专利名称：木瓜抗氧化精华素及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种植物提取物制剂，特别涉及一种木瓜抗氧化精华素，还涉 及该抗氧化精华素的制备方法。
背景技术：
抗氧化剂无论在体内还是体外均有很强的自由基清除作用，在抑菌、抗病 毒、抗辐射、抗衰老、抗肿瘤和抗心血管疾病等方面均具有良好的功效。近年 来，随着抗氧化剂的蓬勃发展，对抗氧化剂的要求也越来越高，各种广泛使用 的合成抗氧化剂由于其潜在毒性和致癌作用等逐渐受到人们的排斥，而从植物 中寻找天然、高效、低毒的抗氧化剂已引起各国科研人员的高度重视，成为抗 氧化剂发展的必然趋势。目前已相继从多种植物中提取出近百种天然抗氧化剂，
并通过体外化学测定法确证了其清除氧自由基效应，如类胡萝卜素、维生素c、 黄酮等，其中绝大部分天然抗氧化剂都是多酚类物质。
但是，既往天然抗氧化剂的动物干预及人群临床研究结果显示从植物中 提纯的天然抗氧化剂单一化合物多数并未发挥出预期的抗氧化活性和相关疾病 防治功效，与前期直接食用原植物的研究结果不一致，究其原因，可能与破坏 了原植物抗氧化体系的完整性有关，从而难以发挥出原抗氧化体系的多种活性 成分协同效应。近年来风靡全球的抗氧化膳食补充剂多以植物天然抗氧化剂粗 提物为主要原料制成，如葡萄籽提取物制品保留了 2种以上重要的不同类型天然 抗氧化剂类黄酮和原花色素，可以同时清除HO.和O,,充分抑制脂质过氧化， 防治氧化损伤相关疾病的功效优于传统抗氧化剂代表维生素C。因此，植物天然 抗氧化剂制品应尽量保持原植物抗氧化体系的完整性，使各种抗氧化活性成分 相互补充、协调，从而使机体具有比较完善的防御体系并发挥出其潜在的生物学效应。
此外，植物天然抗氧化剂制品的抗氧化活性还容易受到下述几方面的影响 (1)在植物釆收后的保藏过程中，由于呼吸作用和酶催化反应的不断进行，其 抗氧化体系不可避免地会发生组成和含量上的变化，且变化的总体趋势是削弱 抗氧化能力；(2)在提取和加工过程中，植物含有的纤维素和果胶可能阻碍抗 氧化活性成分的溶出，高温、紫外线、氧分压等外界因素可能会引起植物中某 些抗氧化活性成分的降解或挥发，也会使抗氧化体系的组成和含量发生变化， 降低其抗氧化活性。因此，采用先进的提取加工技术对植物抗氧化体系进行高 效、充分、完整地提^取，并通过后期加工有效地防止抗氧化活性成分的降解或 丢失，对保持植物天然抗氧化活性、提高生物利用度具有十分重要的意义。
木瓜为蔷薇科植物贴梗海裳(C力se/7咖e/")的果实，主要分为皱皮木瓜和 光皮木瓜两大类，皱皮木瓜主要有川木瓜、云木瓜、藏木瓜和日本木瓜，光皮 木瓜主要有山木瓜。木瓜为药食同源物品，鲜食口感不佳，多制成中药饮片使 用，具有平肝舒筋、和胃化湿的功效。现代成分分析显示，木瓜含有丰富的膳 食纤维和有机酸，尤其含有大量的维生素C、多酚类物质(包括黄酮类、单宁和 酚酸等化合物)和超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase, SOD )。发明人经 过长期大量的研究发现，木瓜提取物具有显著的抗氧化活性，但迄今为止，国 内外尚未见有关木瓜天然抗氧化剂制品的研究报道。
发明内容
有鉴于此，为克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种木瓜 抗氧化精华素，具有高效、持久、稳定抗氧化的特点，并且易于储藏、携带和 使用。
本发明的目的之二在于提供一种制备所述木瓜抗氧化精华素的方法，可以 高效、充分、完整地提取木瓜抗氧化体系，并且有效地保存其抗氧化活性。
为达到上述目的，在本发明的第一方面，提供了一种木瓜抗氧化精华素，包括木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合物和药学上可接受的载体；所述木瓜天然 抗氧化剂由木瓜的酶解水提物和醇提物组成，包括维生素C和多酚类物质；每 克木瓜抗氧化精华素含有维生素C不少于2毫克、总多酚以没食子酸计不少于 22毫克。
进一步，所述环糊精选自a-环糊精、|3-环糊精、y-环糊精、羟丙基-p-环糊精或羧曱基-P _环糊精；
进一步，所述环糊精为y-环糊精；
进一步，所述药学上可接受的载体选自p-环糊精、糊精和淀粉中的一种或 多种；
进一步，所述药学上可接受的载体为P-环糊精和糊精。 在本发明的第二方面，提供了一种制备所述木瓜抗氧化精华素的方法，包 括以下步骤
a、 制浆将新鲜木瓜洗净、去核、切成小块后，按木瓜与水的重量比为1 : 0. 5~3加入水，研磨，制得木瓜果浆；
b、 酶解在步骤a所得木瓜果浆中，按木瓜果浆与水解酶的重量比为100 : 0.2 10加入水解酶，在温度为30~50°C、压力为-O. 11 ~-0. 09 Mpa的条件下 进行酶解反应，时间为40 ~ 90分钟，制得木瓜酶解果浆；所述水解酶选自纤维 素酶或由果胶酶和纤维素酶组成的复合酶；
c、 过滤将步骤b所得木瓜酶解果浆100目过滤，分别收集滤液和滤渣， 滤液即为木瓜酶解水提物；
d、 醇提在步骤c所得滤渣中，按滤渣与醇类溶剂的重量体积比为1 : 5~ 12加入醇类溶剂，回流提取1 2次，每次1 2小时，收集提取液，过滤，滤 液即为木瓜醇提物；所述醇类溶剂选自体积百分浓度为50~100%的曱醇、乙醇 或异丙醇；
e、 浓缩'.将步骤c所得木瓜酶解水提物和步骤d所得木瓜醇提物混合，浓 缩至总体积的1/3-1/5,即得木瓜天然抗氧化剂；f、 包合在步骤e所得木瓜天然抗氧化剂中，按木瓜天然抗氧化剂与环糊 精的重量比为100: 0. 3 2加入环糊精，在压力为-O. 11 ~-0. 09 Mpa的条件下 进行包合反应，时间为4 6小时，制得木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液；
g、 制粒将步骤f所得木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液与药学上可接受 的载体，按环糊精包合液与载体的重量比为2~3 : 1进行顶喷流化床制粒，所 得颗粒即为木瓜抗氧化精华素。
进一步，所述步骤b中水解酶为由果胶酶和纤维素酶组成的复合酶，木瓜 果浆与该复合酶的重量比为100 : 2，酶解反应的温度为40。C、压力为-0. 09Mpa、 时间为60分钟；
进一步，所述步骤f中环糊精选自a-环糊精、|3-环糊精、y-环糊精、羟 丙基-p -环糊精或羧曱基-P -环糊精；
进一步，所述步骤f中环糊精为Y-环糊精，木瓜天然抗氧化剂与Y-环糊 精的重量比为100 : 0. 5，包合反应的温度为2(TC、压力为-O. 09Mpa、时间为4 小时；
进一步，所述步骤g中药学上可接受的载体选自(3-环糊精、糊精和淀粉中 的一种或多种，顶喷流化床制粒的进料泵转速为4-8转/分钟、流化床体中心 温度为45 65。C、鼓风频率为3-7 kHz。
本发明的有益效果在于
(1) 本发明提供了一种木瓜抗氧化精华素，具有高效、持久、稳定抗氧化 的特点，并且易于储藏和携带，可以作为抗氧化保健食品直接食用，也可以作 为化妆品、动物饲料、食品或药物中间体，进一步制备具有抗氧化功能的产品。
(2) 本发明提供了一种制备所述木瓜抗氧化精华素的方法，包括制浆、酶 解、过滤、醇提、浓缩、包合、制粒共7个步骤，可以高效、充分、完整地提 取木瓜抗氧化体系(主要抗氧化活性物质为维生素C和多酚类物质)，并且有 效地保存其抗氧化活性。
新鲜木瓜的纤维素重量占总重量的4%以上，采用传统物理榨汁方法，其出汁率非常低，从而造成从细胞中溶出的抗氧化活性成分的总量不高、抗氧化体 系组成不完整。本发明采用水解酶对木瓜果浆进行酶解反应，可以破坏木瓜交 错形成的致密组织细胞壁，有利于细胞质及液泡中的抗氧化活性成分高效、充 分、完整地溶出，提取效率高、提取量大，而且反应条件温和、能耗低。研究 结果显示，经过酶解处理，木瓜中维生素C及多酚类物质的提取总量分别提高
了 35. 1%和43. 8%。此外，木瓜提取物的成分分析结果显示，木瓜提取物中含 有儿茶素、表儿茶素、槲皮素、芦丁、绿原酸和原花青素。
抗氧化剂本身易氧化或降解失去活性，本发明采用环糊精包合技术，将木 瓜天然抗氧化剂分子包嵌在环糊精分子的空穴结构中形成复合物，可以有效地 阻断木瓜天然抗氧化剂与外界环境的接触，防止其氧化、水解或挥发，从而增 加抗氧化稳定性，同时，环糊精包合还使木瓜天然抗氧化剂具有了緩释性，可 以持久挥发作用。发明人对比了木瓜抗氧化精华素常温储藏和新鲜木瓜冷冻储 藏过程中抗氧化活性物质的含量和活性变化情况，结果显示，在储藏近半年后， 本发明的木瓜抗氧化精华素中抗氧化活性物质的含量和活性存留率更高，维生 素C和总多酚含量分别是木瓜鲜果的2. 2倍和3. 4倍；维生素C、总多酚和S0D
活性存留率分别高出木瓜鲜果10. 7%、 8%和2. 3%，提示本发明的木瓜抗氧化 精华素具有持久、稳定抗氧化的特点。发明人还采用r"环糊精分别对已鉴定的 木瓜含有的抗氧化单一化合物进行了包合研究，结果证实，厂环糊精对木瓜中 含有的维生素C (呋喃烯醇式内酯结构)、原花青素(单宁类多聚体结构)、绿原 酸(缩酚酸结构)和,丁 (类黄酮单元结构)均有包合作用，维生素C的包合 常数为5.7x103,多酚类物质的包合常数在2.8xl0^4.2xl(T之间，且随多酚类 物质的分子量增加而增大。环糊精包合修饰的实现有助于后续制粒的加工稳定 性、耐储藏性及生物利用率的提高。此外，在本发明的制备方法中，酶解反应 和包合反应均选择在负压条件下进行，这有利于保持热敏性抗氧化活性成分的 稳定性，防止其降解。
喷雾制粒是将嚢心物分散于嚢材溶液中，借助热气流雾化，溶解嚢材的溶媒被迅速蒸发而使嚢材凝固在嚢心物的表面，形成微嚢。本发明将喷雾制粒技 术和流化床干燥技术相结合，创新采用顶喷流化床制粒药学上可接受的载体 (固相)从物料槽的底部上升呈流化状态，木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液 通过安装在扩散(喷雾)室的喷枪喷嘴喷入流化床，在干燥空气的不断搅动下， 木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液中的水分子在固相载体微细颗粒表面形成微 细膜状态，快速气化排出，从而使木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合物沉积在固 相载体表面。顶喷流化床制粒工艺可以确保木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液 在压缩空气的承载下与上升的干燥空气进行充分的对流，环糊精包合液与固相 载体混合时首先遇到较低温度、较高湿度的热气流预热，符合干燥的导湿温性 向有利进程发展，从而减少了喷雾制粒过程中常出现的"塌床"现象，避免固 相载体吸附环糊精包合液中的有效成分总量降低的问题。此外，顶喷流化床制 粒工艺还可提高抗氧化活性成分的"浓缩比"，缩短干燥时间，易于保持热敏性 抗氧化活性成分的稳定性。研究发现，采用顶喷流化床制粒工艺获得的木瓜抗
氧化精华素每克含有维生素C、总多酚和单宁含量分别为2. 05 ± 0. 09 mg、 22. 70 ± 1. 57 mg和9. 64 ± 0. 65 mg，比制粒前才是高了 219. 8 % 、 344. 2 %和348. 4 % 。
具体实施例方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的优 选实施例进行详细的描述。
实施例l、木瓜抗氧化精华素的制备 包括以下步骤
a、 制浆将新鲜木瓜洗净、去核、切成小块(lcm3)后，按木瓜与水的重 量比为1 : 0. 5加入水，研磨，制得果浆；
b、 酶解在步骤a所得木瓜果浆中，按木瓜果浆与水解酶的重量比为100 : 0. 2加入由果胶酶和纤维素酶(重量比为1 : l)组成的水解酶，在温度为30°C、 压力为-O. 11Mpa、搅拌速度为180转/分钟的条件下进行酶解反应，时间90分钟，制得木瓜酶解果浆；
c、 过滤将步骤b所得木瓜酶解果浆100目过滤，分别收集滤液和滤渣， 滤液即为木瓜酶解水提物；
d、 醇提在步骤c所得滤渣中，按滤渣与醇类溶剂的重量体积比为1:12 加入甲醇，回流提取2次，每次1小时，收集提取液，过滤，滤液为木瓜醇提 物；
e、 浓缩将步骤c所得木瓜酶解水提物和步骤d所得木瓜醇提物混合，浓 缩至总体积的1/5,即得木瓜天然抗氧化剂；
f、 包合在步骤e所得木瓜天然抗氧化剂中，按木瓜天然抗氧化剂与环糊 精的重量比为100 : 0. 3加入a-环糊精，在温度为35°C、压力为-O. 09Mpa、搅 拌速度为90转/分钟的条件下进行包合反应，时间为4小时，制得木瓜天然抗 氧化剂的环糊精包合液；
g、 制粒将步骤f所得木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液与由环糊精 和淀粉(重量比为1:3)组成的复合固相载体，按环糊精包合液与复合固相载 体的重量比为2 : 1，在进料泵转速为4转/分钟、流化床体中心温度为45°C、 风机频率为3 kHz的条件下进行顶喷流化床制粒，所得颗粒即为木瓜抗氧化精 华素。
实施例2、木瓜抗氧化精华素的制备 包括以下步骤
a、 制浆将新鲜木瓜洗净、去核、切成小块(1 cm3)后，按木瓜与水的重 量比为1 : l加入水，研磨，制得果浆；
b、 酶解:在步骤a所得木瓜果浆中，按木瓜果浆与纤维素酶的重量比为100 : 6加入纤维素酶，在温度为40°C、压力为-O. 10 Mpa、搅拌速度为220转/分钟 的条件下进行酶解反应，时间70分钟，制得木瓜酶解果浆；
c、 过滤将步骤b所得木瓜酶解果浆100目过滤，分别收集滤液和滤渣， 滤液即为木瓜酶解水提物；
10d、 醇提在步骤c所得滤渣中，按滤渣与醇类溶剂的重量体积比为1 : 10 加入体积百分浓度为50%的乙醇溶液，回流提取2次，每次1小时，收集提取 液，过滤，滤液为木瓜醇4是物；
e、 浓缩将步骤c所得木瓜酶解水提物和步骤d所得木瓜醇提物混合，浓 缩至总体积的1/4,即得木瓜天然抗氧化剂；
f、 包合在步骤e所得木瓜天然抗氧化剂中，按木瓜天然抗氧化剂与环糊 精的重量比为100 : 1加入羟丙基-|3-环糊精，在温度为30。C、压力为-0. lOMpa、 搅拌速度为120转/分钟的条件下进行包合反应，时间5小时，制得木瓜天然抗 氧化剂的环糊精包合液；
g、 制粒将步骤f所得木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液与由环糊精 和糊精(重量比为1:5)组成的复合固相载体，按环糊精包合液与复合固相载 体的重量比为3:1,在进料泵转速为5转/分钟、流化床体中心温度为55°C、 风机频率为5 kHz的条件下进行顶喷流化床制粒，所得颗粒即为木瓜抗氧化精 华素。
实施例3、木瓜抗氧化精华素的制备 包括以下步骤
a、 制浆将新鲜木瓜洗净、去核、切成小块(lcm3)后，按木瓜与水的重 量比为1 : 2加入水，研磨，制得果浆；
b、 酶解在步骤a所得木瓜果浆中，按木瓜果浆与水解酶的重量比为100 : 2加入由果胶酶和纤维素酶(重量比为1:1)组成的水解酶，在温度为40°C、 压力为-O. 09 Mpa、搅拌速度为200转/分钟的条件下进行酶解反应，时间60分 钟，制得木瓜酶解果浆；
c、 过滤将步骤b所得木瓜酶解果浆100目过滤，分别收集滤液和滤渣， 滤液即为木瓜酶解水提物；
d、 醇提在步骤c所得滤渣中，按滤渣与醇类溶剂的重量体积比为1 : 5 加入体积百分浓度为80%的乙醇溶液，回流提取1次，时间为2小时，收集提耳又液，过滤，滤液为木瓜醇^是物；
e、 浓缩将步骤c所得木瓜酶解水提物和步骤d所得木瓜醇提物混合，浓 缩至总体积的1/3，即得木瓜天然抗氣化剂；
f、 包合在步骤e所得木瓜天然抗氧化剂中，按木瓜天然抗氧化剂与环糊 精的重量比为100 : 0. 5加入y-环糊精，在温度为20。C、压力为-0. 09Mpa、搅 拌速度为100转/分钟的条件下进行包合反应，时间4小时，制得木瓜天然抗氧 化剂的环糊精包合液；
g、 制粒将步骤f所得木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液与由P-环糊精 和糊精(重量比为1:3)组成的复合固相载体，按环糊精包合液与复合固相载 体的重量比为2 : 1，在进料泵转速为6转/分钟、流化床体中心温度为50°C、 风机频率为4 kHz的条件下进行顶喷流化床制粒，所得颗粒即为木瓜抗氧化精 华素。
实施例4、木瓜抗氧化精华素的制备 包括以下步骤
a、 制浆将新鲜木瓜洗净、去核、切成小块(lcm3)后，按木瓜与水的重 量比为1 : 3加入水，研磨，制得果浆；
b、 酶解在步骤a所得木瓜果浆中，按木瓜果浆与水解酶的重量比为100 : IO加入由果胶酶和纤维素酶(重量比为1 : U组成的水解酶，在温度为5(TC、 压力为-O. 09 Mpa、搅拌速度为250转/分钟的条件下进行酶解反应，时间40分 钟，制得木瓜酶解果浆；
c、 过滤将步骤b所得木瓜酶解果浆100目过滤，分别收集滤液和滤渣， 滤液即为木瓜酶解水提物；
d、 醇提在步骤c所得滤渣中，按滤渣与醇类溶剂的重量体积比为1 : 7 加入异丙醇，回流提取1次，时间为2小时，收集提取液，过滤，滤液为木瓜 醇提物；
e、 浓缩将步骤c所得木瓜酶解水提物和步骤d所得木瓜醇提物混合，浓缩至总体积的1/4，即得木瓜天然抗氧化剂；
f、 包合在步骤e所得木瓜天然抗氧化剂中，按木瓜天然抗氧化剂与环糊 精的重量比为100 : 2加入羧曱基-p-环糊精，在温度为15。C、压力为-0. 11Mpa、 搅拌速度为150转/分钟的条件下进行包合反应，时间为6小时，制得木瓜天然 抗氧化剂的环糊精包合液；
g、 制粒将步骤f所得木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液与糊精，按环糊 精包合液与糊精的重量比为2 : 1，在进料泵转速为8转/分钟、流化床体中心温 度为65°C、风机频率为7 kHz的条件下进行顶喷流化床制粒，所得颗粒即为木 瓜抗氧化精华素。
本发明的木瓜抗氧化精华素的主要抗氣化活性物质的含量测定 1、维生素C的含量测定
方法采用荧光法(国家标准第一法)进行测定，①取维生素C对照品约100 mg，精确称定，加偏磷酸-乙酸溶液(称取偏磷酸15 g,加入水乙酸40 mL及水 250 mL,搅拌，放置过夜使溶解，加水定容至50Q mL,即得)100 mL制成浓度 为lmg/raL的溶液，精密量:f又该溶液10mL,用偏磷酸-乙酸溶液稀释并定容至100 mL，加入经活化的活性炭2 g进行氧化处理，过滤，收集滤液；取滤液各5 mL, 分别置2个50 mL容量瓶中，其中1个容量瓶中加入质量百分浓度为50%的乙酸钠 溶液5 mL，用水定容至50 mL,精密量取该溶液O. 5、 1.0、 1.5、 2.0 mL，分別 置IO mL带塞刻度试管中，用蒸馏水定容至2mL，作为系列浓度的标准溶液；另 一个容量瓶中加入硼酸-乙酸钠溶液(称取硼酸3 g,加入质量百分浓度为50% 的乙酸钠溶液IOO mL使溶解，即得，临用前配制)5 mL,振摇15分钟，用水定 容至50 mL，在温度4。C放置2小时，精密量取该溶液O. 5、 1.0、 1.5、 2. 0 mL, 分别置IO mL带塞刻度试管中，用蒸馏水定容至2 raL，作为系列浓度的标准空白 溶液；②取本发明的木瓜抗氧化精华素约10 g，精密称定，加偏磷酸-乙酸溶液 溶解并定容至lGOmL，加入经活化的活性炭2g进行氧化处理，过滤，收集滤液； 取滤液各5 mL，分别置2个50 mL容量瓶中，其中l个容量瓶中加入质量百分浓度为50%的乙酸钠溶液5 mL,用水定容至50 mL，作为样品溶液；另一个容量瓶中 加入硼酸-乙酸钠溶液5 mL，振摇15分钟，再用水定容至50 mL，在温度4。C放置 2小时，作为样品空白溶液；③取上述标准溶液、标准空白溶液、样品溶液和样 品空白溶液各2 mL，分别置IO mL带塞刻度试管中，在避光条件下迅速向各管中 加入邻苯二胺溶液(称取邻苯二胺20 mg,于临用前用水稀释至IOO mL,即得) 5 mL，振摇混合，在室温下反应35分钟，用激发光波长338 nm、发射光波长420 nm测定荧光强度，以标准溶液的维生素C含量为横坐标、对应的实际荧光强度(标 准溶液的爽光强度与对应的标准空白溶液的荧光强度的差值)为纵坐标绘制标 准曲线，求得回归方程，根据样品溶液的实际荧光强度(样品溶液的荧光强度 与样品空白溶液的焚光强度的差值)从标准曲线上查得样品中维生素C的含量。
结果本发明的木瓜抗氧化精华素每克含维生素C不低于2 mg。
2、总多酚的含量测定
方法采用Folin-Ciocalteu法进行测定，①取没食子酸对照品约30mg， 精密称定，加无水乙醇100 mL制成浓度为0. 3 mg/mL的溶液，精密量取该溶 液0、 0.1、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 l.OmL，分别置45 mL带塞刻度离心管中， 用蒸馏水定容至IO mL,再加入Folin-Ciocalteu试剂0.5 mL,用质量百分 浓度为7. 5%的无水碳酸钠溶液定容至20 mL，静置30分钟，作为系列浓度 的标准溶液；②取本发明的木瓜抗氧化精华素约0. 5 g，精密称定，置45mL 带塞刻度离心管中，加蒸馏水溶解并定容至10 mL，再加入Folin-Ciocalteu 试剂G. 5 mL，用质量百分浓度为7. 5%的无水碳酸钠溶液定容至20 mL，静 置30分钟，作为样品溶液；③取上述标准溶液和样品溶液，在波长675 nm 处分别测定吸光度，以标准溶液的没食子酸含量为横坐标、对应的吸光度为 纵坐标绘制标准曲线，求得回归方程，根据样品溶液的吸光度从标准曲线上 查得样品溶液中总多酚的含量。
结果本发明的木瓜抗氧化精华素每克含总多酚以没食子酸计不低于22
rag。本发明的木瓜抗氧化精华素的抗氧化活性研究
1、 体外DPPH. (二苯代苦味酰肼自由基)清除实验
方法取本发明的木瓜抗氧化精华素约1 g,精密称定，加水50 mL制 成浓度为20 mg/mL的溶液，精密移耳又该溶液50、 100、 200、 400 ^L,分别 用含有体积百分浓度为50%的乙醇的Tris-HCl緩沖液定容至2 mL，作为系 列浓度的样品溶液；精密移取上述不同浓度的样品溶液各100 ^L，置96孔 酶标板中，每个浓度设3个复孔，每孔加入浓度为0.4 mg/mL的DPPHW式液 100 jaL;振荡30秒，温度37。C保温反应20分钟后，在波长517 nm处测定 吸光值(Asca)，同时测定不加DPPH.试液的样品空白溶液吸光值(Acon) 和不加样品溶液(以含有体积百分浓度为50%的乙醇的Tris-HCl緩沖液100 ^L代替样品)的DPPH.空白溶液吸光值(Amax),按照下述公式计算自由基 清除率自由基清除率(％) = [1-(Asca-Acon)]/Amaxxl00% ;然后根据样品 溶液的浓度与清除率的关系计算IC5。( IG。为DPPH.清除率为50%时所需样品 量)。
结果本发明的木瓜抗氧化精华素每克清除945 ±20网的DPPH.。
2、 体内抗氧化活性研究
(1 )对血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平和总抗氧化能力(T-AOC ) 的影响
方法将40只ApoE基因缺陷型(ApoE+ )雄性2月龄小鼠(品系C57BL/6J ) 随机分为5组，分别为空白对照组、样品低剂量组、样品高剂量组、超微茶 粉组、维生素C组；各组小鼠在SPF级动物飼养室层流架中分笼喂养，自由 摄食饮水；以普通营养饲料为基础饲料，样品低剂量组和高剂量组分别在基 础飼料中添加质量百分浓度为5%和10%的本发明的木瓜抗氧化精华素；超 微茶粉组在基础饲料中添加质量百分浓度为3%的超微绿茶粉(每g超微绿茶 粉含总多酚以没食子酸计为35 mg);维生素C组在基础饲料中添加质量百 分浓度为0. 02。/。的维生素C;样品低剂量组与超微茶粉组的总多酚添加量相
15同，样品高剂量组与维生素C组的维生素C添加量相同；用酪蛋白调整各组 饲料的蛋白质含量为18% ，用猪油调整饲料的脂肪含量为20%;记录小鼠进 食量和体重变化，喂养16周后，小鼠摘眼球取血，分离血清，测定GSH-PX 含量和T-A0C。
结果与空白对照组比较，样品低剂量组分别使ApoE+小鼠血清GSH-PX 和T-A0C提高了 30. 0%和53.3%;样品高剂量组分别使ApoE—/_小鼠血清 GSH-Px和T-A0C提高了 47. 1 %和126. 7 % ,表明本发明的木瓜抗氧化精华素 具有良好的生物体内抗氧化功效，可以显著提高血清抗氧化能力，对动脉粥 样硬化(AS)发生发展的关键风险因子氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的生成 有潜在地抑制作用。同时，将本发明的木瓜抗氧化精华素与具有明确抗氧化 功效的茶叶和维生素C进行对比，样品低剂量组的抗氧化功效与超微茶粉组 相近，优于维生素C组，样品高剂量组的抗氧化功效优于超微茶粉组，且比 超微茶粉对小鼠的食欲影响更小，提示本发明的木瓜抗氧化精华素刺激性小， 安全可靠。
(2 )对体内丙二醛(MDA)水平和S0D活力的影响
方法将60只昆明种雄性小白鼠(8~10周龄、体重18~20g)随机分 为6组，每组10只，1个空白对照组，1个模型对照组和4个样品剂量组，4 个样品剂量组分别灌胃给予质量百分浓度为4% 、 6%、 8%和10%的本发明 的木瓜抗氧化精华素G. 1 raL/kg/d,空白对照组和模型对照组均给予等量蒸 镏水，30天后，除空白对照组外，各组给予5Gy6°Co Y射线一次性全身照射， 照射后第3天处死各组小鼠，摘眼球取血，分离血清，剖腹取脑、肝脏、心 脏和肾脏，测定血清和组织中的MDA含量和S0D活性。
结果模型对照组中小鼠体内MDA含量和S0D活性均高于空白对照组， 提示造模成功；各样品剂量组中小鼠血清和组织中的MDA含量和S0D活性显 著低于模型对照组(P<0. 05)，表明本发明的木瓜抗氧化精华素能够有效降 低小鼠体内MDA含量和SOD活性，并呈现一定剂量效应关系。最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽 管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通 技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不 偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
权利要求
1、一种木瓜抗氧化精华素，其特征在于包括木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合物和药学上可接受的载体；所述木瓜天然抗氧化剂由木瓜的酶解水提物和醇提物组成，包括维生素C和多酚类物质；每克木瓜抗氧化精华素含有维生素C不少于2毫克、总多酚以没食子酸计不少于22毫克。
2、 根据权利要求1所述的木瓜抗氧化精华素，其特征在于所述环糊精选 自oc-环糊精、0-环糊精、y-环糊精、羟丙基-P-环糊精或羧甲基-(3-环糊精。
3、 根据权利要求2所述的木瓜抗氧化精华素，其特征在于所述环糊精为 Y-环糊精。
4、 根据权利要求1所述的木瓜抗氧化精华素，其特征在于所述药学上可 接受的载体选自P-环糊精、糊精和淀粉中的一种或多种。
5、 根据权利要求4所述的木瓜抗氧化精华素，其特征在于所述药学上可 接受的载体为P-环糊精和糊精。
6、 一种制备权利要求l所述的木瓜抗氧化精华素的方法，其特征在于包 括以下步骤a、 制浆将新鲜木瓜洗净、去核、切成小块后，按木瓜与水的重量比为1 : 0. 5~3加入水，研磨，制得木瓜果浆；b、 酶解在步骤a所得木瓜果浆中，按木瓜果浆与水解酶的重量比为100 : 0. 2 10加入水解酶，在温度为30-5(TC、压力为-O. 11 ~-0. 09 Mpa的条件下 进行酶解反应，时间为40 ~ 90分钟，制得木瓜酶解果浆；所述水解酶选自纤维 素酶或由果胶酶和纤维素酶组成的复合酶；c、 过滤将步骤b所得木瓜酶解果浆100目过滤，分别收集滤液和滤渣， 滤液即为木瓜酶解水提物；d、 醇提在步骤c所得滤渣中，按滤渣与醇类溶剂的重量体积比为1 : 5~ 12加入醇类溶剂，回流提取1 ~ 2次，每次1 ~ 2小时，收集提取液，过滤，滤液即为木瓜醇提物；所述醇类溶剂选自体积百分浓度为50~100%的曱醇、乙醇 或异丙醇；e、 浓缩将步骤c所得木瓜酶解水提物和步骤d所得木瓜醇提物混合，浓 缩至总体积的1/3 ~ 1/5，即得木瓜天然抗氧化剂；f、 包合在步骤e所得木瓜天然抗氧化剂中，按木瓜天然抗氧化剂与环糊 精的重量比为100: 0. 3 2加入环糊精，在压力为-O. 11 ~-0. 09 Mpa的条件下 进行包合反应，时间为4 6小时，制得木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液；g、 制粒将步骤f所得木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合液与药学上可接受 的载体，按环糊精包合液与载体的重量比为2-3:1进行顶喷流化床制粒，所 得颗粒即为木瓜抗氧化精华素。
7、 根据权利要求6所述的制备木瓜抗氧化精华素的方法，其特征在于所 述步骤b中水解酶为由果胶酶和纤维素酶组成的复合酶，木瓜果浆与该复合酶 的重量比为100 : 2,酶解反应的温度为4(TC、压力为-0.09Mpa、时间为60分 钟。
8、 根据权利要求6所述的制备木瓜抗氧化精华素的方法，其特征在于所 述步骤f中环糊精选自oc -环糊精、(3 -环糊精、y -环糊精、羟丙基-P -环糊精 或羧曱基-P-环糊精。
9、 根据权利要求8所述的制备木瓜抗氧化精华素的方法，其特征在于所 述步骤f中环糊精为Y-环糊精，木瓜天然抗氧化剂与y-环糊精的重量比为 100:0.5，包合反应的温度为20°C、压力为-O. 09Mpa、时间为4小时。
10、 根据权利要求6所述的制备木瓜抗氧化精华素的方法，其特征在于 所述步骤g中药学上可接受的载体选自p-环糊精、糊精和淀粉中的一种或多种， 顶喷流化床制粒的进料泵转速为4 ~ 8转/分钟、流化床体中心温度为45 ~ 65°C、 鼓风频率为3~7 kHz。
全文摘要
本发明公开了一种木瓜抗氧化精华素，包括木瓜天然抗氧化剂的环糊精包合物和药学上可接受的载体，木瓜天然抗氧化剂由木瓜的酶解水提物和醇提物组成，包括维生素C和多酚类物质，每克木瓜抗氧化精华素含有维生素C不少于2毫克、总多酚以没食子酸计不少于22毫克，具有高效、持久、稳定抗氧化的特点，并且易于储藏和携带，可以作为保健食品直接食用，也可以作为化妆品、动物饲料、食品或药物中间体，进一步制备具有抗氧化功能的产品；还公开了该木瓜抗氧化精华素的制备方法，包括制浆、酶解、过滤、醇提、浓缩、包合、制粒共7个步骤，可以高效、充分、完整地提取木瓜抗氧化体系，并且有效地保存其抗氧化活性。
文档编号A61K36/732GK101444562SQ20081023723
公开日2009年6月3日 申请日期2008年12月24日 优先权日2008年12月24日
发明者永 周, 勇 唐, 婷 张, 张乾勇, 朱俊东, 糜漫天, 靖 赵 申请人:中国人民解放军第三军医大学