胺碘酮及其衍生物的新用途的制作方法

专利名称：胺碘酮及其衍生物的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物学领域。更具体地，本发明涉及一种已知药物-胺碘酮或其衍生物的新医药用途。本发明还涉及诱导细胞自噬的药物组合物。

背景技术：
胺碘酮(Amiodarone)又称乙胺碘呋酮，已在临床应用40多年，其强大的抗心律失常作用已被越来越多的循证医学结果所证实。目前，胺碘酮已成为临床应用最多、且最广泛的抗心律失常药物之一。
胺碘酮是一个含碘苯呋喃的衍生物，由Charlier发现，并于1962年在比利时的Ladas实验室合成。由于胺碘酮具有扩张血管、减慢心率的作用，1986年作为一个血管扩张剂在法国上市，用于心绞痛的治疗。随后，Rosenbaum首先在南非将其用于各种快速性心律失常的治疗，并获得较好的临床疗效。1985年，美国食品药物管理局(FDA)正式批准胺碘酮可用于危及生命、反复发生的室性心律失常，如心室颤动或血液动力不稳定的室性心动过速，适应症还包括对其他抗心律失常药物治疗反应不好或不能耐受的心律失常。与此同时，胺碘酮在治疗心房颤动和心房扑动中的应用也日趋广泛。
胺碘酮具有抗心肌缺血、增加心输出量、降低血压以及抗甲状腺等作用。胺碘酮抗心肌缺血的作用来自两个方面，一是松弛血管平滑肌，直接扩张冠脉血管，降低冠脉阻力，增加心肌血供；二是非竞争性肾上腺素的拮抗作用，对α受体的抑制可舒张冠状动脉。
此外，胺碘酮还具有β受体的抑制作用，但其与β受体阻滞剂的作用机理不同。胺碘酮并不直接作用于β受体，也不是完全竞争性阻滞，而是属于非竞争性抑制，阻滞心肌细胞内的信号传导，同时还能减少心肌细胞肾上腺素能受体的数量，这些作用可减弱心肌收缩力。理论上，这一作用对病态心肌有负性肌力作用。但胺碘酮施用后基本不呈现负性肌力作用，反而能够增加多数患者的心输出量，其施用后的净效应对心功能有显著的改善作用。引起这种矛盾性结果的原因为①胺碘酮对钙离子通道阻滞作用的强度要比其他非吡啶类的IV类抗心律失常药物抑制心肌收缩力的程度弱；②其对肥大心肌的钙通道阻滞作用比对正常心肌收缩力的抑制作用弱；③胺碘酮能够延长动作电位的时程(APD)，其负性肌力作用能在动作电位时程的延长中得到补偿；④胺碘酮对钙离子通道的阻滞作用有明显的频率依赖性，治疗时心律较快则作用强；⑤对心肌收缩力的抑制作用呈现一过性；而且仅在剂量较大时才呈现负性肌力作用。
虽然本领域对胺碘酮的研究较为深入，然而目前为止国内外文献均未记载胺碘酮作为细胞自噬诱导剂方面的用途，也未给出这方面的技术启示。
自噬性细胞死亡是一种非凋亡性程序性细胞死亡，形态学上不同于凋亡，起因于过度的自体吞噬，也被称为II型程序性细胞死亡。在凋亡缺陷的细胞中，肿瘤的生物治疗主要通过自噬性细胞死亡，使用自噬诱导剂使凋亡抵抗的肿瘤细胞发生自噬性细胞死亡的潜能提高，这将成为化疗的新方向。因此，本领域迫切需要开发通过诱导细胞自噬从而发挥抗肿瘤作用的药物。
发明概述 本发明旨在提供胺碘酮或其衍生物在作为细胞自噬诱导剂以及治疗肿瘤方面的新医药用途。
在本发明的第一方面，提供了一种式I所示化合物或其药学上可接受的盐的用途，它们被用于制备细胞自吞噬诱导剂
式中， R1代表氢原子或烷基(较佳地C1-C8烷基，更佳地C1-C5烷基)； R2代表氢原子或烷基(较佳地C1-C8烷基，更佳地C1-C5烷基)； R3代表氢原子或-NH-SO2-CH3； R4代表烷基(较佳地C1-C8烷基，更佳地C1-C5烷基)或酯基(较佳地1-8个碳原子的直链或支链酯基)； R5代表碘原子或氢原子； R6代表碘原子或氢原子； n为1-8的正整数(较佳地1-5的正整数)。
在另一优选例中，所述的细胞自吞噬诱导剂用于治疗肿瘤、肌病和神经系统退行性疾病。
在另一优选例中，所述的诱导剂包括药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
在另一优选例中，所述式I化合物是结构式为II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII的化合物。
在另一优选例中，所述的诱导剂包括药学上可接受的载体和选自下组的额外组分雷帕霉素、长春新碱、他莫西芬、白藜芦醇、紫杉醇、替莫唑胺、三苯氧胺、三氧化二砷、丁氯倍他松、卡巴西平、丙戊酸钠、N-羟基-N’-苯基辛二酰胺(缩写SAHA)。
在另一优选例中，所述的诱导剂的剂型选自下组注射剂、注射用无菌粉末、片剂、胶囊、醑剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、或栓剂。
在另一优选例中，所述的肌病选自下组重症肌无力、类重症肌无力、肉毒中毒、肌无力综合症、肌营养不良症、强直性肌病、炎症性肌病、代谢性/内分泌性肌病、先天性和婴儿性肌病；和/或 所述的神经系统退行性疾病选自下组老年性痴呆、帕金森氏病、周围神经炎、糖尿病外周神经病变、脑干神经病变、颅脑损伤、脑缺血、脊髓损伤、肌萎缩侧索硬化症、Huntington氏病。
在本发明的第二方面，提供了一种上述式I所示化合物或其药学上可接受的盐的用途，它们被用于制备治疗肿瘤的药物组合物。
在另一优选例中，所述的肿瘤选自下组神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、或卵巢癌。
在另一优选例中，所述式I化合物是结构式为II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII的化合物；和/或 所述的药物组合物中包括药学上可接受的载体和选自下组的额外组分雷帕霉素、长春新碱、他莫西芬、白藜芦醇、紫杉醇、替莫唑胺、三苯氧胺、三氧化二砷、丁氯倍他松、卡巴西平、丙戊酸钠、N-羟基-N’-苯基辛二酰胺(SAHA)、喜树碱、替尼泊苷、秋水仙碱、高三尖杉酯碱、依托泊苷、丙卡巴肼、门冬酰胺酶、顺铂、卡铂、米托蒽醌、环磷酰胺、盐酸氮芥、洛莫司汀、司莫司汀、塞替派、白消安、氮甲、苯丁酸氮芥、氟尿嘧啶、喃氟啶、优氟啶、卡莫氟、巯嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、环胞苷、巯鸟嘌呤、六甲蜜胺、羟基脲、丝裂霉素、阿霉素、表柔比星、博莱霉素、培莱霉素、阿伐司汀、赫赛汀、格列卫、吉西他滨、托泊替康、多西他赛、亮丙瑞林。
在另一优选例中，所述的治疗肿瘤的药物组合物诱导哺乳动物的肿瘤细胞发生细胞自噬。
在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，它含有 (a)作为主要活性成分的0.01-99.9wt％的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，
式中， R1、R2、R3、R4、R5、R6和n的定义如上， (b)选自下组的一种或多种辅助活性成分雷帕霉素、长春新碱、他莫西芬、白藜芦醇、紫杉醇、替莫唑胺、三苯氧胺、三氧化二砷、大豆三萜皂甙、维生素D类似物、丁氯倍他松、卡巴西平、丙戊酸钠、N-羟基-N’-苯基辛二酰胺(SAHA)、喜树碱、替尼泊苷、秋水仙碱、高三尖杉酯碱、依托泊苷、丙卡巴肼、门冬酰胺酶、顺铂、卡铂、米托蒽醌、环磷酰胺、盐酸氮芥、洛莫司汀、司莫司汀、塞替派、白消安、氮甲、苯丁酸氮芥、氟尿嘧啶、喃氟啶、优氟啶、卡莫氟、巯嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、环胞苷、巯鸟嘌呤、六甲蜜胺、羟基脲、丝裂霉素、阿霉素、表柔比星、博莱霉素、培莱霉素、阿伐司汀、赫赛汀、格列卫、吉西他滨、托泊替康、多西他赛、亮丙瑞林；和 (c)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的(b)辅助活性成分的含量是0.0001-20wt％。
在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型选自下组注射剂、注射用无菌粉末、片剂、胶囊、醑剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、或栓剂。
在本发明的第四方面，提供了一种非治疗性的、体外诱导细胞发生细胞自噬的方法，它包括步骤 将培养的细胞与上述式I所示的化合物或其药学上可接受的盐接触，从而诱导细胞发生细胞自噬。
在另一优选例中，所述的细胞是选自下组的哺乳动物肿瘤细胞神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、或卵巢癌。
在另一优选例中，所述的细胞来自于人、大鼠或小鼠。

具体实施例方式 本发明人经过广泛而深入的研究，发现胺碘酮或其衍生物具有显著诱导细胞发生自噬的作用，并且体内、体外实验表明其能有效地抑制肿瘤(细胞)生长。因此，胺碘酮或其衍生物是本发明人发现的具有诱导细胞自噬、以及抑制肿瘤生长的化合物。据此，本发明提供了胺碘酮或其衍生物通过诱导细胞自噬，从而发挥治疗相关疾病的作用。
具体而言，自噬性细胞死亡是一种非凋亡性程序性细胞死亡，形态学上不同于凋亡，起因于过度的自体吞噬，也被称为II型程序性细胞死亡。自噬过程中形成的自噬小体将细胞质结构隔绝并将其降解为核苷酸、氨基酸、游离脂肪酸，使其被重新利用以合成大分子物质或产生ATP。因此，“自噬”是一种降解胞质内容物的溶酶体途径，可以降解细胞内长期存在的蛋白质和细胞器。它参与细胞对外界刺激发生反应，参与发育过程，并且有抗肿瘤的作用，与肿瘤、肌病和神经系统退行性疾病密切相关。肿瘤细胞可以通过自噬发生自发性或化疗诱发的死亡。在凋亡缺陷的细胞中，肿瘤的生物治疗主要通过自噬性细胞死亡，使用自噬诱导剂使凋亡抵抗的肿瘤细胞发生自噬性细胞死亡的潜能提高，这将成为化疗的新方向。本发明人经过深入研究发现，胺碘酮或其衍生物能诱导细胞发生自吞噬，并且在体内、体外均能显著抑制肿瘤的生长，阻止肿瘤发生、发展，发挥明显的抗肿瘤作用。
如本文所用，术语“本发明化合物”指具有如下结构的式I化合物或其药学上可接受的盐
式中， R1和R2独立地为氢原子或烷基，或者R1和R2与相邻的N原子一起构成4-7元杂环(更佳地所述的杂环为

或

)； R3代表氢原子或-NH-SO2-CH3； R4代表烷基或酯基； R5代表碘原子或氢原子； R6代表碘原子或氢原子； n为1-8的正整数(优选1-5)。
如本文所用，术语“烷基”是指具有1-8个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基或辛基等。优选具有1-5个碳原子的直链或支链烷基，最优选甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、或新戊基。
如本文所用，术语“酯基”是指具有1-8个碳原子的直链或支链酯基，例如甲酯基、乙酯基、丙酯基、异丙酯基、丁酯基、异丁酯基、叔丁酯基、仲丁酯基、戊酯基、辛戊酯基等。优选具有1-5个碳原子的直链或支链酯基，最优选甲酯基、乙酯基、异丙酯基、异丁酯基、或新戊酯基。
优选R1、R2各自独立地代表氢原子、甲基、乙基、异丙基或丁基。
优选R4代表丙基、甲酯基、乙酯基、异丙酯基、异丁酯基、或新戊酯基。
特别优选地，R1、R2各自独立地代表氢原子或C1-4烷基，R3代表氢原子或-NH-SO2-CH3、R4代表丙基或C1-4酯基，R5代表碘原子或氢原子，和R6代表碘原子或氢原子。
最优选的化合物包括选自下组的式II-XII化合物


一种特别优选的化合物是胺碘酮，其结构如式II所示
如本文所用，术语“胺碘酮及其衍生物”或“胺碘酮及其活性衍生物”可互换使用，指胺碘酮以及结构与胺碘酮类似且具有胺碘酮的诱导细胞自吞噬功能(或活性)的衍生物。所述式III至XII化合物可以视为胺碘酮的衍生物。另外，衍生物还可包括式I化合物的酯、盐等形式，尤其是药学上可接受的盐。
本发明中，术语“药学上可接受的盐”是指相对无毒的本发明化合物的无机酸加成盐和有机酸加成盐。代表性盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐或月桂基磺酸盐等。它们可包含基于碱金属和碱土金属的阳离子，如钠、锂、钾、钙、镁等，以及无毒胺、季胺和胺阳离子，包括但不限于胺、四甲基胺、四乙基胺、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。
本发明包括通式(I)所表示的化合物及其可能的各种异构体型式。包括非镜像异构体、镜像异构体、互变异构体或“E”或“Z”构型异构体等。
此外，通式(I)所表示的化合物在应用上也涵盖该化合物的溶剂化或非溶剂化形式。因此，各式均包括具有所指明构造的化合物，包括其水合或无水合形式。
除了通式(I)所表示的化合物外，不同具体实施方案包括药学上可接受的盐、前药、该化合物的活性代谢物、或该代谢物的药学上可接受的盐。
“前药”是一种通式(I)所表示的衍生物，借助于在体内代谢的方式将其于活体内转化(水解、还原或氧化)成通式(I)所表示的化合物。适合用来制备“前药”的酸包括(但不限于)乙酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、草酸、水杨酸、琥珀酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、亚甲基-双-β-羟基萘酸、龙胆酸、羟乙基磺酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或对甲苯磺酸等。
如本文所用，“本发明的组合物”是指含有如式I所示化合物或其药学上可接受的盐的组合物，其中所含的式I化合物或其药学上可接受的盐的重量是组合物总重量的0.01-99％，较佳地为0.1-95％，更佳地为1-90％，最佳地为10-80％。本发明的组合物包括(a)细胞自噬诱导剂，(b)治疗肿瘤的组合物。
本发明的组合物可以是药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
医药用途 本发明的胺碘酮或其衍生物可用作细胞自噬诱导剂。所述的细胞自噬诱导剂可用于治疗肿瘤、肌病和神经系统退行性疾病，所述的用途可通过诱导细胞自噬来实现。
本发明的胺碘酮或其衍生物可用于治疗肿瘤，所述的用途可通过诱导细胞自噬来实现。所治疗肿瘤的代表性的例子包括(但并不限于)神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、或卵巢癌。
本发明的胺碘酮或其衍生物可用作或用于制备细胞自噬诱导剂。所述的诱导剂可用于治疗肿瘤、肌病和神经系统退行性疾病。
所述的肿瘤包括(但并不限于)神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、或卵巢癌； 所述的肌病包括(但并不限于)重症肌无力、类重症肌无力、肉毒中毒、肌无力综合症、肌营养不良症、强直性肌病、炎症性肌病、先天性或婴儿性肌病、或代谢性/内分泌性肌病； 所述的神经系统退行性疾病包括(但并不限于)老年性痴呆、帕金森氏病、周围神经炎、糖尿病外周神经病变、脑干神经病变、颅脑损伤、脑缺血、脊髓损伤、肌萎缩侧索硬化症、或Huntington氏病。
药物组合物和施用方式 本发明还提供了药物组合物以及诱导细胞发生自噬的方法，它包括给哺乳动物施用药物有效量的本发明化合物。
本发明还提供了药物组合物以及治疗肿瘤的方法，它包括给哺乳动物施用药物有效量的本发明化合物。
本发明还提供了治疗与细胞自噬相关疾病的方法，它包括给哺乳动物施用药物有效量的本发明化合物。
所用的活性成分的有效剂量可随给药模式和待治疗疾病的严重程度而变化。然而，通常当本发明的化合物每天以约0.5-500mg/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以2-4次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为1-100mg。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体混合的约0.5-500mg的活性化合物。可调节此治疗方案以达到最佳治疗效果。例如，可根据治疗状况的需要，每天若干次分开给药，或将剂量按比例减少。通常，成人口服临床剂量的范围为1-1000mg/日，优选为10-200mg/日，成人非口服的剂量为0.1-100mg/日，优选1-100mg/日。
在使用本发明的胺碘酮作为细胞自噬诱导剂时，还可与其它治疗剂联用。例如(但不限于)和选自下组的一种或多种辅助活性成分联用雷帕霉素、长春新碱、他莫西芬、白藜芦醇、紫杉醇、替莫唑胺、三苯氧胺、三氧化二砷、丁氯倍他松、卡巴西平、丙戊酸钠、N-羟基-N’-苯基辛二酰胺(SAHA)。
SAHA是suberoylanilide hydroxamic acid的缩写，其结构式如下
在使用本发明化合物治疗肿瘤时，还可与其他治疗剂联用。例如与选自下组的一种或多种辅助活性成分联用雷帕霉素、长春新碱、他莫西芬、白藜芦醇、紫杉醇、替莫唑胺、三苯氧胺、三氧化二砷、丁氯倍他松、卡巴西平、丙戊酸钠、N-羟基-N’-苯基辛二酰胺(SAHA)、喜树碱、替尼泊苷、秋水仙碱、高三尖杉酯碱、依托泊苷、丙卡巴肼、门冬酰胺酶、顺铂、卡铂、米托蒽醌、环磷酰胺、盐酸氮芥、洛莫司汀、司莫司汀、塞替派、白消安、氮甲、苯丁酸氮芥、氟尿嘧啶、喃氟啶、优氟啶、卡莫氟、巯嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、环胞苷、巯鸟嘌呤、六甲蜜胺、羟基脲、丝裂霉素、阿霉素、表柔比星、博莱霉素、培莱霉素、阿伐司汀、赫赛汀、格列卫、吉西他滨、托泊替康、多西他赛、亮丙瑞林。
在使用本发明化合物治疗肌病时，还可与其他治疗剂联用。例如与选自下组的一种或多种辅助活性成分联用新斯的明、依酚氯胺、加兰他敏、安贝氯铵、地美溴铵、毒扁豆碱、吡斯的明。
在使用本发明化合物治疗神经系统退行性疾病时，还可与其他治疗剂联用。例如与选自下组的一种或多种辅助活性成分联用左旋多巴、卡比多巴、金刚烷胺、司立吉兰、溴隐亭、苄丝肼、苯海索、苯扎托品、丙环定。
通常，当本发明化合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合制成不同给药途径的药物剂型，如注射剂、注射用无菌粉末、片剂、胶囊、醑剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、栓剂等。
本发明的化合物可经过口服、静脉内、肌内或皮下途径给药。
上述剂型中可经口服给药的剂型为片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、醑剂。固态载体包括淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖、白陶土、微粉硅胶、滑石粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮。而液态载体包括无菌水、乙醇、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制备药物组合物的过程中通常使用的佐剂包括调味剂、着色剂、防腐剂(如羟苯烷基丁酯、苯甲酸钠、山梨酸)和抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠和二丁基羟基甲苯)。
上述剂型中可用于注射途径给药的剂型包括注射剂、注射用无菌粉末，它们是将药物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合制成以供注射给药的形式。溶剂包括无菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，还需加入抑菌剂(如苯甲醇、羟苯丁酯、硫柳汞)、等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖)、助悬剂(如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素)、增溶剂(吐温-80、卵磷酯)、抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠)和填充剂(如乳糖、甘露醇)。
从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。优选口服给药。
本发明的主要优点在于 1、本发明的胺碘酮或其衍生物可用于制备有效的细胞自噬诱导剂。
2、本发明的胺碘酮或其衍生物可有效治疗肿瘤。
3、本发明的胺碘酮或其衍生物还可有效治疗与细胞自噬相关的疾病。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分比和份数按重量计。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1 胺碘酮或其衍生物对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用 实验动物雌性SPF级BALB/c小鼠，自养，体重为18-20g，SPF级动物房饲养，12h光照/12h黑暗，自由摄取饲料和水。
实验药品胺碘酮(式II化合物)购自上海信谊九福药业有限公司，化合物VI(如式VI所示)由本实验室合成，合成方法见文献(Laurent Bigler，CarloSpirli，Romina Fiorotto et al.Synthesis and cytotoxicity propertiesof amiodarone analogues.European Journal of MedicinalChemistry，2007，42861-867)；化合物XI(如式XI所示)由本实验室合成，合成方法见文献(Huy Riem Ha，Laurent Bigler，Barbara Wendt et al.Identification and quantitation of novel metabolites of amiodarone inplasma of treated patients.European Journal of Pharmaceutical Sciences，2005，24271-279)，紫杉醇购自四川九峰天然药业股份有限公司，环磷酰胺购自常州新力医药化工有限公司。
实验方法取接种7天的S180腹水小鼠，无菌条件下抽取腹水，用生理盐水调整细胞浓度至5×106/ml。将S180细胞悬液以0.2ml/只的量接种在小鼠右前肢腋部皮下。接种24h后，将小鼠分别随机分为6组(每组10只)胺碘酮组，给药剂量为300mg/kg；化合物IV组，给药剂量为300mg/kg；化合物XI组，给药剂量为300mg/kg；环磷酰胺组，给药剂量为20mg/kg；联合用药组，分别给与150mg/kg的胺碘酮和2mg/kg的紫杉醇；对照组给予蒸馏水，给药体积为0.1ml/10g，以上各组均每天灌胃给药1次，连续7天。停药次日处死小鼠，剥取瘤块称重，计算每组平均值，进行t检验。计算抑瘤率 抑瘤率＝(对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重×100％。
表1胺碘酮或其类似物对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用
*表示p＜0.01，与对照组相比，具有显著性差异。胺碘酮或其衍生物在300mg/kg剂量时能够显著抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长，差异具有显著性(p＜0.01)，抑制率分别为70.41％、56.12％、60.2％。胺碘酮(150mg/kg)和紫杉醇(2mg/kg)联合给药时，抑制率为80.61％，表明两者具有显著的协同增效作用。与环磷酰胺组相比，胺碘酮组、化合物IV组、化合物XI组、联合用药组小鼠的体重没有明显下降，说明药物基本无毒。
实施例2 体外试验中胺碘酮及其衍生物对多种肿瘤细胞生长的抑制作用 体外培养人胚肾癌293细胞、人肝癌HepG2细胞、人肺癌A549和CRL-5895细胞、人胃癌HGC细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人白血病HL-60细胞、人淋巴瘤U937细胞、人结肠癌HT-29细胞、人骨肉瘤MG-63细胞、人卵巢癌3AO细胞、人神经胶质瘤U251细胞。细胞生长至对数生长期后，用胰酶消化细胞，1000rpm离心5分钟，弃上清，适量培养基悬浮，调整细胞浓度至8×104/ml。将细胞悬液接种到96孔细胞培养板中，每孔100μl，放置细胞培养箱(37℃，5％)中培养24h后，胺碘酮组、化合物IV组、化合物XI组分别每孔加入细胞培养基稀释的待测药物100μl，终浓度为0.5μg/ml，空白对照组加入等量的细胞培养基，各组均设6个复孔。培养箱中培养66h后，每孔加入5mg/ml的MTT 20μl，37℃放置4h，弃上清，加入150μl DMSO，振荡混匀，492nm测吸光度(OD)。计算药物对各肿瘤细胞生长的抑制率 抑制率＝(对照组OD值-给药组OD值)/对照组OD值×100％。
表2胺碘酮对多种肿瘤细胞生长的抑制作用 表3化合物IV对多种肿瘤细胞生长的抑制作用 表4化合物XI对多种肿瘤细胞生长的抑制作用 表2、表3和表4结果表明，胺碘酮、化合物IV、化合物XI的剂量分别为0.5μg/ml时，在体外对人胚肾癌细胞、肝癌细胞、肺癌细胞、胃癌细胞、乳腺癌细胞、白血病细胞、结肠癌细胞、骨肉瘤细胞、淋巴瘤细胞、人卵巢癌细胞、人神经胶质瘤细胞均有很强的抑制其生长的作用，抗瘤谱广。
实施例3 片剂的制备 利用常规技术，混合以下组分，然后直接压片，制备片剂形式的药物组合物，其配方如下 实施例4 注射剂的制备 ①将亚硫酸氢钠加于500ml注射用水中，加入羧甲基纤维素钠，混匀，浸泡过夜(24小时)，全溶后，用210目尼龙布过滤； ②将溶液①水浴加热，加入吐温-80，混匀； ③至水浴沸腾，加入胺碘酮，混匀，继续加热30分钟，取出冷却至室温，G3垂熔玻璃漏斗过滤； ④加注射用水至1000ml，混匀，灌封，用100℃30分钟灭菌。
实施例5 复方片剂的制备 利用常规技术，混合以下组分，然后直接压片，制备片剂形式的药物组合物，其配方如下 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
权利要求
1.一种式I所示化合物或其药学上可接受的盐的用途，
式中，
R1和R2独立地为氢原子或烷基，或者R1和R2与相邻的N原子一起构成4-7元杂环；
R3代表氢原子或-NH-SO2-CH3；
R4代表烷基或酯基；
R5代表碘原子或氢原子；
R6代表碘原子或氢原子；
n为1-8的正整数，
其特征在于，用于制备细胞自吞噬诱导剂。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的细胞自吞噬诱导剂用于治疗肿瘤、肌病和神经系统退行性疾病。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的诱导剂包括药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述式I化合物是结构式为II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII的化合物；和/或
所述的诱导剂包括药学上可接受的载体和选自下组的额外组分雷帕霉素、长春新碱、他莫西芬、白藜芦醇、紫杉醇、替莫唑胺、三苯氧胺、三氧化二砷、丁氯倍他松、卡巴西平、丙戊酸钠、N-羟基-N’-苯基辛二酰胺(SAHA)。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的诱导剂的剂型选自下组注射剂、注射用无菌粉末、片剂、胶囊、醑剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、或栓剂。
6.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的肌病选自下组重症肌无力、类重症肌无力、肉毒中毒、肌无力综合症、肌营养不良症、强直性肌病、炎症性肌病、代谢性/内分泌性肌病、先天性和婴儿性肌病；和/或
所述的神经系统退行性疾病选自下组老年性痴呆、帕金森氏病、周围神经炎、糖尿病外周神经病变、脑干神经病变、颅脑损伤、脑缺血、脊髓损伤、肌萎缩侧索硬化症、Huntington氏病。
7.一种式I所示化合物或其药学上可接受的盐的用途，
式中，
R1和R2独立地为氢原子或烷基，或者R1和R2与相邻的N原子一起构成4-7元杂环；
R3代表氢原子或-NH-SO2-CH3；
R4代表烷基或酯基；
R5代表碘原子或氢原子；
R6代表碘原子或氢原子；
n为1-8的正整数，
其特征在于，用于制备治疗肿瘤的药物组合物。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤选自下组神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、或卵巢癌。
9.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述式I化合物是结构式为II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI或XII的化合物；和/或
所述的药物组合物中包括药学上可接受的载体和选自下组的额外组分雷帕霉素、长春新碱、他莫西芬、白藜芦醇、紫杉醇、替莫唑胺、三苯氧胺、三氧化二砷、丁氯倍他松、卡巴西平、丙戊酸钠、N-羟基-N’-苯基辛二酰胺(SAHA)、喜树碱、替尼泊苷、秋水仙碱、高三尖杉酯碱、依托泊苷、丙卡巴肼、门冬酰胺酶、顺铂、卡铂、米托蒽醌、环磷酰胺、盐酸氮芥、洛莫司汀、司莫司汀、塞替派、白消安、氮甲、苯丁酸氮芥、氟尿嘧啶、喃氟啶、优氟啶、卡莫氟、巯嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、环胞苷、巯鸟嘌呤、六甲蜜胺、羟基脲、丝裂霉素、阿霉素、表柔比星、博莱霉素、培莱霉素、阿伐司汀、赫赛汀、格列卫、吉西他滨、托泊替康、多西他赛、亮丙瑞林。
10.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的治疗肿瘤的药物组合物诱导哺乳动物的肿瘤细胞发生细胞自噬。
11.一种药物组合物，其特征在于，它含有
(a)作为主要活性成分的0.01-99.9wt％的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，
式中，
R1和R2独立地为氢原子或烷基，或者R1和R2与相邻的N原子一起构成4-7元杂环；
R3代表氢原子或-NH-SO2-CH3；
R4代表烷基或酯基；
R5代表碘原子或氢原子；
R6代表碘原子或氢原子
n为1-8的正整数，
(b)选自下组的一种或多种辅助活性成分；雷帕霉素、长春新碱、他莫西芬、白藜芦醇、紫杉醇、替莫唑胺、三苯氧胺、三氧化二砷、丁氯倍他松、卡巴西平、丙戊酸钠、N-羟基-N’-苯基辛二酰胺(SAHA)、喜树碱、替尼泊苷、秋水仙碱、高三尖杉酯碱、依托泊苷、丙卡巴肼、门冬酰胺酶、顺铂、卡铂、米托蒽醌、环磷酰胺、盐酸氮芥、洛莫司汀、司莫司汀、塞替派、白消安、氮甲、苯丁酸氮芥、氟尿嘧啶、喃氟啶、优氟啶、卡莫氟、巯嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、环胞苷、巯鸟嘌呤、六甲蜜胺、羟基脲、丝裂霉素、阿霉素、表柔比星、博莱霉素、培莱霉素、阿伐司汀、赫赛汀、格列卫、吉西他滨、托泊替康、多西他赛、亮丙瑞林；和
(c)药学上可接受的载体。
12.如权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述的(b)辅助活性成分的含量是0.0001-20wt％。
13.如权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述的药物组合物的剂型选自下组；注射剂、注射用无菌粉末、片剂、胶囊、醑剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、或栓剂。
14.一种非治疗性的、体外诱导细胞发生细胞自噬的方法，其特征在于，包括步骤
将培养的细胞与如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐接触，从而诱导细胞发生细胞自噬
式中，
R1和R2独立地为氢原子或烷基，或者R1和R2与相邻的N原子一起构成4-7元杂环；
R3代表氢原子或-NH-SO2-CH3；
R4代表烷基或酯基；
R5代表碘原子或氢原子；
R6代表碘原子或氢原子；
n为1-8的正整数。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述的细胞是选自下组的哺乳动物肿瘤细胞神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、或卵巢癌。
全文摘要
本发明涉及药物学领域。更具体地，本发明涉及一种已知药物-胺碘酮及其衍生物在制备细胞自吞噬诱导剂中的新医药用途。本发明还涉及含胺碘酮的药物组合物。
文档编号A61K31/343GK101642451SQ20081004151
公开日2010年2月10日 申请日期2008年8月8日 优先权日2008年8月8日
发明者强 俞 申请人:上海安普生物科技有限公司