专利名称：包含乳酸的阴道栓剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗和/或预防泌尿生殖道病症的包含惰性载体和乳酸或 其盐的阴道栓剂。还涉及了所述阴道栓剂在制备治疗和/或预防泌尿生殖道病症的药物中的应用， 以及治疗和/或预防泌尿生殖道病症的方法。
背景技术：
阴道生态系统是一个通过多种细菌之间复杂的相互作用而保持良好平衡的环境， 少数情况下也包括酵母菌，其均在阴道中自然存在。泌尿生殖感染，包括尿路感染(UTI)、细菌性阴道炎(BV)和酵母菌阴道炎，是全世 界女性的常见病症。75%以上的女性在其一生中都有过至少一次的阴道感染，并且这些女 性中的50%会复发感染。细菌性阴道炎通常显示阴道上皮细胞很少或无感染，其更像是改变阴道的细菌环 境而非对组织或上皮细胞的彻底感染。BV目前主要使用抗生素进行治疗。然而，抗生素同 时也杀死了阴道环境中存在的有益菌，例如乳酸杆菌乳酸杆菌，而这将导致阴道环境PH的 提高，并增加细菌性阴道炎复发的危险，或者增加罹患不同阴道感染的风险，例如酵母菌感^fe ο酵母菌白色念珠菌作为无害的共生生物体存在于多数人体中，但当人发生正常菌 群损失时可以导致感染，例如念珠菌病。在严重的免疫缺乏的人中，白色念珠菌可以传播至 全身并引起致命的全身感染。某些乳酸杆菌乳酸杆菌属菌种在健康的阴道生态系统中处于优势地位，它们通过 产生乳酸来保持阴道的酸性环境。酸性被认为是阴道保护机制之一。这种酸性与降低的感染风险有关，所述感染诸 如衣原体属感染、阴部支原体属感染、滴虫病、尿路感染，并且与减少细菌至开口处的运送 有关(Hanna，N 等，1985，1975，Stamey TA 和 Kaufman MF 1975，Stamey TA 和 Timothy MM 1975)。通常存在对产生乳酸盐的微生物群的有利环境是存在的，并且该环境使得粘膜分 泌物的PH接近4。然而一些因素可以打乱这种环境，例如雌激素在月经周期的某个阶段期 间及绝经期间的浓度变化，以及各种类型分泌物的增加，如来自月经出血延长、经前期血性 溢液、周期正中性出血以及精液。阴道中的外来物，如线圈、子宫托以及例如与抗生素治疗 相结合和在清洗时插入的那些也会导致健康微生物群的破坏，从而导致PH升高。当pH升 高至4. 5以上时将使厌氧菌的生长倾向增加。细菌性阴道炎表明对感染的抵抗(部分由低PH值赋予)已经降低，并且在不利情 况下，这会导致真正的感染。细菌生物群的转换与阴道内PH改变相关(Caillouette JC等，1997)。在BV期 间，观察到由占优势的乳酸杆菌乳酸杆菌属转变为其中阴道加德纳菌(G. vaginalis)和或厌氧菌占主导的生物群。在PH增加(<4. 5)时，厌氧菌的存在产生挥发性胺。酸性环境由产生乳酸的乳酸杆菌乳酸杆菌属菌群维持。为使这种乳酸的产生得以 维持，已做出几种降低PH的尝试以建立对保护不受感染所必须的有利环境。例如，EP 0 257 007涉及一种通过帮助重建乳酸杆菌乳酸杆菌的生长环境来加强 阴道粘膜的自然保护机制的药剂。该药剂含有乳酸及缓冲物质，其量足以维持PH在3. 5到 4之间。pH在4以下使得乳酸杆菌乳酸杆菌属较容易定植在阴道内，并且从而恢复对BV相 关细菌过度繁殖的自然抵抗力。EP 1 782 794涉及一种无水组合物以及保持健康的阴道pH以控制阴道气味的方 法。该组合物可应用于阴道区域以降低阴道PH，并使所述pH在一段时间内保持。WO 06/001766涉及一种用于治疗和/或预防泌尿生殖道病症的包含乳酸、乳铁蛋 白和/或其肽片段的组合物。提议加入乳铁蛋白和/或其肽片段是为了提高组合物的抗微 生物活性。已经表明，乳酸盐用于凝胶中可有效抵抗与BV相关的恶劣气味(呋喃葡烯 糖-5-半乳糖苷)。乳酸盐凝胶也已表明具有抵抗某些BV-相关细菌种类的一些抗菌作 用(参见 Andersch B 等；Treatment of Bacterial vaginosis with an Acid cream :A comparison between the effect of Lactate gel and Metronidazole (用酸乳膏治疗 细菌性阴道炎乳酸盐凝胶和甲硝唑的作用之间的比较)”GyneC0l Obstet Invest 21: 19-25，1986)。凝胶中的乳酸降低了 pH水平，并有效防止BV过程中出现的恶臭。然而，以凝胶的形式的施用常常会从阴道内的泄漏，这常常要求使用一些形式的 卫生防护。这将对患者的可接受性和治疗的顺应性有影响。因此，本领域中需要寻找一种更有效的阴道局部治疗方法，用于治疗和/或预防 细菌性阴道炎和/或真菌感染，特别是酵母菌感染。理想的是，该治疗应耐受性好、易于实 施，并且提供良好的患者可接受性。发明概述本发明的一个目的是提供一种用于治疗泌尿生殖病症的局部阴道治疗方法，该方 法有效对抗细菌性阴道炎和真菌感染，特别是由酵母菌种引起的真菌感染。该疗法在施用 时应简单、方便、舒适，并提供优异的患者可接受性。这一目的通过一种包含惰性载体和乳酸或其盐的阴道栓剂得以实现，其中所述栓 剂包含浓度为9-15重量％的乳酸或其盐。本发明人发现，具有9到15重量％的范围内的浓度的乳酸或其盐的阴道栓剂，不 仅可以减轻恶臭并在阴道中创建有利的酸性环境，而且对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌以 及酵母白色念珠菌有杀微生物作用。这不仅是由于低PH的缘故，而且在于乳酸盐分子本身 的作用。典型地，阴道栓剂中含有乳酸或其盐的浓度为11-15重量％，更加优选的是13-15 重量％。这些浓度范围已经表现出特别有效地杀死泌尿生殖道中不希望有的细菌，例如诸 如大肠杆菌、GBS以及白色念珠菌的病原体。本发明的栓剂方便地施用于阴道中，并提供良好的患者可接受性。
本发明的实施例中，所述的惰性载体包含聚乙二醇(PEG)。惰性载体能够制造栓剂，其在室温及干燥环境中相对地为固体，而在体温下和接 触体液时融化。因此，施用后活性剂即乳酸或其盐与阴道组织接触。聚乙二醇(PEG)在阴道环境中逐渐融化。在备选的实施方式中，阴道栓剂可进一步含有中和物质。这类物质用于缓冲乳酸的pH。优选地，乳酸和中和物质的含量使得维持pH介于3. 5到4. 5之间，优选地接近 3. 8。pH应该不能过低，因为酸性可能刺激阴道组织或损害益生的乳酸杆菌的环境，该乳酸 杆菌要求适中的酸性环境。合适的中和物质的例子包括氢氧化钠。另一方面，本发明涉及阴道栓剂在制备治疗和/或预防泌尿生殖道病症的药物中 的应用。该药物具有抗微生物活性。生殖泌尿道病症典型地涉及pH升高和/或微生物群紊乱。典型地，所述病症选自由细菌性阴道炎、中间阴道微生物群、以及酵母菌感染组成 的组。另一方面，本发明涉及一种用于预防和/或治疗泌尿生殖道病症的具有上述特征 的阴道栓剂。本发明进一步涉及预防和/或治疗泌尿生殖道病症的方法，包括对需要所述预防 和/或治疗的患者施用药学有效量的具有上述特征的阴道栓剂。参照下面所述的具体实施方式
和实施例本发明的这些和其它方面将变得显而易 见并被阐明。发明详述维持阴道内微生物的平衡非常重要。在阴道感染的治疗中，重建乳酸杆菌占优势 的生物群很重要。在获得本发明的研究工作中发现，当乳酸或其盐在阴道栓剂中的浓度介于5. 5-15 重量％的范围之间时，获得了令人吃惊的良好效果。本发明的阴道栓剂通过帮助重建乳酸杆菌的生长环境、降低pH，以及对多种不希 望有的微生物如白色念珠菌、大肠杆菌、金色葡萄球菌、阴道加德纳菌(G. vaginalis)以及 普氏菌属菌种发挥抗微生物活性，加强了阴道粘膜的天然保护机制。本发明的栓剂容易、方便并舒适地施用。“阴道栓剂”指阴道胚珠、阴道片剂或阴道胶囊。术语“乳酸或其盐”指栓剂可以包含乳酸或乳酸的盐，即乳酸盐。乳酸或其盐的浓度应当介于5. 5至15重量％之间，特别是9到15重量％之间。这一浓度区间杀灭多种存在于泌尿生殖道中的不希望有的细菌。如果乳酸的浓度过高，栓剂的施用对象可能经受不希望的症状，如灼烧感。乳酸或其盐的优选浓度介于11到15重量％之间，如13到15重量％。在这一浓 度区间内已经观察到诸如大肠杆菌、GBS及白色念珠菌的病原体被有效杀灭。本发明的阴道栓剂包含惰性载体。
在这里使用的术语“惰性载体”指的是使活性物质，这里指的是乳酸或其盐，与阴 道组织接触的载体。惰性载体能够制造栓剂，其在室温及干燥环境中相对地为固体，而在体温下或接 触体液时融化。可以使用具有上述特性的任何惰性载体，但是典型地可使用聚乙二醇(PEG)。本发明的实施方式中，惰性载体包括聚乙二醇600和聚乙二醇4000。PEG600与 PEG4000的比例变化，使得阴道栓剂的溶出时间发生变化。惰性载体的性质决定了阴道栓剂 在阴道中的溶出时间。本发明的阴道栓剂可以进一步包含中和物质。此处，术语“中和物质”指的是缓冲乳酸pH的物质。中和物质的例子包括氢氧化 钠和氨水。优选地，乳酸与中和物质的含量使得维持pH介于3. 5到4. 5的范围之间，优选接 近3. 8。pH应当不能过低，因为酸性可能刺激阴道组织或损害益生的乳酸杆菌的环境，所述 乳酸杆菌要求适中的酸性环境。PH介于3. 7-3. 9已经显示是特别有利的。阴道栓剂也可包含乳酸杆菌菌种的生长基质。乳酸及其盐与生长基质共同为乳酸杆菌的持续生长建立理想环境。生长基质可以是包含α (1-6)支链的α (1-4)葡聚糖。适合的生长基质的实例是 糖原，其在可生育女性的阴道上皮细胞中大量存在，是乳酸杆菌的重要营养物质。糖原被用 作乳酸杆菌的生长基质，因此治疗不仅通过供应乳酸将PH水平调低，而且再建了有益于乳 酸杆菌的生长环境，以重建自然条件。生长基质的另外实例是乳糖、右旋糖、葡萄糖和支链淀粉。乳酸以比生长基质大得多的重量比加入，如重量比为20 1到100 1，特别是 80 1。本发明的阴道栓剂也可含有增稠剂，其提供给栓剂适合的稠度用于阴道给药。还可加入本领域技术人员所熟知的其它物质，诸如佐剂、载体、防腐剂、维生素、矿 物质、雌激素等。本发明进一步涉及阴道栓剂在制备预防和/或治疗泌尿生殖道病症的药物中的 应用。还涉及了用于预防和/或治疗泌尿生殖道病症的阴道栓剂，以及预防和/或治疗泌 尿生殖道病症的方法，包括向需要所述预防和/治疗的患者施用药学有效量的具有上述特 征的阴道栓剂。“泌尿生殖道病症”指在女性和/或男性中的泌尿道或生殖器中的任何紊乱或功能 障碍。特别地，本发明适于治疗阴道中的病症。“预防和/或治疗病症”指为治愈或缓解上述病症，或预防所述病症发生的治疗。“药学有效量”指将导致所需的药理学和/或治疗效果的根据本发明的栓剂的量。 如上所述，所需的药理学和/或治疗效果是治愈或缓解和/或预防泌尿生殖道病症的发生。“患者”指的是需要使用本发明的阴道栓剂和/或方法治疗的任何人类或非人类哺 乳动物，雌性或雄性。阴道栓剂具有抗微生物活性。在乳酸盐浓度处于5. 5到15重量％之间，特别是 处于9%到15重量％之间时，观察到很好的抗微生物活性。抗微生物活性与乳酸或其盐相关。栓剂中的乳酸盐不仅降低了阴道PH以建立有利于乳酸杆菌的环境，而且其本身也是抗 微生物剂。“抗微生物活性”指抑制细菌、抑制真菌、杀细菌和/或杀真菌的活性，即分别能阻 碍某些细菌和真菌生长或杀灭某些细菌和真菌的能力。根据本发明治疗的病症可以涉及泌尿生殖道内的pH升高和/或微生物群紊乱。 “PH升高”指？!1高于4.5。“微生物群紊乱”是指含有异常高水平的BV-相关细菌的生物群，所述细菌诸如阴 道加德纳菌、厌氧革兰氏阴性菌(普氏菌属、拟杆菌属以及梭菌属)、厌氧革兰氏阳性球菌、 活动弯曲杆菌属，和/或异常高水平的大肠杆菌、葡萄球菌(金黄色葡萄球菌)以及链球菌 属，所有这些均与异常低水平的乳酸杆菌属组合。可能会导致阴道炎的高水平的念珠菌属 也被看做紊乱的阴道微生物群。“异常高水平”是指高于正常人体水平100到1000倍的水平。“异常低水平”是指不占主导地位，即每一显微镜浸没视野不存在或少于一个乳酸 杆菌形态型，或每一浸没视野少于或等于其它形态型(根据“Nugent评分系统”，国际上用 于描述阴道分泌物中的细菌失衡，参见Nugent RP等，1991，J Clin Microbiol (临床微生 物学杂志)29 :297-301.)。用本发明阴道栓剂治疗的病症实例是细菌性阴道炎、中间阴道微生物群以及酵母 菌感染，如念珠菌-感染(念珠菌阴道炎、念珠菌性龟头炎)。进一步地，本发明的阴道栓剂可以用于治疗衣原体属、阴部支原体属、滴虫病、泌 尿道感染、盆腔炎性疾病、HIV、淋球菌以及由人乳头状瘤病毒(HPV)引起的感染。再者，上 述病症的任意组合可以用本发明的阴道栓剂治疗。本发明的阴道栓剂也可以用于例如真菌性湿疹、溃疡性乳头的治疗，用于针对性 传播疾病的预防剂，或用作助滑剂。此外，可以将本发明的阴道栓剂与泌尿生殖道病症的其它常规药理学治疗方法相 结合，例如采用抗生素和/或抗真菌剂诸如咪唑类制剂的治疗。本发明阴道栓剂的具体实例列在下述的示例性组合物中表1.本发明的阴道栓剂组分乳酸0. 250gNaOH0. 022g糖原0. 003gPEG 40000. 950gPEG 6000. 650g总质量1. 875g
实施例实施例1 乳酸盐的抗微牛物活件细菌种属大肠杆菌06K5 (尿道感染病原体)、B组链球菌株(GBQ CCUG 49086、以及白色念 珠菌ATCC 64549.微生物在BHI培养基中孵育过夜。之后将混悬液转移至新试管中，并在 37 °C 孵育 2. 5h。洗涤细胞并将其混悬在稀释的BHI中(1/100，BHIdil)。混悬液于590nm下以分光 光度计测量，并且根据标准曲线调整微生物浓度。细菌混悬液调整至每毫升2X IO8CFU,白 色念珠菌调整至IX IO6。乳酸盐栓剂一个乳酸盐栓剂溶解于0. 5ml蒸馏水中。得到11. 5%乳酸盐溶液。该溶液用于杀 微生物测定中。乳酸盐的最小杀微生物浓度乳酸盐溶液在试管中用BHIdil以双倍量连续稀释(每试管100 μ 1)。细菌和酵母 细胞溶液加入体积为 ο μ 1以达到最终浓度分别接近每毫升2 X IO7和IX IO5个细胞。试 管在振动器上37°C孵育2.证。从每个试管中取出5 μ 1滴加入到血液琼脂平板中(一式三 份)，并在37°C孵育过夜。杀灭力用与种菌相关的剩余菌落形成单位(CFU)表示。微生物 的检测低限为200CFU/ml。试管中剩余微生物的存活能力通过用生长培养基将剩余溶液稀 释至1/5，以致乳酸盐溶液的浓度为2. 3%或更低，并使试管在37°C孵育过夜来检测。第二 天，再取出5μ 1溶液滴加入血液琼脂平板中，并在37°C孵育过夜。表2.乳酸盐对大肠杆菌、GBS以及白色念珠菌的杀微生物作用病原体残存活力 乳酸盐浓度，％11.55.82.91.40.70.350大肠杆 菌000000+*GBS00+++++白色念 珠菌00.6 士 0.4 口+++++#没有可辩识的菌落(〉50 0 11/区域=〉1040 1；每毫升) α种菌的百分数结果孵育2. 5h后，乳酸盐浓度为5. 8%和11. 5%时，GBS的杀灭率为100%。乳酸盐浓度11. 5%时对白色念珠菌杀灭率为100%，浓度为5. 8%时，杀灭率为 99. 4%。相比来说，即使测试乳酸盐的最低浓度(0. 35% )对大肠杆菌的杀灭率也为100%。
加入生长培养基孵育过夜的试管产生的模式与对孵育2. 5h所述的的相同。乳酸盐与HCL在相同pH下的杀真菌作用的对比结果显示，乳酸盐杀灭白色念珠菌 能力远远高于HCL (
图1)。结论乳酸盐浓度彡5. 8%将有效杀灭潜在病原体诸如大肠杆菌、GBS以及白色念珠菌。杀微生物活性不仅归因于低pH，而且归因于乳酸盐分子本身。 _4] _仿丨丨2删i式骀本研究的目的限于证明乳酸对于两种微生物菌株白色念珠菌及大肠埃希杆菌的 抗微生物作用，并评价当浓度升高至14-15%时的作用。调整pH至3.8，温度至35-37°〇以 模拟阴道环境的条件。试验目的是将用于受试菌株的激发物与不同浓度乳酸盐加入到容器 中，并在孵箱中于35-37°C孵育。以规定时间间隔取样并对存活的微生物计数。除了受试溶 液外，平行使用对照组。两个菌株容器中用0. 9% NaCl接种至同样的水平，并以规定的间隔 测试。对照的目的是证实菌株在整个试验中是存活的。第二个对照组仅用于念珠菌属，其 中HCL溶液用NaOH调节pH至3. 8，在各种情况下孵育并测试。两个菌株的暴露时间由对白 色念珠菌在8%乳酸中进行的预试验，和此实验室以前使用乳酸盐进行的先前试验(其中 大肠杆菌在2. 5和5%乳酸中测试)来估算。研究概述培养及溶液选择白色念珠菌ATCC 64549及大肠杆菌ATCC 8739代表酵母菌感染及细菌性阴 道炎中通常分离的菌株。菌株分别接种在萨布罗右旋糖琼脂(SDA)及大豆胰蛋白胨琼脂 (TSA)中，在35-37°C温育18-24h。收集表面的生长、清洗并将混悬液稀释至指定的光学密 度。通过测量MOnm下的吸光度确定滴度。来自 Purac BiochemL(+)-乳酸由 Kullgren Pharm, Gnesta, Sweden 以 90%浓缩 液提供。将该浓缩液稀释至5^^8^^14. 5% v/v，加入NaOH调整pH至3. 8，无菌过滤并加 入到测试容器中。其它容器中包含对照液、PH7的无菌0. 9% NaCl以及pH3. 8的HCL。然 后，将溶液在温箱中预处理至35-37°C，然后加入到激发物中并开始暴露。暴露试验容器中用每毫升加入IO5-IO6个细胞激发，并开始温育。对于大肠杆菌测试样品， 于0、10、20、60和240分钟时取样。对于白色念珠菌样品，于0、6和24h取样。根据具体方 案进行稀释，将样品从测试容器中吸出并经0. 45 μ m滤器过滤。滤器用3份IOOml的0. 9% NaCl清洗，并分别加入琼脂平板、TSA和SDA中。全过程使用同一样品。方法验证由于预测验的方法验证结果表明，浓度至多为8%的乳酸的等份试样可以如所述 的那样被过滤和清洗，不会抑制在板式过滤器上的生长，因此决定与该测试直接平行地使 用两种菌株采用最高浓度14. 5%进行此验证。为此，过滤浓度为14. 5%、pH为3. 8的乳酸 无菌样品，清洗滤器，并且在最终清洗液中包含10-100CFU的测试菌株。平行地对未经乳酸 盐处理的第二个滤器清洗、接种平板，并将两个平板温育。对于被验证的方法，两个平板上 得到的CFU数应必需在50-200%之间。对两个菌株重复此试验。两个菌株的结果均满足可 接受的标准(没有列出数据)。
结果及讨论表3和表4列出了结果。大肠杆菌迅速灭活，并且暴露10分钟后没有存活菌(见 表3)。在时间0时(指的是暴露时间为1-2分钟)，同时样品被取出并测试，对于5%的样 品，从4.5X105(如对照中所见)减少至1.3\103，等于2.61(11呢。14. 5%的浓度在0时间 样品中没有存活菌。对照组证实了激发生物体在中性环境中可以存活。表3 大肠杆菌在乳酸中的存活(结果以CFU/ml表示)
权利要求
1.一种用于治疗和/或预防泌尿生殖道病症的包含惰性载体、乳酸或其盐的阴道栓 剂，其特征是所述栓剂中包含的乳酸或其盐的浓度为9-15重量％。
2.根据权利要求1所述的阴道栓剂，其中所述栓剂中包含的乳酸或其盐的浓度为 11-15 重量 ％。
3.根据权利要求1或2所述的阴道栓剂，其中所述栓剂中包含的乳酸或其盐的浓度为 13-15 重量 ％。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的阴道栓剂，其中所述惰性载体包含聚乙二醇 (PEG)。
5.根据前述任一项权利要求所述的阴道栓剂，进一步包含中和物质。
6.根据权利要求5所述的阴道栓剂，其中乳酸和中和物质的含量使pH维持在3.5到 4.5的范围内。
7.根据权利要求5或6所述的阴道栓剂，其中所述中和物质为氢氧化钠。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的阴道栓剂在制备预防和/或治疗泌尿生殖道病症 的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其中所述药物具有抗微生物活性。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其中所述病症涉及泌尿生殖道中的pH升高和/ 或微生物群紊乱。
11.根据权利要求8-10中任一项所述的应用，其中所述病症选自由细菌性阴道炎、中 间阴道微生物群、以及酵母菌感染组成的组。
12.根据权利要求1-7中任一项所述的用于预防和/或治疗泌尿生殖道病症的阴道栓剂。
13.根据权利要求12所述的阴道栓剂，其中所述栓剂具有抗微生物活性。
14.根据权利要求12或13所述的阴道栓剂，其中所述病症包括泌尿生殖道中的pH升 高和/或微生物群紊乱。
15.根据权利要求12-14中任一项所述的阴道栓剂，其中所述病症选自由细菌性阴道 炎、中间阴道微生物群、以及酵母菌感染组成的组的组。
16.一种预防和/或治疗泌尿生殖道病症的方法，包括向需要所述预防和/或治疗的患 者施用药学有效量的根据权利要求1-7中任一项所述的阴道栓剂。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述病症涉及泌尿生殖道中的pH升高和/或微 生物群紊乱。
18.根据权利要求16-17中任一项所述的方法，其中所述病症选自由细菌性阴道炎、中 间阴道微生物群、以及酵母菌感染组成的组。
全文摘要
本发明涉及一种用于治疗和/或预防泌尿生殖道病症的包含惰性载体和乳酸或其盐的阴道栓剂。还涉及所述阴道栓剂在制备治疗和/或预防泌尿生殖道病症的药物中的应用，以及治疗和/或预防泌尿生殖道病症的方法。
文档编号A61K9/02GK102046148SQ200980119860
公开日2011年5月4日 申请日期2009年6月3日 优先权日2008年6月4日
发明者比约恩·安德希 申请人:罗夫库尔格伦公司