具有抗肥胖功效的草药提取物的制作方法

专利名称：具有抗肥胖功效的草药提取物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种肥胖预防或治疗剂，其包括作为活性成份的灵香草
(/_yw'mac/2/ae/oeww附-graecz' /7w6a )提取物，且本发明尤其涉及予贞防/治疗 肥胖用的原料、功能性食物、化妆品和生药，其包括抑制脂肪堆积——这 是肥胖的一个诱因——的提取物，所述提取物抑制脂肪细胞分化并减少肥 胖动物的体重和体脂肪。
背景技术：
肥胖是一种由代谢失调引起的疾病，其中体内过剩能量转化为脂肪且 该脂肪在脂肪性组织中过量地堆积，因此非正常地增加体脂肪。引起肥胖 的因素大致分为遗传因素和环境因素(诸如，趋向于肉类的饮食生活、运 动量减少等)。除此之外，还有其他因素，诸如神经内分泌因素和药物因 素等。
在1996年，肥胖已经被WHO定义为一种疾病，是目前在全世界范 围内增长最为迅速的慢性疾病之一，并且是引起诸如糖尿病、高血脂、动 脉粥样硬化、心血管系统疾病等"成人疾病，，的主要危险因素。根据肥胖人 口的突然增长，直接或间接的损失已经在世界范围内增长，有关肥胖和成 人疾病的市场已经快速增长，从而导致损失程度的快速增长趋势。
治疗上述肥胖的目标包括对食欲、脂肪代谢、脂肪细胞分化、脂肪吸 收、能量代谢等的控制，且已经积极地进行集中在这些控制的研究。目前， 有两种药物用于治疗肥胖，美国FDA批准了这些药物的长期^f吏用，它们 包括西布曲明(REDUCTIL)，其具有抑制去曱肾上腺素和血清素再吸收 的作用机制，还包括奥利司他(XENICAL)，其具有抑制从胰腺和消化系
3统分泌脂肪酶的作用。西布曲明最初被发现为一种抗抑郁药，^f旦是目前因 为其出色的抗肥胖功效而被用作肥胖治疗剂。根据最近报道的研究结果， 与安慰剂组相比，使用西布曲明至少 一年或更长时间会导致体重减少超过
4.3kg或4.5。/。。但是，使用西布曲明会引起副作用，诸如血压升高、失眠、 口干、眩晕等，而且西布曲明还有一个缺点是，它不能用于具有诸如高血 压等心血管疾病的患者。通过抑制从胰腺和消化系统分泌的脂肪酶的作 用，奥利司他减少大约30%的包括在摄取食物中的脂肪的吸收。根据最近 报道的研究结果，与安慰剂组相比，给药奥利司他一年会导致体重减少 2.7kg或2.9。/c)。但是，使用奥利司他会产生副作用，诸如腹泻、油便、排 泄失禁等，且与西方人不同，在人们摄取少量脂肪的情况下(诸如韩国人)， 药物效果不十分明显。由于到目前为止所开发的药物的限制，为了治疗肥 胖，必然需要开发一种具有新作用机制的药物，其具有好的抗肥胖功效并 减少副作用的产生。
在已经用于传统医学的天然药的使用中，不必深切关注由所开发药物 引起的毒性，因为天然药已经使用很长时间，根据药物显示的功效也非常 可能找到新的活性成份。
因此，本发明的发明人尽力寻找抑制脂肪细胞分化的药物，以找到更 加有效的肥胖治疗/预防方法，其使用高经济功效且副作用减少的天然药， 结果是，发明人通过证明灵香草(一种药用植物)提取物对肥胖预防/治疗 的良好效果而完成了本发明。

发明内容
因此，根据以上所述问题作出本发明，且本发明提供用于肥胖预防或 治疗剂的原料、功能性食物、化妆品、生药等，其中包括的灵香草提取物 作为一种活性成份，所述灵香草提取物对抑制脂肪细胞分化并减少肥胖动 物模型的体重和体脂肪具有显著作用。本发明特征性地包括从灵香草获得的提取物，所述提取物呈现低毒性 并具有抑制脂肪细胞分化并减少肥胖动物模型的体重和体脂的效果。
在本发明中的灵香草提取物的制备中，本发明提供一种提取灵香草提 取物的方法，所述提取物具有诸如抑制脂肪细胞分化、减少体重和体脂肪
的效果，所述方法包括如下步骤
(1) 干燥并研磨灵香草；
(2) 通过添加有机溶剂进行溶剂提取，有机溶剂的量是步骤(1 )中 获得的灵香草的重量的5到50倍；及
(3) 通过使用滤纸过滤有机溶剂的提取溶液，并在40。C或更低温度 下进行真空浓缩。
通过以上方法获得的本发明的灵香草提取物对抑制脂肪细胞分化并 减少肥胖动物模型的体重和体脂肪具有非常理想的效果，因此能够用于肥 胖预防或治疗剂的原料、功能性食物、化妆品、生药等。
在本发明的一个实施方式中，当NIH3T3-L1细胞(即前脂肪细胞系) 被分化为脂肪细胞时，通过对本发明的提取液的处理检验对脂肪细胞分化 的抑制效果，并通过对肥胖动物模型给药所述提取物，观察体重和体脂肪 的减少效果。
本发明的组合物包括提取物，基于组合物总重，提取物的含量范围从 0.1至50wt%。包括本发明的灵香草提取物的组合物根据已知的方法还可 以另外适当地包括载体、赋形剂或稀释剂。包括在本发明的组合物中的载 体、赋形剂或稀释剂包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖 醇、赤藻糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、 硅酸钙、纤维素、曱基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟苯 曱酯、羟苯丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油等。包括本发明提取物的组合 物可以被制备为任何剂型，即根据常规已知方法的口服剂型(诸如粉末、 颗粒、片剂、胶嚢、悬浮液、乳剂、糖浆、气雾剂等)、外用形式、栓剂说明书第4/12页
或无菌注射液。具体地，在本领域中常规已知的制剂、稀释剂或赋形剂可 以被用于制备中，诸如填充剂、补充剂、黏合剂、湿润剂、分解剂、表面 活性剂等。用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、粉末、颗粒、胶嚢 等，且这样的固体制剂可以通过将提取物与至少一种赋形剂(诸如淀粉、 碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等)混合而制备。此外，除了赋形剂之外，诸 如硬脂酸镁和滑石等润滑剂也可以使用。用于口服给药的液体制剂包括悬 浮液、内用的液体、乳液、糖浆等，且除了诸如水和液体石蜡等经常使用 的主要稀释剂之外，所述制剂可以包括各种赋形剂(例如，湿润剂、甜味 剂、芳香剂、防腐剂等)。用于非肠道给药的剂型包括无菌水溶液、非水 溶剂、悬浮液、溶液、冰冻干燥制剂和栓剂。作为非水溶剂和悬浮液，丙 二醇、聚乙二醇、诸如橄榄油等蔬菜油、可注射酯(诸如油酸乙酯)等可
以被使用。作为栓剂的基质，半合成脂肪酸脂(v^e;wo/)、聚乙二醇、吐 温61、可可黄油、月桂精黄油、甘油明胶等可以被使用。
本发明提取物的剂量可以根据患者的年龄、性别和体重来决定，但是， 给药提取物的含量可以通常为0.01至500mg/kg，优选为0.1至100mg/kg 每天一次或每天若干次。此外，提取物的剂量根据给药途径、病情严重性、 性别、体重、年龄等可以增加或减少。因此，本发明不以任何方式限定剂 量。
本发明的组合物可以对诸如大鼠、小鼠、家畜、人等动物通过不同途 径给药。可以通过所有可能的方法实施所述组合物的给药，例如口服给药、 直肠给药、静脉内注射、肌肉注射、皮下注射、子宫内膜内注射、脑室内 注射。本发明所述灵香草提取物毒性低、副作用少，因此以预防为目的， 可以长期给药而无需担心。
本发明提供一种预防与颅神经系统相关的焦虑症的卫生保健食品，其 包括灵香草提取物和营养学可接受的食品补充添加剂。包括本发明的野菊 (C7^"orwAemMW )提取物的组合物可以被多方面地用于药物、食；品、饮用液体等用于预防与颅神经系统相关的焦虑症。根据本发明的提取 物可以被添加到各种食品中，例如饮用液体、口香糖、茶、维生素复合物、 促进健康的食品等，还可以以丸剂、粉末、颗粒、浸剂、片剂、胶嚢或饮 用液体的形式使用。此处，在根据本发明的健康食品组合物的情况下，添
加所述提取物的量通常可以是基于食品总重的0.01至15wt。/。，在健康饮用 液体组合物的情况下，添加所述提取物的量通常可以是基于100ml的0.02 至10g，优选0.3至lg。
本说明书定义的食品补充添加剂包括本领域中通常所知的食品添加 剂、例如芳香剂、调味剂、着色剂、填充剂、稳定剂等。除了预定量的作 为基本组分的提取物之外，本发明的健康饮用液体组合物可以包括其他成 份，而不作特别限制，且与常规饮用液体的方式相同，可以包括各种芳香 剂或天然淀粉等作为添加剂。天然淀粉的例子包括常规的糖，诸如单糖(例 如，葡萄糖、果糖等)、二糖(例如，麦芽糖、蔗糖等)、多糖(例如，糊 精、环式糊精等)，还包括糖醇，诸如木糖醇、山梨糖醇、赤藻糖醇等。 此外，作为芳香剂、诸如索马汀(thaumatin)的天然芳香剂、甜叶菊提取 物(例如甜叶菊戒A、甘草甜味剂等)和诸如糖精、阿斯巴甜等合成芳香 剂可以被适当地使用。所包括的天然淀粉的量通常为基于本发明组合物的 100ml的1至20g，优选约5至12g。
此外，本发明的组合物可以包括各种营养剂、维生素、矿物质(电解 质)、香味剂(诸如合成香味剂、天然香味剂等)、着色剂、补充剂(奶酪、 巧克力等)、果胶酸及其中的盐、褐藻酸及其中的盐、有机酸、保护性胶 体增稠剂、PH调节剂、稳定剂、防腐剂、丙三醇、醇、用于碳酸饮用液 体的碳酸化剂等。此外，本发明的组合物可以包括果肉，所迷果肉可以被 用于制备天然果汁、果汁饮用液体和蔬菜饮用液体。这些成々分中的每一种 可以单独地使用或将其任意组合使用。即使这些添加剂的百分比不重要， 基于本发明组合物的重量为100份，通常选择添加剂的含量范围是基于重量的约0至20份。


本发明的前述和其他目的、特征和优点将^Mv结合以下附图的详细it明 中变得更加清晰，其中
图1是在前脂肪细胞和脂肪细胞以油红O染色后，通过显微镜观察的 前脂肪细胞和脂肪细胞的显示图片；
图2是根据灵香草提取物的浓度抑制脂肪细胞分化的显示图表；
图3是在MRC5和3T3-L1细胞系中根据灵香草提取物浓度的细l包毒 性的显示图表；
图4是在对Lep ob/Lep ob小鼠(即一种肥胖动物模型)口服给药灵 香草提取物之后，体重的减少效果显示图表；
图5是在对Lep ob/Lep ob小鼠(即一种肥胖动物模型)口服给药灵 香草提取物之后，体脂肪的减少效果显示图表；及
图6是在对DIO (饮食诱导肥胖)大鼠(即一种肥胖动物模型)口服 给药灵香草提取物之后，体脂肪的减少效果显示图表。
具体实施例方式
现在详细地参考本发明的优选实施方式。但是，以下实施例仅是说明 性的，本发明的保护范围不限于此。 实施例
实施例l:灵香草提取物的提取
向干燥且经研磨的灵香草中加入5至50倍重量的醇(曱醇或乙醇)， 之后进行24小时或更长时间的回流萃取以提取活性材料。随后，用滤纸 过滤醇(曱醇、乙醇等)提取液，并在4(TC或更低温度下进行真空浓缩。
实施例2:对脂肪细胞分化的抑制活性的测量NIH3T3细胞(ATCC CL173)(即前脂肪细胞系)在含有10%BCS (小 牛血清)的DMEM培养基中培养。当在培养期间，前脂肪细胞的细胞密 度达到约90%时，地塞米松、IBMX (异丁基曱基黄嘌呤)和胰岛素被处 理约48小时。然后，通过每隔两天将培养基变为含有胰岛素和10%FBS (胎牛血清)的培养基来诱导脂肪细胞分化。从实施例l获得的灵香草提 取物用来自脂肪细胞分化的初始诱导步骤的2(ig/ml的浓缩物进4亍处理， 以将用灵香草提取物处理的组与来自脂肪细胞分化的抑制活性观点的未 经处理的抑制组相比较。此外，GW1929(MERCK) (50nM),其是PPARy(过氧化物酶体增殖子激活受体y，即一种脂肪细胞分化的转录因子)的 兴奋剂，GW1929被处理以将经处理的组与未经处理的组比较。进4亍所述 处理，直到在抑制组中脂肪细胞分化达到80%或更多。然后，在用油红O 染色后，通过显微镜观察脂肪细胞分化(见图1)。接下来，用于选择性地 染色中性脂肪的尼罗红(Sigma)用于检测中性脂肪，所述中性脂肪在脂 肪细胞分化期间显著积累，并且定量地测量脂肪细胞分化的抑制活性。从 实施例1获得的灵香草提取物用来自脂肪细胞分化的初始诱导步骤的浓度 范围在0.1至20pg/ml的浓缩物进行处理，以将经处理的组与抑制组比较。 进行所述处理，直到在所述抑制组中脂肪细胞分化达到90%或更多。然后， 在用尼罗红染色之后，在475nm测量脂肪细胞分化(见图2)。如图1中 所示，结果，被确定的是灵香草提取物对脂肪细胞分化有显著作用。此外， 当GW1929，即一种PPARy兴奋剂，与灵香草提取物一起^皮处理的时候， 被确定的是与抑制组相比，脂肪细胞分化被抑制，抑制组中只有GW1929 被处理因此利于脂肪细胞分化。图2示出灵香草的醇提取物的浓度与脂肪 细胞分化的抑制关系示意图。灵香草提取物作用的脂肪细胞分化的抑制活 性(IC50 )的范围是从1至3ng/ml。 实施例3:细胞毒性的测量MRC5 (ATCC)细胞和NIH 3T3-L1细胞(ATCC CL173 )用从实施例1中根据浓度获得的灵香草提取物进行处理。然后，测量活细胞数以将经处理的组的细胞毒性与抑制组的细胞毒性相比较(见图3)。如图3中所 示，灵香草提取物的细胞毒性(CC50)大于20pg/ml。实施例4:检验Lep ob/Lep ob小鼠(即一种肥胖动物模型)的肥胖 预防/治疗效果因为C57BL/6JL Lep ob/Lep ob雄性小鼠(SPL， Japan)由于瘦素 (l印tin )基因突变的瘦素分泌减少而不能控制食欲，该小鼠不断地摄取过 量食物。结果，脂肪在其体内过度积累，从而血糖升高，且因此在出生10 至11周后，体重达到约50g。因此，为了检验肥胖预防/治疗效果，对包 括5只Lepob/Lepob雄性小鼠(7周龄)的各个组口服给药从实施例1获 得的灵香草提取物达12周，浓度100mg/kg/天。对阳性抑制组给药西布曲 明(20mg/kg/天)，对阴性抑制组给药相同量的0.5%曱基纤维素(MC)。 给药后，提取内脏以测定其重量，对皮下脂肪组织进行组织学结构分析(见 图4和5)。此外，在通过小鼠的血液凝集的血液生化分析(诸如对肝酶、 AST/ALT的测试)中，未显示灵香草提取物的肝毒性。如图4中所示，类 似于阳性抑制组，给药灵香草提取物导致体重显著减少(PO.05)。类似 于阳性抑制组，图5说明了通过给药灵香草提取物，皮下脂肪组织的重量 显著减少(PO.001)，且确定了原因是脂肪细胞尺寸的减少。实施例5:饮食诱导肥胖(DIO)大鼠(即一种肥胖动物模型)中肥 胖预防/治疗效果的检验为了检验肥胖预防/治疗，使用3组，各组包括8只SD( Sprague Dawley ) 雄性大鼠(DBL, Korea) (8周龄)。对这些组分别口服给药正常饮食， 高脂肪饮食和与高脂肪饮食一起的灵香草提取物达4周(给药量为持续2 周100mg/kg/天和持续2周50mg/kg/天)。给药之后，提取内脏以测量其 重量(见图6)。在通过大鼠的血液凝集的血液生化分析(诸如对肝酶、 ..AST/ALT的测试.)中，未显示灵香草提取物的肝毒性。如图6中所.示，确类似的，通过给药灵香草提取物，皮下脂肪显著减少(PO.05)。剂型实施例1 — 一粉末的制备从实施例1获得的灵香草干粉 300mg乳糖 100mg滑石 10mg通过混合以上成份制备粉末并将所述成份填充到密封袋中。剂型实施例2——片剂的制备从实施例1获得的灵香草干粉 50mg玉米淀粉 100mg乳糖 100mg硬脂酸镁 2mg通过混合以上成份并根据制备片剂的常规方法对所述成份压片来制 备片剂。剂型实施例3——胶囊的制备从实施例1获得的灵香草干粉玉米淀粉乳糖硬脂酸镁通过混合以上成份并根据制备胶 胶胶嚢中来制备胶嚢。50mg 100mg 100mg 2mg的常规方法将所述成份填充到明剂型实施例4一一注射剂的制备从实施例1获得的灵香草干粉 50mg 注射用无菌水 适量 PH调节剂 适量
根据制备注射剂的常规方法，每l安培(2mg)的以上成份用来制备 注射剂。
剂型实施例5——、液体制剂的制备
从实施例1获得的灵香草干粉 100mg
异构糖 10g
甘露醇 5g
纯净水 适量
根据制备液体制剂的常规方法通过以下步骤制备液体制剂将上述成 份的每一种加入到纯净水中并使其溶解；加入适量柠檬芳香剂；混合这些 成份；向总混合物加入纯净水；调节混合物到100ml;并将混合物填充到 棕色瓶并将所述混合物进行灭菌。
剂型实施例6—_保健食品的制备
从实施例1获得的灵香草千粉 1000mg
维生素混合物 适量
维生素A醋酸酯 70 jxg
维生素E l.Omg
维生素B1 0.13mg
维生素B2 0.15mg
维生素B6 0.5mg
维生素B12 0.2ng维生素c10mg
生物素10吗
烟械酰胺(nicotinic acid amid)1.7mg
叶酸50吗
泛酸4丐0.5mg
无机混合物适量
硫酸亚铁1.75mg
氧化锌0.82mg
碳酸镁25.3mg
磷酸二氢钾15mg
磷酸单氬钾55mg
柠檬酸钾90mg
碳酸4丐lOOmg
氯化镁24.8mg
即使被
确定为相对地适于用作保健食品的所述成分被混合，所述混合比例仍是可 以变化的。可以根据制备保健食品的常规方法制备保健食品组合物，所述
方法包括以下步骤混合以上成份，制备颗粒，和以与常失见方法中相同的 方式在组合物中使用颗粒。
剂型实施例7——保健饮用液体的制备
从实施例1获得的灵香草干粉 lOOOmg
柠檬酸 lOOOmg
低聚糖 100g
李子浓缩物 2g .牛磺酸 lg
纯净水 900ml
根据保健饮用液体的常规方法，以上成份被混合并在85°C下振荡加 热约1小时；溶液被过滤并注入到21灭菌容器中；溶液纟皮施以密封和灭 菌过程，并保持被冷冻的状态。随后，最终的溶液被用于制备本发明的保 健々大用液体组合物。
在根据优选实施方式的以上组合物中，即使被确定为相对适于用作受 人喜爱的饮用液体的所述成份被混合，混合的比例仍是可以根据诸如阶 级、民族、消费者目的等区域/国家的喜好而变化的。
工业实用性
从上述可以看出，本发明的灵香草提取物具有高抗肥胖功效，诸如对 脂肪细胞分化的抑制和减少肥胖动物模型的体重和体脂肪的效果，并因此 可以用作肥胖预防或治疗剂的原料、功能性食品、化妆品、生药等的活性 成份。
而本发明已结合目前被认为最实用且可效仿的实施方式来描述，将被 理解的是，本发明不限于所公开的实施方式和附图，但反之，其旨在覆盖 所附权利要求的主旨和范围内的各种修改和变型。
权利要求
1.一种用于预防和治疗肥胖的药物组合物，其中该药物组合物包括作为活性成分的灵香草提取物。
2. 如权利要求1所述的药物组合物，其中该药物组合物具有脂肪细胞分化的抑制活性。
3. 如权利要求1或2所述的药物组合物，其中该药物组合物形成为胶嚢、片剂、颗粒、粉末或饮用液体的剂型。
4. 一种肥胖预防或治疗剂，其中包括如权利要求1或2的作为活性成份的所述组合物。
5. —种预防肥胖并减轻肥胖症状的化妆品组合物，其中包括作为活性成份的灵香草提取物。
6. —种用于预防肥胖并减轻肥胖症状的保健食品，其中包括作为活性成份的灵香草提取物。
全文摘要
本发明公开一种从药用植物中获得的抗肥胖活性提取物。更具体地，从灵香草(一种传统上在东方使用的药用植物)获得的提取物可以被用作肥胖预防或治疗剂的原料、功能性食物、化妆品、生药等的活性成分，因为所述提取物能够抑制脂肪细胞分化并减少肥胖动物的体重和体脂肪，从而抑制脂肪堆积(即肥胖的一个因素)。
文档编号A61K36/185GK101678060SQ200880018326
公开日2010年3月24日 申请日期2008年5月8日 优先权日2007年6月8日
发明者崔善美, 崔恩旭, 崔恩正, 徐钟培, 朴相昱, 李泰揆, 申东承 申请人:纽吉克斯有限公司