专利名称：：一种血府逐瘀口服液的质量控制方法
技术领域：
：本发明涉及一种血府逐瘀口服液的质量控制方法，更具体地说是测定血府逐瘀口服液中苦杏仁苷含量的方法，属于中药现代化领域。
背景技术：
：血府逐瘀汤来源于清代医学家王清任所著的《医林改错》，为活血化瘀方中具有代表性的方剂。由桃仁、红花、当归、川芎、地黄、赤芍、牛膝、柴胡、枳壳、桔梗、甘草等十一味中药组成，具有活血化瘀，行气止痛之功效。用于瘀血内阻，头痛或胸痛，内热瞀闷，失眠多梦，心悸怔忡，急躁善怒。血府逐瘀口服液是在基础上提取精制制成的口服制剂。杉^仁为蔷薇科植物杉fePru皿spersica(L.)Batsch或山杉^Pru皿sdavidiana(Carr.)Franch.的干燥成熟种子。具有破血行瘀，润燥滑肠之功效。用于治经闭，热病蓄血，风痹，疟疾，跌打损伤，瘀血肿痛，血燥便秘。在血府逐瘀汤(《医林改错》)、生化汤(《傅青主女科》)、桂枝茯苓丸(《金匮要略》)、桃核承气汤(《伤寒论》)等医家名方中均重用桃仁。现代研究亦表明桃仁对心脑血管疾病疗效显著，近年来受到广泛关注，主要文献报道主要如下。1.对动脉粥样硬化的作用，通过对载脂蛋白E(ApoE)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块炎症反应和血脂的影响试验结果显示，桃仁能够干预ApoE基因缺陷小鼠成熟斑块的进展，有一定稳定斑块的作用(文川等，活血中药对ApoE基因缺陷小鼠血脂及动脉粥样硬化斑块炎症反应的影响.中国中西医结合杂志，2005，25(4):345349);2.对血小板聚集的作用，桃仁水煎提取物有促进纤维化的吸收和降解作用(张晓平等，山桃仁水煎提取物对肝纤维化小鼠血清I、III型前胶原的降解作用.福建中医，2002,33(8):3637);3.对心肌缺血的作用(耿涛等，桃仁提取物抗大鼠心肌缺血作用的研究.苏州大学学报(医学版)，2005，25(2):238);4.对矽肺的作用，桃仁提取物能显著抑制矽肺大鼠胶原蛋白合成和减少血清铜蓝蛋白，有延缓矽肺纤维化的作用(洪长福等.桃仁提取物对大鼠实验性矽肺纤维化的影响.劳动医学，2000，17(4):218);5.对肝脏的作用，山桃仁水煎提取物能有效地阻止血清中I、II型前胶原的沉积，从而预防肝纤维化的形成，亦能促进肝纤维化患者肝内已沉积的胶原纤维分解吸收和降解，是临床预防肝纤维化和促使肝纤维化逆转的良药(山桃仁水煎提取物对肝纤维化小鼠血清I、II型前胶原的降解作用.福建中医药，2002，33(4):36);从上述文献报道表明，桃仁及其有效成分苦杏仁苷的药理作用与血府逐瘀口服液的临床作用是相一致的。因此对血府逐瘀口服液中的苦杏仁苷进行检测和质量控制是非常必要的，在现有的血府逐瘀口服液质量标准中，包括国家食品药品监督管理局血府逐瘀口服液试行标准(YBZ1172204)和中国专利"一种血府逐瘀口服液的质量控制检测方法"(申请号200810050687.4)，均未见对桃仁中有效成分苦杏仁苷的质量控制方法。测定苦杏仁苷的方法有滴定法、分光光度法及色谱法。由于中药复方制剂所含成分极为复杂，通常采用高效液相色谱法使用紫外检测器检测进行含量测定，由于苦杏仁苷理化性质易溶于沸水、乙醇中微溶；检测波长为213nm的原因，样品中苦杏仁苷无法与中药复方制剂中其它成分分离，致使供试品中阴性液有干扰，测定结果不准确。
发明内容本发明提供一种血府逐瘀口服液的质量控制方法，采用高效液相色谱法，使用蒸发光散射检测器检测测定血府逐瘀口服液苦杏仁苷的含量，本发明包括下列步骤(a)供试品溶液制备精密量取血府逐瘀口服液1ml10ml，置1050ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；(b)色谱条件色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为1050:5090的甲醇或乙腈-水，流动相流速为0.51.2ml/min，采用蒸发光散射检测器检测，蒸发光散射检测器漂移管温度为10012(TC，雾化气体为空气或氮气，气体流速为3.0L/min;(c)对照品溶液制备取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇制成每1ml含O.mgl0.8mg的溶液，即得；(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液5iil、15iil，供试品溶液lOiU，注入液相色谱仪，使用蒸发光散射检测器检测进行含量测定，以外标二点法对数方程计算，即得。本发明的一种实施方式是，包括如下步骤(a)供试品溶液制备精密量取血府逐瘀口服液3ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；(b)色谱条件色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为25:75的甲醇_水，流动相流速为1.Oml/min，采用蒸发光散射检测器检测，蒸发光散射检测器漂移管温度为105t:，雾化气体为空气或氮气，气体流速为3.OL/min;(c)对照品溶液制备取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液5iU、151，供试品溶液101，注入液相色谱仪，使用蒸发光散射检测器检测进行含量测定，以外标二点法对数方程计算，即得。本发明采用高效液相色谱法使用蒸发光散射检测器检测时供试品中苦杏仁苷色谱峰完全达到基线分离，阴性液无干扰，且苦杏仁苷色谱峰有较高的相应信号。方法学研究表明，采用高效液相色谱法使用蒸发光散射检测器检测的方法测定本品中苦杏仁苷含量，具有较好重现性、稳定性和精密度。本发明是通过大量试验所得到的切实可行的方法，本方法具有操作简便、稳定、精密度高、重现性好、易掌握的特点，达到了有效控制药物质量的发明目的。图1为实施例的对照品色谱图，苦杏仁苷的保留时间为10.345min。图2为实施例的苦杏仁苷的供试品色谱图，苦杏仁苷的保留时间为10.437min。图3为缺苦杏仁阴性液样品HPLC图。具体实施例方式对于本领域技术人员而言，根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其它实施方案，本发明实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进，但只要使用本发明所述的质量控制方法，均在本发明的保护范围之内。实验例苦杏仁苷含量测定方法的建立仪器与试剂日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，Alltech2000ES型蒸发光散射检测器[美国奥泰科技(中国)有限公司];N2010色谱工作站(浙江大学智达信息工程有限公司)。对照品苦杏仁苷甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。样品批号血府逐瘀口服液(1)090801;(2)090802;(3)090803。方法与结果(1)线性关系精密称取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成每1ml中含苦杏仁苷0.214mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取4、8、12、16、20iil，注入高效液相色谱仪，按上述条件测定，以峰面积的自然对数为纵坐标，苦杏仁苷进样量的自然对数为横坐标，线性回归，回归方程为Y=6.2303+1.2026Xr=0.9995。绘制标准曲线，结果见表1。表1、苦杏仁苷线性关系试验结果进样量(化)自然对数-0.06750.23350.40960.53450.6314峰面积值自然对数6.14486.50916.73946.87396.9784结果表明在O.8564.28yg范围内苦杏仁苷峰面积的自然对数与进样量的自然对数具有良好的线性关系。(2)精密度试验取同一供试品溶液，连续进样5次，每次10iU，测各次峰面积，结果见表2。表2、精密度试验数据序号峰面积积分值(A)15212371.225296030.035337933.445286696.755301595.35<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>(3)稳定性试验精密吸取同一批号供试品溶液，按正文中的含量测定方法测定，每隔2小时进样一次，测定峰面积，结果见表3。表3、稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>结果供试品溶液色谱峰面积积分值在8小时内基本无变化，供试品溶液在8小时内稳定。(3)重现性试验取同一批号样品，按含量测定方法进行多次测定(n=5)，结果见表4。表4、重现性试验数据序号<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>(4)回收率试验本试验采用加样回收法，精密称取已知含量的样品5份，分别精密加入一定量苦杏仁苷对照品溶液，按含量测定法进行测定，结果见表5。表5、回收率试验数据<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>下面列举实施例进一步说明详细说明本发明，对本发明并不构成限制。实施例1:(a)供试品溶液制备精密量取血府逐瘀口服液lml，置10ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀，即得。(b)色谱条件色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为甲醇或乙腈_水(10:90)，流动相流速为1.2ml/min，采用蒸发光散射检测器检测，蒸发光散射检测器漂移管温度为115t:，雾化气体为空气或氮气，气体流速为3.OL/min。(c)对照品溶液制备取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得。(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液5iil、15iil，供试品溶液lOiU，注入液相色谱仪，使用蒸发光散射检测器检测进行含量测定，以外标二点法对数方程计算，即得。实施例2:(a)供试品溶液制备精密量取血府逐瘀口服液3ml，置25ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀，即得。(b)色谱条件色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为甲醇或乙腈_水(25:75)，流动相流速为1.0ml/min，采用蒸发光散射检测器检测，蒸发光散射检测器漂移管温度为105t:，雾化气体为空气或氮气，气体流速为3.OL/min。(c)对照品溶液制备取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得。(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液5iil、15iil，供试品溶液lOiU，注入液相色谱仪，使用蒸发光散射检测器检测进行含量测定，以外标二点法对数方程计算，即得。实施例3:(a)供试品溶液制备精密量取血府逐瘀口服液10ml，置50ml量瓶中，加甲醇或乙醇至刻度，摇匀，即得。(b)色谱条件色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为甲醇或乙腈_水(50:50)，流动相流速为0.5ml/min，采用蒸发光散射检测器检测，蒸发光散射检测器漂移管温度为IO(TC，雾化气体为空气或氮气，气体流速为3.OL/min。(c)对照品溶液制备取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇制成每lml含0.8mg的溶液，即得。(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液5iil、15iil，供试品溶液lOiU，注入液相色谱仪，使用蒸发光散射检测器检测进行含量测定，以外标二点法对数方程计算，即得。8权利要求一种血府逐瘀口服液的质量控制方法，其特征在于包括下列步骤(a)供试品溶液制备精密量取血府逐瘀口服液1ml～10ml，置10～50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；(b)色谱条件色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为10～50∶50～90的甲醇或乙腈-水，流动相流速为0.5～1.2ml/min，采用蒸发光散射检测器检测，蒸发光散射检测器漂移管温度为100～120℃，雾化气体为空气或氮气，气体流速为3.0L/min；(c)对照品溶液制备取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.mg1～0.8mg的溶液，即得；(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液5μl、15μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，使用蒸发光散射检测器检测进行含量测定，以外标二点法对数方程计算，即得。2.如权利要求1所述的血府逐瘀口服液的质量控制方法，其特征包括如下步骤(a)供试品溶液制备精密量取血府逐瘀口服液3ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；(b)色谱条件色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为25:75的甲醇-水，流动相流速为1.Oml/min，采用蒸发光散射检测器检测，蒸发光散射检测器漂移管温度为105t:，雾化气体为空气或氮气，气体流速为3.OL/min;(c)对照品溶液制备取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得；(d)测定方法分别精密吸取对照品溶液5ia、15iU，供试品溶液10iU，注入液相色谱仪，使用蒸发光散射检测器检测进行含量测定，以外标二点法对数方程计算，即得。全文摘要本发明涉及一种血府逐瘀口服液的质量控制方法，属于中药现代化领域。包括下列步骤供试品溶液制备精密量取血府逐瘀口服液，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；色谱条件色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用蒸发光散射检测器检测，对照品溶液制备取干燥至恒重的苦杏仁苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇制成溶液；测定方法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪，使用蒸发光散射检测器检测进行含量测定，以外标二点法对数方程计算，即得。本方法具有操作简便、稳定、精密度高、重现性好、易掌握的特点，达到了有效控制药物质量的发明目的。文档编号A61P9/10GK101700304SQ20091021783公开日2010年5月5日申请日期2009年11月6日优先权日2009年11月6日发明者于江波,仲崇林,王永宽,解钧秀,郭淑芹申请人:吉林敖东延边药业股份有限公司