专利名称：异去氧地胆草素在制备抗血管新生药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的抗血管新生中草药单体异去氧地胆草素以及该化合物 在制备抑制血管新生药物中的应用。
背景技术：
肿瘤是人体细胞异常分化增殖的恶性疾病。肿瘤在表现其生长、转移等生物 学行为时与其中的微血管增生有密切的关系。无论原发性或转移性肿瘤，其持续 性生长都必须依赖于新生血管的形成。肿瘤的生长需要建立一个新生血管的形 成。缺少血供的肿瘤直径一般只能维持在l-2mm以内。
血管新生对肿瘤的生长、侵袭、发展起着关键的作用。而在这个过程中，关 键的是血管内皮细胞。各种细胞分泌的促血管或抑制血管生长因子维持着平衡状 态，从而维持血管的形成。这种平衡取决于内皮细胞对多种正常过程的应答反应 是否变得有血管新生能力，这些过程包括创伤修复、月经周期、胚胎发生、器 官形成。当血管内皮细胞在生长因子的刺激下，便会进行迁移、增殖以及最后形 成管腔而形成新的血管。正是由于血管新生与内皮细胞的这些行为有直接的关 系，所以通过抑制内皮细胞的这些功能从而抑制血管新生将成为一个很好的靶 点。
较之传统的化疗放疗等治疗方式，抗血管新生疗法靶定于肿瘤灶的微血管内 皮细胞而不是肿瘤本身， 一个血管破坏后，成千上万个肿瘤细胞坏死，在治疗上 具有级联放大效应，并且不易产生抗药性等优点。特效的抗血管新生的药物的不 断发展已然成为对待癌症和其他血管新生依赖性疾病的诱人的治疗方法。
异去氧地胆草素(isodeoxyelephantopin,ESI)是一种植物倍半萜内酯化合物， 是近几年从菊科地胆草属地胆草中分离出来的。目前对其作用的研究很少，仅仅 是对一些癌细胞的生长有抑制作用，还没有异去氧地胆草素作为抑制血管新生药物的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题目的在于开发异去氧地胆草素作为一种新的血管 生成抑制剂的药理用途。所述异去氧地胆草素，其分子式为C19H1906，分子 量为343.3506。
本发明要解决的技术问题在于异去氧地胆草素在制备血管新生抑制药物中 的应用，尤其是异去氧地胆草素在制备抑制乳腺癌、结肠癌、淋巴瘤、急性骨髓 性白血病、类风湿性关节炎、牛皮癣、糖尿病综合症、血管瘤等血管新生依赖性 疾病中的相关应用。所述抑制血管新生药物可以抑制肿瘤血管新生，关节炎病 变组织血管新生，新生血管性眼病，血管瘤病变组织血管新生，银屑病病变 组织血管新生，实体瘤病变组织血管新生，血管瘤，Kaposi' s肉瘤病变组织 血管新生，白血病、淋巴瘤、骨髓瘤血液癌症，Paget' s疾病血管新生。
本发明要解决的技术问题在于可以制备抑制血管新生药物来治疗类风湿性 关节炎，炎性关节炎；新生血管性角膜疾病，新生血管性视网膜疾病，新生血管 性虹膜疾病，新生血管性青光眼，新生血管性脉络膜疾病，新生血管性结膜眼病， 新生血管性白内障，新生血管性玻璃体眼病，新生血管性视神经疾病；糖尿病性 视网膜病变、视网膜静脉闭塞，早产儿视网膜病变，视网膜动脉闭塞；湿性老年 黄斑病变；原发性或继发性实体瘤；多发性血管瘤，血管母细胞瘤，良性血管增 生疾病。
本发明要解决的技术问题在于提供含有有效量的异去氧地胆草素以及药学 可接受成分的组合物在制备抑制血管新生药物中的应用。
根据本发明可以将治疗有效量的异去氧地胆草素和药学上允许的任意一种 辅料制成药物组合物，也可以添加其他与异去氧地胆草素没有拮抗作用的抗血管 新生药物。其制剂可以是药学上的任意一种剂型，包括但不限于片剂、颗粒剂、 胶囊剂、丸剂、口服液、注射剂、脂质体等。
为实施本发明的方法，异去氧地胆草素可通过口服、肠胃外、吸入式喷雾或 通过植入式贮存器给药。"肠胃外"包括皮下、皮内、静脉内、肌肉内、关节内、动脉内、滑膜腔内、胸骨内、鞘内、病灶内及颅内注射或输入技术。
口服可用固体或液体状的剂量单位，如末剂、散剂、片剂、糖衣剂、胶囊剂、
颗粒剂、悬浮剂、溶液剂、糖浆剂、滴剂、舌下含片等剂型进行给药。
末剂是将本发明化合物磨成适当的细度而制成。散剂是将本发明化合物磨成
适当的细度，然后与同样细度的医药用载体(如载体、甘露糖醇之类可食性碳水
化合物等)混合制成。根据需要，也可混入矫味剂、防腐剂、分散剂、着色剂、
香料等物质。
胶囊剂是将如上所述制成粉末状的末剂和散剂或入片剂部分所述的颗粒化的 物质填充到如明胶胶囊外壳中而制成。也可将润滑剂和助流剂等混合到粉末状物 质中，然后在胶囊中进行填充操作。若添加助溶剂和崩解剂等，如聚乙二醇，碳 酸钠，可改善胶囊摄取时的药效。
本发明公开了异去氧地胆草素在制备血管新生药物中的应用。实验表明，异 去氧地胆草素在人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)增殖实验、HUVEC迁移实验、 HUVEC的Boyden小室迁移实验、HUVEC成管实验中均有明显的抑制作用，可 用于制备抑制血管新生的药物。
图1:异去氧地胆草素(ESI)抑制人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖，
pM代表微摩尔/升，纵坐标值表示4卯纳米处的光吸收值。
图1中，以pO.05表示有显著差异；其中，*表示口<0.05;"表示pO.01;
***表示p<0.001 。
图2:浓度为5微摩尔/升的异去氧地胆草素抑制人脐带静脉内皮细胞 (HUVEC)的体外划痕迁移照片(左边为对照组，右边为5微摩尔/升异去氧地胆 草素组)；
图3:浓度为5微摩尔/升异去氧地胆草素抑制人脐带静脉内皮细胞 (HUVEC)在修饰的Boyden小室中的迁移照片(左边为对照组，右边为5微摩 尔/升异去氧地胆草素组)；
图4:浓度为5微摩尔/升异去氧地胆草素抑制人脐带静脉内皮细胞 (HUVEC)的成管照片(左边为对照组，右边为5微摩尔/升异去氧地胆草素组)。
具体实施例方式
实施例l:异去氧地胆草素抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖
目的和原理细胞增殖实验采用MTS assay。 MTS assay是一种在活细胞中 运用比色法确定细胞增殖数量的测定方法。NADra脱氢酶将MTS四唑盐化合物转 变成一种溶于组织培养液的一种有色物质——甲臢，其颜色深浅与活细胞数目在 一定范围内高度相关。通过该模型可评价药物对细胞增殖能力的影响。
方法96孔板中加入人脐静脉内皮细胞，设置对照组和加样组，加样组加 入含有不同浓度的异去氧地胆草素，孵育60 72小时后，加入细胞增殖检测试 剂，孵育1-3小时，用酶标仪在490nm处检测光吸收值。
结果与评价如图1所示，与对照组相比，加样组人脐静脉内皮细胞的增殖 能力受到抑制，说明异去氧地胆草素可以抑制内皮细胞的增殖。
实施例2:异去氧地胆草素抑制HUVEC体外划痕迁移实验
目的和原理在血管内皮细胞生长因子(VEGF)的刺激下，人脐静脉内皮细 胞可以向没有细胞的划痕区域迁移。通过观察迁入划痕区的内皮细胞量，来评价 异去氧地胆草素是否具有抑制人脐静脉内皮细胞迁移的能力。
方法在6孔板中加入人人脐静脉内皮细胞，待细胞长至90%左右，用tip 头在六孔板中心划一个十字形，用PBS洗掉划下的细胞，加入VEGFw以及含有 不同药物浓度的培养基，培养至VEGF组长满。
结果与评价如图2所示，在显微镜下观察并拍照，结果显示与对照组相比， 处理组人脐静脉内皮细胞的迁移受到抑制，说明异去氧地胆草素可以抑制人脐静 脉内皮细胞的迁移。
实施例3:异去氧地胆草素抑制HUVEC在修饰的Boyden小室中的迁移实验 目的和原理Boyden小室被微孔分离成两个部分。细胞置于上面的部分， 下面的部分含有趋化因子，在趋化因子的诱导下，上层细胞可以穿过微膜孔迁移 至膜的底部并贴附在膜的背面。细胞在生长因子的诱导下可以透过多聚碳酸盐滤 膜，此实验可以检测药物对内皮细胞迁移能力的影响。方法将小室放在24孔板中，在小室外加入一定量含有VEGF的内皮细胞完 全培养基。小室中接入细胞，并加入等量不同浓度的药物，在培养箱中孵育四小 时后，进行固定和染色，最后在显微镜下观察拍照。
结果与评价:如图3所示，与对照组比，样品组人脐静脉内皮细胞穿过Boyden 小室的能力受到抑制，说明异去氧地胆草素可以抑制内皮细胞迁移的能力。
实施例4:异去氧地胆草素抑制HUVEC成管实验
目的和原理Matrigel是从小鼠肉瘤中抽提得到的可溶性的基底膜抽提物。富 含细胞外基质蛋白，人脐静脉内皮细胞可以在Matrigel上贴附成管，可以利用 人脐静脉内皮细胞在Matrigel上的这种成管特性来研究药物对血管形成的影 响。
方法将Matrigel铺到24孔板上，孵育一段时间后，在每孔加入一定数量 的人脐静脉内皮细胞，再加入含有不同浓度异去氧地胆草素的培养基。在培养箱 中孵育后，在显微镜下观察血管形成情况并拍照。
结果与评价如图4所示，人脐静脉内皮细胞在Matrigel中生长，单个细 胞在Matrigel中延伸，形成三维网状结构。与对照组相比，内皮成管过程受到 影响，三维网络结构受到破坏，说明异去氧地胆草素可以抑制人脐静脉内皮细胞 血管形成。
权利要求
1.式(I)的异去氧地胆草素在制备抑制血管新生药物中的应用。结构式(I)异去氧地胆草素
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制血管新生药物可抑制 肿瘤血管新生。
3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制血管新生药物可抑制 病变组织血管新生。
4. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肿瘤血管新生包括白血病、 淋巴瘤、骨髓瘤血液癌症的血管新生，Kaposi' s肉瘤病变组织血管新生， Paget' s疾病血管新生，血管瘤，血管瘤病变组织血管新生，实体瘤病变组 织血管新生，多发性血管瘤，血管母细胞瘤，良性血管增生疾病。
5. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述病变组织血管新生包括关 节炎病变组织血管新生，新生血管性眼病，银屑病病变组织血管新生。
6. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，含有有效量的式(I)异去氧地 胆草素以及药学可接受成分的组合物在制备抑制血管新生药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种新的抗血管新生中草药单体异去氧地胆草素以及该化合物在制备抑制血管新生药物中的应用。所述异去氧地胆草素可以抑制肿瘤血管新生，关节炎病变组织血管新生，新生血管性眼病，血管瘤病变组织血管新生，银屑病病变组织血管新生，实体瘤病变组织血管新生，血管瘤，Kaposi’s肉瘤病变组织血管新生，白血病、淋巴瘤、骨髓瘤血液癌症，Paget’s疾病血管新生。还提供了含有有效量的异去氧地胆草素以及药学可接受成分的组合物在制备抑制血管新生药物中的应用。
文档编号A61K31/365GK101637468SQ200910056249
公开日2010年2月3日 申请日期2009年8月11日 优先权日2009年8月11日
发明者刘明耀, 吴媛媛, 张晓丽, 易庭芳, 易正芳, 贺利军, 力 赖 申请人:华东师范大学