专利名称：积雪酸在制备预防或治疗心肌纤维化的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及积雪酸在制药中的应用，尤其涉及积雪酸在制备预防或治疗心肌纤维化的药物中的应用。
背景技术：
积雪草是一种植物药，积雪苷是从积雪草中提取的物质，也称为积雪甙(Asiaticoside)，结构见式II所示 式II研究发现积雪苷治疗皮肤粘膜损伤后，具有纤维疤痕过增生作用。该化合物作为相关用途的化妆品和药品均有上市。在这些产品中积雪苷是其主要活性成份。积雪酸是积雪苷脱糖后即形成的苷元，结构如式I所示。
式I
发明内容
在研究积雪苷对心肌纤维化的过程中，发明人发现积雪苷在体外实验时对培养的纤维母细胞的纤维蛋白的形成影响很小；而在积雪苷的体内药代动力学研究中，发现口服积雪苷后积雪酸(Asiatic acid)在体内浓度较高。当在培养基中加入积雪酸后，发现积雪酸对培养的纤维母细胞的纤维蛋白的形成有一定影响。因此，积雪苷进入人体后可能是以积雪酸的形式发生作用，因而如果积雪酸具有抗心肌纤维化作用，则可以直接应用积雪酸作为活性成份制成药物。在临床应用时，积雪酸药物能直接发挥药效，起到抗心肌纤维化的作用。
本发明所要解决的技术问题在于通过设计动物实验方法，研究积雪酸的抗心肌纤维化作用。
本发明的目的是提供积雪酸在制备预防或治疗心肌纤维化的药物中的应用。
本发明应用大鼠作为实验动物，应用市售的积雪酸为样品进行实验。
本发明通过下列具体实验研究积雪酸的抗心肌纤维化作用。
本发明应用自发性高血压大鼠(SHR)作为实验动物模型，是按下列文献(Kuijpers MH和de Jong W在Spontaneous hypertension in the fawn-hoodedrata cardiovascular disease model.J Hypertens Suppl.1986 Oct；4(3)S41-4)方法进行的。该方法提出fawn-hooded rat能在5周龄即可出现自发性高血压，随着年龄增长而增高，在1岁龄时可达180-240mmHg，并伴随着心脏、肾脏、肝脏、脾脏等器官的重量增加，组织病理学可见心肌纤维化以及心肌梗死等改变。以后曾有很多学者把SHR应用于高血压导致心肌纤维化的研究中，如文献(Barone FC，Campbell WG Jr，Nelson AH，Feuerstein GZ Carvedilolprevents severe hypertensive cardiomyopathy and remodeling.J Hypertens.1998Jun；16(6)871-84，以及Huikeshoven M，Van Der Wal AC，Tukkie R，Beek JF.The old spontaneously hypertensive rat as a model for transmyocardial laserrevascularisation research.Lasers Med Sci.2003；18(1)12-8)。故自发行高血压大鼠是研究高血压导致心肌纤维化的一个很可靠的模型。
本发明的积极进步效果在于积雪酸具有抗心肌纤维化作用，因此，积雪酸作为活性成份可用于制备抗心肌纤维化的药物。由于积雪酸单体可以从积雪草中直接提取，而且提取率较高，价格不贵，所以积雪酸的应用有很好的开发前景。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作详细叙述。
实施例1材料与方法1动物及材料SHR大鼠，雄性，由上海高血压研究所提供；MRB-IIIA型电脑大鼠血压心率测定仪，由上海高血压研究所制造2样品名称积雪酸 广西昌州天然产物开发有限公司或上海医药工业研究院制造，溶于蒸馏水中卡托普利 济南东风制药有限公司，溶于生理盐水3剂量 积雪酸3g/kg、9g/kg、27g/kg三个剂量实验方法50只12周龄雄性SHR大鼠随机分成5组，每组10只①大剂量积雪酸组，给予积雪酸27g/kg；②中剂量积雪酸组，给予积雪酸9g/kg；③小剂量积雪酸组，给予积雪酸3g/kg；④阳性药组，给予卡托普利35mg/kg；⑤SHR空白对照组，给予等体积的蒸馏水。各组均通过灌胃给药28天，实验结束，称量体重及测血压后处死。
1.血压测量 在大鼠清醒状态下无创性测定尾动脉收缩压及心率，每周测定1次。
2.左心室重量和体重的测定 动物称重(BW)，断头处死，取出心脏，先剪去周围大血管，吸干血液，称全心重(HW)，再剪去心房和右心室游离壁，称取左心室重量(LVM)，计算全心重、左心室重与体重比(HW/BW、LVM/BW)，以确定左心室肥厚的程度。
3.心肌胶原形态学的观察及定量分析 在心肌冠状沟下约1mm处，取左心室心肌横切面。用Boum’s液固定，石蜡包埋，制片，切片厚约6μm。苦味酸天狼星红染色法使胶原特殊染色，心肌细胞呈黄色，胶原呈红色。采用光学显微镜测定，每个心肌切面内膜和外膜各取固定上下左右四个视野，用计算机图像分析，通过灰度调节区别胶原和非胶原成分，测量心肌切片的胶原容积分数(CVF＝心肌胶原面积/所测视野面积)。心肌小动脉为小动脉周围胶原和小动脉面积之比。
结果1.积雪酸对SHR血压的影响 治疗4周后，卡托普利能明显降低SHR大鼠收缩压(SBP)，积雪酸对SHR大鼠收缩压无明显影响。
2.积雪酸对SHR左心室肥厚的影响 各组大鼠在用药后的体重(BW)、全心重(HW)、左心室重量(LVM)、全心重/体重(HW/BW)、左心室重/体重(LVM/BW)见表1。与空白对照组比较，各用药组体重无明显改变(P＞0.05)；全心重(HW)、左心室重量(LVM)明显降低(P＜0.01)，大中小剂量组间呈现量效关系。这说明积雪酸能在一定程度上抑制SHR左心室肥厚增加。
表1 积雪酸治疗对SHR大鼠心肌肥厚参数的影响(x±s，n＝10)
与空白组比较，bP＜0.05，cP＜0.01；与大剂量组比较，eP＜0.05，fP＜0.013.积雪酸对SHR大鼠心肌纤维化的作用 各组大鼠在用药后的心内、外膜以及小动脉心肌胶原容积分数见表2。与空白对照组比较，各用药组心室内、外膜及心肌小动脉周围的胶原均有减少(P＜0.05)，大中小剂量组间呈现量效关系，表明积雪酸治疗对SHR大鼠的心肌纤维均有显著的抑制作用。
表2 积雪酸对SHR心内、外膜以及小动脉心肌胶原容积分数的影响(x±s，n＝10)
与空白组比较，bP＜0.05，cP＜0.01；与大剂量组比较，eP＜0.05，fP＜0.01结论根据以上实验表明积雪酸作为积雪酸在体内的活性成分，具有抗心肌纤维化的作用。而本实验利用积雪酸直接给予自发性高血压诱发心肌纤维化的大鼠模型实验，证明积雪酸确有抗心肌纤维化的效果。
权利要求
1.积雪酸在制备预防或治疗心肌纤维化的药物中的应用，其中该积雪酸的化学结构如式I所示 式I。
全文摘要
本发明公开了积雪酸在制备预防或治疗心肌纤维化的药物中的应用。本发明通过用积雪酸对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响，证实了积雪酸具有抗心肌纤维化的作用。因而，积雪酸可作为活性成份用于制备抗心肌纤维化的药物。
文档编号A61P9/00GK101032495SQ200610024409
公开日2007年9月12日 申请日期2006年3月6日 优先权日2006年3月6日
发明者徐智儒, 顾性初, 刘全海, 赵帅, 刘珉宇 申请人:上海医药工业研究院