专利名称：α-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌抗肿瘤的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种a-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌用于体内外抗肿瘤的用途，特别适用于动物 或人癌症的治疗。
背景技术：
癌症是指细胞失去控制异常增殖，肿瘤本身持续生长进而侵犯临近正常组织，并可经血 管、淋巴管及体腔转移到身体其它部位，最终危及人类生命的一类严重疾病。癌症是一种常 见病，它可发生在人体各器官。中年是肿瘤发病的高峰时期。根据有关资料表明在死亡的 老年人中，只有1/10死于癌症；而中年人死亡原因中，癌症占1/5。同时指出死于癌症的
病人平均年龄为55~59岁，比正常人减寿12-18岁。癌症已经成为人类死亡的第一位或第二 位原因，每年全世界约有700万人死于癌症。尽管与一些发达国家如美国、英国、法国、俄 国、日本等相比，我国恶性肿瘤死亡率及占总死亡的比例相对较低，但在全国范围内恶性肿 瘤在各种死因中已经排在第二位，在部分城市则已排在首位；并且近20年，肿瘤的发病率及
死亡率呈明显上升趋势。城市恶性肿瘤死亡率增长幅度最大的是肺癌，其次是肝癌，还有结 直肠肛门癌、白血病和女性乳腺癌。手术、化疗和放射疗法是治疗肿瘤的三大方法，光动力 治疗的根本是光动力作用己经成为第四种治疗癌症方法。
酞菁以及它的衍生物不仅广泛用作染料，而且在高技术领域中作为光电材料、非线性光 学材料、催化剂、光记录介质材料等得到了应用。酞菁衍生物最显著的新用途之一是作为医 药用光敏剂应用于肿瘤光动力治疗。这种应用是基于光动力效应，即光敏剂受光激发与三线 态氧相互的作用而产生单线态氧。酞菁可选择性定位在肿瘤中，通过在光照治疗前进行静脉 注射给药。在光合适波长激光激发下，产生的单线态氧是一种强氧化剂，导致肿瘤组织坏死。 与目前己广泛应用于临床的卟啉衍生物相比，.酞菁有如下几个优点。首先，它们激发长波较 长，能作用更深的组织。由于它具有更强的荧光，可用于肿瘤检测和定位诊断等。酞菁分子 的氧化稳定性高使得它们可制成稳定的水溶液使用。
发明内容
本发明提供一种a-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌用于体内外抗肿瘤的用途，特别适用于动物 或人癌症的治疗。较好地抑制人前列腺癌DU145细胞、人上皮肿瘤A431细胞、人肺癌细胞 A549、人胚肺成纤维细胞HELF等正常或肿瘤细胞体外的生长增殖，并抑制人前列腺癌DU145 细胞及人上皮肿瘤A431细胞在裸小鼠体内的生长。
具体实施例方式
31.oK8-喹啉氧基:i单取代酞菁锌用于体外抗肿瘤活性
选择的细胞株为人前列腺癌DU145细胞、人上皮肿瘤A431细胞、人肺癌A549细胞、 人胚肺成纤维HELF细胞及人鼻咽癌KB细胞。收集生长良好的肿瘤细胞，用含10%小牛血 清的RPMI 1640培养基配制成lxl04/ml细胞悬液，于96孔培养板内接种，每孔100^1 (含 IOOO个肿瘤细胞)，置37'C， 5。/。C02温箱内培养24小时后加药。实验设溶剂对照，受试样 品及阳性对照各组。分别设5个浓度。a-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌终浓度为0.01、 0.1、 1.0、 5.0禾卩10吗/ml，溶剂为含10%蓖麻油的DMSO，血叶啉终浓度为O.l、 1.0、 5.0、 10.0禾卩50.0 吗/ml。加药后置温箱内孵育。在加药2 3小时后，采用光动力治疗仪照射细胞。a-(8-喹啉 氧基)单取代酞菁锌在670 nm波长，血卟啉在630 nm波长，照射强度均设为5.4焦耳/cm 2。 光照完毕将96孔板重置37'C， 5%(302温箱内，继续培养。
细胞于4天后进行MTT测定。方法为弃培养液，每孔加入MTT溶液(0.4 mg/ml, RPMI 1640配制)100 |al， 37。C孵育4小时。弃上清，每孔加入DMSO 150 nl以溶解Fomazan颗粒， 轻度振荡后，用550型酶标仪在检测波长540nm,参考波长450 nm下测定OD值。以上实验 重复2次。以药物的不同浓度及对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中求出半数抑 制浓度(IC50)。
结果
经过激光照射，a-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌的光敏作用明显，有较强的体外抗肿瘤作用。 具体结果见表l。
表1 a-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌对肿瘤细胞及正常细胞的光动力效应(x±SD)药物IC 50 (吗/ml)
细胞株^^""^^^血口卜啉a-(8-喹啉氧基)单取代
酞菁锌
人前列腺癌DU145细胞4.241±0.42490.069±0.0036
A431 (人皮肤基底癌细胞)3.667±0,12850.073±0扁5
HELF (人胚肺成纤维细胞)2.811±0.14970.059±0.0025
人鼻咽癌KB细胞4.441±0.13310.075±0.0021
人肺癌A549细胞0.906±0.0683O細士O衡O
2.a-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌用于体内抗肿瘤活性
选择的瘤株为人前列腺癌DU145及人上皮肿瘤A431。选择肿瘤生长良好，全身状况 较好荷瘤动物，颈椎脱臼处死。无菌条件下取出瘤块，用手术刀切割成直径2-3mm的瘤块， 套管针接种于裸小鼠腋部皮下。7天后实验动物腋后可见肿瘤。用游标卡尺测量肿瘤长、宽径，按瘤体积大小分层分组。每组6-8只动物。设阴性对照组(不给药)，溶剂对照组，血卟 琳注射液50 rng/kg阳性对照组，cK8-喹啉氧基)单取代酞菁锌2.0 mg/kg、 1.0 mg/kg、0.5 mgZkg (670nm条件下)72J/cm2光照3个剂量组，溶剂为含10%蓖麻油的DMSO。分组当日，将 血卟啉注射液尾静脉注射给药，给药体积0.2 ml/20g。次日，以相等体积不等浓度对a-(8-喹 啉氧基)单取代酞菁锌各剂量组和溶剂对照组分别尾静脉注射。再24小时后分别用630 nm波 长和670 nm波长对阳性对照组和a-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌各给药照光组及溶剂对照组照 射。照射剂量72J/cm2。
激光照射后，每周2次对实验动物所荷肿瘤长、宽径及体重进行测量记录，观察动物肿 瘤生长及一般情况，参考有关文献提供的方法计算肿瘤体积(TV)及相对肿瘤体积(RTV)， 绘制肿瘤体积生长变化图。实验结束时将动物处死后剥离肿瘤，称瘤重，计算药物对肿瘤生 长抑制率。t检验法比较各组动物肿瘤重量、肿瘤体积、RTV等指标的统计学差别。 肿瘤体积(TV)的计算公式为长x宽2/2。
相对肿瘤体积(RTV)的计算公式为Vt/Vo(其中Vo为分笼给药时测量所得TV， Vt为 以后每次测量时的TV。)
抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C (%)，计算公式为
治疗组(T) RTV
T/C (%) 二-x 100
阴性对照组(C) RTV
结果
经670 nm波长激光照射，a-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌尾静脉给药对人前列腺癌DU145 及人上皮肿瘤A431肿瘤生长具明显抑制作用，并与给药剂量相关。具体结果见表2、续表2、 表3、续表3。
5表2 (x-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌对人前列腺癌DU145肿瘤生长抑制作用
组别
动物数
体重(g)
开始结束开始结束瘤重(g)抑制率(°/。)
阴性对照 溶剂对照 a-(8-喹啉氧 基)单取代酞 菁锌 0.5mg/kg a-C8-喹啉氧 基)单取代酞 菁锌 1.0mg/kg a-C8-喹啉氧 基)单取代酞 菁锌 2.0mg/kg 血口卜啉 50.0mg/kg6 6 76 6 616.9±1.73 17.7±1.11 17.5±1.3821.3±2.37 20.8±2.11 19.0±2.521.82±0.471 1.81±0.275 1.03士0.378*43.6
7616.6±1.5920.1±1.670.86±0.355*51.9
7716,4±1.9919.2±0.370.68±0.412*63.0
7617.5±2.7821.7±3.610.38±0.271*肌l
*:与阴性对照组相比，PO.05
续表2cK8-喹啉氧基)单取代酞菁锌对人前列腺癌DU145肿瘤生长抑制作用
组别肿瘤体积(mm3)RTVT/C (%)
开始结束
阴性对照131±26.51973±482.415.76±6.17
溶剂对照116±49.81733±590.315.88±11.94101
oK8-喹啉氧基)单取代酞 菁锌0.5mg/kg
a-(8-喹啉氧基)单取代酞 菁锌l.Omg/kg
a-(8-喹啉氧基)单取代酞 菁锌2.0mg/kg
131±19.4
115±31.9
129±34.9
1260±375.4*
980±462.3*
801 ±444.2*
8.63±4.457*
7,18±3.54*
5.96±2.99*
54.7
45.6
37.8
血叶啉50.0mg/kg 133±24.7 447±289.3*
:与阴性对照组相比，PO.05
3.54±2.5"
22,:
6表3 d-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌对人上皮肿瘤A431肿瘤生长抑制作用
组别
动物数
体重(g)
开始
开始
结束
结束
瘤重(g)
抑制率(％)
阴性对照 溶剂对照
a-(8-喹啉氧
基)单取代酞 菁锌
0.5mg/kg
a-(8-喹啉氧
基)单取代酞
lmg/kg
ot-(8-喹啉氧 基)单取代酞 菁锌 2mg/kg
血口卜啉 50.0mg/kg
16.6±1.84 15.3±0.94
16.8±0.69 15.8±1.34 16,0±0.76 16.6±0.99
18.4±1.50 19.8±1.21
20.2±1.07 20.3±1.25 19.0±1.60 21.0±2.00
1.83±0.526 1.86±0.531
0.97±0.282* 0.64±0.315* 0.45±0.271* 0.53±0.320*
46.5
64
75.0
71.f
*:与阴性对照组相比，PO.05
续表3cK8-喹啉氧基;)单取代酞菁锌对人上皮肿瘤A431肿瘤生长抑制作用_
組别 肿瘤体积(mm3) RTV T/C (%)
开始 结束
阴性对照 溶剂对照
cK8-喹啉氧基)单取代酞
菁锌
0.5mg/kg
a-(8-喹啉氧基)单取代酞
菁锌 lmg/kg
a-(8-喹啉氧基)单取代酞
菁锌 2mg/kg
血u卜啉 50.0mg/kg
*:与阴性对照组相比，
109±24.0 1640±427.7
106±23.2 1706±625.9
123±6.7 994.8±355.7*
135±29.3 765±363.5*
119±27.6 589.6±304.7*
110±32.1 432±287,0* PO.05
15.11±1.87
15.45±4.12 103
8綠2.78* 60
5.84±2.66* 38.6
5.03士2.21* 33.3
3.95±2.63* 26.权利要求
1. 一种α-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌用于体内外抗肿瘤的用途，特别适用于动物或人癌症的治疗。α-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌结构式为
全文摘要
本发明涉及α-(8-喹啉氧基)单取代酞菁锌用于治疗恶性肿瘤的用途，特别适用于动物或人癌症的治疗。较好地抑制人前列腺癌DU145细胞、人上皮肿瘤A431细胞、人肺癌细胞A549、人胚肺成纤维细胞HELF等正常或肿瘤细胞体外的生长增殖，并抑制人前列腺癌DU145细胞及人上皮肿瘤A431细胞在裸小鼠体内的生长。
文档编号A61K31/4709GK101485660SQ200910119190
公开日2009年7月22日 申请日期2009年3月9日 优先权日2009年3月9日
发明者超 李, 王爱平, 王英明, 薛金萍 申请人:王英明;北京贵千金医药科技有限公司