专利名称：一种含氟尿嘧啶及其增效剂的抗癌缓释剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含氟尿嘧啶(5-FU)及其增效剂的抗癌缓释剂及其制备方法，属于药物技术领域。缓释剂主要为缓释注射剂和缓释植入剂。
背景技术：
作为一种常用的化疗药物，5-氟尿嘧啶(5-FU)已广泛应用于多种恶性肿瘤的治疗，而且作用效果较为明显。然而，其出人意料的神经毒性极大地限制了该药的应用。肿瘤间质中的血管、结缔组织、基质蛋白、纤维蛋白及胶原蛋白等不仅为肿瘤细胞的生长提供了支架及必不可少的营养物质，还影响了化疗药物在肿瘤周围及肿瘤组织内的渗透和扩散(参见尼提等“细胞外间质的状况对实体肿瘤内药物运转的影响”《癌症研究》60期2497-503页(2000年)(Netti PA，Cancer Res.2000，60(9)2497-503))。由于实体肿瘤过度膨胀性增生，其间质压力、组织弹性压力、流体压力及间质的粘稠度均较其周围正常组织为高，因此，常规化疗，难于肿瘤局部形成有效药物浓度，参见孔庆忠等“瘤内放置顺铂加系统卡莫司汀治疗大鼠脑肿瘤”《外科肿瘤杂志》69期76-82页(1998年)(Kong Q et al.，J SurgOncol.1998 Oct；69(2)76-82)，单纯提高给药剂量又受到全身反应的限制。药物局部应用可能在某种程度上解决药物浓度的问题(中国专利)，然而药物植入等手术操作较复杂，创伤性大，除易导致出血、感染、免疫力降低等各种并发症外，还可引起或加速肿瘤的扩散与转移。除此之外，手术前后本身的准备及昂贵的费用常常影响其有效的实施。
另外，许多肿瘤细胞内的DNA修复功能在化疗之后明显增加。后者常导致肿瘤细胞对抗癌药物的耐受性的增强，其结果是治疗失败。
除此之外，低剂量的抗癌药物治疗不仅能够增加癌细胞的药物耐受性，而且还可促进其浸润性生长”(参见梁等“抗癌药物脉冲筛选后增加了人肺癌细胞的药物耐受性及体外浸润能力并伴有基因表达的改变”《国际癌症杂志》111期484-93页(2004年)(Liang Y，etal.，Int J Cancer.2004；111(4)484-93))。
因此，便于在肿瘤局部维持高的药物浓度以及增加肿瘤细胞对药物的敏感程度的制剂和方法便成为一个重要研究课题。
发明内容5-氟尿嘧啶作为一种常用的抗癌药物，已广泛用于治疗多种肿瘤，如直结肠癌等。然而，在应用过程中，其明显的全身毒性极大地限制了该药的应用。
为有效提高肿瘤局部的药物浓度、降低药物在循环系统中的药物浓度，人们研究了含5-氟尿嘧啶的药物缓释系统，包括缓释微球(囊)(见(中国专利号ZL00809160.9；申请号91109723.6)、Ciftci K等“用含氟尿嘧啶的聚乳酸微球治疗实体肿瘤及药物释放的研究”《药物开发技术》(Pharm Dev Technol.)2(2)151-60，1997)、缓释植入剂(见中国专利号ZL96115937.5；ZL97107076.8)等。然而，固体缓释植入剂(中国专利号ZL96115937.5；ZL97107076.8)和现有的如用于治疗脑肿瘤(ZL00809160.9)缓释微球或美国专利(US5,651,986)均存在不容易操作、疗效差、并发症多等问题。除此之外，许多实体肿瘤对抗癌药包括5-氟尿嘧啶的敏感性较差，且在治疗过程中容易产生耐药性。本发明发现，本发明中提到的药物与5-FU合用可使其抗癌作用相互加强(以下将能使5-FU抗癌作用相互增加的药物称之为5-FU增效剂)。
除此之外，将5-FU与其增效剂的组合包装于特定的缓释辅料中并配以特殊溶媒制成抗癌药物缓释注射剂不仅能够极大地提高肿瘤局部的药物浓度、降低药物在循环系统中的药物浓度、降低药物对正常组织的毒性，还能够极大方便药物注射、减少手术操作的并发症、降低病人的费用。5-FU增效剂除能抑制肿瘤生长外，还能增加肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性。
本发明发现，并非所有辅料都能有效释放5-FU。药用辅料有数百种以上，具有缓释作用的药用辅料，特别是能将本发明中所选的5-FU在人体或动物体内于一定的时间内缓慢释放的药用辅料必须经过大量创造性的实验才能获得，特定的缓释辅料与可被缓释药物的组合的选择需要经过大量的创造性劳动才能确定。相关数据，特别是动物体内释放特性的数据需要经过体内外大量创造性的实验才能获得，并非经过有限的实验就能确定，具有非显而易见性。
局部药物缓释在保证了局部用药范围内持久而较稳定的药物浓度的同时，明显降低了全身药物浓度，减轻了毒副作用。
本发明针对现有技术的不足，发明了含5-FU及其增效剂的缓释剂。该缓释剂，包括抗癌有效成分和药用缓释辅料。主要为缓释注射剂和缓释植入剂本发明针对现有技术的不足，提供一种新的含氟尿嘧啶和5-氟尿嘧啶增效剂的缓释注射剂。
本发明的一种形式是缓释注射剂，由缓释微球和溶媒组成。具体而言，该抗癌缓释注射剂由以下成分组成(A)缓释微球，包括抗癌有效成分0.5-60％
缓释辅料40-99％助悬剂 0.0-30％以上为重量百分比和(B)溶媒，为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。
其中，抗癌有效成分为5-FU和5-FU增效剂，5-FU增效剂选自卡铂、卡莫氟、阿霉素；缓释辅料包括下列之一或其组合外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物、聚苯丙生、双脂肪酸与癸二酸共聚物、聚(芥酸二聚体癸二酸)、聚(富马酸-癸二酸)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、透明质酸、胶原蛋白、明胶和蛋白胶之一或其组合。
在各种高分子聚合物中，以聚乳酸、癸二酸、含聚乳酸或葵二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物为首选，混合物和共聚物可选自，但不限于，PLA、PLGA、乙醇酸和羟基羧酸的混合物、葵二酸与芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。乙醇酸和羟基羧酸的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和羟基羧酸共聚时的含量分别为重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是聚苯丙生[聚(1，3-二(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸)(p(CPP-SA))、双脂肪酸-癸二酸共聚物(PFAD-SA)]、聚(芥酸二聚体-癸二酸)[P(EAD-SA)]和聚(富马酸-癸二酸)[P(FA-SA)]等。对羧苯氧基丙烷(p-CPP)与癸二酸共聚时的含量分别为重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40∶50-90，最好是重量比15-30∶65-85。
聚乳酸的分子量峰值可为，但不限于，5000-100,000，但以20,000-60,000为优选，以5,000-30,000为最优选；聚乙醇酸的分子量可为，但不限于，5000-100,000，但以5,000-50,000为优选，以10,000-30,000为最优选；以上聚羟基酸可单选或多选。当单选时，以聚乳酸(PLA)或羟基羧酸和乙醇酸的共聚物(PLGA)为优选，共聚物的分子量可为，但不限于，5000-100,000，但以20,000-60,000为优选，以30,000-50,000为最优选；当多选时，以高分子多聚物或不同高分子多聚物组成的复合多聚物或共聚物为优选，以含不同分子量聚乳酸或癸二酸的复合多聚物或共聚物为最优选，如，但不限于，分子量为1000到30000的聚乳酸与分子量为20000到50000的聚乳酸混合、分子量为10000到30000的聚乳酸与分子量为30000到80000的PLGA混合、分子量为20000到30000的聚乳酸与癸二酸混合、分子量为30000到80000的PLGA与癸二酸混合。所用聚乳酸以左旋聚乳酸(L-PLA)为优选。左旋聚乳酸(L-PLA)粘度范围IV(dl/g)为0.2～0.8，玻璃化转变温度范围为55～65℃，熔点175～185℃。
除上述缓释辅料外，还可选用其他物质见美国专利(专利号4757128；4857311；4888176；4789724)及《药用辅料大全》(第123页，四川科学技术出版社1993年出版，罗明生和高天惠主编)中已有详细描述。另外，中国专利(申请号96115937.5；91109723.6；9710703.3；01803562.0)及美国发明专利(专利号5,651,986)也列举了某些药用辅料，包括充填剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂、制(或致)孔剂、赋型剂或阻滞剂等。
为调节药物释放速度或改变本发明的其它特性，可以改变聚合物的单体成分或分子量、添加或调节药用辅料的组成及配比，添加水溶性低分子化合物，如，但不限于，各种糖或盐等。其中糖可为，但不限于，木糖醇、低聚糖、(硫酸)软骨素及甲壳素等，其中盐可为，但不限于，钾盐和钠盐等；也可添加其它药用辅料，如但不限于，充填剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂、制(或致)孔剂、赋型剂或阻滞剂等。
增效剂(卡铂、卡莫氟、阿霉素)在缓释剂中的重量百分比从0.1％-60％，以1％-50％为佳，以5％-30％为最佳。
抗癌有效成分为5-FU与其增效剂的组合。当药物缓释微球中的抗癌药物仅为5-FU增效剂时，抗癌缓释注射剂主要用于增加其他途径应用的5-FU的作用效果或用于对放疗或其它疗法的增效。当用于增加其他途径应用的5-FU的作用效果时，5-FU可经动脉、静脉或局部注射、放置给药。
抗癌有效成分在缓释微球中的重量百分比为0.5％-60％，以2％-40％为佳，以5％-30％为最佳。5-FU和5-FU增效剂的重量比为1-9∶1到1∶1-9。以1-2∶1为优选。
本发明抗癌缓释微球中的抗癌有效成分重量百分比优选如下5-30％的5-FU与5-30％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合。
抗癌缓释微球中的抗癌有效成分重量百分比最优选如下(a)5-30％的5-FU与5-30％的卡铂；(b)5-30％的5-FU与5-30％的卡莫氟；(c)5-30％的5-FU与5-30％的阿霉素。
缓释辅料优选聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)、FAD:SA共聚物和聚苯丙生之一或其组合。
当选用聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸(PLA)与聚乙醇酸的混合物、乙醇酸和羟基羧酸的共聚物(PLGA)时，PLA和PLGA含量重量百分比分别为0.1-99.9％和99.9-0.1％。聚乳酸的分子量峰值可为，但不限于，5000-200,000，以20,000-60,000为优选，以30,000-50,000为最优选；聚乙醇酸的分子量可为，但不限于，5000-200,000，以20,000-60,000为优选，以30,000-50,000为最优选；以上聚羟基酸可单选或多选。当单选时，以聚乳酸(PLA)或羟基羧酸和乙醇酸的共聚物(PLGA)为优选，共聚物的分子量可为，但不限于，5000-200,000，以20,000-60,000为优选，以30,000-50,000为最优选；当多选时，以高分子多聚物或不同高分子多聚物组成的复合多聚物或共聚物为优选，以含不同分子量聚乳酸或癸二酸的复合多聚物或共聚物为最优选，如，但不限于，分子量为1000到30000的聚乳酸与分子量为20000到50000的聚乳酸混合、分子量为10000到30000的聚乳酸与分子量为30000到80000的PLGA混合、分子量为20000到30000的聚乳酸与癸二酸混合、分子量为30000到80000的PLGA与癸二酸混合。
在各种高分子聚合物中，以聚乳酸、癸二酸、含聚乳酸或葵二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物为首选，混合物和共聚物可选自，但不限于，PLA、PLGA、乙醇酸和羟基羧酸的混合物、葵二酸与芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。乙醇酸和羟基羧酸的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和羟基羧酸共聚时的含量分别为重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是聚苯丙生[聚(1，3-二(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸)(p(CPP-SA))、双脂肪酸-癸二酸共聚物(PFAD-SA)]、聚(芥酸二聚体-癸二酸)[P(EAD-SA)]和聚(富马酸-癸二酸)[P(FA-SA)]等。对羧苯氧基丙烷(p-CPP)与癸二酸共聚时的含量分别为重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40∶50-90，最好是重量比15-30∶65-85。
除上述辅料外，还可选用其他物质见美国专利(4757128；4857311；4888176；4789724及《药用辅料大全》(第123页，四川科学技术出版社1993年出版，罗明生和高天惠主编)中已有详细描述。另外，中国专利(申请号96115937.5；91109723.6；9710703.3；01803562.0)及美国发明专利(专利号5,651,986)也列举了某些药用辅料，包括充填剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂、制(或致)孔剂、赋型剂或阻滞剂等。
为调节药物释放速度或改变本发明的其它特性，可以改变聚合物的单体成分或分子量、添加或调节药用辅料的组成及配比，添加水溶性低分子化合物，如，但不限于，各种糖或盐等。其中糖可为，但不限于，木糖醇、低聚糖、(硫酸)软骨素及甲壳素等，其中盐可为，但不限于，钾盐和钠盐等。
缓释注射剂中，药物缓释系统可制成微球、亚微球、微乳、纳米球、颗粒或球形小丸，然后与注射溶媒混合后制成注射剂使用。在各种缓释注射剂中以混悬型缓释注射剂为优选，混悬型缓释注射剂是将含抗癌成分的药物缓释系统悬浮于注射液中所得的制剂，所用的辅料为上述缓释辅料中的一种或其组合，所用溶媒为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。普通溶媒为，但不限于，蒸馏水、注射用水、生理冲液、无水乙醇或各种盐配制的缓冲液。助悬剂的目的在于有效悬浮含药微球，从而利于注射。
助悬剂选自羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合。
助悬剂在普通溶媒中的含量因其特性而定，可为0.1-30％因具体情况而定。优选助悬剂的组成为(a)0.5-5％羧甲基纤维素钠+0.1-0.5％土温80；或(b)5-20％甘露醇+0.1-0.5％土温80；或(c)0.5-5％羧甲基纤维素钠+5-20％山梨醇+0.1-0.5％土温80。
溶媒的制备则取决于溶媒的种类，普通溶媒有市售，也可以自制，如蒸馏水、注射用水、生理冲液、无水乙醇或各种盐配制的缓冲液，但必需严格按照有关标准。特殊溶媒需考虑到助悬剂的种类及其组成、溶媒所悬浮的药物、缓释微球(或微囊)的组成、性质及其需要量及注射剂的制备方法，如将羧甲基纤维素钠(1.5％)+甘露醇和/或山梨醇(15％)和/或吐温80(0.1％)溶于生理盐水中得相应溶媒，黏度在10cp-650cp(20℃-30℃时)。
本发明发现影响药物和/或缓释微球悬浮和/或注射的关键因素是溶媒的黏度，黏度越大，悬浮效果越好，可注射性越强。这种意外发现构成了本发明的主要指数特征之一。溶媒的黏度取决于助悬剂的黏度，助悬剂的黏度为100cp-3000cp(20℃-30℃时)，优选1000cp-3000cp(20℃-30℃时)，最优选1500cp-3000cp(20℃-30℃时)。按照此条件所制得的溶媒的黏度为10cp-650cp(20℃-30℃时)，优选20cp-650cp(20℃-30℃时)，最优选60cp-650cp(20℃-30℃时)。
注射剂的制备有多种方法，一种是将助悬剂为“0”的缓释微粒(A)直接混于特殊溶媒中，得到相应的缓释微粒注射剂；另一种是将助悬剂不为“0”的缓释微粒(A)混于特殊溶媒或普通溶媒中，得到相应的缓释微粒注射剂；再一种是将缓释微粒(A)混于普通溶媒中，然后加入助悬剂混匀，得到相应的缓释微粒注射剂。除外，还可先将缓释微粒(A)混于特殊溶媒中制得相应的混悬液，然后用真空干燥等方法去除混悬液中的水分，之后再用特殊溶媒或普通溶媒混悬，得到相应的缓释微粒注射剂。以上方法只是用于说明而非限制本发明。值得注意的是，悬浮药物或缓释微球(或微囊)在注射剂中的浓度因具体需要而定，可为，但不限于，10-400mg/ml，以30-300mg/ml为优选，以50-200mg/ml最优选。注射剂的黏度为50cp-1000cp(20℃-30℃时)，优选100cp-1000cp(20℃-30℃时)，最优选200cp-650cp(20℃-30℃时)。此黏度适用于18-22号注射针头和特制的内径更大的(至3毫米)注射针头。
缓释注射剂的制备方法是任意的，可用若干种方法制备如，但不限于，混合法、熔融法、溶解法、喷雾干燥法制备微球、溶解法结合冷冻(干燥)粉碎法制成微粉、脂质体包药法及乳化法等。其中以溶解法(即溶剂挥发法)、干燥法、喷雾干燥法和乳化法为优选。微球则可用于制备上述各种缓释注射剂，其方法是任意的。所用微球的粒径范围可在5-400um之间，以10-300um之间为优选，以20-200um之间为最优选。
微球还可用于制备其他缓释注射剂，如凝胶注射剂、嵌段共聚物胶束注射剂。其中，嵌段共聚物胶束由疏水亲水嵌段共聚物在水溶液中形成，具有球形内核外壳结构，疏水嵌段形成内核，亲水嵌段形成外壳。载药胶束注射进入体内达到控制药物释放或靶向治疗的目的。所用药物载体为上述任意一种或其组合。其中优选分子量为1000-15000的聚乙二醇(PEG)作为胶束共聚物的亲水嵌段，优选生物降解聚合物(如PLA、聚丙交酯、聚己内酯及其共聚物(分子量1500-25000))作为胶束共聚物的疏水嵌段。嵌段共聚物胶束的粒径范围可在10-300um之间，以20-200um之间的为优选。凝胶注射剂系将生物降解聚合物(如PLA、PLGA或DL-LA和ε-己内酯共聚物)溶于某些两亲性溶媒，再加入药物与之混溶(或混悬)后形成流动性较好的凝胶，可经瘤周或瘤内注射。一旦注入，两亲性溶媒很快扩散至体液，而体液中的水分则渗入凝胶，使聚合物固化，缓慢释放药物。
缓释微球还可用于制备缓释植入剂，所用的药用辅料可为上述药用辅料中的任何一种或多种物质，但以水溶性高分子聚合物为主选，在各种高分子聚合物中，以聚乳酸、葵二酸、含聚乳酸或葵二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物为首选，混合物和共聚物可选自，但不限于，PLA、PLGA、PLA与PLGA的混合物、葵二酸与芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。聚乳酸(PLA)与聚乙醇酸的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和乳酸共聚时的含量分别为重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是对羧苯基丙烷(p-CPP)，对羧苯基丙烷(p-CPP)与葵二酸共聚时的含量分别为重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40∶50-90，最好是重量比15-30∶65-85。
本发明抗癌药物缓释剂的另一种形式是抗癌药物缓释剂为缓释植入剂。抗癌植入剂的有效成分可均匀地包装于整个药用辅料中，也可包装于载体支持物中心或其表面；可通过直接扩散和/或经多聚物降解的方式将有效成分释放。
缓释植入剂的特点在于所用的缓释辅料除高分子聚合物外，还含有上述任意一种或多种其它辅料。添加的药用辅料统称为添加剂。添加剂可根据其功能分为充填剂、致孔剂、赋型剂、分散剂、等渗剂、保存剂、阻滞剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂等。
缓释植入剂的主要成份可制成多种剂型。如，但不限于，胶囊、缓释剂、植入剂、缓释剂植入剂等；呈多种形状，如，但不限于，颗粒剂、丸剂、片剂、散剂、球形、块状、针状、棒状、柱状及膜状。在各种剂型中，以体内缓慢释放植入剂为优选。
缓释植入剂的最佳剂型为生物相容性、可降解吸收的缓释植入剂，可因不同临床需要而制成各种形状及各种剂型。其主要成份的包装方法和步骤在美国专利中(US5651986)已有详细描述，包括若干种制备缓释制剂的方法如，但不限于，(i)把载体支持物粉末与药物混合然后压制成植入剂，即所谓的混合法；(ii)把载体支持物熔化，与待包装的药物相混合，然后固体冷却，即所谓的熔融法；(iii)把载体支持物溶解于溶剂中，把待包装的药物溶解或分散于聚合物溶液中，然后蒸发溶剂，干燥，即所谓的溶解法；(iv)喷雾干燥法；及(v)冷冻干燥法等。
缓释植入剂中的抗癌有效成分重量百分比最如下，5-30％的5-FU与5-30％的卡铂、卡莫氟、阿霉素的组合。
缓释植入剂中的抗癌有效成分重量百分比最优选如下(a)5-30％的5-FU与5-30％的卡铂；(b)5-30％的5-FU与5-30％的卡莫氟；(c)5-30％的5-FU与5-30％的阿霉素。
缓释辅料优选聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)、FAD:SA共聚物和聚苯丙生之一或其组合。
本发明可以用于制备治疗人及动物的各种肿瘤的药物制剂，主要为缓释注射剂或缓释植入剂。所制备的肿瘤包括各种实体肿瘤。包括起源于大脑及中枢神经系统的原发或转移的、以及起源于颅外的各种实体肿瘤，如肾脏、肝、胆囊、头颈部、口腔、甲状腺、皮肤、黏膜、腺体、血管、骨组织、淋巴结、肺脏、食管、胃、乳腺、胰腺、眼睛、鼻咽部、子宫、卵巢、子宫内膜、子宫颈、前列腺、膀胱、结肠、直肠的原发或转移的癌或肉瘤或癌肉瘤，其中以脑肿瘤、肾癌、头颈部肿瘤、甲状腺癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、子宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠直肠的原发或转移癌为优选。
给药途径取决于多种因素，为于原发或转移肿瘤所在部位获得有效浓度，药物可经多种途径给予，如皮下腔内(如腹腔胸腔及椎管内)、瘤内、瘤周注射或放置、选择性动脉注射、淋巴结内及骨髓内注射。以选择性动脉注射、腔内、瘤内、瘤周注射或放置为优选。可于手术时或手术前后在瘤内、瘤周注射或放置；可与放射及全身化疗同时或前后分开应用，但缓释植入剂以瘤内、瘤周注射或放置为优选。
本发明所制的缓释注射剂或缓释植入剂中还可加入其它药用成分，如，但不限于，抗菌素、止疼药、抗凝药、止血药等。
通过如下试验和实施例对本发明的技术方法作进一步的描述试验1、不同方式应用5-FU后的局部药物浓度比较以大白鼠(Fisher344)为试验对象，将2×105个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长至1厘米直径后将其分为以下8组(见表1)。每组剂量均为5mg/kg。测定不同时间肿瘤内药物含量(％)。
表1
以上结果表明，5-FU经不同方式应用后的局部药物浓度差异显著，局部给药能够明显提高并有效维持肿瘤所在部位的有效药物浓度，其中以瘤内放置缓释植入剂和瘤内注射缓释注射剂的效果最好。然而，瘤内注射缓释注射剂操作最方便、容易。这一发现构成本发明的重要特征。以下的相关抑瘤试验进一步证实了这一点。
试验2、不同方式应用5-FU后的体内抑瘤作用比较以大白鼠(Fisher344)为试验对象，将2×105个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长至0.5厘米直径后将其分为以下9组(见表2)。每组剂量均为5mg/kg。治疗后第30天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果。
表2
以上结果表明，5-FU经不同方式应用后的抑瘤作用差异显著，局部给药能够明显提高并有效维持肿瘤所在部位的有效药物浓度，其中以瘤内放置缓释植入剂和瘤内注射缓释注射剂的效果最好。然而，瘤内注射缓释注射剂操作最方便、容易。不仅疗效好，毒副作用也小。
试验3、含5-FU和5-FU增效剂(缓释注射剂)的体内抑瘤作用以大白鼠(Fisher344)为试验对象，将2×105个胰腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为以下10组(见表3)。第一组为对照，第2到10组为治疗组，药物经瘤内注射。剂量见表。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果(见表3)。
表3
以上结果表明，5-FU及所用5-FU增效剂(卡铂)在该浓度单独应用时对肿瘤生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。其中，5-FU对肿瘤生长的抑制作用与剂量有关。
试验4、5-FU和5-FU增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用所用的肿瘤细胞包括CNS-1、C6、9L、胃腺上皮癌(SA)、骨肿瘤(BC)、乳腺癌(BA)、肺癌(LH)、甲状腺乳头状腺癌(PAT)、肝癌等。将5-FU和5-FU增效剂按10μg/ml浓度加到体外培养24小时的各种肿瘤细胞中，继续培养48小时后计数细胞总数。其肿瘤细胞生长抑制效果见表4所示。
表4
以上结果表明，所用5-FU及5-FU增效剂(卡莫氟、阿霉素、卡铂)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验5、5-FU及5-FU增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠(Fisher344)为试验对象，将2×105个肝肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为以下8组(见表5)。第一组为对照，第2到8组为治疗组，缓释植入剂经瘤内放置。5-FU剂量均5mg/kg，增效剂的剂量均为2.5mg/kg。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果(见表5)。
表5
以上结果表明，所用5-FU及5-FU物增效剂(卡铂、卡莫氟、阿霉素)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验6、5-FU和5-FU增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠(Fisher344)为试验对象，将2×105个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为阴性对照(空白)、单药治疗组(5-FU或5-FU增效剂)和联合治疗组(5-FU和5-FU增效剂)。药物经瘤内注射。5-FU和增效剂的剂量见表6。治疗后第30天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率作指标比较治疗效果(见表6)。
表6
以上结果表明，所用5-FU及5-FU增效剂(卡铂)在该浓度单独应用时肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验7、5-FU和5-FU增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠(Fisher344)为试验对象，将2×105个乳腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为阴性对照(空白)、单药治疗组、联合治疗组。药物经瘤内注射。5-FU和增效剂的剂量见表7。治疗后第30天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率作指标比较治疗效果(见表7)。
表7
以上结果表明，所用5-FU及5-FU增效剂(卡莫氟)在该浓度单独应用时对肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
试验8、5-FU和5-FU增效剂(缓释植入剂)的抑瘤作用以大白鼠(Fisher344)为试验对象，将2×105个乳腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为阴性对照(空白)、单药治疗组、联合治疗组。缓释植入剂经瘤内放置。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率作指标比较治疗效果(见表8)表8
以上结果表明，所用5-FU及5-FU增效剂(卡铂)在该浓度单独应用时对肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用，且呈量效关系。
试验9、5-FU和5-FU增效剂(缓释植入剂)的抑瘤作用按试验8所述方法测定5-FU及5-FU增效剂(缓释植入剂)的抑瘤作用，其肿瘤生长抑制率见表9。
表9
以上结果表明，所用5-FU及5-FU增效剂(阿霉素)在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。
总之，所用5-FU及各种5-FU增效剂单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。因此，本发明所述的有效成分为5-FU与任意一种5-FU增效剂的组合。含有以上有效成分的药物可制成缓释微球，进而制成缓释注射剂和植入剂，其中以与含助悬剂的特殊溶媒组合形成的混悬注射剂为优选。
缓释注射剂或缓释植入剂还可通过以下实施方式得以进一步说明。上述实施例及以下实施例只是对本发明作进一步说明，并非对其内容和使用作任何限制。
具体实施方式
实施例1.
将80mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)为20∶80)共聚物分别放入容器中，然后加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后加入10mg5-FU和10mg卡铂，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％5-FU和10％卡铂的注射用微球。然后将微球悬浮于含15％甘露醇的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂，黏度为360cp-480cp(25℃-30℃时)。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。
实施例2.
将80mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)为50∶50)共聚物分别放入容器中，然后加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后加入5mg5-FU和15mg卡铂，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含5％5-FU和15％卡铂的注射用微球。然后将微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂，黏度为380cp-460cp(25℃-30℃时)。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为14-20天，在小鼠皮下的释药时间为25-35天左右。
实施例3加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例2相同，但所不同的是所含抗癌有效成分及其重量百分比为15％的5-FU和5％的卡铂，混悬型缓释注射剂的黏度为420cp-520cp(25℃-30℃时)。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为15-25天，在小鼠皮下的释药时间为25-35天左右。
实施例4.
将80mg分子量峰值为25000-50000的PLGA(50∶50)共聚物分别放入容器中，然后加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后加入10mg5-FU和10mg卡铂，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％5-FU和10％卡铂的注射用微球。然后将微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂，黏度为360cp-420cp(25℃-30℃时)。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为15-20天，在小鼠皮下的释药时间为20-25天左右。
实施例5.
将70mg分子量峰值为40000-60000的PLGA(75∶25)分别放入容器中，然后加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后加入10mg5-FU和20mg卡铂，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％5-FU和20％卡铂的注射用微球。将干燥后的微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。
实施例6将80mg分子量峰值为20000-40000的PLGA(50∶50)分别放入容器中，然后加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后加入15mg5-FU和5mg卡铂，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含15％5-FU和5％mg卡铂的注射用微球。将干燥后的微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为14-20天，在小鼠皮下的释药时间为20-25天左右。
实施例7
加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例6相同，但所不同的是所含抗癌有效成分及其重量百分比为5-30％的5-FU与5-30％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合。
实施例8.
将70mg乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入20毫克5-FU和10毫克卡莫氟，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含20％5-FU和10％卡莫氟的注射用微球。然后将微球悬浮于含5-15％山梨醇的注射液中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为15-20天，在小鼠皮下的释药时间为20-25天左右。
实施例9.
加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例8相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为10-20％的5-FU与10-20％的卡铂、卡莫氟、阿霉素的组合。
实施例10.
将70mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)为50∶50)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg5-FU和20mg卡莫氟，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％5-FU与20％卡莫氟的注射用微球。然后将微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠和0.5％吐温80的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。
实施例11.
加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例10相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为10％的5-FU与20％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合。
实施例12.
将70mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)为20∶80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入15mg5-FU和15mg卡铂，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含15％5-FU和15％的卡铂注射用微球。然后将微球悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠和15％山梨醇和0.2％吐温80的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂。该缓释注射剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天左右。
实施例13.
加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例12相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为15％的5-FU与15％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合。
实施例14
将80mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)为20∶80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入7.5mg阿霉素和12.5mg5-FU，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含7.5％阿霉素和12.5％5-FU的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为10-15天，在小鼠皮下的释药时间为30-40天左右。
实施例15加工成缓释植入剂的方法步骤与实施例14相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为12.5％的5-FU与7.5％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合。
实施例16将70mg分子量峰值为20000-40000的PLGA(50∶50)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg5-FU和20mg卡铂，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％5-FU和20％卡铂的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为15-25天，在小鼠皮下的释药时间为35-50天左右。
实施例17将70mg分子量峰值为20000-40000的PLA放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg5-FU和20mg阿霉素，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％5-FU和20％阿霉素的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为20-25天，在小鼠皮下的释药时间为30-40天左右。
实施例18将70mg分子量峰值为40000-60000的PLGA(50∶50)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入20mg5-FU和10mg阿霉素，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含20％5-FU和10％阿霉素的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为20-25天，在小鼠皮下的释药时间为35-40天左右。
实施例19加工缓释植入剂的方法步骤与实施例17和18相同，但所不同的是所含抗癌有效成分为(1)15％的5-FU与5％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合；或(2)10％的5-FU与10％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合；或(3)5％的5-FU与15％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合。
实施例20将70mg分子量峰值为25000-40000的PLGA(50∶50)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入20mg5-FU和10mg卡莫氟，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含20％5-FU和10％卡莫氟的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为20-25天，在小鼠皮下的释药时间为35-40天左右。
实施例21将70mg分子量峰值为25000-40000的PLA放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混匀后，加入10mg5-FU和20mg卡莫氟，重新摇匀后用喷雾干燥法制备含10％5-FU和20％卡莫氟的注射用微球。然后将微球经压片法制得相应的缓释植入剂。该缓释植入剂在体外生理盐水中的释药时间为20-25天，在小鼠皮下的释药时间为30-35天左右。
实施例22加工成缓释剂的方法步骤与实施例1-21相同，但所不同的是所用的缓释辅料为下列之一或其组合a)分子量峰值为10000-30000、30000-60000、60000-100000或100000-150000的聚乳酸(PLA)；b)分子量峰值为10000-30000、30000-60000、60000-100000或100000-150000的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)，其中，聚乙醇酸和羟基乙酸的比例为50-95∶50-50；c)乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)；d)10∶90、20∶80、30∶70、40∶60、50∶50或60∶40的对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)共聚物(聚苯丙生)；e)FAD与葵二酸(SA)共聚物；f)木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、透明质酸、胶原蛋白、明胶或白蛋胶。
实施例23.
加工成缓释注射剂的方法步骤与实施例1-21相同，但所不同的是所用的助悬剂分别为下列之一或其组合a)0.5-3.0％羧甲基纤维素(钠)；b)5-15％甘露醇；c)5-15％山梨醇；d)0.1-1.5％表面活性物质；e)0.1-0.5％吐温20。
以上实施例仅用于说明，而并非局限本发明的应用。
本发明所公开和保护的内容见权利要求。
权利要求
1.一种同载氟尿嘧啶及其增效剂的抗癌缓释注射剂由以下成分组成(A)缓释微球，包括抗癌有效成分0.5-60％缓释辅料40-99％助悬剂 0.0-30％以上为重量百分比和(B)溶媒，为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。其中，抗癌有效成分为5-FU和5-FU增效剂；助悬剂选自羧甲基纤维素钠、碘甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合，注射剂的黏度为50cp-1000cp(20℃-30℃时)
2.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于增效剂选自卡铂、卡莫氟、阿霉素之一或其组合。
3.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于抗癌缓释注射剂的抗癌有效成分为5-30％的5-FU与5-30％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合。以上均为重量百分比。
4.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于抗癌缓释注射剂的抗癌有效成分为(1)15％的5-FU与5％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合；或(2)10％的5-FU与10％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合；或(3)5％的5-FU与15％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合；或(4)25％的5-FU与5％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合。
5.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于缓释辅料选自下列之一或其组合a)聚乳酸；b)聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；c)聚苯丙生；d)乙烯乙酸乙烯酯共聚物；e)FAD与葵二酸共聚物。
6.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于所用的助悬剂分别为下列之一或其组合a)0.5-3.0％羧甲基纤维素(钠)；b)5-15％甘露醇；c)5-15％山梨醇；d)0.1-1.5％表面活性物质；e)0.1-0.5％吐温20，或f)(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇或卡波姆。
7.根据权利要求1所述之抗癌缓释注射剂，其特征在于所用的助悬剂为下列之一A)0.5-5％羧甲基纤维素钠+0.1-0.5％土温80；B)5-20％甘露醇+0.1-0.5％土温80；或C)0.5-5％羧甲基纤维素钠+5-20％山梨醇+0.1-0.5％土温80。
8.根据权利要求1所述之抗癌缓释微球用于制备治疗起源于人及动物颅外实体肿瘤或脑肿瘤的缓释植入剂。
9.根据权利要求8所述之抗癌缓释植入剂，其特征在于抗癌有效成分为(1)15％的5-FU与5％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合；或(2)10％的5-FU与10％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合；或(3)5％的5-FU与15％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合；或(4)25％的5-FU与5％的卡铂、卡莫氟或阿霉素的组合。缓释辅料选自下列之一或其组合a)聚乳酸；b)聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；c)聚苯丙生；d)乙烯乙酸乙烯酯共聚物；e)FAD与葵二酸共聚物。
10.根据权利要求8所述之所述之抗癌缓释植入剂，其特征在于颅外实体肿瘤为起源于人及动物起源于人及动物肾脏、肝、胆囊、头颈部、口腔、甲状腺、皮肤、粘膜、腺体、血管、骨组织、淋巴结、肺脏、食管、胃、乳腺、胰腺、眼睛、鼻咽部、子宫、卵巢、子宫内膜、子宫颈、前列腺、膀胱、结肠或直肠的原发或继发的癌、肉瘤或癌肉瘤。
全文摘要
一种同载氟尿嘧啶及其增效剂的缓释注射剂由缓释微球和溶媒组成。其中缓释微球包括抗癌有效成分和缓释辅料，溶媒为含助悬剂的特殊溶媒。助悬剂选自羧甲基纤维素钠、甘露醇、山梨醇、土温80之一或其组合。抗癌有效成分为5－FU和卡铂、卡莫氟、阿霉素等5－FU增效剂的组合；缓释辅料选自聚乳酸、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚苯丙生、FAD葵二酸共聚物、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物之一或其组合；注射剂的黏度为50cp－1000cp(20℃－30℃时)，缓释微球还可制成缓释植入剂，肿瘤内或瘤周注射或放置该缓释剂不仅能够降低药物的全身毒性反应，同时还能选择性地提高肿瘤局部的药物浓度，增强化疗药物及放射治疗等非手术疗法的治疗效果。
文档编号A61K31/7028GK1969824SQ20061020094
公开日2007年5月30日 申请日期2006年9月28日 优先权日2006年9月28日
发明者孔庆忠, 张婕 申请人:山东蓝金生物工程有限公司, 孔庆忠