癌性疾病调节抗体的制作方法

专利名称：癌性疾病调节抗体的制作方法
癌性疾病调节抗体引用的相关申请本申请要求2005年8月2日递交的申请号为60/704,647的临时申 请的权益，将其内容通过引用并入本文。发明领域本发明涉及癌性疾病调节抗体(CDMAB)的分离和制备，以及 CDMAB在诊断和治疗过程中的应用，任选地与一种或多种化学治疗 剂联合使用。本发明进一步涉及利用本发明的CDMAB进行的结合活性测定。发明背景用于癌症治疗的单克隆抗体每个患有癌症的个体都是独特的，正如人的身份有所差异一样，其患有的癌症也不同于其他癌症。尽管如此，目前的治疗对于同一时期的同类型肿瘤采用相同的方式。至少30%的患者的一线治疗是失败的，这样就造成更多轮次的治疗，增加了治疗失败、肿瘤转移及最终死亡的可能性。 一种优越的治疗方式应该是针对特定个体的个体化治疗。目前唯一采用个体化治疗的方式是外科手术。化疗和放疗不能针对患者量身定做，而在大多数情况下， 手术本身并不足以治愈癌症。随着单克隆抗体的问世，开发个体化治疗的可能性变得更为现实， 因为每种抗体对应单一的抗原决定簇。而且，制备针对多个抗原决定 簇布局的抗体组合成为可能，该多个抗原决定簇唯一确定了某一特定 个体的肿瘤。认识到癌细胞和正常细胞的显著差异在于癌细胞含有转化细胞特 异的抗原，科学界长期认为可以设计出特异性与这些癌抗原结合的单 克隆抗体，以特异性作用于转化细胞；这样就产生了这样一种观点单克隆抗体能够作为"魔术子弹，，消除癌细胞。然而，现在已经广泛 地认识到单一的单克隆抗体不能用于癌症的所有情形，单克隆抗体可 以按类来开发，用来治疗目标癌症。依照本发明公开的方法分离出的 单克隆抗体已经显示出能够以有利于患者的方式改善癌性疾病过程， 如降低肿瘤负荷，并且在本文中这些单克隆抗体将分别被称为癌性疾病调节抗体(CDMAB)或"抗癌"抗体。目前，癌症患者通常可选择的治疗方式很少。目前的治疗方式已 经改善了总体存活率和发病率。然而，对特定的个体来说，这些改善 的统计数据与他们个人情况的改善并无必然关系。因此，如果提出一种方法学，使医生能够在同组患者中，独立于 其他患者治疗每例肺瘤，这就使根据个人进行量身定做的独特治疗成 为可能。这样一种治疗方式在理论上可以增加治愈率，产生更好的效 果，从而满足长期的需要。从历史上来看，多克隆抗体的应用在治疗人类癌症的方面取得的 成功有限。 一直用人类的血浆来治疗淋巴瘤和白血病，但很少有长期 的好转或反应。而且，这种治疗方法重复性差，与化疗相比，没有更 多的益处。像乳癌、黑色素瘤和肾细胞癌等实体肿瘤也用人类血液、 黑猩猩的血清、人类血浆和马血清来治疗过，但相应的结果是不可预 测和无岁文的。有很多用单克隆抗体治疗实体肿瘤的临床试验。在20世纪80年 代，就有至少四项针对人类乳腺癌的临床试验，在使用了针对特定抗 原或基于组织特异性的抗体的至少47个患者中，只产生了一名应答 者。直到1998年，才有了一次成功的临床试验，该试验联合使用人源 化的抗Her2/neu抗体(Herceptit^)与顺铂。在这项试验中，对37个患 者的反应进行了评估，大约有四分之一的患者有部分反应，另外四分 之一有轻微的或稳定的病情发展。在反应者中，中位肿瘤进展时间(median time to progression)是8.4个月，其中中位反应持续时间(median response duration)是5.3个月。Herceptii^在1998年被批准作为一线用药与Taxo产联合使用。临 床试验结果表明，与单独接受Taxo产治疗的人群的中位疾病进展时间(3.0月)相比，抗体治疗与Taxo^的联合应用增加了患者的中位疾病进 展时间(6.9月)。Herceptii^与Taxof的联合应用在中位存活时间方面 也有轻微增加，单独使用Taxo^是18个月，Herceptii^与Taxo产联合 应用的存活期是22个月。除此之外，Herceptii^与Taxol⑧联合应用与 单独使用Taxo^相比，无论在完全应答者(8: 2)，还是在部分应答者 (34: 15)的数量方面都有增加。然而与单独使用Taxo产相比，Herceptin 与Taxo产的联合应用导致了较高的心血管毒性发病率，两者分别是1% 和13%。 Herceptii^治疗也只对那些过表达人类表皮生长因子受体 2(Her2/neu)(通过免疫组化分析来确定)的患者有效，Her2/neu是一种目 前还不知其功能或生物学重要配体的受体；大约25%的转移性乳腺癌 患者过表达Her2/neu。因此远远不能满足患乳腺癌的患者的治疗需求。 即便那些从Herceptii^治疗中受益的患者仍然需要化疗，随后还需要 不得不处理这类治疗至少在一定程度上带来的副作用。研究结肠直肠癌的临床试验涉及到针对糖蛋白和糖脂靶标的抗 体。对腺癌有某些特异性的诸如17-lA等抗体已经进入了 II期临床试 验，其中60多个患者中，只有一例患者产生了部分反应。在其他的试 验中，52例患者使用17-lA的同时，还使用了环磷酰胺，只有l例患 者产生了完全反应，2个患者产生了轻微反应。到目前为止，17-lA作为III期结肠癌辅助治疗的in期临床试验还没有显示出改善的疗效。最初被批准用来成像的人源化鼠单克隆抗体也没能使肿瘤消退。只有到了最近，单抗的使用在结肠直肠癌的临床试验中才有一些 阳性结果。2004年，ERBITUX⑧被批准作为表达EGFR的转移结肠直 肠癌患者的二线治疗用药，这些患者对于基于依立替康(irinotecan)的 化疗是耐受的。双臂II期临床研究和单臂研究的结果表明， ERBITUX㊣与依立替康联合应用分别有23%和15%的反应率，中位疾 病进展时间分别是4.1和6.5月。来自同一项双臂II期临床试验和另 一项单臂研究的结果表明，ERBITLTX^单独治疗的反应率分别是11% 和9%,中位疾病进展时间分别是1.5和4.2个月。因而在瑞士和美国，ERBITUX⑧与依立替康的联合应用，以及在 美国，ERBITUX⑧的单独治疗都已经被批准作为二线治疗药物，用于那些在依立替康一线治疗中失败的结肠癌患者。因此，与Herceptin 一样，ERBITUX⑧治疗在瑞士只被批准作为单克隆抗体和化疗联合应 用。此外，在瑞士和美国，ERBITUX②治疗只被批准作为患者的二线 治疗。同样，在2004年，AVASTIN⑧被批准与基于静脉注射5-氟尿嘧 啶的化疗联合应用，作为转移性结肠直肠癌的一线治疗。III期临床研 究结果表明，与单独使用5-氟尿嘧啶相比，联合应用AVASTIN 和5-氟尿嘧咬延长了患者的中位存活时间(分别是20个月和16个月)。然 而，还是与Herceptin㊣和ERBITUX⑧一样，AVASTIN⑧只被批准作为单 克隆抗体与化疗联合应用。对于肺脏、脑、卵巢、胰腺、前列腺和胃癌的治疗，疗效仍然很 差。在II期临床试验中，得到了近期对于非小细胞肺癌最有希望的结 果，其治疗包括与细胞杀伤药物阿霉素偶联的单抗(SGN-15;dox-BR96， 抗-Sialyl-LeX)和化疗试剂TAXOTERE⑧的联合应用。TAXOTERE⑧是 唯一经FDA批准的用于肺癌二线治疗的化疗药物。初始数据表明，与 单独使用丁八乂0丁￡1^@相比，总体存活率提高。参与本研究的62个患 者中，三分之二接受了 SGN-15与TAXOTERE㊣的联合治疗，剩下的 三分之一接受了 TAXOTERE 的单独治疗。接受SGN-15与 丁八乂0丁￡1^@联合治疗的患者中位总体存活时间是7.3个月，而接受 丁八乂0丁￡1^@单独治疗的患者中位存活时间是5.9个月。与接受 TAXOTERE⑧单独治疗的患者的1年和18个月的总体存活率为24%和 8%相比，接受SGN-15与TAXOTERE⑧联合治疗的患者是29。/。和18%。 进 一 步的临床试^r在计划中。临床前试验中，使用单克隆抗体治疗黑色素瘤取得了有限的成功。 这些抗体中，极少有达到临床试验期的。直到目前为止，还没有一种 得到批准，或在III期临床试验中显示出良好效果的。治疗疾病的新药的发现由于缺乏在30， 000种已知基因的产物中 鉴别相关靶点而滞后，这些靶点明确促进疾病的发生。在肿瘤学研究 中，潜在的药物靶点只因为在肺瘤细胞中过表达而经常被选择。随后， 这样鉴别的靶点通过与大量化合物的相互作用被筛选。就潜在抗体的 治疗而言，这些候选化合物通常由制备单克隆抗体的传统方法所产生，该方法依据Kohler和Milstein所发表的基本原理(1975， Nature, 256, 495497， Kohler and Milstein)。从抗原免疫过的小鼠(举例来说，全细 胞，细胞成分，纯化的抗原)收集脾细胞，并与永生的杂交瘤细胞伴 侣融合。根据与靶抗原密切结合的抗体的分泌来筛选所产生的杂交瘤。 许多针对癌细胞诊断和治疗的抗体，包括Herceptin⑧和RITUXIMAB， 已经用这些方法制备，并已基于它们的亲和性筛选出来。这项策略的 缺陷是双重的。首先，与用于诊断和治疗的抗体结合的合适的靶标的 选择是有限的，这是由于对组织特异性的癌症过程的认识贫乏和产生 结果的过分单纯化的方法，比如通过过表达鉴别靶标来筛选。其次， 通常认为与受体有最大亲和性的药物分子启动或抑制信号通路的可能 性最大，但并不总是如此。尽管乳癌和结肠癌的治疗取得了 一些进展，但是有效的抗体治疗 (作为单一试剂应用或联合应用)的鉴定与开放对所有类型癌症是不够的。现有专利美国第5,750,102号专利公开了一种方法，用MHC基因转染患者 的肿瘤细胞，该基因可从患者的组织或细胞中克隆。然后用这些转染 的细胞免疫患者。美国专利4,861,581公开了一种方法，包括获取单克隆抗体，该 抗体对哺乳动物肿瘤细胞和正常细胞的细胞内成分是特异的，对细胞外成分没有特异性；标记单克隆抗体；将该标记的抗体与哺乳动物的 组织接触，该哺乳动物已接受杀灭肿瘤细胞的治疗；及，通过测量该 标记抗体与退化的肺瘤细胞的细胞内成分的结合来确定治疗的有效 性。在制备针对人类细胞内抗原的抗体时，专利权所有人认识到肿瘤 细胞是这类抗原的一个方便来源。美国专利5,171,665提供了一种新型抗体及其制备方法。具体的， 该专利叙述了 一种单克隆抗体的制备，该抗体与人类肿瘤(例如肠癌和 肺癌)相关的蛋白抗原强烈结合，而与正常细胞的结合弱得多。美国专利5,484,596提供了一种癌症治疗的方法，包括手术切除人癌症患者的肿瘤；处理肿瘤组织以获得肿瘤细胞；照射肿瘤细胞， 使其能成活但不致瘤；用这些细胞来制备抑制原发性肿瘤复发，同时 抑制肿瘤转移的患者疫苗。该专利讲述了能够与肿瘤细胞表面抗原反 应的单克隆抗体的开发。如在第4栏，第45行等处提到的，专利权所 有人在研发单克隆抗体中应用了自体肿瘤细胞，该单克隆抗体对人类 肿瘤表现出活性特异的免疫治疗。美国专利5，693，763讲述了人类癌细胞的糖蛋白抗原特性且不依 赖于来源的上皮组织。美国专利5,783,186涉及诱导表达Her2的细胞凋亡的抗-Her2抗 体，产生该抗体的杂交瘤细胞系，用该抗体治疗癌症的方法和包括所 述抗体在内的药物组合。美国专利5,849,876描述了产生单克隆抗体的新的杂交瘤细胞系， 该抗体是针对从肿瘤细胞和非肿瘤细胞来源纯化的粘液素抗原。美国专利5,869,268公开了 一种制备产生特异针对目标抗原的人 类淋巴细胞的方法，制备单克隆抗体的方法及该方法制备的单抗。该 专利特别公开了用于癌症诊断和治疗的抗-HD人类单克隆抗体的制 备。美国专利5,869,045涉及与人类癌细胞反应的抗体、抗体片段、抗 体偶联物和单链免疫毒素。这些抗体的作用机制是双重的，其中该分 子可与人类癌细胞表面的细胞膜抗原反应，而且该抗体可进一步内化 入癌细胞内，随后是结合，这对形成抗体-药物，抗体-毒素的偶联物 尤其有用。未经修饰的抗体在特定浓度下，也表现出细胞毒性质。美国专利5,780,033公开了用于肿瘤治疗和预防的自身抗体的使 用。不过，这种抗体是来自老年哺乳动物的抗核自身抗体。这里，自 身抗体是指一种存在于免疫系统的天然抗体。因为自身抗体来自"老 年哺乳动物"，所以就不要求自身抗体必须来自受治患者。除此之外， 该专利公开了来自成年哺乳动物的天然单克隆抗核自身抗体及产生单 克隆抗核自身抗体的杂交瘤细胞系。发明概述本申请利用美国专利6,180,357讲述的制备患者特异性的抗癌抗 体的方法，以分离编码调节癌性疾病的单抗的杂交瘤细胞系。这些抗 体可以针对一个肿瘤而特别制备，从而使癌症的个体化治疗成为可能。 在本申请公开的内容中，有杀细胞(细胞毒的)或抑制细胞生长(细胞生 长抑制的)特性的抗癌抗体将在下文被称为细胞毒性作用的。这些抗体 可以辅助癌症的分期和诊断，可以用于治疗肿瘤转移。这些抗体也可 以通过预防性治疗来预防癌症。与传统的药物发现模式下制备的抗体 不同，用本方法制备的抗体把在以前没有表明对恶性组织生长和/或存 活必需的分子和通路作为目标。此外，这些抗体的亲和性满足启动细 胞毒性作用事件的要求，该事件可不顺从于更强的亲和性相互作用。 同样，本发明的范围还包括将传统的化疗调节物质，比如放射核，与 本发明中的CDMAB偶联，从而使所述的化疗作用集中。该CDMAB 也可与毒素、细胞毒性部分、酶(例如生物素结合酶)或造血细胞偶联， 由jt匕形成抗体^f禺联物。个体化抗癌治疗前景将会带来癌症患者治疗方式的变化。 一个可 能的临床情境就是在肿瘤出现时，就获取肿瘤样本并入库。通过该样 本，从预存在的调节癌性疾病的抗体组中对该肿瘤进行分型。可常规 地对该患者进行分期，但提供的抗体可用于该患者的进一步分期。可 以用已有的抗体直接对该患者进行治疗，而肿瘤特异性的抗体组可以 通过本文中列出的方法来制备或通过噬菌体显示库与本文公开的筛选 方法合用来制备。既然其他肿瘤可能携带与被治疗肿瘤相同的抗原表 位，制备的所有抗体将被加入到抗癌抗体库中。按照本方法制备的抗 体可以用于治疗许多患有与这些抗体结合的癌症的患者的癌性疾病。除抗癌抗体之外，患者可以选择接受目前推荐治疗作为多模式治 疗方案的一部分。通过本方法分离的抗体对于非癌细胞相对无毒性这 一事实允许大剂量使用抗体组合，要么单独应用，要么与传统的治疗 联合应用。高治疗指数也允许短期内的重复治疗，从而降低了治疗抗 性细胞出现的可能性。如果患者对治疗的初始阶段产生抗性或发生转移，可以重复肿瘤 特异性抗体的制备过程用于再次治疗。而且，该抗癌抗体可以与vMv该患者体内获得的红细胞偶联，重新输注到患者体内用于治疗转移肿瘤。 目前几乎没有有效的治疗转移癌的方法，而转移通常预示着导致死亡 的不良结果。然而，转移癌通常血管丰富，通过红细胞来运输抗癌抗 体可以使抗体富集在肿瘤部位。即便在转移之前，大多数癌细胞也要 依赖于宿主的血供来存活，与红细胞结合的抗癌抗体对原位肿瘤同样 有效。或者，抗体可以与其他的血细胞，比如、淋巴细胞、巨噬细胞、 单核细胞、自然杀伤细胞等结合。抗体有五类，每类都与其重链所赋予的功能相关。通常认为通过 抗体依赖的细胞毒性作用或补体依赖的细胞毒性作用来介导棵抗体(naked antibodies)的癌细胞杀伤功能。例如，鼠IgM和IgG2a抗体能 够结合补体系统的C-1组分来活化人补体，从而活化导致肿瘤裂解的 补体活化的经典途径。对于人类抗体，最有效的补体激活抗体通常是 IgM和IgGl。鼠IgG2a和IgG3同种型抗体可以有效地召集具有Fc 受体的细胞毒细胞，导致单核细胞、巨噬细胞、粒细胞和某些淋巴细 胞的细胞杀伤作用。人IgGl和IgG3同种型抗体介导ADCC。抗体介导的癌症杀伤功能的另 一可能机制是使用能够催化细胞膜 及其相关糖蛋白或糖脂中不同的化学键水解的抗体，即所谓的催化抗 体。抗体介导的癌细胞杀伤功能还有三种机制。第 一种是抗体作为疫 苗诱导机体产生针对癌细胞推定抗原的免疫反应。第二种是用抗体靶 向生长受体，干扰其功能或下调受体，导致其功能有效丧失。第三种 是这类受体与细胞表面部分直接结合，这可导致细胞的直接死亡，比 如与i者如TRAIL Rl或TRAIL R2的死亡受体结合，或是与"^如o!V/5 3 等的整合素分子结合。抗癌药物的临床应用是基于该药物在可接受的风险范围下对患者 的益处。在癌症治疗过程中，存活率通常是最重要的目的。但是，除 了延长寿命之外，还有一些其他公认的益处。这些对存活率没有负面 影响的其他益处包括症状减轻、防止副作用、延长复发时间或无疾病 存活时间及延长病情进展时间。这些标准是被普遍接受的，像美国食 品药品管理局(F.D.A.)等管理机构批准产生这些益处的药物(HirschfeldW a/. Critical Reviews in Oncology/Hematolgy 42:137-143 2002》除了这 些标准之外，还有一些其他的指标，可以预测这些类型的益处。在某 种程度上，美国FDA准许的快速审批程序肯定了可能预测患者效益的 替代品的存在。到2003年末，有16种药物在这种程序下得到批准， 在这些药物中，有四种进入了完全审批，即后续的研究已经显示了直 接的患者受益，正如替代指标预测的那样。决定药物对实体肿瘤疗效 的一个重要的指标是通过测定对治疗的反应来评价肿瘤负荷 (Therasse " a/. Journal of the National Cancer Institute 92(3):205-216 2000)。这类评价的临床标准(RECIST criteria)已经由实体肿瘤反应评 价标准工作组(Response E valuation Criteria in Solid Tumors Working Group), —个国际癌症专家组公布。正如RECIST标准的客观疗效显 示的，与适当的对照组相比，对肿瘤负荷有确切作用的药物易于最终 对患者产生直接的益处。通常，能够更直接地评价和记录临床前设置 的肿瘤负荷。因为临床前研究可以转化成临床设置，所以在临床前模 型中延长患者存活率的药物应该有最大的预期临床效用。与临床治疗 产生的积极作用相似，在临床前设置中减轻肿瘤负担的药物也对疾病 有明显的直接影响。尽管延长生存时间是癌症药物治疗结果中最关注 的临床结果，但仍有其他有临床作用的益处，显然，降低肿瘤负荷也 能导致直接的益处，并具有临床作用，其与疾病进展的延迟、生存时 间的延长或两者都有关系(Eckhardt & a/. Developmental Therapeutics: Successes and Failures of Clinical Trial Designs of Targeted Compounds(发展的治疗学靶化合物的临床试验设计的成功与失败); ASCO Educational Book, 39th Annual Meeting, 2003, pages 209-219)。本发明描述了 AR59A269.5的开发和应用，其通过在细胞毒性作 用分析和人类癌症的动物模型中的作用得到鉴定。本发明描述了特异 性结合存在于靶分子上的一个或多个抗原决定簇的试剂，其作为棵抗 体，在体外对恶性肿瘤细胞也有细胞毒性作用，对正常细胞没有毒性 作用，也可作为棵抗体直接介导肿瘤生长的抑制作用。更进一步的优 点是应用诸如此类的抗癌抗体靶向表达同类抗原标志物的肿瘤以实现 肿瘤生长的抑制及癌症治疗的其他阳性目标。总之，本发明讲述了 AR59A269.5抗原作为治疗试剂靶点的应用， 当给予AR59A269.5时，可以减轻哺乳动物中表达该抗原的癌症的肿 瘤负荷。本发明也讲述了 CDMAB(AR59A269.5)及其衍生物、其抗原 结合片段和其细胞毒诱导性配体，在耙向它们的抗原，降低哺乳动物 的表达该抗原的癌症的肿瘤负荷中的应用。而且，本发明也讲述了在 癌细胞内检测AR59A269.5抗原的应用，其用于携带表达该抗原的肿 瘤的哺乳动物的i貪断、治疗的预测及预后。因此，本发明的目的是利用产生癌性疾病调节抗体(CDMAB)方 法，该抗体针对来自特定个体的癌细胞，或一个或多个特定癌细胞系， 该CDMAB对癌细胞有细胞毒性作用，而同时对非癌细胞相对无毒， 该方法是为了分离杂交瘤细胞系和该杂交瘤细胞系编码的相应的分离 单克隆抗体及其抗原结合片段。本发明的另一个目的是说明癌性疾病调节抗体、配体及其抗原结 合片段。本发明进一步的目的是制备癌性疾病调节抗体，其细胞毒性作用 由抗体依赖的细胞毒性作用介导。本发明另 一个目的是制备癌性疾病调节抗体，其细胞毒性作用由 补体依赖的细胞毒性作用介导。本发明还有进一步的目的是制备癌性疾病调节抗体，其细胞毒性 作用是其催化细胞化学键水解的能力。本发明还有进一步目的是制备癌性疾病调节抗体，其用于癌症诊 断、预后和监测的结合分析。本发明其他的目的和优点通过本发明下述的说明、举例和一些实 施方式的描述将变得显而易见。附图简要说明本专利或申请文件包含至少 一张彩色图片。依据请求并支付必要 费用后，专利局会提供带彩色附图的本专利或申请文件公开文本的复 印件。

图1比4交了杂交瘤上清液对MDA-MB-231、 OVCAR-3、 SW1116、Lovo和CCD-27sk细胞系的细胞毒性作用百分比及结合水平。图2显示AR59A269.5和抗-EGFR对照组与癌细胞及正常细胞系 的结合。以相对于同种型对照的倍增来表示平均荧光强度，数据以表 格形式呈现。图3包括针对几种癌细胞和非癌细月包系的AR59A269.5和抗 -EGFR抗体的典型FACS图。图4显示AR59A269.5在预防性LoVo结肠癌-漠型上对肿瘤生长 的影响。垂直线表示给予抗体的阶段。数据点代表平均值+A标准误。图5显示AR59A269.5在预防性LoVo结肠癌模型上对体重的影 响。数据点代表平均值+A标准误。附图6显示AR59A269.5在预防性DLD-1结肠癌^t型上对肿瘤生 长的影响。垂直线表示给予抗体的阶段。数据点代表平均值+/-标准误。附图7显示AR59A269.5在预防性DLD-1结肠癌才莫型上对体重的 影响。数据点代表平均值+/-标准误。图8以表格的形式比较了 AR59A269.5与阳性、阴性对照在人体 异种移植肿瘤组织中IHC的结果。图9A， 9B, 9C和9D是代表性的显孩i照片，显示AR59A269.5与 乳腺MDA-MB-231 (A)或结肠SW1116 (B)异种移植胂瘤组织的结合模 式或者緩沖液对照与乳腺MDA-MB-231(C)或结肠SW1116 (D)异种移 植肺瘤组织的结合才莫式。AR59A269.5在肺瘤细胞内显示了阳性染色。 》文大倍数是200倍。发明的详细描述下面用于概述、描述、实施例和权利要求书中的字词或短语通常 都有其指定的含义。术语"抗体"使用其最广泛的涵义，且特别包括，例如单克隆抗 体(包括激动剂、拮抗剂和中和抗体，脱免疫的、鼠科的、嵌合的或人 源化的抗体)、携带有多表位特异性的抗体组合物、单链抗体、抗体的 免疫偶联物和抗体片段(见下文)。本发明中使用的术语"单克隆抗体，，指从一群基本上同质的抗体中获得的一种抗体，也就是说，包括这群抗体的单个抗体是相同的， 除了可以少量存在的可能的自然变异。单克隆抗体针对单一抗原位是 高度特异性的。而且，与包含针对不同决定基(抗原决定簇)的不同抗 体的多克隆抗体制剂相比，每一种单克隆抗体针对抗原上的单一的决 定基。除了特异性之外，单克隆抗体在合成方面也是有优势的，其合 成可以不受其他抗体的污染。修饰语"单克隆的"指从基本同质的抗 体群中获得的抗体的特征，而不能解释为通过任何特定的方法需要抗体生产的。例如，本发明中4吏用的单克隆抗体可以通过由Kohler^a/., A^mm, 256:495 (1975)首次描述的杂交瘤(鼠源或人源)方法制备或由 重组DNA方法制备(参见，例如，美国专利第4,816,567号)。"单克 隆抗体"也可以从噬菌体抗体库中分离，使用的技术在例如Clackson W a/"胸匿，352:624- 628 (1991)和Marks " a/, J. Mol. Biol, 222:581 -597 (1991)中描述过。"抗体片段"包含完整抗体的一部分，优选包括其抗原结合区域 或可变区。例如，抗体片段包括非全长的抗体、Fab、 Fab'、 F(ab')2 和Fv片段；微型双功能抗体(diabodies);线形抗体；单链抗体分子； 单链抗体，单结构域抗体分子，融合蛋白，重组蛋白和由抗体片段形 成的多特异性抗体。"完整"抗体指不但包含轻链恒定区(CL)和重链恒定区CH1、 CH2、 CH3，还包含结合抗原的可变区的抗体。恒定区可以是天然序 列的恒定区(例如，人天然序列恒定区)或其氨基酸序列的变体。优选 地，完整抗体有一个或多个效应器功能。依据其重链恒定区的氨基酸序列，完整抗体可以分为不同的"种 类，，。有五种完整的抗体IgA、 IgD、 IgE、 IgG和IgM，其中几 种可进一步分成"亚类，，(同种型)，例如，IgGl、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgA和IgA2。与不同种类抗体对应的重链恒定区分别被称为S, e, 7 和m。不同种类的免疫球蛋白的三维空间结构和亚结构是公知的。抗体"效应器功能"指那些由抗体Fc区引起的(天然序列的Fc区 或氨基酸序列变异的Fc区)的生物活性。抗体效应器功能的例子包括 CIq结合；补体依赖的细胞毒性作用；Fc受体结合；抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体的下调(例如B 细胞受体；BCR)等。"抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用"和"ADCC"指一种细 胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性的细胞毒细胞(例 如自然杀伤(NK)细胞，噬中性粒细胞和巨噬细胞)识别结合在靶细胞上 的抗体，随后导致该靶细胞的裂解。介导ADCC的主要细胞，NK细 胞，只表达Fc7Rin,而单核细胞表达FcryRI, Fc7Ri1和Fc7RIIL关于 造血纟田月包FcR表达的总结见Ravetch and Kinet, 7m附wwo/ 9:457-92 (1991)464页的表3。为了测定目标分子的ADCC活性，可以 进行例如美国专利5,500,362或5,821,337描述的体外ADCC活性测 定。用于这类分析的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤 (NK)细胞。选择地或附加地，目标分子的ADCC活性可以在体内评价， 例如在诸如Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998)中^>开的动物 模型中。"效应细胞"指表达一种或多种FcR、执行效应器功能的白细胞。 优选地，这些细胞至少表达Fc7Rin,并执行ADCC效应器功能。介 导ADCC的人类白细胞的实例包括外周血单核细胞(PBMC)、自然杀 伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒T细胞和中性粒细胞；优选PBMC和 NK细胞。效应器细胞可以从其天然来源中分离，例如从本文中描述 的血液或PBMC中分离。术语"Fc受体"或"FcR"用于描述结合于抗体Fe区的受体。优 选的FcR是天然序列的人类FcR。而且，优选的FcR是结合于IgG抗 体(受体)的受体，并包^舌Fc7RI， Fc7RH，和Fcy RIII亚类的受体，其包 括这些受体的等位基因变体和选择性的剪切形式。Fc7RH受体包括 Fc7RIIA("激活性受体")和Fc7RIIB("抑制性受体")，两者的氨基 酸序列相似，主要不同在于其胞浆区。激活性受体F(ryRIIA在其胞浆 区含有免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。抑制性受体Fc7RIIB在其胞 浆区含有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)。(参见综述M. in Dagron, i ev. 7wmwwo/. 15:203-234 (1997)。 Ravetch and Kinet， i ev. 7m聽m / 9:457-92(1991》Capel & a/" /m聽wCAoA 4:25-34 (1994)和de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)对FcR进行了综述。 本发明中的术语"FcR"包括将来要被确认的FcR在内的其他FcR。 该术语也包括负责将母体的IgG转运到胎儿体内的新生受体， FcRn(Guyer e《a/.， 《/. /mmwwo/, 1 17:587 (1976)和Kim W a/.， /. /mm謹/. 24:2429 (1994))。"补体依赖性细胞毒性作用"或"CDC"指分子在补体存在下， 裂解靶细胞的能力。补体激活途径通过补体系统的第一组分(CIq)与交 联了同类抗原的分子(比如，抗体)的结合启动。为了评价补体激活， 可以进4亍长口 Gazzano-Santoro & a/.，7m附wwo/. A/eAo^s 202:163 (1996) 中描述的CDC分析。术语"可变的"指可变区某些部分的序列在抗体间高度不同，并 用于每一种特定抗体与其特定抗原的结合及其特异性。然而，变异并不是均匀分布在抗体的可变区域内。在轻链和重链的可变区域内，变 异集中在所谓的高度可变区的三个区域内。可变区内更加高度保守的 部分被称为骨架区(FR)。每个天然的重链和轻链可变区，包含主要采 用/3-片层构型的四个FR,由三个高度可变区连接在一起，形成环状连 接，在一些情况下形成部分〉片层结构。每条链的高度可变区由FR以 密切靠近的方式结合一起，并与其他链的高度可变区一起，有助于抗 体的4元原结合部4立的形成(参见Kabat a/， Se《wewc&s o/ iVW">w o/ 7mmwwo/og/ca/7n^ra^(06瘦夢《^^蛋々的y^/力，5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. pp 15-17; 48-53 (1991))。恒定区并不直接参与抗体与抗原的结合，而是呈现各种效应 器功能，例如参与抗体在抗体依赖性的细胞毒效应(ADCC)中的作用。 本发明中使用的术语"高度可变区"指抗体上负责与抗原结合的 氨基酸残基。高度可变区通常包括"互补决定区"或"CDR"的氨基 酸残基(例如轻链可变区的氨基酸残基24-34 (LI )、 50-56 (L2)和 89-97 (L3)及重链可变区的氨基酸残基31 -35 (Hl)、 50-65 (H2)和 95-102 (H3); Kabat d a/， 5^wewcas o/ iVotoVw /mmwwo/og/ca/ 瘦夢《^^蛋冷的^/y」，5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda， Md. pp 15-17; 48-53 (1991))和/或"高变环"区的氨基酸残基(例如轻链可变区的残基2632 (Ll)、 50-52 (L2)和91 -96 (L3)及重链可变区的26-32 (Hl)、 53-55 (H2)和96-101 (H3); ChothiaandLeskJ. Mo/.历o/. 196:901-917 (1987))。"骨架区，， 或"FR"残基指除了本发明定义的高变区残基之外的那些可变区的残 基。木瓜蛋白酶水解抗体产生了两个相同的被称为"Fab"片段的抗原 结合片段和一个残余的"Fc"片段，每个"Fab"片段都有单一的抗原 结合部位，"Fc"片段的名称反映了其易结晶的能力。抗体经胃蛋白 酶处理后，产生F(ab')2片段，其有两个抗原结合部位，仍能够与抗原 交联。"Fv，，是携带完整的抗原识别和抗原结合部位的最小抗体片段。此 区域由以非共价4定的方式紧密结合的一条重链和一条轻链可变区的二 聚体构成。以这种每个可变区的三个高变区相互作用的结构决定 VH-VL 二聚体表面的抗原结合部位。六个高变区域共同赋予了抗体的 抗原结合特异性。然而，即便单一的可变区(或只含有三个抗原特异性 高变区的部分Fv)仍能够识别和结合抗原，虽然比完整结合位点的亲 和性低。Fab片段也含有轻链恒定区和重链的第一恒定区(CH1)。 Fab' 片段与Fab片段的不同在于重链CH1区的羧基末端多了几个氨基酸 残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH在本发明 中指代Fab'，其中恒定区的半胱氨酸残基至少携带一个游离的硫基。 最初的F(ab')2抗体片段以Fab'片段对产生，之间有铰链的半胱氨酸。 其他的抗体片段的化学偶联也是公知的。来自任一脊推动物的抗体的"轻链"都可以归于两种截然不同的 所谓kappa (k)和lambda (X)链中的一种，k和X链的分类基于其恒定区 的氨基酸序列。"单链Fv"或"scFv"抗体片段包含抗体的Vh和Vl区，其中这 些区域存在于单一的多肽链上。优选地，Fv多肽进一步包含VH和VL 区之间的多肽连接子，使scFv形成适于抗原结合的结构。关于scFv 的综述参见 Pltickthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies(单克隆抗体药理学)，vol. 1 13， Rosenburg and Moore eds" Springer-Verlag， New York, pp. 269- 315 (1994)。术语"双功能抗体(Diabodies)'，指带有两个抗原结合位点的小型 抗体片段，其在同 一多肽链上(VH-VJ含有与轻链可变区(VO结合的重 链可变区(VH)。使用连接子，该连接子过短不能在同一条链上使两个 区域成对，这些区域被迫与另一条链上的互补区域配对，由此产生了 两个抗原结合位点。例如在EP 404,097; WO 93/11161;和Hollinger " a/. , A^/Sc/. t/&4， 90:6444-6448 (1993).中对于双功能抗体作了更详细的描述。"分离"抗体是指从其天然环境的组分中鉴别、分离和/或恢复的 抗体。其天然环境下的污染成分是指干扰抗体诊断或治疗作用的物质， 可能包括酶、激素和其它的蛋白质或非蛋白质溶质。因为抗体的天然 环境中的至少一种组分可能不存在，分离抗体包括重组细胞内部的原 位抗体。但是，通常分离抗体会经过至少一步的纯化步骤来制备。"结合"目的抗原的抗体是指对该抗原有充分亲和力的抗体，以 致该抗体在耙定表达该抗原的细胞时，可以作为治疗或诊断试剂。如 果抗体能结合抗原性部分，它通常会优先结合其抗原性部分，而不是 其它受体，这不包括偶然的结合，像非特异性的Fc接触或与其他抗原 共有的翻译后修饰成分结合，该抗体不会与其他蛋白有明显的相互作 用。检测与目的抗原结合的抗体的方法在本领域中是公知的，可包括 但并不局限于例如FACS 、细胞ELISA和Western印迹等分析。正如本发明中使用的，"细胞"、"细胞系"、"细胞培养物" 的表述可以交替使用，所有这些用法都包括其子代。也可以理解为由 于人为的或非人为的突变，所有的子代在DNA组成上不可能完全相 同。在原始转化细胞内筛选的有相同功能或生物学活性的突变子代包 括在内。在上下文中，能够清楚有意使用不同的指代。"治疗"既指治疗性处理，也指预防性或防止的措施，其目的就 是预防或减緩(减轻)目标的病理状态或病症。需要治疗的个体不仅包 括那些将发展为该病症的或名夂对其病症进行预防的个体，还包括那些 已经存在所述病症的个体。因此，本文中欲被治疗的哺乳动物可已经 被i會断为患有该病症可倾向于或易感于该病症。术语"癌症"和"癌性(的)"是指或描述哺乳动物的生理状态，其典型特征是细胞生长或死亡不受调控。癌症的例子包括但不限于癌、 淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。这些肿瘤更多具 体的例子包括鳞状细胞癌(例如鳞状上皮细胞癌)，包括小细胞癌、非 小细胞癌、腺癌和鳞癌在内的肺癌，腹膜癌，肝细胞癌，包括胃肠道 癌在内的胃癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝脏癌症， 膀胱癌，肝细胞瘤，乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内 膜癌，唾液腺肺瘤，肾癌，前列腺癌，外阴肺瘤，曱状腺癌，肝癌， 肛癌，阴茎癌，还有头颈部癌。"化疗剂"是用于癌症治疗的化合物。化疗剂的例子包括诸如 p塞替派和环磷酰胺(CYTOXANTM)的烷化剂；例如白消安(busulfan)、 英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)的烷基磺酸酯类；如苯佐 替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)、乌瑞替派(uredopa) 的氮丙。定类；包括六曱蜜胺、曲他胺(triethylenemelamine)、三亚乙基 磷酰胺、三亚乙基疏代磷酰胺 和三曱基奥罗蜜胺 (trimethylolomelamine)在内的乙烯亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类 (methylamelamine);如瘤可宁(chlorambucil)、萘氮芥、环磷酰胺、雌 莫司汀(estramustine)、异环石岸酰胺、氮芥(mechlorethamine)、盐酸曱氧 氮芥、美法仑、新氮芥(novembichin)、 苯乙酸氮芥(phenesterine)、 泼 尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀(uracil mustard)等氮芥类药物；如卡氯 芥、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀等硝脲类 (nitrosureas);如阿克拉霉素类、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、 博来霉素、放线菌素C、加里刹霉素、洋红霉素、碳霉素(carnomycin)、 嗜癌霉素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托咪定、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素、表阿霉素、依索比星、依达比星、麻西罗 霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、灰霉素、otfiromycin、 噤呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、 乌苯美司、净司他丁、佐柔比星类抗生素；甲氨碟呤和5-氟尿嘧啶(5-FU) 类抗代谢类药；如二曱叶酸、氨曱喋呤、蝶罗呤、三甲曲沙等叶酸拟 似物；如氟达拉滨、6-巯嘌呤、》危米嘌呤、碌^鸟嘌呤类噪呤类似物； 如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU等嘧啶类似物；如卡鲁睾 酮、屈他雄酮丙酸酯、表硫雄醇、美雄烷、睾内酯酮等男性激素类药 物；如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦等抗肾上腺类药物；如亚叶酸等 叶酸补充物；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶； bestrabucil;比生群；依达曲沙；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌依氟 鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达 明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；尼曲吖啶；喷司他丁；蛋氨氮 芥；吡柔比星；足叶草酸；2-乙肼；丙卡巴肼；PSK ;雷佐生；西佐 喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2'，2"-三氯三乙胺；乌拉 坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇； 哌泊渙烷；gacytosine;阿拉伯糖苷("Ara-C");环磷酰胺；塞替派； 如紫杉醇(TAXOL， Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ.)和 多西4也赛(TAXOTERE㊣，Aventis, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France) 等紫杉烷类；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；曱氨蝶 呤；如顺铂和卡柏等柏类似物；长春碱；柏；依托泊苷(VP-16);异环 磷酰胺；丝裂霉素C;米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；去曱长春碱； 诺消灵(novantrone);替尼泊苷；柔红霉素；氨蝶呤钠；希罗达；伊班 膦酸钠；CPT-11;拓朴异构酶抑制剂RFS 2000; 二氟曱基鸟氨酸 (DMFO);视黄酸；esperamicins;卡培他滨；以及上述4壬一种药物在 药学上可接受的盐、酸或衍生物。调节或抑制激素对胂瘤作用的抗激 素类药物也包括在本定义内，像抗雌激素药物，例如，包括它莫西芬、 雷洛昔芬、芳香化酶抑制剂4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、 雷诺昔芬，LY117018、奥那司酮、托瑞米芬(法乐通)；抗雄激素物质， 例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林；以及上述 任一种药物在药学上可接受的盐、酸或衍生物。用于治疗目的的"哺乳动物"指任何一种可归于哺乳类的动物， 包括人类、小鼠、免疫缺陷鼠或棵鼠或品系小鼠、家畜和农场动物及 动物园内的动物、体育动物或宠物，比如绵羊、狗、马、猫、母牛等。 优选地，本发明中的哺乳动物指人类。"寡核香酸"指短长度、单链或双链多聚脱氧核苷酸，其可利用已知的方法化学合成(例如磷酸三酯、亚磷酸盐、亚磷酰胺化学，利用例如发表于1988年5月4日的EP 266,032描述的固相4支术；或利用 Froehler e, a/,v4cz^s14:5399-5407, 1986描述的脱氧核苷H-磷酸盐中间物)，然后用聚丙烯酰胺凝胶纯化。"嵌合"抗体指免疫球蛋白，其部分重链和/或轻链与来源于特定 种属或属于特定抗体种类或亚类的抗体的对应序列相同或同源，同时 链上余下序列与来源于另一种属或属于另一种类或亚类的抗体的对应 序列相同或同源，此外还指这些抗体的片段，只要这些片段能够表现 出所需的生物活性(美国专利4,816,567和Morrison C A^/. 颠& ,, 81 :6851 -6855 (1984》。非人类(例如鼠科)抗体的"人源化"形式指特殊的嵌合免疫球蛋 白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fv， Fab, Fab', F(ab)2或抗体的其他抗 原结合序列)。在绝大多数情况下，人源化抗体是人的免疫球蛋白(受 者抗体)，其中，互补决定区的氨基酸残基被诸如具有所需的特异性、亲和力、能力的小鼠、大鼠或兔等的非人类抗体(供者抗体)的CDRs 的残基所替代。在一些情况下，人类免疫球蛋白的Fv骨架区(FR)残 基被相应的非人类FR残基所替代。此外，人源化抗体可能还包含既 不在受者抗体也不在供者抗体的CDR或FR序列的残基。这些修饰 进一步改善和优化了抗体的性能。通常，人源化抗体包含至少一个， 通常是两个可变区的几乎所有的部分，其中所有或几乎所有的CDR 区对应非人类免疫球蛋白的CDR区，而所有或几乎所有的FR残基是 人类免疫球蛋白共有序列的FR残基。人源化抗体也最适宜包含至少 一部分的免疫球蛋白恒定区序列，通常是人类免疫球蛋白的序列。"去免疫化"抗体是对给定的物种没有免疫原性或免疫原性较差 的免疫球蛋白。通过改造抗体的结构可以实现去免疫化。任何本领域 技术人员公知的去免疫化技术都可以-使用。例如，在发表于2000年6 月15日的WO 00/34317中，描述了 一项使抗体去免疫原性的适当的 技术。诱导"细胞凋亡"的抗体是指通过任一方式诱导程序性细胞死亡 的抗体，该方式例如但不局限于结合annexin V(膜联蛋白V)、caspase(半胱天冬酶)活性、DNA断裂、细胞皱缩、内质网扩张、细胞 破碎和/或膜嚢泡(所谓的凋亡小体)的形成。在本说明书中，杂交瘤细胞系及其产生的分离单抗可选择用内部 分类号AR59A269.5或保藏号IDAC 170505-01来表示。本发明中使用的"抗体-配体"包括至少对靶抗原的一个抗原决定 簇有结合特异性的部分，可以是完整的抗体分子、抗体片段和至少有例如，Fv分子、Fab分子、Fab'.sub.2分子、双特异性抗体、融合蛋白 或任一基因工程分子，其特异性识别和结合至少一个抗原决定簇，该 抗原可与IDAC 170505-01杂交瘤细胞系(IDAC 170505-01抗原)产生 的分离的单抗结合。本发明中使用的"癌性疾病调节抗体"(CDMAB)指能够以有益于 患者的方式，例如通过减轻肿瘤负荷或延长肿瘤患者的生存期的方式， 改善癌性疾病进程的单克隆抗体和其抗体-配体。本发明中使用的"抗原结合区"指识别靶抗原的分子的部分。本发明中使用的"竟争性抑制"是指能够识别和结合由IDAC 170505-01杂交瘤细胞系产生的单抗(IDAC 170505-01抗体)针对的抗 原决定表位，通过常规的抗体相互竟争测定来检测。(Belanger L.,Sylvestre C. and Dufour D. (1973)， Enzyme linked immunoassay for alpha fetoprotein by competitive and sandwich procedures(竟争和夹心法 的曱胎蛋白的酶耳关免疫测定).Clinica Chimica Acta 48, 15)。本发明中使用的"靶抗原"指IDAC 170505-01抗原或其部分。本发明中使用的"免疫偶联剂"指诸如抗体的任一分子或CDMAB 以化学或生物学方式与细胞毒素、放射物质、酶、毒素、抗肿瘤药或 治疗剂结合。只要能够与其靶标结合，该抗体或CDMAB可以在其分 子的任一部位与细胞毒素、放射物质、抗肿瘤药或治疗剂连接。免疫 偶联剂的例子包括，抗体毒素化学偶联剂和抗体-毒素融合蛋白。本发明中使用的"融合蛋白"指任一嵌合蛋白，其抗原结合区与 例如毒素、酶或蛋白药物的生物活性分子连接。为了更充分理解本文中描述的发明，进行下述说明。本发明提供CDMAB (即IDAC 170505-01 CDMAB)，其特异性识 别和结合IDAC 170505-01抗原。以保藏号170505-01保藏于IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆 抗体CDMAB可以呈现任一形式，只要其具有竟争性抑制IDAC 170505-01杂交瘤产生的分离的单克隆抗体与靶抗原的免疫特异性结 合的抗原结合区。这样，具有与IDAC 170505-01抗体结合特异性相 同的任何重组蛋白(例如融合蛋白，其中抗体与诸如淋巴因子或肿瘤生 长抑制因子的另 一种蛋白结合)都在本发明的范围内。在本发明的一个实施方案中，CDMAB是IDAC 170505-01抗体。在其他实施方案中，CDMAB是一个抗原结合片段，其可以是具 有IDAC 170505-01抗体的抗原结合区的Fv分子(例如单链Fv分子)、 Fab分子、Fab'分子、F(ab')2分子、融合蛋白、双特异性抗体、异种抗 体或任一重组分子。本发明中的CDMAB针对的抗原决定簇是IDAC 170505-01单克隆抗体针对的决定簇。本发明中的CDMAB可以被修饰，即通过分子内的氨基酸修饰， 产生出衍生分子。也可能是化学修饰。衍生分子要保留多肽的功能，也就是说，具有这些取代的分子仍 能够^吏该多肽与IDAC 170505-01抗原或其部分结合。氨基酸取代包括在本领域中公知的保守氨基酸置换，但并不局限 于此。举例来说，某些被称为"保守氨基酸取代"的氨基酸取代能够在 蛋白中经常出现，但并不改变该蛋白的构象或功能，这是蛋白质化学 中已建立的法则。这些改变包括以下氨基酸任一异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)和亮氨酸 (L)取代任何其他的疏水氨基酸；天门冬氨酸(D)取代谷氨酸(E),反 之亦然；谷氨酰胺(Q)取代天冬酰胺(N),反之亦然；以及丝氨酸(S) 取代苏氨酸(T)，反之亦然。其他的取代也可被认为是保守的，取决 于特定氨基酸的环境和其在蛋白质三维结构中的作用。例如，甘氨酸 (G)和丙氨酸(A)可经常互换，丙氨酸和缬氨酸(V)也是。相对疏水 的蛋氨酸(M)可经常与亮氨酸和异亮氨酸互换，有时与缬氨酸互换。赖氨酸(K)和精氨酸(R)经常互换，其发生部位氨基酸的明显特征是 其带电特性，这两种氨基酸的不同pK的差别并不明显。在特定情境 下，仍有其他的一些变化可以被认为是"保守的，，。给定一种抗体，本领域的技术人员可以生产出竟争性抑制的 CDMAB，例如竟争性抗体，其可识别相同的抗原决定簇(Belanger L " a/. C//m'cfl CA/m/ca爿"a 48:15- 18 (1973))。 一种方法是用表达该4元体识 别抗原的免疫原产生免疫。该样本可以包括组织、分离的蛋白或细胞 系，但并不局限于这些。用竟争性测定方法筛选产生的杂交瘤，该方 法其能鉴别抑制所检测抗体结合的抗体，例如ELISA 、 FACS或 Western印迹。另 一种方法是利用噬菌体展示抗体库，淘选至少识别 所述抗原一个抗原决定簇的抗体(Rubinstein JL et al. Anal Biochem 314:294-300 (2003))。在任一情况下，抗体的筛选都是基于其与至少一 个靶抗原决定簇的结合能力竟争超出原标记抗体。因此，这些抗体的 特征是可以识别该抗原的至少一个抗原决定簇，正如原抗体一样。实施例1杂交瘤制备一杂交瘤细胞系AR59A269.5依据布达佩斯条约，杂交瘤细胞系AR59A269.5于2005年5月 17日保藏于加拿大国际微生物保藏单位(IDAC),位于加拿大马尼托巴 省温尼伯市阿林顿街道1015的加拿大卫生部微生物局，保藏号为 170505-01。依据37 CFR 1.808的规定，保藏者保证在专利授权时将不 可撤销地取消对公众获取该保藏材料的所有限制。如果保藏中保藏样 本不存活，应替换保藏物。为了制备产生AR59A269.5抗癌抗体的杂交瘤，在PBS中制备转 移到肝组织(Genomics Collaborative, Cambridge, MA)的冷冻人结肠肿 瘤组织的单细胞悬液。将IMMUNE AS YTM (Qiagen, Venlo, Netherlands) 佐剂轻轻混合后备用。通过皮下注射含2百万个细胞的50微升抗原-佐剂来免疫5到7周龄的BALB/c小鼠。初次免疫2到5周后，用新 鲜制备的含2百万个细胞的50微升抗原-佐剂腹腔注射加强免疫鼠。 末次免疫3天后，取出脾脏用于融合。将分离的脾细胞与NSO-I骨髓瘤细胞伴侣融合，制备杂交瘤细胞。检测杂交瘤亚克隆融合细胞的上 清。为了检测杂交瘤分泌的抗体是IgG，还是IgM同种型，进行ELISA 分析。用包被緩冲液(0.1M碳酸盐/碳酸氢盐緩冲液，pH 9.2-9.6)中的 浓度2.4 jtig/ml的山羊抗小鼠的IgG + IgM (H+L), 4。C按100^1/孔加入 ELISA板过夜。该ELISA板用洗涤緩沖液(PBS + 0.05% Tween)洗三 次。按100jiil/孔加入封闭緩沖液(5%脱脂乳洗涤緩冲液)，室温1小 时，随后用洗涤缓冲液洗三次。按100/d/孔加入杂交瘤上清，将该板 室温孵育1小时。该板用洗涤緩冲液洗三次，按100/xl/孔加入山羊抗 小鼠的IgG或IgM辣根过氧化物酶偶联物的1/100,000稀释液(用含 5。/。牛奶的PBS稀释)。室温孵育1小时后，反应板用洗涤緩冲液洗三 次。按100/d/孔加入TMB溶液，室温孵育1-3分钟。按50jd/孔加入 2M H2S04，终止颜色反应，用Perkin-Elmer HTS7000酶标仪在450 nm 波长读数，参考过滤器波长为595 nm。如图1所示，AR59A269.5杂 交瘤主要分泌IgG同种型抗体。采用小鼠单克隆抗体同种型分析试剂盒(Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit)(HyCuIt Biotechnology, Frontstmat, Netherlands) 进行同种型分型(isotyping)实验来检测杂交瘤细胞分泌抗体的亚类。在 含大鼠抗小鼠特异性抗体亚类的检测条上加入500 ]Lil緩沖液。在试管 中加入500jLil杂交瘤上清，轻搅使其浸入。通过与胶体粒偶联的另一 大鼠单抗，可以直接检测到被俘获的小鼠免疫球蛋白。这两种蛋白的 结合产生了一个肉眼可见的信号，用于分析抗体同种型。抗癌抗体 AR59A269.5为IgG2a, K同种型。经过一轮限制稀释，在细胞ELISA测定系统中，检测杂交瘤上清 中与輩巴细胞结合的抗体。检测了一种人乳腺癌细胞系、 一种人卵巢癌 细胞系、 一种人结肠癌细胞系和一种人正常皮肤细胞系分别是 MDA-MB-231, OVCAR-3, Lovo和CCD-27sk。所有细胞系来自美国典 型培养物保存中心(ATCC; Manassas， VA)。板内的细胞在4吏用前先固 定。室温下，该板用含MgCl2和CaCl2的PBS洗三次。每孔加PBS稀 释的2%的多聚曱醛100 /xl，室温10分钟，然后弃掉多聚曱醛。对该反应板再用含MgCl2和CaCl2的PBS室温洗三次。每孔加100/il用洗 涤液(PBS + 0.05% Tween)稀释的5%奶来封闭，室温封闭1小时。该 反应孔;f反用洗涤液洗三次，接75 ]ul/孔加入杂交瘤上清，室温孵育1 小时。该反应板用洗涤緩沖液洗三次，按100/il/孔加入辣根过氧化物 酶偶联的山羊抗小鼠的IgG或IgM的1/25,000稀释液(用含5%奶的 PBS稀释)。室温孵育l小时后，该反应板用洗涤緩冲液洗三次，每孔 加入100/ilTMB底物，室温孵育1-3分钟。每孔加入50/xl2M硫酸 终止反应，用Perkin-Elmer HTS7000酶标仪在450 nm波长处读凄t, 参考过滤器波长为595 nm。如图1列表所示，结果表示为与实验室的 IgG同种型对照比较，高出背景的倍数，事先已经证明该对照不与所 ;险测的细胞系结合。AR59A269.5杂交瘤分泌的抗体对结肠癌细月包系 Lovo显示了中等强度的结合，其次是卵巢癌细胞系OVCAR-3。没有 检测与其他结肠癌细胞系SW1116的结合(ND)。 AR59A269.5与正常 的皮肤细胞系CCD-27sk的结合力最差。进行抗体结合试—险的同时，在MDA-MB-231、 0VCAR-3 、 SW1116、 Lovo和CCD-27sk这些细胞系上，检测了杂交瘤上清的 细胞毒性。4丐黄绿素AM(Eugene, OR)购自Molecular Probes 乂>司，才艮 据下述操作进行分析。在分析前，将细胞根据预先确定的适当密度进 行铺板。两天后，将75/il来自杂交瘤微孔板的上清转移到细胞培养板 中，在5。/。C02孵箱中孵育5天。将阳性对照孔吸净，加入100jLd叠 氮钠(NaNs大于〉.01%, Sigma， Oakville， ON)、放线菌酮(cycloheximide) (CHX, 0.5 /iM, Sigma, Oakville, ON)或抗-EGFR抗体(c225, IgGl, k, 5 /ig/mL, Cedarlane， Hornby, ON)。经过5天的处理后，倒空反应板的液 体并吸干。通过多通道塑料挤瓶，将含MgCl2和CaCl2的室温 DPBS(Dulbecco's phosphate buffered saline)分到每孔中，叩打三次，倒 出液体并吸干。每孔加入50jLd用含MgCl2和CaCl2的DPBS稀释的 荧光染料钙黄绿素(calcein)，在37°C含5% C02的孵箱内孵育30分钟。 反应板置于Perkin-Elmer HTS7000荧光读板仪内读数，数据用 Microsoft Excel进行分析。结果在图1的表格中列出。AR59A269.5杂 交瘤上清对OVCAR-3细胞产生了 15%的特异性细胞毒性作用，阳性对照叠氮钠和放线菌酮对OVCAR-3细胞产生的细胞毒性作用分别是 22%和42%。 AR59A269.5对SW1116细胞也产生了 46%的特异性细胞 毒性作用，高于放线菌酮产生的细胞毒性作用，高于针对表皮生长因 子受体的c225抗体产生的细胞毒性作用的2倍。图1的结果表明 AR59A269.5的细胞毒效应与其对这两种癌细胞的结合水平并不成比 例。尽管AR59A269.5与Lovo的结合能力高于OVCAR-3,但在测定 中只冲全测到了对OVCAR-3细胞的离体毒性作用。如图1所示， AR59A269.5对CCD- 27sk正常细胞系并没产生细胞毒效应。如预期 的 一致，已知的非特异性的细胞毒物质放线菌酮和叠氮钠产生了广泛 的细胞毒性作用，抗EGFR抗体c225对SWl 116细胞产生了毒性作用。实施例2 离体结合试验在转瓶(Corning Inc. NY， USA)内培养杂交瘤细胞，10到14天后， 收集上清，制备AR59A269.5单克隆抗体。然后用蛋白G琼脂糖4快 流(Protein G Sepharose 4 Fast Flow) (Amersham Biosciences, Baie d'Urfe, QC)进行标准的抗体纯化操作。本发明的范围包括利用去免疫 原性的、人源化的、嵌合的或鼠源化的单克隆抗体。用流式细胞仪(FACS)评价了 AR59A269.5 与乳腺 (MDA-MB-231 )、结肠(DLD-1， Lovo, SW620和SWl 116)、前列腺(PC-3) 和卵巢(OVCAR-3)癌细胞系及来自皮肤(CCD-27sk)和肺脏(Hs888丄u) 的非癌细胞系的结合。所有细胞系来自美国典型培养物保存中心 (ATCC; Manassas, VA)。用DPBS(不含钩离子和4美离子)洗涤单层细胞， 制备用于流式细胞术的细胞。然后在37。C条件下，用细胞解离緩冲液 将细胞从细胞培养板上分离出来。离心收集细胞，在4。C下，将细胞 重悬在含MgCl2、 CaCh和2%胎牛血清的DPBS (标记培养液)中，记 数，调整到合适的细胞密度，离心沉淀细胞，重悬在4。C的标记液中， 加入20 /xg/mL的测试抗体(AR59A269.5)或对照抗体(同种型对照，抗 -EGFR),冰上放置30分钟。在加Alexa Fluor 546偶联的二抗前，细 胞用标记液洗一次。然后加入溶于标记培养液中的Alexa Fluor 546偶联的二抗，4°C置30分钟。最后洗涤一次细胞，并重悬在固定液(含 1.5%多聚曱醛的标记培养液)中。通过在FACSarrayTM上运行样本来评 测流式细胞计数的细胞获取结果，FACSarray 使用FACSarray 系 统软件(BD Biosciences, Oakville, ON)。通过调整FSC和SSC探测 器上的电压和振幅，设置细胞的前向角散射(FSC)和侧向角散射(SSC)。 运行未标记的细胞来调整荧光(Alexa-546)通道的探测器，使这些细胞 有一个统一的约为1-5单位的中等荧光强度的波峰。对于每一个样本， 约需要获取10,000个门事件(着色的固定细胞)，用于分析，结果见图 2。图2把平均荧光强度高于同种型对照的倍增制成表格。图3汇集 了 AR59A269.5抗体代表性的直方图。AR59A269.5对结肠癌细胞系 DLD-1 (192.9倍)，Lovo (109.1倍)，和SW620 (138.3倍)的结合力最强。 对SW1116结肠癌细胞系(44.2倍)、卵巢癌细胞系OVCAR-3 (93.7倍) 和前列腺癌细胞系PC-3 (31.6倍)也有强的结合力。与乳腺癌细胞系 MDA-MB-231 (5.3倍)的结合弱。AR59A269.5不与正常的肺细胞系 Hs888丄u和皮肤细胞系CCD-27sk结合。这些数据表明AR59A269.5 可以与不同的人癌细胞系结合，与结肠癌细胞系的结合力最强。既然没有4企测到AR59A269.5与两种正常的人细胞系结合，表明 AR59A269.5呈现选择性结合的特点。这些结果与实施例1获得的结 果一致。实施例3在体Lovo细胞的肿瘤实验实施例1和2表明AR59A269.5对结肠和卯巢癌细胞系有抗癌特 性，对结肠癌细胞系显示出最高的结合活性。随后在人类结肠癌的在 体模型中检测了该抗体的作用。参见图4和5，将100 /d含有l百万 个人结肠癌细胞(Lovo)的生理盐水植入到4-6周雄性SCID小鼠颈背皮 下。这些小鼠被随机分成两个治疗组，每组5只。移植癌细胞后的第 一天，按20 mg/kg的剂量给小鼠腹腔给予AR59A269.5测试抗体或緩 沖液对照，用含2.7 mM KC1, 1 mM KH2P04， 137 mM NaCl和20 mMNa2HP04的稀释液将储存液稀释后，每组注射300/il的液体量。随后 抗体组和对照组以相同的方式每周给药一次， 一共7周。大约每7天 用测径器测量肿瘤生长， 一直测到第8周或个体动物达到了加拿大动 物保护协会规定的极限。在试验过程中， 一周记录一次动物的体重。 试验结束时，依据CCAC的指导方针，所有的动物都采取安乐死。在预防性人结肠癌在体;f莫型中，AR59A269.5抑制肿瘤生长，并 减轻肿瘤的负荷。在种植后的第49天，也是最后一次给药的前1天， AR59A269.5治疗组肺瘤的平均体积是緩冲液对照组胂瘤体积的 38。/。(p^.0335，t检验,图4)。在整个实验过程中，没有出现临床毒性症状。每周一次测得的体 重作为动物健康和发育停止的指标。如图5所示，在处理结束时，两 组的体重没有明显差异^=0.2391, t-4企验)。在每组内，动物的平均体 重从实-睑开始到结束都没有明显变化(緩冲液处理组p=0.0752, t-4企-验; AR59A269.5-治疗组p=0.4234)。因此AR59A269.5在人类结肠癌异种移植模型中耐受性良好，能 够降低肿瘤的负荷。实施例4在体DLD-1细胞的肿瘤实-睑实施例3的结果延及人类结肠癌的不同模型。参见图6和7,将 100 /xl含有5百万个人结肠癌细胞(DLD-1)的生理盐水皮下注入到4-6 周雌性SCID小鼠颈背皮下。这些小鼠被随机分成两个治疗组，每组5 只。植入癌细胞后第一天，按20 mg/kg的剂量对每组腹腔给予 AR59A269.5测试抗体或i爰冲液对照，用含2.7 mM KC1, 1 mM KH2P04, 137 mM NaCl和20 mM Na2HP04的稀释液将储存液稀释后，以300/xl 的液体量给药。随后抗体组和对照组样品以相同的方式每周注射一次， 贯穿整个实验过程。大约每7天用测径器测量一次肿瘤的生长。注射 7次(48天)后，因为动物由于大的溃疡达到了 CCAC规定的极限，结 束实验。在整个实验过程中， 一周记录一次动物的体重。试验结束时， 依据CCAC的指导方针，所有的动物都采取安乐死。在预防性的人结肠癌在体;f莫型中，AR59A269.5预防肿瘤生长， 减轻肿瘤负荷。在植入后的第48天，也是最后一次给药后5天， AR59A269.5治疗组肿瘤的平均体积是对照组肿瘤体积的19%(p==0.001 t检验，图6)。在整个实验过程中，没有出现临床毒性症状。每周一次测的体重 作为动物健康和发育停止的指标。如图7所示，在整个实验过程中， 两组的体重没有明显差异。在组内，动物的平均体重在整个实验过程 中变化不明显。因此AR59A269.5在两种不同的人类结肠癌异种移植模型中耐受 性良好，都能够降低胂瘤的负荷。实施例5人类肿瘤异种移植物染色利用免疫组化(IHC)研究来表征AR59A269.5抗原在人类肿瘤异种 移植物中的分布。IHC最优化研究表明抗体不结合福尔马林固定的组 织，但与冷冻组织切片结合。肿瘤异种移植物从SCID小鼠体内获得， 这些小鼠饲养在多伦多全科医院的动物实验室内。小鼠注射了结肠癌 细胞SW1116或乳腺癌细胞MDA-MB-231。细胞系来自美国典型培养 物保藏中心(ATCC; Manassas, VA)。肿瘤浸入OCP包埋胶中并迅速冻 入液氮内。组织块送至多伦多全科医院的病理研究项目实验室进行处 理。组织切片从-80。C转到-20。C, 1小时后，切片用冷(-20。C)丙酮固 定10分钟，然后回到室温中。切片用冷(4。C)PBS洗三次，每次2分 钟。然后将切片浸入3%过氧化氢中孵育IO分钟，PBS洗3次，每 次5分钟，干燥后用通用的封闭液室温孵育5分钟。将AR59A269.5 用抗体稀释緩冲液(Dako, Toronto, Ontario)稀释到工作浓度(5/xg/mL)。 细胞角蛋白-7作为阳性的抗体对照(即用型；Dako, Toronto, Ontario)， 抗体稀释緩沖液(Dako, Toronto, Ontario)作为阴性对照。 一抗室温孵育 1小时。切片用PBS洗3次，每次5分钟。加入HRP标记的二抗(即 用型；Dako Envision System, Toronto, Ontario),室温孵育30分钟，枱，测/观察一抗的免疫反应性。这步之后，将切片用PBS洗3次，每次5 分钟，然后加入DAB (3,3'-二氨基联苯胺四盐酸盐，Dako， Toronto, Ontario)显色底物液，室温下进行免疫过氧化物酶染色10分钟，发生 颜色反应。自来水冲洗切片，终止显色反应。切片用Meyer's苏木精 (Sigma Diagnostics, Oakville, ON)复染后，梯度酒精(75-100%)脱水，二 曱苯透明。用固定剂封片。使用Axiovert200型显微镜观察切片，用 Northern Eclipse成像软件获取和储存图像。结果由组织病理学家读 取、评价和解释。AR59A269.5与人类异种移植物(结肠癌 SW1116和乳腺癌 MDA-MB-231)的结合活性检测表明AR59A269.5与SW1116有强的结 合力，与MDA-MB-231的结合力较弱(图8)。结合局限在肿瘤细胞。 AR59A269.5在SW1116细胞定位于膜，在MDA-MB-231细胞定位于 胞质膜，染色呈弥散状(图9)。 SW1116细胞的阳性率超过50%， MDA-MB- 231细胞的阳性率不到50%。这些结果肯定了实施例2中这 些细胞系离体的FACS结果，表明在体内的异种移植物中仍有该抗原 表达。此优势证据表明AR59A269.5通过与存在癌细胞和人类肿瘤组织 上的抗原决定簇结合介导了抗癌作用。进一步表明，利用例如(但并不 局限于)FACS、细胞ELISA或IHC等技术，AR59A269.5抗体可以用的技术人员的水平。所有专利和公开出版物通过引用的方式并入本文， 其引用程度如同每个出版物被特别单独地指明以引用的方式并入本 文。应该明白，尽管本发明以某种形式被说明，但这不是要将本发明 限定在本文所描述和显示的特定形式或布局。对本领域的技术人员显 而易见的是，在不偏离本发明的范围的前提下还可做出各种变化，本 发明并不局限于本说明书中所显示和描述的内容。本领域的技术人员 很容易看出使本发明较好地适合实现所描述的目的获得最终结果和益处，以及其中固有的部分。本文中描述的任一寡核苷酸、肽、多肽、生物相关化合物、方法、流程和技术都是优选实施方案中有代表性的， 其目的在于示例，并不是限制本发明的范围。本领域的技术人员能够 想到包括在本发明精神的范畴内的变化和其它用途，并由所附权利要 求书的范围所限定。尽管借助特定的优选实施方案描述了本发明，但 是应理解所要求保护的本发明并不仅仅局限于这些特定的实施方案。 事实上，所描述的实施本发明的一些方式的的各种变化，对本领域的 技术人员来说是显而易见的，均在所附权利要求书的范围内。加拿大国际保藏机构 电话(204)789-2070加拿大卫生部国立微生物学实验室 传真(204)789-2097加拿大马尼托巴省温尼伯市阿林顿街1015R3E 3R2_国际IDAC/BP/4表微生物保藏证明(译文)(根据布达佩其斤条约第7.1条发布)所附文件为原始保藏合同与活存声明的副本1、 国际保藏机构接受了以下具体描述的微4tl 保藏人姓名Valerie Harris (哈里斯'瓦莱丽)地址 ARIUS Research. Inc. 55 York Street. Suite 1600. Toronto. ON M5J 1R7(加拿大多伦多阿里乌斯研究公司) 提交曰期2005年5月17日2、 保藏的标识保藏人对培养物指定的名称和符号-AR59A269.5由该国际保藏机构给予的保藏号:170505-01科学性描述和/或预计的分类学指定:□科学性描述□预计的分类指定3、国际保藏机构IDAC授权代表签^日期2005年5月17日
权利要求
1.由杂交瘤细胞产生的分离的单克隆抗体，该杂交瘤细胞系保藏于IDAC，保藏号为170505-01。
2. 由权利要求1所述分离的单克隆抗体产生的人源化抗体。
3. 由权利要求1所述分离的单克隆抗体产生的嵌合抗体。
4. 分离的杂交瘤细胞系，以保藏号170505-01保藏在IDAC。
5. 引发抗体i秀导的选自人类肿瘤的组织样本中癌细胞的细胞毒 性作用的方法，其包括提供所述人类肿瘤的组织样本；提供由保藏于IDAC、保藏号为170505-01的杂交瘤产生的分离的 单克隆抗体或其CDMAB,其中CDMAB的特征在于能够竟争性抑制 所述分离的单克隆抗体与其靶抗原的结合；以及将所述分离的单克隆抗体或其CDMAB与所述组织样本接触； 其中所述分离的单克隆抗体或其CDMAB与所述组织样本的结合 诱导细胞毒性作用。
6. ^l利要求1所述分离的单克隆抗体的CDMAB。
7. 权利要求2所述的人源化抗体的CDMAB。
8. 权利要求3所述的嵌合抗体的CDMAB。
9. 权利要求l、 2、 3、 6、 7或8中的任一项所述的分离抗体或其 CDMAB,其与选自细胞毒部分、酶、放射活性化合物和造血细胞的 成员结合。
10. 确定选自人肿瘤的组织样本中癌细胞存在的结合分析，所述 癌细胞特异性地被AR59A269.5杂交瘤细胞系产生的分离的单克隆抗 体结合，该杂交瘤细胞系在IDAC的保藏号为170505-01，所述分析包 括..提供所述人类胂瘤的组织样本；提供至少一种分离的单克隆抗体或其CDMAB,所述单克隆抗体 或其CDMAB识别的一种或多种抗原决定》i与AR59A269.5杂交瘤细 胞系产生的分离的单克隆抗体识别的 一种或多种抗原决定簇相同，该 杂交瘤细胞系在IDAC的保藏号为170505-01;将所述的至少一种分离的单克隆抗体或其CDMAB与所述组织样 本才妄触；以及确定所述的至少一种分离的单克隆抗体或其CDMAB与所述组织 样本的结合；由此指示出在所述组织样本中所述癌细胞的存在。
11. 治疗哺乳动物中人类胂瘤的方法，其中所述人类肿瘤表达至 少一种能特异性与分离的单克隆抗体或其CDMAB相结合的抗原决定 簇，该分离的单克隆抗体由保藏在IDAC、保藏号为170505-01的克隆 所编码，其CDMAB的特征是具有竟争性抑制所述分离的单克隆抗体 与其靶抗原结合的能力，所述方法包括给予所述哺乳动物降低所述哺 乳动物的肿瘤负荷的有效量的所述单克隆抗体或其CDMAB。
12. 如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体与 细胞毒性部分偶联。
13. 如权利要求12所述的方法，其中所述细胞毒性部分是放射性 同位素。
14. 如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体或其CDMAB活化补体。
15. 如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体或 其CDMAB介导抗体依赖的细胞毒性作用。
16. 如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体是 人源化的。
17. 如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体是 嵌合的。
18. 治疗哺乳动物中对抗体诱导的细胞毒性作用敏感的人类肿瘤 的方法，其中所述的人类肿瘤表达至少一种与分离的单克隆抗体或其 CDMAB特异结合的抗原决定簇，该抗体由保藏在IDAC、保藏号为 170505-01的克隆所编码，其CDMAB的特征是具有竟争性抑制所述 分离的单克隆抗体与其靶抗原结合的能力，所述方法包括给予所述哺 乳动物降低所述哺乳动物的肿瘤负荷的有效量的所述单克隆抗体或其 CDMAB。
19. 如^L利要求18所述的方法， 细胞毒性部分偶联。
20. 如;f又利要求19所述的方法, 同位素。
21. 如权利要求18所述的方法, 其CDMAB活化补体。其中所述的分离的单克隆抗体与其中所述细胞毒性部分是放射性其中所述的分离的单克隆抗体或
22.如权利要求18所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体或 其CDMAB介导抗体依赖的细胞毒性作用。
23. 如权利要求18所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体是 人源化的。
24. 如权利要求18所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体是 嵌合的。
全文摘要
本发明涉及一种使用新型筛选模式制备患者癌性疾病调节抗体的方法。该方法利用癌细胞细胞毒性作用作为指标来分离抗癌抗体，使制备用于诊断和治疗的抗癌抗体成为可能。该抗体可用于辅助肿瘤分期和诊断，还可用于治疗原发性肿瘤和肿瘤转移。该抗癌抗体能够与毒素、酶、放射性化合物和造血细胞偶联。
文档编号A61K47/48GK101277977SQ200680036742
公开日2008年10月1日 申请日期2006年8月1日 优先权日2005年8月2日
发明者利萨·M·切凯托, 大卫·S·F·杨, 苏姗·E·哈恩 申请人:阿里乌斯研究公司