专利名称：基于肉毒毒素的神经毒成分供应温度-稳定性固体肌肉松弛剂的方法
技术领域：
本发明提供一种在高温下供应肌肉松弛剂的方法，其中所述肌肉 松弛剂为包含不含复合蛋白的肉毒毒素神经毒成分的干固体组合物。
背景技术：
肉毒毒素由细菌梭状芽孢杆菌产生。肉毒毒素有七种抗原不同的
血清型，即A、 B、 C、 D、 E、 F和G型肉毒毒素。肉毒毒素通常以 复合物，即负责肉毒毒素毒性的亚单元(即所称的"神经毒成分")与 其他细菌蛋白复合在一起形成的毒素复合物的形式，从裂解的梭状芽 孢杆菌培养物中释放出来。该复合物的分子量从约300,000 Da至约 900,000 Da不等。复合蛋白为，例如，各种血凝素。这种毒素复合物
的蛋白本身没有毒性，但被认为能为神经毒成分提供稳定性，并能导 致肉毒杆菌口服中毒。与毒素复合物不同，神经毒成分以其分离和提
纯形式，即不含任何复合梭菌蛋白的形式存在，其为不稳定酸并且对 胃肠道中的侵蚀性环境不耐受。
肉毒毒素复合物的神经毒成分最初形成为单链多肽，在血清型A 的情况下分子量约为150kDa。在另一种血清型中，观察到神经毒成 分的分子量根据细菌的来源在约145kDa和170kDa间变化。在血清 型A的情况下，例如，多肽的酶解加工产生了一种以双链多肽形式 存在的活性多肽，该双链多肽由通过二硫键连接的重链和轻链组成。 在人体中，重链介导内毒毒素与突触前的胆碱能神经末梢相结合并将 毒素内转进入细胞内。轻链被认为具有毒性效应，起锌-肽链内切酶 的作用并切割负责膜融合的特异性蛋白(SNARE复合物)(参见例如 Montecucco Cl Shiavo G.， Rosetto 0: The mechanism of action oftetanus and Botulinum neurotoxins. Arch Toxicol. 1996; 18 (Suppl.): 342-354》。
通过干扰细胞内的膜融合过程，肉毒毒素阻止乙酰胆碱释放进入 突触间隙。肉毒毒素在神经-肌肉接头处的总效应是阻断神经-肌肉间 的传导，并在实际上，使肌肉去神经。肉毒毒素对其他周边胆碱能神 经突触也有活性，造成流涎或出汗减少。
本申请将肉毒毒素复合物的神经毒亚单元称为"神经毒成分，，或 "不含复合蛋白的神经毒成分"。
本发明中通篇使用的术语"肉毒毒素"或"肉毒毒素类"，不仅指不 含任何其他梭菌蛋白的神经毒成分，也指"肉毒毒素复合物"当毒素 复合物与神经毒成分不必或不要求有区别时，在本发明中使用术语 "肉毒毒素"。复合物通常含有其他的，所谓的"无毒蛋白"，我们将称
之为"复合蛋白"或"细菌蛋白"。
"BoNT"或"NT"为常用的缩写，涉及不含复合蛋白的肉毒毒素的 NT化合物。
尽管有毒性作用，肉毒毒素复合物已被用作许多疾病的治疗药 物。1989年A型肉毒毒素在美国获准可供人类使用以治疗斜视、眼 睑痉挛以及其他疾病。A型肉毒毒素蛋白复合物可巿购获得，例如， 以商标名BOTOX (Allergan Inc.)或以商标名DYSPORT (Ipsen Ltd)。 用于治疗应用的复合物可直接注入需治疗的肌肉。在生理PH值下， 毒素从蛋白复合物中释放出来并产生所需的药效。
在施予病人之前， 一般是直接肌肉内注射至受影响的肌肉之前， 将所述组合物溶于生理盐水中。
关于基于肉毒毒素的组合物和药物剂量，以及基于肉毒毒素的神 经毒成分的药物组合物、剂量和给药频率，可参阅US 60/817 756。
除了上述功能，据推测复合蛋白还能保护肉毒毒素的神经毒成分 免受严酷的环境条件的影响，因为神经毒成分对降解和/或失活高度敏感，特别是当经受短期温度应力时，例如在温暖到炎热的气候或通 常在夏季期间。
为此，在过去 一般会采取极为谨慎的措施以防止基于肉毒毒素， 特别是基于肉毒毒素的神经毒成分的药物的温度达到4"C以上，例如 接近20°C。大多数情况下，将装有含有肉毒毒素的干固体组合物的
药瓶在冰上或至少在冰箱(约4°C )中冷冻贮存(约-2(TC )。这种必
需的冷却意味着在供应药物时会产生额外的费用。
鉴于上述情况，本发明人对基于肉毒毒素的肌肉松弛剂的温度稳 定性进行了研究。令人惊讶的是，发现肉毒毒素的神经毒成分与现有 技术相比，呈现了显著的意想不到的温度稳定性。
发明内容
本发明提供了一种在20。C以上的高温，例如30。C以上，或40。C
以上供应肌肉松弛剂的方法，其中所述肌肉松弛剂为包含不含复合蛋 白的肉毒毒素的神经毒成分的干固体组合物，优选地所述方法包括贮
存和/或运输。在另一个实施方案中，所述供应为制备所述肌肉松弛 剂的方法中的一个步骤，例如在包含肉毒毒素的神经毒成分的蛋白被 干燥以后实施的一个步骤。
在一个实施方案中，在45X:以上供应肌肉松弛剂，其中所述肌 肉松弛剂为包含不含复合蛋白的肉毒毒素的神经毒成分的干固体组 合物。
在另一个实施方案中，所述供应涉及贮存和/或运输和/或为制备 所述肌肉松弛剂的方法中的一个步骤。
在另一个实施方案中，所述肌肉松弛剂在45。C以上和高达70°C 的温度下经历一段不超过90天的时期。在又一个实施方案中，所述 时期为从10分钟到90天。在又一个实施方案中，温度在45"C到60°C 之间且时期为从10分钟到90天。在又一个实施方案中，所述时期为从10分钟到30天。在又一个实施方案中，温度在65。C到7(TC之间
且时期为从10分钟到10天。
在另一个实施方案中，所述肌肉松弛剂在不需任何人工冷却装置
存在的情况下进行运输和/或贮存。
在另一个实施方案中，组合物为肉毒毒素神经毒成分的冻干物。 在另一个实施方案中，所述组合物还包含蔗糖和/或人血清白蛋白。
在另 一个实施方案中，所述组合物还包含至少 一种选自不同于蔗 糖和人血清白蛋白的冷冻保护剂、稳定剂、pH缓冲液、赋形剂及其 混合物的成分。
在另一个实施方案中，所述神经毒成分为A型肉毒毒素的神经 毒成分。
图1显示6(TC下贮存多达30天后温度对Xeomin②的生物活性的
影响；所述生物活性在指示点及时进行检测；
图2显示7(TC下lfc存多达10天后温度对Xeomin^的生物活性的
影响；所述生物活性在指示点及时进行检测；
图3显示8(TC下贮存多达10天后温度对Xeomin②的生物活性的 影响；所述生物活性在指示点及时进行检测。
具体实施例方式
本发明涉及在2(TC以上供应肌肉松弛剂的方法，其中所述肌肉 松弛剂为包含不含复合试剂的肉毒毒素神经毒成分的干固体组合物。 在另一个实施方案中，所述肌肉松弛剂在45"和/或以上供应，其中 所述肌肉松弛剂为包含不含复合试剂的肉毒毒素神经毒成分的干固 体组合物。在本发明中，术语"供应"包括本发明限定的肌肉松弛剂的 任何一种供应，尤其是贮存、运输或为在制备所述肌肉松弛剂中的一 个步骤。术语"供应"还包括这样的步骤，其中所述肌肉松弛剂经历从冷冻态(-20°C)，或冷却态(+4°C)到20。C以上的温度升高。在另 一个实施方案中，所述肌肉松弛剂在45'C和/或以上供应，其中所述 肌肉松弛剂为包含不含复合药物的肉毒毒素神经毒成分的干固体组 合物。
在本发明中,可釆用任何形式的肉毒毒素的神经毒成分，尤其是 各种血清型。此外，包括突变、缺失等改性和/或重组制备的肉毒毒 素的神经毒成分也在本发明的范围之内。关于适合的突变，可参阅 WO 2006/027207 Al和WO 2006/114308 Al ，以及EP 07014785.5， 其以参阅的方式全文并入于此。此外，在本发明中，可采用各种血清 型的混合物(以神经毒成分形式和/或其重组形式，例如A型和B型 肉毒神经毒素的混合物)。然而，本发明还涉及化学改性的神经毒素，
例如聚乙二醇化、糖基化、硫酸化、磷酸化或任何其他改性，尤其是 一种或多种表面或溶剂暴露的氨基酸。
在一个实施方案中，所述组合物包括A型肉毒毒素的神经毒成 分。在另一个实施方案中，肉毒毒素为抗原不同的血清型A、 B、 C、 D、 E、 F或的肉毒毒素。在所有提及血清型A、 B、 C、 D、 E、 F或 G的肉毒毒素中，也包括血清型的已知变种，例如血清型A1、 A2、 A3、 Bl、 B2、 B3、 Cl、 C2、 C3、 Dl、 D2、 D3、 El、 E2、 E3、 Fl、 F2、 F3、或Gl、 G2、 G3。本发明中可以使用 一种血清型或不同血 清型的混合物。在一个实施方案中，肉毒毒素为A型肉毒毒素。
在另一个实施方案中，还包括肉毒毒素的亚型、同源物、直系同 源物和旁系同源物，其显示至少50%、至少60%、至少70%、至少 80%、至少90%或达到100%的序列同一性。序列同一性可以通过适 于得到可靠结果的任何算法进行计算，例如，使用FASTA算法(W.R. Pearson & D丄Lipman PNAS (1988)85:2444-2448 )。
术语"神经毒成分"还包括在肉毒梭菌的其他血清型中发现的功 能性同源物。在本发明的一个实施方案中，神经毒成分不含任何其他
7的肉毒梭菌蛋白，在一个实施方案中，还不含可能与神经毒成分有潜
在联系的RNA。神经毒成分可为约150kDa的单链前体蛋白或经过蛋 白酶解加工的神经毒成分，其包括由一个或多个二硫键连接的约 50kDa的轻链(U)和约100kDa的重链(Hc)(参见例如SimpsonLL， Ann Rev Pharmacol Toxicol. 2004; 44:167-93 )。在另 一个实施方案中， 可使用单链和加工过的神经毒成分的混合物。
根据本发明的教导，除了神经毒成分之外，药物可不含有在肉毒 毒素复合物中除神经毒成分外发现的蛋白。神经毒成分的前体可切割 或不切割，然而在一个实施方案中，前体被切成重链和轻链。如本发 明其他部分所指出的，多肽可为野生型序列或可在 一个或多个残基上 改性。改性包括化学改性，例如通过糖基化、乙酰化、酰化或酰胺化 等，这些可能对例如摄取或多肽的稳定性是有益的。然而，神经毒成 分的多肽链可通过添加、取代或缺失一个或多个氨基酸残基进行选择 性改性或其他改性。
本发明上述所指的神经毒成分可为组合物或药物组合物的一部
分。本发明中使用的药物组合物可包含肉毒毒素，例如以神经毒成分 作为唯一活性成分或可含有其他的药物活性成分，例如镇痛药和/或
还有神经毒素。
"药物组合物"是含有或包括用作药物或诊断药剂的活性成分的 制剂。这种药物组合物可能适用于诊断性或治疗性施予(即通过肌肉 注射或皮下注射)人类患者。
在本发明的一个实施方案中，组合物可包括神经毒成分和透明质 酸和/或聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙二醇，通过合适的pH缓冲液，尤 其是醋酸钠缓冲液和/或冷冻保护剂多元醇，可使该组合物在任选的 pH下稳定。
在一个实施方案中，小鼠LD5。试验测定结果显示，神经毒成分 的生物活性为每ng神经毒成分50至50个LDso单位。在另 一实施方案中，神经毒成分的生物活性为约150个LDs。单位。其中这里所述 的单位指的是每亳微克单位。通常，本发明的药物组合物包含重量约
为6pg至约30ng的神经毒成分。包含分离形式为A型肉毒毒素的神 经毒成分的药物组合物可以从德国Merz Pharmaceuticals GmbH巿购 获得，商标名为Xeomh^。 A型和B型肉毒毒素的神经毒成分的制备 描述于例如国际申请WO 00/74703和WO 2006/133818。
在一个实施方案中，所述组合物包括A型肉毒毒素的神经毒成 分。所述组合物为肉毒毒素的神经毒成分的干固体组合物。在另一个 实施方案中，组合物还包括蔗糖或人血清白蛋白或两者兼而有之，在 另一个实施方案中，人血清白蛋白和蔗糖的比例为1: 5。在一个实 施方案中，组合物为Xeomi^。在另一个实施方案中，人血清白蛋白 为重组人血清白蛋白。可选地，所述组合物不含来源于哺乳动物的蛋 白，例如人血清白蛋白。通过用其他非蛋白稳定剂取代血清白蛋白任 何这些方案均可提供足够的神经毒素稳定性(infra)。
在本专利申请中，可应用基于A型肉毒毒素神经毒成分的药物， 在另一个实施方案中，可使用由Merz Pharmaceutical以商标名 Xeomi,分销的药品。这是因为同施予基于A型肉毒毒素复合物相 比，当施用基于肉毒毒素神经毒成分的组合物例如Xeomh^时，发现 在患者体内产生抗体的趋向更低。不受制于任何理论约東，肉毒毒素 复合物中的血凝素被认为有激活免疫系统的能力。
关于基于肉毒毒素的组合物和药物剂量，以及基于肉毒毒素的神 经毒成分的药物组合物、剂量和给药频率，可参阅 PCT/EP2007/005754。
在一个实施方案中，所述组合物为肉毒毒素神经毒成分的冻干 物，所述组合物还包括蔗糖和/或人血清白蛋白。在所述在后组合物 中，人血清白蛋白和蔗糖的比例可为例如1: 5。在一个实施方案中， 组合物为Xeomin 。这种组合可包括其他赋形剂。术语"赋形剂"指的是组合物中存在 的除了活性成分之外的物质。赋形剂可以是缓冲液、载体、抗粘剂、 粘合剂、崩解剂、填料、稀释剂、防腐剂、辅料、环糊精和/或填充 剂，例如白蛋白、明胶、胶原蛋白、氯化钠、防腐剂、冷冻保护剂和
,上Y/t山丄t
/欢條疋刑。
"pH缓冲液"是指能够将组合物、溶液等的pH调至一定值或一 定pH范围的化学物质。在一个实施方案中，pH值范围可为5至8， 在另一个实施方案中，pH值可为7至8，在另一个实施方案中，pH 值可为7.2至7.6,在另一个实施方案中，pH值为7.4。在另 一个实 施方案中，重组或注射后，药物组合物的pH值在4至7.5之间，在 另一个实施方案中，pH值在约6.8至7.6之间，在另一个实施方案中 pH值在约7.4至7.6之间。
在一个实施方案中，组合物还包括1-100 mM醋酸钠缓冲液，在 另一个实施方案中，包含10mM醋酸钠缓冲液。
上述给出的pH值范围仅为典型实例。实际值可能包含上述数值 间的任何区间。根据本发明教导的适合的缓冲液为，例如磷酸钠缓冲 液、醋酸钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(TRIS)缓冲液或任何适于 缓冲至上述pH值范围的缓冲液。
本申请中术语"室温"是指在+20。C至+25°C间的任意温度，甚至更 优选在+2(TC、 +21°C、 +22°C、 +23°C、十24。C或+25'C间的任意温度 以及这些温度之间的任意值。
"稳定的"、"使稳定"、"稳定化"是指活性成分，即，在药物组合 物的重组溶液或水溶液中的神经毒成分的毒性超过被加入到药物组 合物之前的生物活性的神经毒成分的毒性的20%、 30%、 40%， 50°/。、 60%、 70%、 80%、 90%,直到约为100%。
在一个实施方案中，稳定剂的示例为明胶或人源或重组来源的白 蛋白。还包括非人类或非动物来源的蛋白。可通过化学方法或基因重组对稳定剂进行改性。在本发明的一个实施方案中，设想用醇，例如， 肌醇、甘露醇、作为冷冻保护赋形剂来稳定冷冻干燥过程中的蛋白质。 在本发明的另 一实施方案中，稳定剂可以是包含透明质酸或聚乙 烯吡咯烷酮或聚乙二醇或其任意组合的非蛋白稳定剂。在另 一个实施 方案中，稳定剂为(Kollid0n )。进一步的稳定剂可以是羟乙基淀粉 和/或海藻酸盐。通过合适的pH缓冲液，尤其是醋酸钠缓冲液或冷冻 保护剂或两者联用可使该组合物在任选的pH下稳定。除了上述提到 的稳定剂，所述组合物可包括水和至少一种多元醇，例如甘露醇或山 梨糖醇或其混合物。它也可包括单糖、双糖或更高的多糖，例如葡萄 糖，蔗糖或果糖。这样的组合物被认为是具有高稳定性的更加安全的 组合物。
在一个实施方案中，本发明药物组合物中的透明质酸以在200 U/ml肉毒毒素溶液中，每亳升含有0.1至10mg,优选lmg透明质酸 的量与神经毒成分联用。
当本发明的组合物中存在聚乙烯吡咯烷酮时，其以能够制备出重 组溶液的量，例如以在200 U/ml神经毒成分的肉毒毒素溶液中，每 亳升含有10到500mg，优选100mg聚乙烯吡咯烷酮的量与神经毒成 分联用。在另一个实施方案中，在多达8ml的溶液中进行重组。这导 致在25U/ml神经毒成分溶液中，其浓度降至每亳升含12.5mg/ml聚 乙烯吡咯烷酮。在另一个实施方案中，所得溶液还含有l-100mM， 在另一个实施方案中含有lOmM醋酸钠缓冲液。
在一个实施方案中，本发明药物组合物中的聚乙二醇以在200 U/ml的肉毒毒素溶液中，每亳升含有10至500mg，优选100mg聚乙 二醇的量与神经毒成分联用。在另一个实施方案中，所得溶液还含有 l-100mM醋酸钠缓冲液，在另一实施方案中，还含有10mM醋酸钠
在一个实施方案中，本发明的药物组合物在约+3(TC至-20。C的贮存温度下，其药效在六个月、 一年、两年、三年和/或四年内基本保持不变。此外，所述药物组合物经重组后具有药效，或可恢复到20%
至100%。
在另一个实施方案中，稳定剂选自现有技术中除了硫代烷类、乙硫嫌或海藻糖的其他稳定剂。
"冷冻保护剂"J^能导致组合物的重组溶液或水溶液中的神经毒成分具有比在药物组合物中冻干之前的生物活性的神经毒成分的
毒性大20%、 30%、 40%, 50%、 60%、 70%、 80%、卯％,直到具有约为100%的毒性的赋形剂。所述冷冻保护剂是指能导致活性成分的
赋形剂。
在另一个实施方案中，组合物可包含多羟基化合物，例如作为冷冻保护剂的多元醇。可用的多元醇的示例包括，例如，肌醇、甘露醇和其他非还原醇。组合物的一些实施方案不包含蛋白稳定剂，或不含有有时用作冷冻保护剂的海藻糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖或相关糖类。
术语"防腐剂"和"防腐剂类"分别指一种或一类物质，其能阻止微生物、昆虫、细菌或其他污染性微生物在所述组合物中的生长或存活。防腐剂还能防止所述组合物发生不希望有的化学变化。可在本专利范围内应用的防腐剂，可以是本领域技术人员所知的所有防腐剂。可用的防腐剂的示例包括，尤其是，例如苄基醇、苯甲酸、苯扎氯铵、丙
酸钩、硝酸钠，亚硝酸钠、亚硫酸盐(二氧化硫、亚硫酸氢钠、亚硫
酸氢钾等)、乙二胺四乙酸(EDTA) 二钠、甲醛、戊二醛、硅藻土、乙醇、甲基氯代异噻唑啉酮、丁基羟基苯甲醚和/或丁基羟基甲苯。
术语"镇痛剂"涉及以多种方式作用于外周和中枢神经系统的镇痛药，包括特别是扑热息新对乙酰氨基酚)、非甾体抗炎药(NSAIDs)，例如水杨酸盐、麻醉药品例如吗啡、具有麻醉性的合成药物例如曲马多，及其他药物。还包括任何带有局部镇痛作用的化合物，例如利多卡因、节醇、苯甲酸及其他化合物。在一个实施方案中，镇痛剂是组合物的一部分，在另一个实施方案中，镇痛剂在化学去神经剂治疗前、治疗中或治疗后施予。
典型地，上述肌肉松弛剂的供应包含在高温下贮存或运输或两者皆有，或为制备所述肌肉松弛剂中的一个步骤，更优选在包括肉毒毒素神经毒成分的蛋白被干燥之后进行的一个步骤。"高温"是指2(TC以
L 25。Ci^LL^ 30。C以匕在龙他愔况下,即在基于肉毒毒素神经毒成分的肌肉松弛剂贮存在0'C以下的环境中时，术语"高温"分别是指0。C以上，或4。C以上，或1(TC以上，或者20。C、 25T:或3(TC以上。
在一个优选的实施方案中，肌肉松弛剂在不超过卯天的一段时间期限内经受上述30'C以上至高达7(TC范围间的某个温度。如本领域技术人员所知，肌肉松弛剂经受各个温度的时间期限可为几分钟至14天间的任何时间间隔。通常，考虑到供应该种肌肉松弛剂的情况，
尤其是贮存和/或运输或两者兼而有之所涉及地点的情况，时间期限不应少于10分钟。这些短期限在某些情况下尤为重要，其中在炎热
气候下运输后或贮存后，肌肉松弛剂经受阳光直接照射。例如在机场或街道上。因此本发明典型的时间期限为IO分钟、30分钟、l小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、l天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、IO天、2周、3周、1个月、2个月、3个月(90天)。毋庸赘述，上述提到的时间期限仅为典型示例，实际的时间期限可或长或短并且包括上述给出的数值间的任何间隔。
对于肌肉松弛剂所经受的温度，本领域技术人员能够想到典型的温度下限为20。C以上。对于本发明详细记载的温度和温度范围，本
领域技术人员应能理解肌肉松弛剂/组合物所经受的温度上限优选不高于70°C 。即肌肉松弛剂所经受的温度优选在20°C以上至70°C的范围。因此，在本发明中，肌肉松弛剂分别经受2(TC以上或25。C以上、或3(TC以上、或35°。以上、或40。C以上、或45。C以上、或5(TC以上、或55。C以上、或6(TC以上、或65。C以上，直到70。C的温度。另外，上述给出的2(TC以上至7(TC之间的任一特定温度及各个温度间隔可邰县由供K 7肌由WV铀.糸l Ehf的环據沐定的.所3未Y4i 1^7 #: 3先^云输或
存或两者兼而有之，所述特定温度及各个温度间隔在本发明的范围之内a
下述温度和时间间隔代表本发明的优选实施方案。根据第一实施
方案，使肌肉松弛剂在3(TC以上到高达7(TC间的某一温度经历一段
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町别'ib^、观现yu入，1兀迈佐佐ju l m工到同3ii /u l pj的杲一;/益度纟i历10分钟到90天，更优选在40。C以上到6(TC间的某一温度经历10分钟到90天。
在另一个实施方案中，当时期范围是从10分钟到30天时，温度从30°C以上到高达70°C ，优选从40°C到60°C ，更优选从50°C到60°C。
在另一个实施方案中，代表极端情况下，温度在65。C至7(TC的范围，且肌肉松弛剂在所述温度下经历的时期从10分钟到10天，或者从10分钟到3天。
由于这个发现，本发明现在能够提供上述不需使用人工冷却装置的肌肉松弛剂。这个发现对肌肉松弛剂的运输和/或贮存尤其重要。
此外，本发明与高温、可能还伴有高湿度的环境有很大关系。
下面将通过非限制性的实施例对本发明进行详细说明。实施例
实施例是使用巿购获得的产品Xeomin⑧进行的。Xeomin⑧是一种含有以A型肉毒毒素(150kDa)为活性成分的冻干粉。这种毒素以有缺口的(nicked)双链形式存在，即它包含重链和轻链。该毒素是从肉毒梭菌培养物(ATCC3205菌株)中获得的。已被提纯至不含任何复合蛋白。Xeomin⑧还含有人血清白蛋白和蔗糖。
将Xeomh^样品(未开封的小瓶没有重组)分别在6CTC贮存3天(实施例1)，在70。C贮存10天(图2),在80。C贮存10天(比较例3)。使用窄温度耐受度(±2°C)的合格培养箱进行贮存，隔天不间断的取出样品并在5"贮存，待分析之用。
为了评估Xeomin，的稳定性，分别用公知的小鼠LDso检测法检测生物活性，按pg/瓶xl0检测神经毒成分的含量、蔗糖含量(％)以及HAS含景(%X卜—i术方法是桉照欧洲药典掳霡的要龙实施的。实施例l
根据本实施例，将Xeomh^在6(TC贮存达一个月。结果示于图1。由图1可以清楚地看到，在6(TC贮存达一个月，Xeomi,的质量未受影响。在贮存时间结東后，生物活性(LDso检测)以及神经毒浓度(ELISA)均未有丝亳变化。人血清白蛋白(HSA)和蔗糖的水平没有随时间发生显著变化。总之，在60'C贮存一个月后，检测了货架寿命说明书中的所有参数。类似的，由6(TC以下的贮存情况中得到的所有稳定性数据均显示未对产品的质量有不利的影响(数据未示出)。
实施例2
根据本实施例，将Xeomin②在7(TC贮存达10天。结果示于图2。由图1可以清楚地看到，在70。C贮存达10天，Xeomit^的质量
未受影响。同样，生物活性以及神经毒浓度还有HSA和蔗糖的含量
没有随时间发生显著变化。总之本实施例表明Xeomir^的质量未受在
在7(TC贮存达10天的影响。
实施例3(比较)
在本比较例中，将Xeomir^在8(TC贮存多达10天。与在60。C和7(TC下贮存相比，观测到生物活性(LDso检测)迅速降低，神经毒在5天内完全灭活，在贮存的第三天，活性进一步降低。本实施例表明在一个相对不长的时期后，至少80。C这个温度对基于肉毒毒素神经毒成分的肌肉松弛剂的稳定性有不利影响。
权利要求
1、在20℃以上供应肌肉松弛剂的方法，其中所述肌肉松弛剂为包含不含复合蛋白的肉毒毒素神经毒成分的干固体组合物。
2、 根据权利要求l所述的方法，其中所述供应涉及贮存和/或运 输和/或为制备所述肌肉松弛剂的方法中的 一个步骤。
3、 根据权利要求1或2所述的方法，其中所述肌肉松弛剂在20'C 以上至高达70。C的温度下经历一段不超过90天的时期。
4、 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述时期从10分 钟到90天。
5、 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述温度在2(TC 到60。C之间且所述时期从10分钟到90天。
6、 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述时期从10分 钟到30天。
7、 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中温度在2(TC到 7(TC之间且所述时期从10分钟到10天。
8、 根据权利要求2-7任一项所述的方法，其中所述肌肉松弛剂 在运输和/或贮存时不需任何人工冷却装置。
9、 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述组合物为肉 毒毒素神经毒成分的冻干物。
10、 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述组合物还包 含蔗糖和/或人血清白蛋白。
11、 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述组合物还包 含至少 一种选自不同于蔗糖和人血清白蛋白的冷冻保护剂、稳定剂、 pH缓冲液、赋形剂及其混合物的成分。
12、 根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述神经毒成分 为A型肉毒毒素的神经毒成分。
全文摘要
本发明涉及一种在20℃以上供应稳定的肌肉松弛剂的方法，其中所述肌肉松弛剂为包含不含复合蛋白的肉毒毒素的神经毒成分的干固体组合物。
文档编号A61K38/48GK101687018SQ200880018442
公开日2010年3月31日 申请日期2008年5月28日 优先权日2007年6月1日
发明者斯文·格莱茵, 盖德·J.·曼德, 马提亚斯·马克思 申请人:德国麦氏大药厂