专利名称：：组织胶原合成促进用口服剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分的组织胶原合成促进用口服剂、皮肤创伤治愈用口服剂、以及皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂。
背景技术：
：胶原是填充生物体组织的细胞与细胞、或者细胞集团与细胞集团的间隙的细胞外基质的主要蛋白质成分，据说在哺乳动物中占身体总蛋白质的近30%(参照非专利文献1)。胶原形成纤维状或膜状的构造体，作为基本功能，起到组织的结构维持、支撑、结合和增强等作用，大多存在于皮肤、骨、腱、韧带、角膜、血管等中。伴随这些组织的老化引起的皱纹和松弛、骨质疏松等的主要原因认为是组织胶原的减少、变性等。另据报道，实际长期的日光照射会使组织胶原显著减少(参照非专利文献2)，并且随年龄增大生物体成分的新陈代谢的减弱成为胶原新陈代谢减弱的诱因而进行(参照非专利文献3)。作为促进胶原合成的物质，已知生长因子TGFP-l(参照非专利文献4)、植物提取物(参照专利文献1)、胶原分解物(参照专利文献2~5)或者氨基酸组合物(参照专利文献6)等。更具体而言，已知作为通过口服具有胶原合成促进作用的胶原分解物的特征序列的Gly-Pro-Hyp三肽，另一方面，已知Gly、Pro、Hyp等胶原构成氨基酸与胶原中的构成比相等的氨基酸组合物不显示胶原合成促进作用(参照专利文献4)。另一方面，已知口服羟基脯氨酸的N-酰化衍生物具有胶原合成促进作用(非专利文献4)，含有羟基脯氨酸的N-乙酰基衍生物的外用剂在欧洲作为创伤的治疗药物使用。另外，已知羟基脯氨酸及羟基脯氨酸的N-酰化衍生物的对培养人成纤维细胞的胶原合成促进作用、通过外用对皱纹形成的抑制或者改善作用(专利文献7)。但是，口服羟基脯氨酸的胶原合成促进作用、皮肤的创伤治愈促进作用、皮肤的皱纹或松弛的抑制或改善作用未知。专利文献1:日本特开2004-35527号公报专利文献2:日本特开平7-278012号公报专利文献3:日本特开2000-201649号公报专利文献4:日本特开2001-131084号公报专利文献5:日本特开2003-137807号公报专利文献6:日本特开2005-289928号公报专利文献7:国际公开第2000/051561号小册子非专利文献l:「生化学辞典第1版」、东京化学同人、1984年、「加齢&皮膚j、清至书院、1986年、p.35「老化0少力二乂厶^制御」、7^t:。一？一、p.480非专利文献2:非专利文献31993年、p.151非专利文献4:「工夕只^U^:/夕少'7yK'乇i^年-，一'乂《乂口y—」(Experimental&MolecularPathology)、1978年、第28巻第1期、p.58-64
发明内容本发明的目的在于提供安全且具有优良效果的组织胶原合成促进用口服剂、皮肤的创伤治愈促进用口服剂、或者皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂。本发明涉及以下(1)(10)。(l)一种组织胶原合成促进用口服剂，其含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分；(2)上述(1)的胶原合成促进用口服剂，其中，组织为皮肤；(3)—种组织胶原合成促进方法，其特征在于，口服有效量的羟基脯氨酸或其盐；(4)羟基脯氨酸或其盐在制造组织胶原合成促进用口服剂中的应用；(5)—种皮肤的创伤治愈促进用口服剂，其含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分；(6)—种皮肤的创伤治愈促进方法，其特征在于，口服有效量的羟基脯氨酸或其盐；(7)羟基脯氨酸或其盐在制造皮肤的创伤治愈促进用口服剂中的应用；(8)—种皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂，其含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分；(9)一种皮肤皱纹或松弛的抑制或改善方法，其特征在于，口服有效量的羟基脯氨酸或其盐；(10)羟基脯氨酸或其盐在制造皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂中的应用。发明效果根据本发明，可以提供含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分的、安全且具有优良效果的组织胶原合成促进用口服剂、皮肤的创伤治愈促进用口服剂、或者皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂。图1是表示口服羟基脯氨酸后血清中的游离羟基脯氨酸浓度的图；图2是表示口服羟基脯氨酸后皮肤中的游离羟基脯氨酸浓度的图。具体实施方式本发明中使用的羟基脯氨酸，可以是任意一种羟基脯氨酸的立体异构体。即，存在通过羟基脯氨酸的脯氨酸为D型或L型、羟基的位置为3位或4位、以及其立体异构体为顺式或反式而得到的8种立体异构体，本发明中可以使用任意一种化合物。作为具体的羟基脯氨酸，可以列举顺式-4-羟基-L-脯氨酸、顺式-4-羟基-D-脯氨酸、顺式-3-羟基-L-脯氨酸、顺式-3-羟基-D-脯氨酸、反式-4-羟基七-脯氨酸、反式-4-羟基-D-脯氨酸、反式-3-羟基-L-脯氨酸和反式-3-羟基-D-脯氨酸。羟基脯氨酸作为胶原中的主要构成氨基酸成分，并且也是作为弹性蛋白的构成氨基酸而在自然界广泛存在的一种氨基酸，可以通过例如将来自猪或牛等动物的胶原酸解，通过常规方法纯化而制造。反式-4-羟基-L-脯氨酸，可以使用由拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis)属或指孢囊菌(Dactylosporangium)属分离的脯氨酸4位羟化酶(日本特开平7-313179)制造。另外，顺式-3-羟基-L-脯氨酸，可以使用由链霉菌(Streptomyces)属分离的脯氨酸3位羟化酶(日本特开平7-322885)制造(/《一才0夕、、7卜！J一、14巻、31期、1997年)。使用上述微生物来源的酶制造的羟基脯氨酸，质量优良，更优选作为本发明中使用的羟基脯氨酸。作为羟基脯氨酸的盐，可以列举酸加成盐、金属盐、铵盐、有机胺加成盐、氨基酸加成盐等。作为酸加成盐，可以列举盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等无机酸盐，醋酸盐、马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、a-酮戊二酸盐、葡糖酸盐、辛酸盐等有机酸盐。作为金属盐，可以列举钠盐、钾盐等碱金属盐，镁盐、f丐盐等碱土金属盐，铵盐，锌盐等。作为铵盐，可以列举铵、四甲基铵等的盐。作为有机胺加成盐，可以列举吗啉、哌啶等的盐。作为氨基酸加成盐，可以列举甘氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等的盐。本发明的组织胶原合成促进用口服剂、皮肤创伤治愈促进用口服剂、或者皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂，含有羟基脯氨酸或其盐，根据需要可以含有药理学上容许的一种或两种以上的载体，并且根据需要还可以含有其它用于治疗的有效成分。本发明的组织胶原合成促进用口服剂、皮肤创伤治愈促进用口服剂、或者皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂，可以通过将羟基脯氨酸或其盐与根据需要的载体一起混合，利用制剂学
技术领域：
公知的任意方法制造。将本发明的组织胶原合成促进用口服剂、皮肤创伤治愈促进用口服剂、或者皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂制剂化时，可以使用赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、分散剂、悬浮剂、乳化剂、稀释剂、缓冲剂、抗氧化剂、细菌抑制剂等添加剂。制剂的剂型可以列举片剂、散剂、颗粒剂、乳剂、糖浆剂、胶囊剂等。制剂的剂型为糖桨剂等液体制剂的情况下，可以添加水，蔗糖、山梨糖醇、果糖等糖类，聚乙二醇、丙二醇等二醇类，蓖麻油、橄榄油、大豆油等油类，对羟基苯甲酸酯类等防腐剂，草莓香料、薄荷等香料类等进行制剂化。另外，可以添加适合口服的物质进行制剂化，例如为片剂、散剂、颗粒剂等的情况下，可以添加赋形剂，如乳糖、白糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇等糖类，马铃薯、小麦、玉米等的淀粉，碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钠、氯化钠等无机物，甘草粉、龙胆粉等植物粉末等；崩解剂，如淀粉、琼脂、明胶粉末、结晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、碳酸钙、碳酸氢钠、藻酸钠等；润滑剂，如硬脂酸镁、滑石、氢化植物油、聚乙二醇、硅油等；粘合剂，如聚乙烯醇、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、明胶、淀粉糊液等；表面活性剂，如脂肪酸酯等；增塑剂，如甘油等。另外，在适合口服的制剂中，可以添加一般的饮食品中使用的添加剂，例如，甜味料、着色料、保存料、增稠稳定剂、抗氧化剂、发色剂、漂白剂、防霉剂、胶基、苦味料、酶、光泽剂、酸味料、调味料、乳化剂、增强剂、制造用剂、香料、香辣调味料提取物等。适合口服的制剂可以是原状，或者也可以是例如粉末食品、薄片状食品、瓶装食品、罐装食品、蒸煮食品、胶囊食品、药片状、流动食品、饮剂等形态。另外，也可以作为组织胶原合成促进用、皮肤创伤治愈促进用、或者皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用健康食品、功能食品、营养辅助食品、特定保健用食品等饮食品使用。本发明的口服剂中的羟基脯氨酸或其盐的浓度，根据口服剂的种类、给用该口服剂所期待的效果等适当选择，以羟基脯氨酸或其盐的形式，通常为0.1-100重量％、优选0.5~70重量％、特别优选1~50重量％。本发明的口服剂的给药量根据给药形态、服用者年龄、体重等而不同，对成人而言一天的羟基脯氨酸或其盐通常为5mg5000mg、优选50mg5000mg、更优选500mg5000mg，一天一次或分数次给药。给药周期没有特别限制，通常是1天1年，优选1周3个月。另外，本发明的口服剂不仅可以用于人，也可以用于人以外的动物(以下，称为非人动物)。作为非人动物，可以列举哺乳类、鸟类、爬虫类、两栖类、鱼类等人以外的动物。非人动物给药时的给药量，根据动物的年龄、种类等不同，体重lkg每天的羟基脯氨酸或其盐通常为0.1mg100mg、优选lmg100mg、更优选10mg100mg，一天一次或数次给药。给药周期没有特别限制，通常是1天1年，优选1周3个月。以下，列举考査羟基脯氨酸对皮肤的胶原合成促进效果、创伤治愈促进效果及皮肤皱纹或松弛的改善效果的试验例。试验例1试验使用H0S:HR-1小鼠(雌性、7周大、自日本SLC公司购入)。将反式-4-羟基-L-脯氨酸(协和发酵工业株式会社制造，以下，简称羟基脯氨酸)溶解于纯化水中达到50mg/ml，以500mg/kg口服给药。0.5、1、2、4、6、24小时后，在乙醚吸入麻醉下从腹部大静脉采血得到血清。另外，颈椎脱臼后取背部皮肤，冷冻粉碎后，利用水提取得到皮肤提取物。该血清和该皮肤提取物中的羟基脯氨酸量，用等量的2。/。(w/v)磺基水杨酸进行除蛋白处理后，用NBD-Cl(4-氯-7-硝基-2，l,3-苯并嗯二唑，东京化成工业公司制造)标记仲氨基，通过使用ODS柱(4.6cm())X15cm、GL科学公司制造)的高效液相色谱法分析。结果如图1和图2所示。可以看出口服的羟基脯氨酸迅速地移动到血液中和皮肤中。试验例2将29周大的F344/DuCrlCrlj大鼠(雄性、自日本于卞一》7y/《一株式会社购入)12只分成两组，每组6只。第一组大鼠自由摄取实施例5所述的饲料7天、第二组大鼠自由摄取比较例1所述的对照饲料7天。在戊巴比妥腹腔内注射麻醉下将腹部用理发推子剃毛，在皮下两个部位插入切割为约150mg的海绵(7^〃口y公司制造、2mm厚、约38mmX12mm)并缝合，再饲养7天后取出海绵。对一片海绵使用6N盐酸20ml使其在ll(TC下反应18小时进行酸热分解。得到的酸热分解物用1M硼酸缓冲液(pH-10.6)稀释IO倍后，通过与试验例1同样的方法测定羟基脯氨酸量，作为大鼠胶原合成能力和组织修复能力的指标。值以平均值±标准偏差表示，统计学上显著性差异检验通过student-t检验进行。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结果如表1所示。摄取羟基脯氨酸的第一组大鼠中，来自热分解的胶原的羟基脯氨酸量显著增加，因此皮肤的胶原合成被促进，可知其结果是组织修复即创伤治愈被促进。试验例3将苦恼于慢性皮肤干燥、皮肤粗糙的47岁至65岁的女性21名作为受试者，将她们分为两组，两周的观察期后，使第一组受试者(9名)服用实施例6所述的硬胶囊，早晚各两枚胶囊共4周，使第二组受试者(12名)服用比较例2所述的硬胶囊，早晚各两枚胶囊共4周。试验通过平行组间双盲试验进行。硬胶囊的服用开始时及服用结束后，对受试者进行提问以下13的问题，以回答"1"的为一阶段、回答"10"的为十阶段，通过十阶段法评价受试者的皮肤。问题1:请评价你面部的皱纹水平。1.整个面部有皱纹。10.完全没有皱纹。问题2:请评价你面部的皮肤弹性。1.没有弹性。10.有极强的弹性。问题3:请评价你面部皮肤有无张力。1.完全没有张力。2.有张力。上述评价中，问题1中，阶段越高，表示受试者感受到皮肤皱纹改善，问题2和问题3中，阶段越高，表示受试者感受到与皮肤松弛相关的弹性和张力都变高。另外，改善率(％)根据式1计算。式1:改善率(e/。"服用后的阶段平均值/服用前的阶段平均值X100得到的结果如表2所示。另外，表中的值表示平均值。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>从表2可以看出，通过服用反式-4-羟基-L-脯氨酸，面部皱纹以及松弛得到改善。以上的试验例表示口服的羟基脯氨酸转移到皮肤中，具有胶原合成促进效果、创伤治愈效果及皮肤皱纹或松弛改善效果。以下，列举本发明的实施例。实施例1含羟基脯氨酸的片剂的制造通过常规方法制造含有反式-4-羟基-L-脯氨酸的片剂。g卩，将下述各成分均匀混合，并将该混合物通过单冲式压片机压片，得到直径5mm、重量15mg的组织胶原合成促进用片剂。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实施例2含羟基脯氨酸的颗粒剂的制造将实施例1中得到的片剂粉碎、制粒、整粒，得到20-50目的皮肤创伤治愈促进用颗粒剂。实施例3含羟基脯氨酸的饮料的制造通过将下述各成分搅拌溶解至均匀，并添加纯化水使总量为1000ml，制造含有反式-4-羟基-L-脯氨酸的组织胶原合成促进用饮料。另外，下述成分中的适量，对于香料、色素是指通常的饮料制造中所使用的量，对于纯化水是指加上其它成分使总量为1000ml所需要的量。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施例4含羟基脯氨酸的糖果的制造通过常规方法制造由下述各成分组成的含有反式-4-羟基-L-脯氨酸的皮肤创伤治愈促进用糖果。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>粉末山梨糖醇香料山梨糖醇晶种98.750.200.05实施例5含羟基脯氨酸的动物饲料的制造通过常规方法制造由下述各成分组成的含有反式-4-羟基-L-脯氨酸的动物饲料。表6成分量(g)反式-4-羟基-L-脯氨酸1.0酪蛋白25.0蔗糖40.2纤维素5.0酒石酸氢胆碱0.2DL-蛋氨酸0.4L-天冬氨酸6.7玉米淀粉12.0玉米油5.0AIN76组成的维生素混合(未添加胆碱)3.5AIN76组成的矿物质混合3.5实施例6含羟基脯氨酸的胶囊的制造分别称量下述各成分后，投入混合机中，充分混合均匀后，通过常规方法密封入硬型明胶胶囊中，制造每一枚胶囊含有约500mg反式-4-羟基丄-脯氨酸的硬胶囊。表7成分量(g)反式-4-羟基-L-脯氨酸500.0微晶纤维素97.5胶态二氧化硅12.5硬脂酸镁12.5比较例1将实施例5的反式-4-羟基-L-脯氮酸替换为L-天冬氨酸，制造动物饲料。比较例2将实施例6的反式-4-羟基-L-脯氨酸替换为玉米淀粉，制造胶囊。工业上的利用可能性根据本发明，可以提供含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分的组织胶原合成促进用口服剂、皮肤创伤治愈促进用口服剂、或者皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂。权利要求1.一种组织胶原合成促进用口服剂，其含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分。2.如权利要求1所述的胶原合成促进用口服剂，其中，组织为皮肤。3.—种组织胶原合成促进方法，其特征在于，口服有效量的羟基脯氨酸或其盐。4.羟基脯氨酸或其盐在制造组织胶原合成促进用口服剂中的应用。5.—种皮肤的创伤治愈促进用口服剂，其含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分。6.—种皮肤的创伤治愈促进方法，其特征在于，口服有效量的羟基脯氨酸或其盐。7.羟基脯氨酸或其盐在制造皮肤的创伤治愈促进用口服剂中的应用。8.—种皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂，其含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分。9.一种皮肤皱纹或松弛的抑制或改善方法，其特征在于，口服有效量的羟基脯氨酸或其盐。10.羟基脯氨酸或其盐在制造皮肤铍纹或松弛的抑制或改善用口服剂中的应用。全文摘要本发明的目的在于提供安全且具有优良效果的组织胶原合成促进用口服剂、皮肤的创伤治愈促进用口服剂、或者皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂。根据本发明，可以提供含有羟基脯氨酸或其盐作为有效成分的组织胶原合成促进用口服剂、皮肤的创伤治愈促进用口服剂、或者皮肤皱纹或松弛的抑制或改善用口服剂。文档编号A61P17/00GK101404998SQ200780010388公开日2009年4月8日申请日期2007年3月23日优先权日2006年3月23日发明者川田阳子,神村彩子,神谷俊一申请人:协和发酵工业株式会社