己酮可可碱在制备预防或治疗功能性便秘的药物中的用途的制作方法

专利名称：己酮可可碱在制备预防或治疗功能性便秘的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，具体涉及己酮可可碱的一种新用途，特别涉及己酮可可碱 在制备预防或治疗功能性便秘的药物中的用途。
背景技术：
磷酸二酯酶(PDE)具有水解细胞内第二信使环磷酸腺苷(cAMP)或环磷酸鸟苷 (cGMP)的功能，降解细胞内cAMP或cGMP，从而终结这些第二信使所传导的生化作用。cAMP 和cGMP对于细胞活动起着重要的调节作用。而其浓度的调节主要由核苷酸环化酶的合成 和磷酸二酯酶(PDE)水解作用之间的平衡决定。PDE在人体内分布广泛，生理作用涉及多个 研究领域。近年来，PDE作为新的治疗靶点，引起了众多学者广泛的关注，成为一个新的研
究热点。磷酸二酯酶抑制剂是一个多基因大家族，是抑制磷酸二酯酶活性的药物。磷酸二 酯酶抑制剂是可以抑制组织中cAMP和cGMP降解的化合物，PDE抑制剂包括非特异性PDE抑 制剂和特异性PDE抑制剂，特异性PDE抑制剂仅能够抑制一种类型的PDE，对其他类型则几 乎没有作用。非特异性磷酸二酯酶(PDE)抑制剂包括茶碱、氨茶碱、己酮可可碱、帕吉维林 和咖啡因等。茶碱是茶中所含的白色不定形的结晶状生物碱，为可可碱的异构体，作用和结构 都类似咖啡碱。属于磷酸二酯酶，能使细胞cAMP含量提高，具有松弛平滑肌、兴奋心脏肌以 及利尿的作用。氨茶碱是国内应用最广泛的茶碱与乙二胺的复盐制剂，临床上已经使用多 年。氨茶碱比茶碱水溶性高，易于溶解和吸收。但氨茶碱碱性较高，局部刺激性大，口服易 致恶心、呕吐、食欲下降等胃肠道反应。帕吉维林是一种骨骼肌松弛药。咖啡因是从茶叶、 咖啡果中提炼出来的一种生物碱，适度地使用有祛除疲劳、兴奋神经的作用，临床上用于治 疗神经衰弱和昏迷复苏。己酮可可碱是从可可豆中提取的可可豆碱、再引入已酮基而得到的一种生物碱， 分子式为C13H2tlN4O3,化学名称为3，7- 二甲基黄嘌呤，是甲基黄嘌呤衍生物，是一种非选择 性磷酸二酯酶抑制剂。PTX可增加红细胞的变形性，改善白细胞的血流变特征，抑制嗜中性 粒细胞的黏附和激活；扩张微血管；降低血液粘滞度；增加组织氧分压；有抗炎作用；可消 除自由基。60年代，PTX仅用于末梢循环障碍的治疗；后作为一种血管扩张药，被用于治疗 血管性疾病，已有10余年的历史；还用于动脉硬化、血管栓塞、糖尿病性血管病变、冻疮、静 脉溃疡等外周血管疾病的治疗。70年代，开始用于男性不育，体外刺激精子活力的治疗，疗 效显著。此外，对内耳循环障碍性疾病有效，可抗肝纤维化，对肾、肺等有保护作用。PTX在 小肠内吸收良好，其在血浆中的半衰期为30min ；主要在肝脏中去甲基及氧化代谢，主要以 3-甲基嘌呤及7-甲基嘌呤两种形式排出。慢性便秘是一种常见的症状，其病因复杂，给患者带来许多苦恼，严重影响患者的 生活质量。随着社会发展，生存压力增加、竞争激烈，以及饮食结构等生活习惯的改变，便秘 的发生率成上升趋势。
国际上有关功能性胃肠病，包括便秘，在诊断、病理生理学以及治疗方面于1994 年推出了罗马I标准，2000年推出了罗马II标准。国际上对便秘的概念以罗马II标准为 通用标准。即便秘是指粪便干结、排便困难或排便不尽感和排便次数减少。从病因学上慢性便秘可以分为器质性便秘和功能性便秘。器质性便秘主要是由于 器质性病因引起的便秘，慢性便秘的器质性病因主要有胃肠道疾病(肠道肿瘤、先天性巨 结肠等)、肛周疾病(直肠脱垂、直肠前突)、神经系统疾病(多发性硬化、帕金森病、脑卒 中、脊髓损伤及周围神经病变)、内分泌或代谢性疾病(糖尿病肠病、甲状腺功能低下、甲状 旁腺疾病)和精神病，同时还应排除药物性因素(阿片类药物、抗胆碱药、抗抑郁药、钙通道 拮抗剂、抗酸剂、铁剂、抗腹泻药、利尿剂、抗组胺药等)引起的便秘。功能性便秘是排除器质性病因及其他因素导致的便秘，并符合以下标准在过去 的12个月中，持续或累积至少12周有以下两个或两个以上症状(1) 1/4时间排便费力； ⑵1/4时间粪便是呈团块状或坚硬；(3)大于1/4时间排便不尽感；⑷大于1/4时间肛门 有阻塞感或排出困难；(5)大于1/4时间排便时需用物协助(支持盆底肌阻碍)；(6)每周 排便小于3次。根据排便困难发生部位和动力障碍，功能性便秘一般分为三种类型慢传输 型便秘(STC)、出口梗阻型便秘(OOC)和混合型便秘(MIX)。STC是功能性便秘的常见的类 型，约占40%，而OOC则在多发生在儿童、妇女和老年人。STC与结肠运动障碍有关，在曼谷 胃肠动力疾病新分类中，明确肠神经病、肠肌病、帕金森病、内分泌疾病或脊髓损伤等可导 致结肠传输延迟，成为STC。慢传输型便秘患者肠道Cajal间质细胞(ICC)数量减少、体积 缩小，故可认为ICC减少是慢传输型便秘肠道组织细胞学的主要特点。c-kit为一种原癌基 因，位于5号染色体w位点上，它编码kit受体，后者属酪氨酸激酶膜受体。在ICC表达均 表达c-kit，并且ICC能过kit受体接受各种信号，如果阻断kit受体，不但ICC发育受到影 响，而且其功能也将丧失，故ICC有无c-kit表达与肠道动力密切相关，因此可以利用c-kit 抗体标记识别ICC。OOC则与肛门括约肌功能协调或直肠对排便反射感阈值异常有关，患者 常主诉排便费力、肛门下坠感、排便不尽感、排便量少、质地较硬或成形软便。混合型便秘是 具备上述两个特点。由于各种类型便秘发病机制不同，所以应重视和详细分析患者对便秘 的自身感受特点，初步进行分型，采取相应治疗措施。功能性便秘特殊的病变部位和发病机制使临床治疗非常困难，目前常用的便秘治 疗药物疗效不理想或治疗时间过长，或无效，或排出少量稀便，或不良反应大以致患者难 以接受。目前临床上采用非药物治疗和药物治疗，严重者甚至需要进行外科手术治疗。采用非药物治疗，如排便方式的指导、饮食等生活习惯的改变和生物反馈治疗等， 大都需要经过较长的时间才能够缓解，很多患者因个人因素难以坚持下去。治疗便秘的主要药物有刺激性泻药、润滑性泻药、容积性泻药以及渗透性缓泻剂 和促动力药物等。刺激性泻药作用强而迅速，多用于大便嵌塞和需迅速通便患者，不宜长期 应用，因其刺激肠黏膜和肠壁神经丛，提高黏膜通透性，影响了肠内水、电解质和维生素吸 收以至紊乱，还可致大肠肌无力，形成用药依赖性和大便失禁；容积性泻药可以增加大便的 容量，但不能有效地增加结肠张力，肠道运动迟缓者使用受限；润滑性泻药口感差，作用弱， 长时间使用可以引起脂溶性维生素吸收障碍、肛周油质渗漏等不良反应；渗透性缓泻剂例 如乳果糖，不在小肠内吸收，他们通过结肠细菌分解并释放有机酸而在结肠内产生作用，存 在腹胀或腹痛以及长期应用疗效差和易引起肠道菌群改变等缺点；而肠动力药物常常需要联合其他药物使用，副作用也较大。对于占功能性便秘50%以上的出口梗阻型便秘，肛门内外括约肌的持续痉挛和压 力升高是其主要的病理生理改变之一。目前主要是采取手术、生物反馈等治疗方法对其进 行治疗，通过降低肛门括约肌的压力，从而缓解其肛直肠出口的梗阻症状。治疗手段虽多， 但疗效却不能令人满意。手术治疗时间长、创伤大，且可能出现肛门失禁、复发等并发症。而 生物反馈治疗常需长期、反复治疗，疗效不确定。近年来，人们开始考虑使用各种药物降低 肛门括约肌的压力，从而达到治疗出口梗阻型便秘的效果。

发明内容
本发明提供了己酮可可碱在医药领域的一种新的用途，具体涉及己酮可可碱在制 备预防或治疗功能性便秘的药物中的应用。己酮可可碱作为一种非选择性磷酸二酯酶抑制 剂，主要用于血栓闭塞性脉管炎、脑血管障碍、血管性头痛、末梢血管病、耳蜗扰乱症、冻疮 及缺氧所产生的痛症。虽然己酮可可碱在临床上使用会引起便秘、口干等不良反应，但是 经过试验研究，发明人惊奇地发现己酮可可碱在治疗功能性便秘方面表现出预料不到的效^ ο现有技术没有对己酮可可碱在治疗功能性便秘上的研究，本发明通过试验研究惊 奇地发现己酮可可碱在改善功能性便秘方面具有预料不到的效果。表明己酮可可碱可以作 为治疗功能性便秘的药物使用。由于临床上对于功能性便秘的治疗尚无理想的药物，本发明提供了治疗功能性便 秘的药物组合物，它由己酮可可碱和赋形剂组成。己酮可可碱和赋形剂可以根据常规制剂 技术制备成局部外用制剂或口服制剂，其中局部外用制剂优选适合肛门直肠给药的局部外 用制剂，比如喷雾剂、气雾齐 、栓齐 、凝胶剂、乳膏齐 、霜齐 、软膏齐 、溶液齐 、乳胶剂和脂质体 制剂；口服剂型优选片剂、肠溶衣片、胶囊、滴丸、颗粒剂、散剂和口服液。上述药物组合物局部外用制剂中的赋形剂选自半合成脂肪酸甘油脂、卡波姆、三 乙醇胺、十二烷基硫酸钠、液体石蜡、单硝酸甘油脂、对羟基苯甲酸、动植物油、凡士林、纤维 素衍生物、聚乙二醇、硅酮、硅酸、硬脂酸铝、丙二醇、羊毛脂、蜂蜡、滑石粉和氧化锌中的一 种或多种；喷雾剂赋形剂选自乳糖、滑石粉、丙三醇、氯化钠和尿素中的一种或多种，还可以 含有常用的推进剂，例如氯氟烃和/或挥发性非取代烃，挥发性非取代烃优选丁烷和丙烷。 外用搽剂或滴剂可用水性或油性基质来配制，可以按照常规制备方法进行制备。上述药物组合物局部外用制剂的赋形剂中还可以包含一种或多种防腐剂，例如醋 酸洗必泰和苯扎溴铵等；外用制剂可在无菌条件下将己酮可可碱与赋形剂混合，优选地，它 还含有推进剂。上述药物组合物局部外用制剂优选透黏膜药物剂型，它可用黏膜粘附性聚合物来 配制，从而延缓有效成分在肛门黏膜内的释放。透黏膜药物剂型可与黏膜保持接触，同时迅 速崩解和/或溶解，从而引起局部性或全身性的吸收。透黏膜药物传递可使活性物质有效 进入全身循环，并减少肝和小肠壁菌群对药物的立即代谢。本发明还对己酮可可碱在局部外用制剂中的重量百分含量进行了优选。优选地， 己酮可可碱在局部外用制剂中的重量百分含量为0. 1% -10%。上述药物组合物口服制剂中的赋形剂可以选自稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种；其中稀释剂选自淀粉、糊精、乳糖和微晶纤维素中的一种或多种； 润湿剂和粘合剂选自水、乙醇、羟丙基甲纤维素、乙基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮中的一种或 多种；崩解剂选自羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠和交联聚维酮 中的一种或多种；润滑剂选自硬脂酸镁、硬脂酸锌和微粉硅胶中一种或多种。上述口服制剂 均按照常规制剂技术进行制备，比如干法制粒、湿法制粒等。本发明还提供了将上述药物组合物应用到功能性便秘的治疗方法。可以给与患者 口服上述有效量的药物组合物，或者向患者的相应直肠肛门区或患病肛门组织，例如外肛 或内肛组织或肛道给予有效量的上述各种药物组合物。本发明优选向功能性便秘患者的直 肠肛门区直接给与有效量的上述药物组合物，即优选己酮可可碱的局部外用制剂，包括栓 剂、气雾剂和软膏剂等。局部外用制剂在给药之前，应当将肛门区清洗干净，这样将利于药 物在直肠黏膜的吸收。己酮可可碱治疗功能性便秘的对象包括人或动物。己酮可可碱的具体剂量取决于 许多因素，这些都是本领域技术人员所熟知的。例如具体的药物剂型，所治疗对象、病情、年 龄、体重和接受者的临床情况。给药剂量的范围根据所用的己酮可可碱、给药途径等存在下 列不同(1)成年人，口服制剂包括片剂、胶囊、肠溶衣片、滴剂、颗粒剂、散剂、口服溶液，按 照己酮可可碱的量计，口服剂量为0. 05g-0. 60g/次，每日1-3次；局部外用制剂包括喷雾 齐U、栓剂、凝胶剂、乳膏剂、霜剂、软膏剂、溶液剂、乳胶剂和脂质体制剂，按照己酮可可碱的 量计，外用剂量同口服制剂。用药时间具体根据临床症状及其症状的缓解程度而定。(2)儿童，口服制剂包括片剂、胶囊、肠溶衣片、滴剂、颗粒剂、散剂、口服溶液，按照 己酮可可碱的量计，口服剂量为0. 01-0. 30g/次，每日1-3次；局部外用制剂包括喷雾剂、栓 齐U、凝胶剂、乳膏剂、霜剂、软膏剂、溶液剂、乳胶剂和脂质体制剂，按照己酮可可碱的量计， 外用剂量同口服制剂。用药时间具体根据临床症状及其症状的缓解程度而定。(3)3岁以下的幼儿，动物包括猪、狗、羊、牛、虎等，口服制剂或局部外用制剂的有 效剂量可以按照儿童用药量进行适当的调整，这对于本领域的技术人员来说是容易做到 的。本发明还提供了将上述含有己酮可可碱的药物组合物治疗功能性便秘的试验研 究。本发明通过实施例11小鼠皮下注射吗啡诱导建立了慢传输型便秘小鼠模型，记录小鼠 粪便重量，利用活性炭灌胃法试验比较实验组与对照组小鼠结肠传输功能；利用免疫组化 技术计算c-kit阳性细胞面积比较两组小鼠结肠组织中Cajal细胞(ICC)数量。给药后， 模型对照组小鼠粪便减少，肠道推进力减弱(首粒黑便排出时间延长)，肠道ICC数量减少 (c-kit阳性细胞面积减小)，与正常组差异显著。给药非选择性磷酸二酯酶抑制剂己酮可 可碱、茶碱、氨茶碱、咖啡因、帕吉维林后，结果发现己酮可可碱治疗组(包括片剂组和栓剂 组)小鼠日均排便量增加，小鼠肠道推进力增强，肠道ICC数量增加。研究表明，己酮可可 碱在改善慢传输型便秘的症状方面具有预料不到的效果，其它非选择性磷酸二酯酶抑制剂 如茶碱、氨茶碱、咖啡因、帕吉维林在治疗功能性便秘时效果远远不如己酮可可碱。另外，本 发明还惊奇地发现，与己酮可可碱片剂组相比，己酮可可碱栓剂组小鼠日均排便量、首粒黑 便排出时间以及c-kit阳性细胞面积均具有显著性差异(ρ < 0. 05)，这表明己酮可可碱直 肠黏膜直接给药治疗慢传输型小鼠便秘的效果还优于己酮可可碱口服给药。
本发明还通过实施例13己酮可可碱对洛哌丁胺诱导的便秘大鼠直肠黏膜黏液的 影响，表明洛哌丁胺诱导的便秘大鼠肠黏膜上皮黏液较正常大鼠明显减少，给药己酮可可 碱后大鼠肠黏膜上皮黏液明显增多，且具有显著性差异；并且与己酮可可碱灌胃组相比，己 酮可可碱外用组大鼠肠黏膜上皮黏液明显增多，且具有显著性差异(P < 0.05)，这表明直 肠给药对于增强肠黏膜功能效果更加明显。对于占功能性便秘50%以上的出口梗阻型便秘，肛门内外括约肌的持续痉挛和压 力升高是其主要的病理生理改变之一。本发明通过实施例12研究表明，己酮可可碱治疗组 的肛直肠静息压、最大自主收缩压和直肠肛门抑制反射值明显下降，说明其有效地降低了 肛门括约肌的肌张力，达到了松弛肛门括约肌的效果。病理组织学切片观察发现，己酮可 可碱治疗组的肛门括约肌纤维有一定程度的萎缩。己酮可可碱能有效降低肛门括约肌的压 力，为临床治疗慢性出口梗阻型便秘提供了新的方法和思路，值得进一步研究。正常结肠黏膜杯状细胞的分泌液富含黏蛋白，黏蛋白与水结合形成黏液，构成黏 液保障，对黏膜起到机械性保护作用。黏液分泌的减少是结肠功能衰弱的表现，或固水能力 减少，或细胞黏蛋白分泌减少。本发明通过给药己酮可可碱，惊奇地发现己酮可可碱在改善 结肠功能，增加肠黏膜黏液正常分泌方面具有意想不到的效果。可见，己酮可可碱治疗功能 性便秘，不仅仅在改善功能性便秘症状上，并且能显著改善肠黏膜的功能，从而有可能实现 功能性便秘的显著改善。
具体实施例方式以下通过实施例进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。(一 )己酮可可碱的药物制剂部分实施例1栓剂的制备己酮可可碱45g聚山梨酯805g甘油3000g明胶900g纯化水加至4500g制备工艺称取处方量的明胶，置器皿中加入适量的纯化水，放置Ih左右，使其溶胀变软，然 后加入处方量甘油后置水浴上加热，使明胶溶解，继续加热并搅拌；取已酮可可碱、聚山梨 酯80混勻后加入已制好的甘油明胶溶液中，搅拌均勻后，趁热灌入已涂好润滑剂的栓模 中，冷却，削去模口上溢出的部分，脱模，质检、包装，共制100粒。实施例2栓剂的制备己酮可可碱50半合成脂肪酸甘油脂4500g甘油400g聚山梨酯8050g制备工艺 取半合成脂肪酸甘油脂置器皿中，水浴加热融化，待温度降至50°C左右，加入甘油、聚山梨酯80，搅拌均勻，加入己酮可可碱，搅拌均勻，搅勻后注入涂有润滑剂的栓模中至 稍溢出模口为度，冷却，凝固后削去溢出部分，脱模，质检，包装，共制100粒。
实施例3栓剂的制备制备工艺取聚乙二醇4000和聚乙二醇1000置器皿中，水浴加热融化，待温度降至50°C左 右，加入甘油，搅拌均勻，加入己酮可可碱，搅拌均勻，搅勻后注入涂有润滑剂的栓模中至稍 溢出模□为度，冷却，凝固后削去溢出部分，脱模，质检，包装，共制100粒。实施例4栓剂的制备己酮可可碱500g聚乙二醇40002250g聚乙二醇10002200g甘油50g制备工艺取聚乙二醇4000和聚乙二醇1000置器皿中，水浴加热融化，待温度降至50°C左 右，加入甘油，搅拌均勻，加入己酮可可碱，搅拌均勻，搅勻后注入涂有润滑剂的栓模中至稍 溢出模□为度，冷却，凝固后削去溢出部分，脱模，质检，包装，共制1000粒。实施例5凝胶剂的制备己酮可可碱IOg卡波姆IOg丙二醇60ml甘油50ml三乙醇胺适量纯化水加至IOOOg制备工艺将卡波姆缓慢加入到处方量50%左右的水中，边加边搅拌直至形成透明的凝胶基 质，将己酮可可碱溶于适量水中，再加入基质中，搅拌均勻，加入丙二醇、甘油、纯化水至全 量，三乙醇胺调节PH值至中性，即得。实施例6乳膏剂的制备己酮可可碱20g单硬脂酸甘油酯48g硬脂酸120g白凡士林IOOg三乙醇胺15g尼泊金乙脂3g十二烷基硫酸钠12g己酮可可碱聚乙二醇4000聚乙二醇1000甘油
50g 2450g 2450g 50g
甘油18g纯化水加至1OOOg制备工艺按处方量取单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林、三乙醇胺水浴加热至熔化，混勻， 作为油相。另外取适量的纯化水，将己酮可可碱溶解到水中。取甘油、十二烷基硫酸钠、纯化水、尼泊金乙脂混合加热至80°C左右，作为水相。待 油相温度为80°C左右时，搅拌下将己酮可可碱溶液加入其中，并使温度保持在80°C左右。 将搅拌均勻后的油相，在慢速搅拌下，缓缓加入水相中，后加速搅拌30min，停止搅拌，即得乳膏。实施例7软膏剂的制备己酮可可碱 10g单硬脂酸甘油酯100g石蜡100g白凡士林46g液体石蜡53g丙二醇 50g司盘5g对羟基苯甲酸乙酯 1g纯化水加至1000g制备工艺取石蜡、单硬脂酸甘油酯、白凡士林、液状石蜡、丙二醇、司盘80和对羟基苯甲酸 乙酯于水浴上加热熔化并保持80°C，搅拌下缓慢加入80°C的水，边加边搅拌至冷凝，即软 膏基质。取己酮可可碱溶于适量的纯化水中，加入到基质中，最后加水至lOOOg，搅拌均勻， 即得。实施例8片剂的制备己酮可可碱IOg微晶纤维素200g羧甲基淀粉钠8g硬脂酸镁1.5g8%淀粉浆适量制备工艺将己酮可可碱和辅料微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合均勻，加入适量的淀粉浆制 软材，然过16目筛制粒。湿颗粒在60°C干燥，干颗粒过16目筛整粒，筛出干粒中的细粉，与 硬脂酸镁混勻，然后再与干颗粒混勻，压片，即得。实施例9喷雾剂
己酮可可碱IOg
蒸馏水适量
甘油30g
尿素2g
苯扎溴铵0. 1g氯化钠0. 9g蒸馏水加至1OOml制备工艺在常温常压下，称量己酮可可碱10g，溶于适量的蒸馏水中，再按照处方中各组分 的配比分别加入其中，即甘油30g，尿素2g，苯扎溴铵0. Ig,氯化钠0. 9g，最后加蒸馏水至 1OOml，充分混勻，罐装，封口，检验得成品。实施例10气雾剂
己酮可可碱1Og
蒸馏水适量
甘油5g
尿素2g
苯扎溴铵0.1g
氟里昂F12适量
蒸馏水加至1OOml
制备工艺
在常温常压下，称量己酮可可碱10g，溶于适量的蒸馏水中，再按照处方中各组分的配比分别加入其中，即甘油10g，尿素2g，苯扎溴铵0. Ig,适量抛射剂F12，最后加蒸馏水至IOOml，充分混勻，罐装，封口，检验得成品。
对照例1茶碱片剂
茶碱1Og
微晶纤维素200g
羧甲基淀粉钠8g
硬脂酸镁1.5g
8%淀粉浆适量
制备工艺
将茶碱和辅料微晶I纤维素、羧甲基淀粉钠混合均勻，加入适量的淀粉浆制软材，然
过16目筛制粒。湿颗粒在60°C干燥，干颗粒过16目筛整粒，筛出干粒中的细粉，与硬脂酸 镁混勻，然后再与干颗粒混勻，压片，即得。对照例2氨茶碱片剂
氨茶碱1Og
微晶纤维素200g
羧甲基淀粉钠8g
硬脂酸镁1.5g
8%淀粉浆适量
制备工艺同对照例1。
对照例3咖啡因片剂
咖啡因1Og
微晶纤维素200g
羧甲基淀粉钠 8g硬脂酸镁1.5g8%淀粉浆适量制备工艺同对照例1。对照例4帕吉维林片剂帕吉维林IOg微晶纤维素200g羧甲基淀粉钠8g硬脂酸镁1.5g8%淀粉浆适量制备工艺同对照例1。( 二 )己酮可可碱的药效学研究实施例11酮可可碱对慢传输型便秘小鼠模型的影响1.试验目的实验组小鼠皮下注射吗啡诱导建立慢传输型便秘小鼠模型，记录小鼠粪便重量， 利用活性炭灌胃法试验比较实验组与对照组小鼠结肠传输功能；利用免疫组化技术比较两 组小鼠结肠组织中Cajal细胞数量。2.材料无特殊病原体SPF级ICR鼠80只，山东新时代药业动物中心，雌雄各半，体重20 25克；小鼠代谢笼(苏州冯氏实验动物公司)；注射用盐酸吗啡(沈阳第一制药厂，规格 IOmg/支)；生理盐水；一抗(sc-168, Santa Cruz Biotechnology, Inc, 200mg/L) ；二抗(羊 抗兔抗体，中山生物科技公司)；己酮可可碱片剂，制备工艺同实施例8;己酮可可碱栓剂， 制备工艺同实施例3 ；茶碱片剂，制备工艺同对照例1 ；氨茶碱片剂，制备工艺同对照例2 ； 咖啡因片剂，制备工艺同对照例3 ；帕吉维林片剂，制备工艺同对照例4。3试验方法和步骤3. 1慢传输型便秘小鼠模型的建立ICR鼠80只，随机分为6个实验组，1个正常对照组和1个模型对照组，每组10 只。6个实验组分别为己酮可可碱片剂组；己酮可可碱栓剂组；茶碱片剂组；氨茶碱片剂 组；咖啡因片剂组；帕吉维林片剂组。所有小鼠置入80个小鼠代谢笼中，SPF级环境饲养。 适应性喂养3天后，实验组和模型对照组小鼠皮下注射盐酸吗啡2. 5mg/ (kg · d)，正常对照 组注射等量生理盐水。每3天记录一次小鼠大便粒数、大便干重及小鼠体重，计算小鼠日均 排便重量(g)。以小鼠日均排便量减少，且日均排便量与正常对照组相比具有显著性差异作 为慢传输型便秘小鼠模型的建立成功的标志，造模成功后停止注射给药。3. 2小鼠日均排便重量的测定给与造模成功后(饲养第46天起)的小鼠按照如下给药方案给药，己酮可可碱片 剂组小鼠灌胃给药己酮可可碱，给药剂量按照己酮可可碱计lmg/(kg*d)；己酮可可碱栓剂 组直肠给药己酮可可碱栓剂，给药剂量按照己酮可可碱计lmg/(kg · d)；茶碱片剂组、氨茶 碱片剂组、咖啡因片剂组和帕吉维林片剂组给药剂量均为lmg/(kg · d)，灌胃给药。正常对 照组和模型对照组给与蒸馏水。每隔1天记录一次小鼠大便粒数、大便干重及小鼠体重，计算小鼠日均排便重量(g)。小鼠日均排便量与正常组相比减少，表明慢传输型便秘程度增 大。3. 3肠道传输功能测定用活性炭灌胃法测定首粒黑便排出时间。停药1周的所有小鼠禁食M小时，经口 灌入100mg/ml活性炭悬液^iil。从活性炭灌胃完毕开始时计时，记录从灌胃到首粒黑便排 出的时间。首粒黑便排出时间越长表明慢传输型便秘程度越大。3. 4免疫组化标记小鼠结肠组织ICC及小鼠结肠组织ICC数量的比较实验结束后颈椎脱臼法处死，剖腹取出幽门到直肠末端全部肠道，分别取每只小 鼠远端结肠组织2 3处，4%甲醛溶液固定，石蜡包埋连续切片(厚度4 5μ m)；脱 蜡和水化后，切片放入PH8. O的EDTA缓冲液，煮沸15min，保温lOmin，室温冷却；PBS液 (pH7. 6)冲洗3次，每次5min ；每张切片滴加50 μ 13%双氧水以阻断内源性过氧化物酶的 活性，室温下孵育IOmin ；PBS液(ρΗ7. 6)冲洗3次，每次5min ；去除血清，分别加入一抗 (1 500) 50 μ 1，37°C孵育60min, PBS液冲洗3次，每次5min ；去除PBS液，分别加入生物 素标记的二抗(1 50)50μ 1，室温孵育IOmin ;PBS液冲洗3次，每次;3min ；去除PBS液， 加50 μ 1链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温孵育IOmin ；PBS液冲洗3次，每次^iin ； 去除PBS液，加2滴新鲜配制的DAB，显微镜下观察3 IOmin ；自来水冲洗；苏木精复染， 0.1% HCl乙醇分化，流水冲洗返蓝；梯度乙醇脱水干燥(二甲苯透明)，中性树胶封固，细 胞质呈棕色为阳性反应。每张切片选择五个高倍镜视野(Χ200)，应用Lecia RX250型图像 分析系统及Qwin软件标记并计算c-kit阳性细胞面积。c-kit阳性细胞面积与正常组小鼠 相比越小，表明慢传输型便秘程度越大。3. 5试验数据的统计学处理实验数据录入SPSS211. O统计软件包，统计方法选用t检验，ρ < 0. 05为差异有 显著性意义。4 结果实验结果表明(1)与正常组相比，模型组小鼠日均排便量、首粒黑便排出时间以及c-kit阳性细 胞面积均具有极其显著性差异(P < 0.01)，表明慢传输型便秘小鼠模型建造成功；(2)与模型组小鼠相比，己酮可可碱片剂组、己酮可可碱栓剂组小鼠日均排便量、 首粒黑便排出时间以及c-kit阳性细胞面积均具有显著性差异(ρ < 0. 05)，然而茶碱片剂 组、氨茶碱片剂组、咖啡因片剂组、帕吉维林片剂组小鼠日均排便量、首粒黑便排出时间以 及c-kit阳性细胞面积均无统计学意义(ρ > 0. 05)，这表明己酮可可碱能够明显改善小鼠 排便量，增强小鼠肠道推进力并增加肠道ICC数量，缓解慢传输型小鼠便秘的症状，然而茶 碱、氨茶碱、咖啡因、帕吉维林无此功能。(3)与茶碱片剂组、氨茶碱片剂组、咖啡因片剂组、帕吉维林片剂组相比，己酮可可 碱片剂组、己酮可可碱栓剂组小鼠日均排便量、首粒黑便排出时间以及c-kit阳性细胞面 积均具有显著或极显著性差异性差异。这表明己酮可可碱在治疗慢传输型便秘方面效果显 著优于其它非选择性磷酸二酯酶抑制如茶碱、氨茶碱、咖啡因、帕吉维林。(4)与己酮可可碱片剂组相比，己酮可可碱栓剂组小鼠日均排便量、首粒黑便排出 时间以及C-kit阳性细胞面积均较好.虽无显著性差异(P > 0. 05)，但己酮可可碱直肠给药治疗慢传输型小鼠便秘的效果优于己酮可可碱口服给药。表1己酮可可碱对慢传输型便秘小鼠的影响
权利要求
1.己酮可可碱在制备预防或治疗功能性便秘的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述的药物是由己酮可可碱和赋形剂组成的 药物组合物。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述的药物组合物为局部外用制剂。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述的局部外用制剂为喷雾剂、气雾剂、栓 剂、凝胶剂、乳膏剂、霜剂、软膏剂、溶液剂、乳胶剂或脂质体制剂。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于己酮可可碱在所述的局部外用制剂中的重量 百分含量为0. 1% -10%。
6.如权利要求4或5所述的用途，其特征在于所述的局部外用制剂为栓剂。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于所述的栓剂含有聚山梨酯80、甘油和明胶。
8.如权利要求4或5所述的用途，其特征在于所述的局部外用制剂为气雾剂。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于所述的气雾剂含有氟里昂F12、甘油、苯扎溴铵 和尿素。
10.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述的药物组合物为口服制剂。
11.如权利要求10所述的用途，其特征在于所述的口服制剂为片剂、胶囊、滴丸、颗粒 剂、散剂或口服液。
12.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述的赋形剂选自淀粉、糊精、乳糖、微晶纤 维素、乙醇、羟丙基甲纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、交联羧 甲基纤维素钠、交联聚维酮、硬脂酸镁、硬脂酸锌、微粉硅胶中的一种或多种。
全文摘要
本发明属于医药领域，具体涉及己酮可可碱的一种新用途，特别涉及己酮可可碱在制备预防或治疗功能性便秘的药物中的用途。为此，本发明提供了一种治疗功能性便秘的含有己酮可可碱的药物组合物，通过试验惊奇地发现己酮可可碱在改善功能性便秘方面具有预料不到的效果。
文档编号A61P1/10GK102145004SQ20101012377
公开日2011年8月10日 申请日期2010年2月9日 优先权日2010年2月9日
发明者姚景春, 赵志全 申请人:鲁南制药集团股份有限公司