小管轻度扩张或萎缩，个别区域少量炎性细胞浸润，偶见蛋白管型。56周龄时模型组肾小球系膜基质重度增生，出现弥漫型肾小球硬化，鲍曼氏囊增厚非常显著，肾小球纤维蛋白帽形成，多数区域出现肾小管明显扩张，萎缩，严重者出现坏死，蛋白管型多见，出现成片的炎性细胞浸润及纤维化，与36周龄相比，肾组织病变加重明显，发明提取物组与蒙诺组病变与模型组相比明显减轻(见附图8)。
9.大鼠肾组织病理评分结果 与空白组相比，模型组大鼠肾小球硬化指数在36周龄时即有显著性差异，P＜0.01，到56周龄时差异进一步加大，发明提取物组、蒙诺组与模型组比肾小球硬化指数显著降低，均为P＜0.01；模型组肾小管间质纤维化指数在36周龄和56周龄均明显高于空白组，且56周龄时的差异要大于36周龄，在36周龄和56周龄发明提取物组肾小球硬化指数与模型组相比均显著降低，P＜0.05，蒙诺组仅有降低趋势，但无统计学意义。
表10各实验组大鼠肾组织病理评分结果(x±s)
与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01
图1治疗1型糖尿病大鼠体重的变化结果，与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 图2治疗1型糖尿病大鼠血糖的变化，与模型组比，**P＜0.01 图3大鼠尿蛋白/肌酐的变化与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 图4各实验组肾脏病理改变(肾小管间质病理改变)，第一组4张照片为PAS，400倍；第二组4张照片为PAS，200倍； 图5治疗2型糖尿病大鼠体重的变化结果与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 图6治疗2型糖尿病大鼠血糖的变化与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01 图7大鼠尿蛋白变化，*P＜0.05，**P＜0.01 图8各实验组肾脏病理改变(肾小管间质病理改变)，第一组4张照片为36周龄肾小球病理改变PAS，400倍；第二组4张照片为36周龄肾小管间质病理改变PAS，200倍；第三组4张照片为56周龄肾小球病理改变PAS，400倍；第四组4张照片为56周龄肾小管间质病理改变PAS，200倍。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施例方式 实施例1 黄芪300g，生地120g，三七30g，制大黄60g，卫矛150g，山萸肉90g，枳壳100g加水煎煮3次，每次加8倍量，煎煮0.5小时，合并提取液，减压浓缩得稠膏，干燥，粉碎，得干粉，加入1.4倍量的糊精，混匀，加75％乙醇适量制粒，干燥，制成颗粒剂，口服一次8g，每日2次。
实施例2 黄芪260g，生地150g，三七20g，制大黄80g，卫矛120g，山萸肉120g，枳壳60g加12倍量水煎煮1次，煎煮1.5小时，合并提取液，减压浓缩得稠膏，干燥，粉碎，得干粉，加入适量辅料，制成片剂，口服每日3次，每次3-6片。
实施例3 黄芪350g，生地90g，三七50g，制大黄40g，卫矛180g，山萸肉60g，枳壳140g加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮1小时，合并提取液，减压浓缩得稠膏，干燥，粉碎，得干粉，加入适当辅料，制成软胶囊，口服每次2-4粒，每日3次. 实施例4 黄芪250g，生地80g，三七20g，制大黄20g，卫矛120g，山萸肉60g，枳壳70g加水煎煮3次，每次加10倍量，煎煮1小时，合并提取液，减压浓缩得稠膏，干燥，粉碎，得干粉，加入1.4倍量的糊精，混匀，加75％乙醇适量制粒，干燥，装胶囊，制成胶囊剂，每日3次，每次3-6粒。
实施例5 黄芪330g，生地100g，三七40g，制大黄50g，卫矛180g，山萸肉80g，枳壳120g，按照常规工艺，加入常规辅料制成丸剂。
实施例6 黄芪260g，生地140g，三七50g，制大黄70g，卫矛190g，山萸肉80g，枳壳140g，按照常规工艺，加入常规辅料制成丸糖浆剂。
实施例7 黄芪350g，生地80g，三七40g，制大黄40g，卫矛160g，山萸肉100g，枳壳130g，按照常规工艺，加入常规辅料制成滴丸剂。
实施例8 黄芪280g，生地150g，三七60g，制大黄80g，卫矛120g，山萸肉100g，枳壳150g，按照常规工艺，加入常规辅料制成气雾剂。
实施例9 黄芪240g，生地150g，三七20g，制大黄80g，卫矛120g，山萸肉100g，枳壳60g，按照常规工艺，加入常规辅料制成颗粒剂。
实施例10 黄芪360g，生地85g，三七40g，制大黄40g，卫矛180g，山萸肉80g，枳壳70g，按照常规工艺，加入常规辅料制成颗粒剂。
实施例11 黄芪360g，生地85g，三七40g，制大黄40g，卫矛180g，山萸肉80g，枳壳70g， 50％乙醇5重量倍提取2次，每次提取1.5小时，按照常规工艺，加入常规辅料制成颗粒剂。
实施例12 黄芪240g，生地150g，三七20g，制大黄80g，卫矛120g，山萸肉100g，枳壳60g， 30％乙醇6重量倍提取2次，每次提取1.5小时，按照常规工艺，加入常规辅料制成颗粒剂。
实施例13 黄芪280g，生地150g，三七60g，制大黄80g，卫矛120g，山萸肉100g，枳壳150g， 上述原料加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮1小时，合并提取液，提取液滤过，滤液通过大孔树脂，先用5倍量水洗脱，洗脱液弃取，再用30％乙醇3倍洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得纯化提取液，按照常规工艺，加入常规辅料制成丸糖浆剂。
实施例14 黄芪300g，生地120g，三七30g，制大黄60g，卫矛150g，山萸肉90g，枳壳100g加水煎煮3次，每次加8倍量，煎煮0.5小时，合并提取液，提取液滤过，滤液通过大孔树脂，先用15％乙醇洗脱，洗脱液弃取，再用40％乙醇3倍洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得纯化提取液，按照常规工艺，加入常规辅料制成丸糖浆剂.
权利要求
1.一种治疗糖尿病肾病的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为
黄芪200-400重量份，生地50-200重量份，三七6-60重量份，制大黄20-100重量份，卫矛80-280重量份，山萸肉40-150重量份，枳壳30-180重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为
黄芪250-350重量份，生地80-160重量份，三七10-50重量份，制大黄30-90重量份，卫矛100-200重量份，山萸肉60-120重量份，枳壳50-150重量份。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为
黄芪300重量份，生地120重量份，三七30重量份，制大黄60重量份，卫矛150重量份，山萸肉90重量份，枳壳100重量份。
4.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为
黄芪260重量份，生地150重量份，三七20重量份，制大黄80重量份，卫矛120重量份，山萸肉110重量份，枳壳60重量份。
5.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为
黄芪340重量份，生地90重量份，三七50重量份，制大黄40重量份，卫矛180重量份，山萸肉70重量份，枳壳140重量份。
6.如权利要求1-5任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括如下方法中的任意一种
方法1水提取1-4次，每次加水8-30重量倍，提取0.5-3小时；或，
方法2乙醇提取1-4次，每次加5-100％乙醇4-15重量倍，提取0.5-2小时；或，
方法3方法1所述的水提取或方法2所述的醇提取液滤过，滤液通过大孔树脂，先用4-6倍量水或20％以下浓度的乙醇洗脱，洗脱液弃取，再用10-90％乙醇1-10倍洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得纯化提取液。
7.如权利要求1-5任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为
黄芪、生地、三七、制大黄、卫矛、山萸肉、枳壳七味中药，加水煎煮1-4次，每次加8-12倍量，煎煮0.5-2.0小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩得稠膏；按照常规工艺，加入常规辅料制成丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。
8.如权利要求7所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为
黄芪、生地、三七、制大黄、卫矛、山萸肉、枳壳七味中药，加水煎煮2次，每次加10倍量，煎煮1小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩得稠膏；按照常规工艺，加入常规辅料制成颗粒剂、丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂。
9.如权利要求1-5任一所述的药物组合物在治疗糖尿病肾病药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于糖尿病为1型或2型糖尿病。
全文摘要
本发明涉及一种治疗糖尿病肾病的药物组合物及其制备方法，该药物组合物的原料组成为黄芪200-400重量份，生地50-200重量份，三七6-60重量份，制大黄20-100重量份，卫矛80-280重量份，山萸肉40-150重量份，枳壳30-180重量份；制备方法为加水煎煮1-4次，每次加水8-12倍量，煎煮0.5-2小时，合并煎煮液，滤过，减压浓缩得稠膏，加入常规辅料制成丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂等剂型；本发明组合物具有益气养阴、活血化瘀之功效，治疗糖尿病肾病疗效很好。
文档编号A61P3/10GK101703617SQ200910241369
公开日2010年5月12日 申请日期2009年12月7日 优先权日2009年12月7日
发明者李平, 张浩军, 冯建春, 李靖, 高菁 申请人:中日友好医院