专利名称：：绞股蓝提取物及其制备方法和其在预防和治疗脂肪肝和亚健康状态药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及绞股蓝的提取物，属于医药领域。
背景技术：
：绞股蓝的主要药效成份为绞股蓝总皂甙，具有与人参皂甙相似的活性，且没有毒性，性质平稳。绞股蓝作为可食用的中药保健品，通过其降脂、免疫调节及抗氧化作用，提高机体抵抗力，继而达到其抗疲劳和抗衰老作用。绞股蓝总皂甙能提高机体的抗氧化能力，有效抑制脂质过氧化产物形成；能改善高脂血症大鼠的血液浓、粘状态。能显著提高免疫器官胸腺、脾脏重量，提高小鼠免疫功能并能明显提高超氧化物歧化酶活性，抑制丙二醛生成，N0S、NO含量亦明显降低。绞股蓝多糖具有显著的细胞免疫促进作用，并具有降血糖、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、治疗失眠等作用。绞股蓝皂甙具有人参皂甙的生理活性，绞股蓝多糖成分也是绞股蓝的有效成分之一，因此在开发绞股蓝时可考虑综合利用。而近20年对绞股蓝的研究虽然很多，但在绞股蓝总皂甙与绞股蓝多糖之间有效配比的研究应用并未见公开发表。
发明内容本发明的第一个目的在于提供一种绞股蓝提取物，由特定比例的绞股蓝总皂甙与绞股蓝多糖配比而成，可以用于预防和治疗脂肪肝和亚健康状态。本发明采用如下技术方案一种绞股蓝提取物，含有绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙，绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙的重量比为1:1-5。本发明还提供了一种绞股蓝提取物的新的医药用途，绞股蓝提取物在预防和治疗脂肪肝药物中的应用，所述绞股蓝提取物由绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙按重量比为1:1-5的比例组成。绞股蓝提取物在预防和治疗亚健康状态药物中的应用，所述绞股蓝提取物由绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙按重量比为1:1-5的比例组成。本发明还提供了上述绞股蓝提取物的制备方法，包括如下过程(1)取绞股蓝净药材加水提取，并用碳酸钙细粉调节PH为8-10，过滤后将提取液进行真空浓縮；(2)向浓縮液中加入食用乙醇，边加边搅拌至含醇量按体积计达5961%，静置，取上清液；沉淀物用食用乙醇洗涤，收集洗涤液与上清液合并备用；(3)上清液置酒精回收塔中回收乙醇后，通过大孔树脂柱D101，以体积浓度为30%70%的食用乙醇洗至洗脱液无色后，收集洗脱液减压回收乙醇并浓縮，浓縮后浸膏的相对密度为1.201.25，将浸膏干燥后得黄色粉末，为绞股蓝总皂甙；(4)步骤(2)中洗涤后的沉淀物挥干乙醇，用蒸馏水回流提取，取上清液离心除去沉淀，上清液减压浓縮后加入乙醇，使含醇量按体积计达7981%，静置，离心，沉淀物经干燥，得绞股蓝多糖；(5)将提取得到的绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙按重量比为1:l-5的比例配比。研究表明绞股蓝有健脾益气、清热解毒、强身延年之功效，具有双向免疫调节、抗心肌缺血和改善心脏功能、延缓衰老、抗肿瘤等多种生理活性。绞股蓝通过以上生理活性，提高了机体抵抗力，继而发挥其抗疲劳和抗衰老作用，用于防治以慢性疲劳综合症为主的亚健康状态、脂肪肝等。通过试验表明，本发明绞股蓝提取物其作用机制能够通过清除组织自由基含量，提高机体的抗氧化能力，降低肝组织TG、TC、FFA含量，改善肝脏的脂肪堆积实现的，具有较好的预防和治疗脂肪肝及亚健康状态的效果。图1为空白组肝组织病理切片HE染色400X显微照片，图2为模型组肝组织病理切片HE染色400X显微照片，图3为洛伐他汀组肝组织病理切片HE染色400X显微照片，图4为绞股蓝总皂甙组肝组织病理切片HE染色400X显微照片，图5为绞股蓝新组分B组肝组织病理切片HE染色400X显微照片，图6为绞股蓝新组分A组肝组织病理切片HE染色400X显微照片。具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。实施例1实施例2-6中绞股蓝多糖和绞股蓝总皂甙是采用下述步骤进行提取(1)取绞股蓝净药材投入超声波中药提取罐中，加入0.5%碳酸钙细粉以调节pH二8-10，加水提取2次，过滤后于二效浓縮蒸发器中进行真空浓縮，真空浓缩有效温度控制在8085°C，真空度控制在-0.06-0.07MPa，浓縮为相对密度为1.151.20(80。C热测)，放凉。(2)浓縮液加入95。/。(v/v)食用乙醇，边加边搅拌至含醇量达5961%(v/v)，静置12小时，取上清液；沉淀物用60。/。(v/v)食用乙醇洗涤2次，收集洗涤液与上清液合并备用。(3)上清液置酒精回收塔中回收乙醇后，通过大孔树脂柱DIOI，以40。/。60。/。(v/v)食用乙醇洗至洗脱液无色后，收集洗脱液减压回收乙醇并浓縮，浓縮后浸膏的相对密度为1.201.25，将浸膏干燥后得黄色粉末(绞股蓝总皂甙，备用)。(4)将步骤(2)中洗涤后的沉淀物挥干乙醇，用蒸馏水回流提取2次，每次10分钟，合并上清液，离心除去沉淀，上清液减压浓縮，加入95o/"v/v)乙醇，使含醇量达798P/。(v/v)，低温过夜，离心，沉淀物低温干燥，得绞股蓝多糖。(5)将绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙按比例配制。实施例2绞股蓝总皂甙片处方绞股蓝总皂甙20g淀粉180取上述原料于混料器中采用等量递增的方法混匀，全粉末压片，每片重200mg，含绞股蓝总皂甙20mg。实施例3.绞股蓝新组分A处方绞股蓝总皂甙20g绞股蓝多糖5g淀粉175g取上述原料绞股蓝总皂甙和绞股蓝多糖于混料器中采用等量递增的方法混匀，全粉末压片，每片200mg，每片含绞股蓝总皂甙20mg，绞股蓝多糖5mg。实施例4.绞股蓝新组分Al处方绞股蓝总皂甙20g绞股蓝多糖20g淀粉160g取上述原料绞股蓝总皂和绞股蓝多糖于混料器中采用等量递增的方法混匀，全粉末压片，每片200mg，每片含绞股蓝总皂甙20mg，绞股蓝多糖20mg。实施例5.绞股蓝新组分B处方绞股蓝总皂武20g绞股蓝多糖3g淀粉160g取上述原料绞股蓝总皂甙和绞股蓝多糖于混料器中采用等量递增的方法混匀，全粉末压片，每片200mg，每片含绞股蓝总皂甙20mg，绞股蓝多糖3mg。实施例6.绞股蓝新组分C处方绞股蓝总皂甙20g绞股蓝多糖25g淀粉155g取上述原料绞股蓝总皂甙和绞股蓝多糖于混料器中采用等量递增的方法混匀，全粉末压片，每片200mg，每片含绞股蓝总皂甙20mg，绞股蓝多糖25mg。下面通过对绞股蓝新组分进行动物实验研究和临床研究的阐述，说明本发明在治疗脂肪肝、肥胖降血脂方面的作用，并且证实了绞股蓝新组分对以慢性疲劳为主要症状的亚健康状态的防治作用。(一)绞股蓝提取物对代谢性疾病影响作用的实验研究l.抗氧化作用的影响1.1方法大鼠40只，雄性，体重240g士12g，随机分为4组A组正常组，给蒸馏水；B组:模型组，给CCl.,(150mg/kg);C组:CCL加绞股蓝总皂甙片(15mg/kg);D组:CCL加绞股蓝新组分A(15mg/kg)。绞股蓝和蒸馏水组每天一次灌胃给药(lml/100g)，灌胃前禁食16h，连续10d。CCL于第1、3d腹腔注射给药。末次给药后24h处死动物，立即取出肝脏放入4。C生理盐水中洗去浮血、剥除脂肪及结缔组织，吸干水份、称重、剪碎，按lg组织加入9ml0.25mol/Lsucrose-0.01mol/LTris-HCl缓冲液、匀浆。取部分肝匀浆经500g离心、20min去胞核碎片后，经104g离心10min，沉淀物为线粒体。取上清液经105g离心65min，沉淀物为微粒体。肝匀浆、微粒体、线粒体脂质过氧化物(LPO)含量用TBA比色法测定；谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性用DTNB法测定。用酶法测定血清谷丙转氨酶(ALT)。蛋白质含量用Lowry法测定。用单因素方差分析法进行统计。1.2结果1.2.1绞股蓝有效组分对大鼠ALT活性的影响C、D组ALT显著低于B组，但仍高于A组，见表1，表明绞股蓝提取物能减弱CCL对肝功能的损害，且以D组的绞股蓝新组分A为优(P〈0.01)。1.2.2绞股蓝新组分A对大鼠肝脏LPO、GSH-Px活性的影响C、D组LPO明显低于B组，而GSH-Px活性高于B组，虽然C、D组LPO和GSH-Px未完全恢复到A组水平，但与B组相比较，差异显著(P〈0.05)，且以绞股蓝新组分A为优。见表2。表1对大鼠ALT活性的影响(X±S，n-10)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注与模型组比较，*P〈0,05'**P<0.01;表2对大鼠肝脏LPO、GSH—Px活性的影响(X±S，n二一lO)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注与模型组比较，*P〈0.05，水氺P〈0.01结论绞股蓝总皂甙及绞股蓝多糖按本发明特定比例形成的组合物能提高机体的抗氧化能力，并可抑制脂质过氧化产物形成；且能保护肝脏受损大鼠的自由基除酶系的活力，减弱自由基作用于肝细胞膜的脂质过氧化作用，从而在一定程度上减弱了CCh对肝脏的损伤，且优于单纯的绞股蓝总皂甙。2对肥胖大鼠体重、腹腔脂肪含量、血清总胆固醇、甘油三酯的影响2.1方法选用体重150180g健康大鼠56只，雌雄各半，随分为7组A组:正常组B组:模型组C组:绞股蓝总皂甙片组D组:绞股蓝新组份A组E组:绞股蓝新组份B组F组:绞股蓝新组份c组G组:绞股蓝新组份Al组A组(正常组)喂普通饲料，B组(模型组)、C一G组绞股蓝提取物组均喂高脂饲料(内含2%胆固醇，10%猪油，0.5%胆酸钠，4%白糖，83.5%基础饲料)。A组和B组每天上午按2ml/100g给自来水，C一F组灌胃给药O.03g,/kg，2ml/100g，连续40天，第41天空腹称重后剪尾采血测血脂，继续给药饲养至第44天，以戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉后颈动脉采血，肝素抗凝测血液流变学，并剖取肝脏观察肝脂肪变情况，测定腹腔脂肪含量。2.2结果2.2.1对肥胖大鼠血脂的影响与B组(模型组)比较，C组(绞股蓝总皂甙组)、D组(绞股蓝新组分A组)、G组(绞股蓝新组分A1组)TC、TG水平下降明显，有显著差异，对HDL-c有升高趋势，LDL-c、AI显著下降，降血脂作用以D组(绞股蓝新组分A组)作用更优(P〈0.01)。E组(绞股蓝新组分B)组、F组(绞股蓝新组分C组)部分指标也有作用，但效果较差，见表3。2.2.2对肥胖大鼠血液流变学、体重增值、肝脂肪肝发生率及腹腔脂肪含量的影响与B组(模型组)比较，C组(绞股蓝总皂武组)、D组(绞股蓝新组分A组)、G组(绞股蓝新组分A1组)全血比粘度、红细胞压积、体重增值及腹腔脂肪含量明显降低，B组脂肪占其体重的4.26%，C组、D组、G组腹腔脂肪占体重的4.1%和3.79%，3.87%，E组和F组分别为4.2%和4.15%，效果较差，见表4。表3对肥胖大鼠血脂的影响(X土S，n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注与模型组比较，*P〈0.05，**P〈0.01。表4对肥胖大鼠血流变学、体重禮Y直、肝脂肪肝发生率及腹腔脂肪含量的影响(X±S，n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注与模型组比较，*P〈0.05，**P<0.01。结论绞股蓝总皂甙以及由绞股蓝多糖和绞股蓝总皂甙组成的组合物均能改善高脂血症大鼠的血液浓、粘状态，减缓体重，抑制脂肪肝的发生，具有减少脂肪沉积，减轻体重的作用，以绞股蓝新组分A、绞股蓝新组分A1疗效好。(二)绞股蓝总皂甙及组合物对混合型脂肪肝的防治作用研究1.1实验动物健康SPF级SD雄性大鼠104只(体重170士20g)，由广东省实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(粵)2003-0002，粤监证字2007A003。1.2.药物绞股蓝总皂甙片(实施例2)，绞股蓝新组分A(实施例3)，绞股蓝新组分B(实施例5)，绞股蓝新组分C(实施例6)，绞股蓝新组分A1(实施例4)广州白云山和记黄埔中药有限公司制备。洛伐他汀片(批号20060901)北京万生药业有限责任公司。食用酒精(红星二锅头，批号GB/T10781.2-89，酒精度55。/。V()L)北京红星股份有限公司(以下简称酒精)。1.3.仪器旋涡混合器江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司LAC-110.4型电子分析天平德国赛多利斯(ACCULAB)股份公司TDL80-2B离心机上海安亭科学仪器厂TGL-16G型高速冷冻离心机上海安亭科学仪器厂ZS-831型内切式组织匀浆器浙西机械厂DK-S22型电热恒温水浴锅上海精宏实验设备有限公司低温离心机Sigma公司TU-1800紫外-可见分光光度计北京普析通用仪器有限公司1.4.实验方法将大鼠适应性饲养1周，随机分为10组A组空白组；B组模型组；C组洛伐他汀组；Dl组绞股蓝总皂甙片低剂量组；D2组绞股蓝总皂甙片高剂量组；El组绞股蓝新组分A低剂量组；E2组绞股蓝新组分A高剂量组；F组绞股蓝新组分B高剂量组；G组绞股蓝新组分C高剂量组；H组绞股蓝新组分A1高剂量组。其中C组的洛伐他汀组为阳性药物组。每天观察记录大鼠摄食情况(按50g/kg*d—V只喂饲相应的饲料)，每周末称重，根据大鼠体重变化相应调整给药及灌胃55。红星二锅头(药物洛伐他汀组2mg/kg'd—V只，绞股蓝总皂甙片组和各绞股蓝新组分低、高剂量组分别为15mg/kg*d—V只(相当于成人临床用量的5倍)，30mg/kgd—V只(相当于成人临床用量的10倍)。酒精10ml/kg'd—'/只)。每天上午空白组给予普通饲料，模型组和各绞股蓝新组分组给予高脂词料(81%基础词料+10%猪油+0.5%胆酸钠+1.5%胆固醇+2%蛋黄粉+5%糖，由广东省实验动物中心提供)，同时模型组和药物组灌胃酒精，空白组给予等容量生理盐水。每天下午药物组灌胃相应剂量的药物，空白组、模型组给予等量生理盐水。每天灌胃的同时观察大鼠的一般状况(毛发、饮食、体态活动、粪便)。于第10周末宰杀动物并进行相应的实验检测(1)观察摄食量、体重增长状况、计算肝指数。(2)检测大鼠血清中TC、TG、FFA、HDL-C、LDL-C、MDA的含量及ALT、AST、SOD的活性。(3)检测大鼠肝组织匀浆中TC、TG、FFA、MDA的含量及ALT、AST，、SOD的活性。(4)观察肝组织病理变化。1.5实验结果1.5.1—般状况观察A组(空白组)大鼠活动状态，其毛发有光泽，体态活泼，反应敏捷，食量、排泄物均正常。B组(模型组)大鼠灌胃酒精后部分有嗜睡的情况，其毛发欠光泽，灌胃酒精后活动减少，睡眠较多，粪便时稀软；喂饲高脂饲料的模型组大鼠体重增长相对空白组表现明显。1.5.2绞股蓝总皂甙片和绞股蓝新组分对脂肪肝大鼠体重及肝指数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注与模型组比较<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>。表5显示各组大鼠体重增长较快，其中B组(模型组)增长最快，在7周时开始明显高于空白组，8周时与空白组比较在统计学上有显著意义，9周、10周时与空白组比较在统计学上有非常显著意义，说明喂饲高脂饲料的模型组大鼠体重增长相对空白组表现明显。而各药物组体重增长较模型组慢，无显著性差异。表6绞股蓝总甙及其组合物对大鼠肝指数的影响(I±s)组别剂量(mg/kg)n肝指数(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注与模型组比较*尸<0.05，"尸<0.01表6显示B组(模型组)肝指数明显高于A组(空白组)，统计学上有非常显著意义(尸<0.01)。绞股蓝总皂甙和绞股蓝新组分A组低、高剂量组，绞股蓝新组分A1高剂量组肝指数明显低于模型组，与模型组比较在统计学上有非常显著意义(尸<0.01)，低于洛伐他汀组，说明绞股蓝总皂甙和新组分A组、新组分A1组抑制肝脏肥大的效果明显。1.5.3绞股蓝总和新组分对脂肪肝大鼠血脂的影响表7绞股蓝总甙及其组合物对大鼠血清TG、TC、FFA含量的影响(x±s)组别剂量(mg/kg)TGTCFFA(mmol/L)(mmol/L)(/xmol/L)A组一100.75士0.07"1.69±0.19"176.72士75.04"B组一111.29±0.18AA5.70±1.25AA1001.57士473.54八aC组291.02土0.13碰4.64±1.45A\536.43±254.00Dl组15101.16±0.12AA5.31±1.13AA370.67士184.91*D2组.30101.13±0.18AA5.11±1.11AA562.70±348.68、El组15110.99土0.07*谨4.61±1.39AA455.72±262.68E2组30120.93±0.11**AA3.82土0.78場410.20±180.13*注与模型组比较*尸<0.05，"尸〈0.01;与空白组比较，<0.05，△/)<0.01。表7显示绞股蓝总皂甙片及绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙组合物能降低大鼠血清TG、TC、FFA的含量。表8绞股蓝总甙及其组合物对大鼠血清HDL-C、LDL-C含量的影响(7±s)组.别剂量HDL-CLDL-C(mg/kg)ii血清(mmol/L)血.、清(mmol/L)A组—100.90±0.09*0.49士0.23"B组—110.73±0.12A1.06±0.23AC组290.86±0.090.80±0.31Dl组15100.87士0.1(T0.86±0.35D2组.30100.86±0.130.69士0.24El组15110.90±0.15*0.73±0.31E2组30120.91±0.11*0.63±0.32*注与模型组比较*尸<0.05，"尸〈0.01;与空白组比较，<0.05，△△P<0.01。表8显示绞股蓝总皂甙及其与绞股蓝多糖组成的组合物能降低大鼠血清LDL-C含量，升高HDL-C含量，且组合物效果更明显。1.5.4.绞股蓝总及其新组分对脂肪肝大鼠肝脂的影响表9绞股蓝总甙及其组合物对大鼠肝组织TG、TC、FFA含量的影响(7±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注与模型组比较*P<0.05，**P<0.01;与空白组比较，<0.05，DeltaP<0.01。表9显示绞股蓝总皂甙及其与绞股蓝多糖形成的组合物能降低大鼠肝组织TG、TC、FFA含量1.5.5绞股蓝总甙及其组分对脂肪肝大鼠肝功能的影响表10绞股蓝总甙及其新组分对大鼠血清及肝组织ALT、AST含量的影响(^土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注与模型组比较*尸<0.05，*><0.01;与空白组比较，<0.()5，，<0.01。表10显示绞股蓝总皂甙及其与绞股蓝多糖构成的组合物具有保肝降酶的作用，但疗效以绞股蓝新组分A为好。1.5.6绞股蓝总甙及其组合对混合型脂肪肝肝组织病理切片切片如图1-图6所示。由图1可以看出，混合性脂肪肝大鼠模型肝组织HE染色病理图片显示空白组动物肝细胞结构完整，核居中，肝细胞索排列整齐。由图2可以看出，模型组肝细胞出现广泛的大小不等、数量不一的脂肪滴，细胞核被脂肪滴挤压明显偏位，脂肪变表现明显(图中箭头所指)。由图3可以看出，洛伐他汀组不同区域肝细胞周围出现大小不等、数量不一脂肪滴。由图4和图5可以看出，绞股蓝总皂甙组、绞股蓝新组分B组也有脂滴，部分细胞核被挤向一侧，绞股蓝新组分C组与图5—致。由图6可以看出，绞股蓝新组分A组脂肪变最轻，脂滴较少，核居中，肝细胞结构较完整。从对混合型脂肪肝的治疗效果来分析，绞股蓝总皂甙的疗效为45%，绞股蓝新组分A的疗效为87%,绞股蓝新组分Al的疗效为72%,绞股蓝新组分B的疗效为42%,绞股蓝新组分C的疗效为37%，可见绞股蓝总皂武和绞股蓝新组分对混合型脂肪肝均有治疗作物，但绞股蓝新组分A，绞股蓝新组分A1的疗效明显优于其它各组(P<0.01)。(三)对防治亚健康状态的实验研究1对小鼠免疫器官胸腺、脾脏重量的影响1.1方法取体重18-20g健康小鼠，雌雄各半，随机分组。除空白对照组外，其余各组均皮下注射环磷酰胺40mg/kg，每天一次，连续3天，造成免疫功能低下模型，空白组皮下注射等容积生理盐水。从造模当天起灌胃给药，空白组和模型组灌服等容积生理盐水，每天一次，连续8天。末次给药后24h处死动物，称体重，摘取胸腺及脾脏称重，以胸腺或脾脏与体重之比作为胸腺或脾脏指数。1.2结果绞股蓝能显著提高免疫器官胸腺、脾脏重量，提高小鼠免疫功能，且以绞股蓝新组分A和Al作用最优(P<0.01)。见表11。表ll绞股蓝对小鼠免疫器官胸腺、脾脏重量的影响(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注与模型组比较，*P<0.05，**P〈0.01。2抗衰老作用的实验研究2.1方法实验用雄性大鼠220250g，按体重随机分组。除正常组外，其余各组皮下注射D-半乳糖(125mg/kg/d，过滤灭菌)，注射后，模型组不给药，绞股蓝组予100mg/kg.d灌胃给药，生理盐水组灌服lmL/kg/d等容积生理盐水，连续40d。然后断头处死大鼠，迅速取出下丘脑内侧基底组织，称重后置于匀浆器中研磨，匀浆液在4。C时2800r/min离心30min，取上清-2(TC保存，待用。按照试剂盒检测说明检测其中SOD、MDA、NOS、NO含量。2.2结果衰老模型组SOD活性明显降低，MDA水平明显增高，NOS、NO含量均明显增高，与正常对照组比较有显著性差异(P〈0.05)。在应用绞股蓝治疗后，SOD活性明显增高，而MDA水平明显降低，NOS、NO含量亦明显降低。与正常对照组和衰老模型组比较均有显著差异(P〈0.05或P〈0.01)。说明绞股蓝具有延缓衰老作用。其机制可能是通过清除脑组织自由基含量，提高机体的抗氧化能力实现的。见表12。表12对D-半乳糖所致亚急性衰考^:鼠下丘脑SOD、MDA、NOS、NO含量影响(1T士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>注与正常组比较，*P<0.05，林P〈0.01;与模型组比较，ttP〈0.05，鼎P〈0.01。3抗应激作用的实验研究(1)小鼠耐缺氧实验1.1方法选择健康小白鼠，体重18-20g，雌雄各半。随机分组。每日灌胃给药1次(对照组用等容积蒸馏水)，连续给药5天，于末次给药后lh，将动物放入50ml注射器内(l只小鼠)，用封口胶将两端封死，使之不漏气。立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠致缺氧而死亡的时间。1.2结果绞股蓝和补中益气丸均可明显延长小鼠耐缺氧存活时间(P<0.05)。见表13。表13绞股蓝对小鼠缺氧存活时间的影响(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>注与对照组比较，*P〈0.05(2)小鼠耐疲劳实验(小鼠游泳试验)2.1方法选择健康小白鼠，体重18-22g，雌雄各半。随机分组，每日灌胃给药一次(对照组用等容积蒸馏水)，第七天每组动物在尾部束一2g重的负重物，将动物放入玻璃缸内游泳，水深至20cm，水温保持在2(TC土0.5°C，当小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面，即为体力耗竭，即刻计时为小鼠游泳时间。2.2结果绞股蓝各组和补中益气丸均可延长小鼠游泳时间(P〈0.05)。见表14。表14绞股蓝对小鼠游泳时间的影响(Y±S)组别动物数(只)剂量(g/kg)游泳时间(niin)对照组15—9.38土3.38补中益气丸159.015.19土4.72*绞股蓝总皂甙150.060U.91土2.64*绞股蓝新组分A150.06016.06±2.84**绞股蓝新组分Al150.06015.43土2.09**绞股蓝水提液151.011.23土3.13绞股蓝新组分B150.06011.04土4.01绞股蓝新组分c150.06012.42±3.15*注与对照组比较，*P<0.05综上所述，绞股蓝总皂甙和绞股蓝新组分，在预防治疗脂肪肝、肥胖、降血脂保肝、降酶等方面有较好的作用，且对以慢性疲劳为主要症状的亚健康状态和防治脂肪肝的作用优于常规提取的绞股蓝，且以绞股蓝新组分A和Al疗效为优。权利要求1、一种绞股蓝提取物，其特征在于含有绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙，绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙的重量比为1∶1-5。2、一种绞股蓝提取物在预防和治疗脂肪肝药物中的应用，所述绞股蓝提取物由绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙按重量比为1:1-5的比例组成。3、一种绞股蓝提取物在预防和治疗亚健康状态药物中的应用，所述绞股蓝提取物由绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙按重量比为1:154、一种绞股蓝提取物的制备方法，包括如下过程(1)取绞股蓝净药材加水提取，并用碳酸钙细粉调节PH为8-10，过滤后将提取液进行真空浓缩；(2)向浓縮液中加入食用乙醇，边加边搅拌至含醇量按体积计达5961%，静置，取上清液；沉淀物用食用乙醇洗涤，收集洗涤液与上清液合并备用；(3)上清液回收乙醇后，通过大孔树脂柱D101，以体积浓度为30%70%食用乙醇洗至洗脱液无色后，收集洗脱液减压回收乙醇并浓縮，浓縮后浸膏的相对密度为1.201.25，将浸膏干燥后得黄色粉末，为绞股蓝总皂甙；(4)步骤(2)中洗涤后的沉淀物挥干乙醇，用蒸馏水回流提取，取上清液离心除去沉淀，上清液减压浓縮后加入乙醇，使含醇量按体积计达7981%，静置，离心，沉淀物经干燥，得绞股蓝多糖；(5)将提取得到的绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙按重量比为1:l-5的比例配比。5、如权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中真空浓縮有效温度为8085°C，真空度为-0.06-0.07MPa，浓縮为相对密度为1.151.20的浸膏。全文摘要本发明公开了一种绞股蓝提取物，含有绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙，绞股蓝多糖与绞股蓝总皂甙的重量比为1∶1-5。还公开了其在预防和治疗脂肪肝和亚健康状态的药物中的应用，以及其制备方法。这种绞股蓝提取物在预防和治疗脂肪肝和亚健康状态方面具有较好的效果。文档编号A61K36/424GK101336955SQ200810145710公开日2009年1月7日申请日期2008年8月11日优先权日2008年8月11日发明者李楚源,李淑如,覃仁安,黄竹英申请人:广州白云山和记黄埔中药有限公司