用于治疗奶牛乳房炎的中药乳房灌注液及制备方法

专利名称：：用于治疗奶牛乳房炎的中药乳房灌注液及制备方法用于治疗奶牛乳房炎的中药乳房灌注液及制备方法
技术领域：
：本发明属于兽用中药领域，特别涉及的是一种用于治疗奶牛乳房炎的中药乳房灌注液及制备方法。
背景技术：
：奶牛乳房炎是奶牛最常见多发的三大疾病(乳房炎、子宫内膜炎、蹄叶炎)之一，不仅严重影响奶牛的产奶量、乳品质、生殖机能和利用年限，而且还对食品卫生和人体健康产生危害。目前，全世界约有50%左右的奶牛患有各种类型的乳房炎，严重影响奶牛业的健康发展。长期以来，世界各地均把抗生素列入治疗乳房炎的首选药物，但由于长期反复使用，细菌耐药性增多而疗效降低，并造成乳汁中抗生素残留，危害人体健康。随着人们对食品安全要求的不断提高，生产"无抗生素乳"的呼声日见高涨。因此，研制开发高效、无残留、无抗药性、安全低毒的防治奶牛乳房炎的有效药物是提高牛奶品质，增强国际竟争力，保障人民健康的重要技术基础。中草药作为具有生物活性效应的一类药物，在防治人及畜禽疾病，特别是慢性难治性疾病和传染病方面，显示出合成药、抗生素、疫苗等无法比拟的特点。中药属于天然制品，来源于动物、植物或矿物质，含有多种生物有效成分，具有抗菌、消炎、不易使致病菌产生耐药性、体内代谢较快、低毒、无残留的特点，可克服使用抗生素的不足，并兼有药物与营养剂的双重功能。应用中草药防治奶牛乳房炎，已被国内外专家所关注。尽管目前国内市场出现了一些用于防治奶牛乳房炎的中药制剂，但其大多数仅为原药材的粉碎物，经口给药要经过肝脏的"首过效应"和胃肠道的破坏，使中药治疗存在疗效不确切的缺陷。通过乳房灌注给药治疗奶牛乳房炎，可使药物与乳腺组织直接接触，使奶牛乳房感染区的药物有效浓度增加，而且避免肝脏的"首过效应"和胃肠道的破坏，提高治疗效果。
发明内容本发明的目的在于提供一种疗效确切、治疗有效率高、无药物残留、安全有效、无剌激性、无过敏反应的用于治疗奶牛乳房炎的中药乳房灌注液，本发明的另一目的是提供所述中药乳房灌注液的制备方法。本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的。中药乳房灌注液包括以下组份瓜子金10-40重量份，鸡血藤10-30重量份，元宝草10-25重量份，半枝莲10-25重量份，青皮10-20重量份，甜地丁10-40重量份，毛诃子10-20重量份，紫花地丁10-40重量份，香附10-20重量份，黄芪10-30重量份，泽兰10-30重量份。本发明的原理是本发明配方中的瓜子金、甜地丁、紫花地丁具有清热解毒、抗菌消炎、凉血消肿、益气活血、散瘀止痛的作用，为主药；鸡血藤、黄芪补气、补血、通经活络、托毒排脓、增强机体免疫功能，泽兰、半枝莲活血化瘀、养新血、破宿血，共为辅药；元宝草行血调经、下乳消肿，香附、青皮疏肝、行气解郁、调经止痛，共为佐药；毛诃子养气养血、清热解毒、调和诸药，为使药。诸药相合，共同发挥清热解毒、抗菌消炎、益气活血、凉血消肿、祛瘀止痛、通经活络、增强免疫力的功能。本发明的优点在于本发明涉及的乳房灌注液是由中药提取物制成的纯中药制剂，有效成分含量高，对引起奶牛乳房炎的常见病原菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等均有较强的抑制作用，而且组方合理，安全有效，原料易得，制备工艺简单，易于操作，且生产成本低。具体实施方式本发明用于防治奶牛乳房炎的中药乳房灌注液经过原药材挑拣与除杂、蒸馏、水提、浓縮、醇沉、稀释、灌装、灭菌、包装等多道工艺制得。制备过程流程如下1、原药材的挑拣除杂。将原药材铺放于挑拣台上，逐个将原药材中的杂质拣出。2、称量。按重量份数称取瓜子金10-40份，鸡血藤10-30份，元宝草10-25份，半枝莲10-25份，青皮10-20份，甜地丁10-40份，毛诃子10-20份，紫花地丁10-40份，香附10-20份，黄芪10-30份，泽兰10-30份。3、提取。取青皮、香附加蒸馏水4-6倍，加热，回流l-2h后蒸馏，收集的蒸馏液约为加入蒸馏水的1/2，所得蒸馏液重蒸馏，收集的重蒸馏液为加入蒸馏水的1/4一1/6，加入0.5%_1%吐温_80，密封，IO(TC湿热灭菌30min后备用。药渣与其余的瓜子金、鸡血藤等九味药加蒸馏水浸泡3h，煎煮三次，第一次加8倍量蒸馏水煎煮lh，第二次加6倍量蒸馏水煎煮40min，第三次加6倍量蒸馏水煎煮30min，滤过，合并滤液，滤液于7(TC下减压浓縮至每毫升含原药材2g，得水煎浓縮液。4、纯化。①醇处理。将水煎浓縮液放冷，在搅拌下缓缓加入乙醇并使含醇量达到70%，静置冷藏40h以上，滤除杂质，回收乙醇，并浓縮至每毫升含生药5g;再加乙醇使醇含量达到80%，静置冷藏40h以上，滤除杂质，回收乙醇，并浓縮至每毫升含生药5g;②水处理。取上述浓縮液加10倍量的蒸馏水，搅匀，静置冷藏24h以上，滤除杂质，将滤液浓縮至每毫升含生药2g，放冷，再用同法滤过一次，用20%Na0H调pH值至7.0_7.2。③活性炭处理。上液中加入0.2%针用活性炭，煮沸20min，稍冷后抽滤。5、配液。取上述滤液，与步骤3所得的重蒸馏液合并，加注射用水至lg/mL，混匀，调PH值至6.8-7.0，粗滤，再用垂熔玻璃漏斗抽滤。6、灌装。在无菌室内，进行灌装，密封。7、灭菌。IO(TC湿热灭菌30min。8、印字包装。主要控制条件如下1、工作环境温度15-3(TC，相对湿度30-70%，生产区的洁净级别为一般生产区。2、蒸馏控制。蒸馏用水标准为双蒸馏水(注射用水)，蒸馏加水量为投药量的4-6倍，回流时间为l-2h，蒸馏温度为IO(TC，第一次蒸馏所得蒸馏液为加水量的1/2，重蒸馏所得蒸馏液为加水量的1/4，加入吐温-80的量为0.5%-1%。3、水提控制。水提用水标准为双蒸馏水(注射用水)，首次水提加水量为投料量的8倍，物料加入后浸泡3h，提取时间为lh，提取控制温度为IO(TC;二次水提的加水量为投料量的6倍，提取时间为40min，提取控制温度为IO(TC;三次水提的加水量为投料量的6倍，提取时间为30min，提取控制温度为IO(TC。4、浓縮控制。7(TC下减压浓縮。5、醇提控制。乙醇为无水乙醇或药用酒精(乙醇含量^98%)，首次醇提时加入乙醇使含醇量为70%，二次醇提时乙醇加入量使醇量为80%，边加边搅拌，搅匀后静置40h以上。6、稀释控制。稀释液为注射用水，使药液浓度为lg/mL。7、灭菌控制。100。C湿热灭菌30min。适应症状与使用方法本乳房灌注液适应症状临床型乳房炎早期乳汁性状异常，稀薄，内含凝乳块或絮状物，有的混有血液或脓汁，有的乳汁排出不畅，泌乳量减少或停止。中后期乳房红、肿、热、痛、乳房淋巴结肿大。大部分奶牛除上述症状外，还伴有精神不振、食欲减少、体温升高等全身症状。本乳房灌注液的使用方法(l)乳房炎的治疗。首先将奶牛患病乳区的乳头进行消毒处理，然后无菌灌注本乳房灌注液30-50mL，每天两次，连续一周；临床症状严重的结合抗生素治疗，全身症状消失后，再用本乳房灌注液3d。(2)乳房炎的预防。奶牛干奶后，将每个乳头进行消毒处理，每个乳区灌注本乳房灌注液30-60mL，5天后再灌注一次。本乳房灌注液亦可用于治疗反刍动物、猪等的乳房炎。本发明应用药效及优点1、本发明中的乳房灌注液是由中药提取物制成的纯中药制剂，有效成分含量高，对引起奶牛乳房炎的常见病原菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等均有较强的抑制作用，而且组方合理，安全有效，原料易得，制备工艺简单，易于操作，且生产成本低。2、通过奶牛的乳房灌注给药，药物与乳腺组织直接接触，使奶牛乳房感染区的药物有效浓度增加，提高乳房炎的治愈率。药效可靠，给药方便。3、本乳房灌注液无毒副作用，无需停药期，可用于预防和治疗奶牛干奶期乳房炎。4、本乳房灌注液用于治疗奶牛临床型乳房炎，经临床应用、跟踪观察记录，按照每患病乳区40mL行乳管灌注，一日2次，连用7d，其治愈率达到86%，治疗有效率达95%以上。5、本乳房灌注液用于干奶期奶牛乳房炎的预防，经过临床应用，按照每个乳区灌注本乳房灌注液50mL，5天后再灌注一次，显著降低奶牛进入下一产奶周期产犊后2周内乳房炎发病率。药效试验及临床应用以下结合本乳房灌注液的药效、药理和毒理试验对本发明的实施例作进一步的详细说明。1、主要药效学试验1.1体外抑菌试验(琼脂扩散法)试验所使用的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、热带假丝酵母菌，均由安徽农业大学动物科技学院临床兽医学实验室从安徽省部分奶牛场临床型乳房炎奶牛乳汁中分离的菌种，采用琼脂扩散法测定体外抑菌效果。将菌种接种于营养肉汤中，37t:培养518h后，采用平板倾注法进行活菌计数并将菌液浓度稀释为105CFU/mL的含菌量。取稀释好的菌液200iiL，均匀涂于琼脂板上，然后在平板上用直径6mm的琼脂打孔器均匀打孔，每板6空，去除琼脂并适当封底。将供试药液(提取液，lg/mL)加入其中4孔中，另2孔加药物基质，并用氨苄青霉素药敏片抑菌试验作药物阳性对照，每板均匀贴4片，每个试验菌重复三次。37。C培养24h，测量抑菌圈直径。抑菌圈直径d(mm)>20为极敏，22>d>17mm为高敏，17>d>12为中敏，12>d>8低敏，d<8无抑菌效果。观察抑菌圈大小并记录结果。试验结果见表l。表1对临床乳房炎分离菌的抑菌结果(mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注"-"表示无抑菌作用。结果显示，中药乳房灌注液对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌高敏，对大肠杆菌中敏，对热带假丝酵母菌低敏。结果表明中药乳房灌注液对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌具有很好的抑菌效果，对热带假丝酵母菌也有一定的抑制作用。1.2抗炎作用1.2.1、对小白鼠毛细血管通透性的影响小鼠30只，雌雄各半，购自安徽医科大学实验动物中心，用苦味酸标记。按体重随机分为3组，分组及给药剂量第1组为空白对照组，生理盐水0.2mL/10g;第2组为阳性对照组，地塞米松0.2mL/10g;第3组为乳房灌注液组，剂量为0.2mL/10g(制剂量lg/mL)。皮下注射给药，给药后lh，每只小鼠尾静脉注射0.5X伊文思蓝0.lmL/10g，并同时腹腔注射0.6%乙酸0.2mL/只，20min后，脱颈椎处死小鼠，剪开腹腔，用5mL生理盐水冲洗腹腔，用注射器抽出腹腔洗液约4.5mL，2000r/min离心5min，取上清液3mL，在751分光光度计590nm处测定吸收度(A)并记录结果。结果见表2。表2对小白鼠毛细血管通透性的影响(^士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注*表示与第1组相比差异显著(P<0.05);**表示与第1组相比差异极显著(P<0.01)。实验结果显示，中药乳房灌注液能抑制乙酸致小鼠毛细血管通透性的增加，与空白对照组比较具有显著性差异(P<0.01)，表明本中药乳房灌注液具有较明显的抗炎作用。1.2.2对小鼠耳肿胀的影响小鼠30只，雌雄各半，购自安徽医科大学实验动物中心，用苦味酸标记。按体重随机分为3组，分组及给药剂量第1组为等剂量的生理盐水对照组，O.2mL/10g;第2组为阳性对照组，地塞米松0.2mL/10g;第3组为乳房灌注液组，剂量为0.2mL/10g(制剂量lg/mL)。腹腔注射给药，给药后30min，于小鼠左耳两侧涂二甲苯0.lmL/只致肿，右耳不涂为正常耳。lh后处死小鼠，剪下左右两耳，用打孔器(内直径6mm)分别在同一部位取下圆耳片，电子天平称重，计算耳肿胀率。进行组间t检验。按下列公式计算出耳肿胀率耳肿胀率=(左耳重-右耳重)X100%/右耳重结果见表3。表3对小鼠耳肿胀的影响(；±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注*表示与第1组相比差异显著(P<0.05)广表示与第1组相比差异极显著(P<0.01)。试验结果显示，中药乳房灌注液能明显减轻小鼠耳壳肿胀率，与空白对照组比较差异显著(P〈0.01)，表明本中药乳房灌注液可抑制二甲苯所致的炎症反应。1.3对小鼠的镇痛作用(扭体法)小鼠30只，雌雄各半，购自安徽医科大学实验动物中心，用苦味酸标记。按体重随机分为3组，分组及给药剂量第1组为空白对照组，生理盐水0.2mL/10g;第2组为阳性对照组，安痛定注射液0.2mL/10g;第3组为乳房灌注液组，剂量为0.2mL/10g(制剂量lg/mL)。皮下注射给药，给药后30min腹腔注射0.6%乙酸溶液0.2mL/只，记录注射乙酸后20min内出现的扭体次数。实验完毕，计算药物阵痛率。镇痛率=(对照组扭体次数-给药组扭体次数)X100%/对照组扭体次数。结果见表4。表4对乙酸所致小鼠扭体反应的影响(；士SD)注*表示与第一组相比差异显著(P<0.05);**表示与第一组相比差异极显著(P<0.01)。试验结果显示，中药乳房灌注液对伤寒副伤寒二联菌苗所致家兔发热具有明显的解热作用，各个时间点的体温均有降低。2、中药乳房灌注液的安全性检查2.1异常毒性检查健康小鼠10只，雌雄各半，在试验前及试验期内，均按正常饲养条件饲养。每只小鼠分别腹腔注射中药乳房灌注液(lg/mL)0.5mL。全部小鼠在给药后48h内没有死亡，生长情况良好，均未见异常反应，未见动物有明显中毒症状发生。2.2过敏反应检查健康豚鼠8只，雌雄各半，雌鼠无孕。在试验前和试验过程中，均按正常饲养条件饲养。隔日每只每次腹腔注射中药乳房灌注液(lg/mL)0.5mL，共3次，进行致敏。然后将其均分为2组，每组4只，分别在首次注射后第14d和第21d，由静脉注射供试品lmL进行攻击。每日观察每只动物的行为和体征，观察攻击后30min内，动物有无竖毛、呼吸困难、抽搐等过敏反应症状。结果显示，静脉注射中药灌注液后30min后，未见豚鼠出现竖毛、呼吸困难、抽搐等过敏反应症状，表明中药乳房灌注液无变态反应。2.3溶血与凝聚检查取洁净试管5只，编号，1、2号管为供试品管，3号管为阴性对照管，4号管为阳性对照管，5号管为供试品对照管。按表6所示依次加入2%红细胞混悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水，混匀后，立即置37t:士0.5t:的恒温箱中进行温育。3h后观察溶血和凝聚反应。表6中药乳房灌注液溶血与凝聚检查<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实验结果显示，阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生，供试管中的溶液在3h内没有发生溶血和凝聚，表明本中药灌注液合格，无溶血和凝集现象。3、中药乳房灌注液对奶牛临床型乳房炎的治疗效果实验动物选自合肥市某奶牛场的临床型乳房炎患病奶牛，症状为乳区肿胀、皮肤发红，触诊乳房发热、有硬块、疼痛敏感，产奶量减少，乳汁异常，黄白色或血清样，内有凝乳块。出现此类症状的牛可作为本试验治疗对象，但伴有严重全身感染症状的、超急性或复发的病牛除外。符合上述标准的共有97例病牛，128个乳区。随机分为3组，第一组用中药乳房灌注液，共33头45个乳区，将奶牛患病乳区的乳头进行消毒处理，然后无菌灌注本乳房灌注液40mL，每天两次；第二组抗生素乳头灌注，共32头42个乳区，患病乳区灌注青霉素钠160万单位、链霉素100万单位，每天2次；第三组联合治疗，共32头41个乳区，采用乳房灌注液和抗生素灌注结合。3组病牛中如有发热病例，均配合相同的全身抗生素治疗。根据临床症状和乳汁质量的改变综合判断药物的疗效，并计算各组乳房炎奶牛7d内的治愈率、有效率和无效率。临床痊愈乳房红、肿、热、痛、硬结消失，乳汁肉眼观察正常，奶产量回升，食欲、体温、精神等均恢复正常。有效乳房红肿热痛明显好转，乳房肿块显著减少，发热症状消失，乳汁性状基本正常，乳汁无凝块或少量奶块，奶产量回升但没有达到发病前水平。无效乳房红、肿、热、痛、硬结无明显改善或更严重，乳汁异常，奶产量下降；或在治疗过程中病程未减而改用其他方法治疗者。结果见表7。表7中药乳房灌注剂治疗临床型乳房炎效果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>中药乳房灌注液的治愈率和有效率分别为86.67%和95.55%%，达到了良好的治疗效果，优于单纯的抗生素治疗效果。中药与抗生素联合治疗效果最佳，且大多病例经过3-4d的治疗就痊愈，极大地縮短了治疗时间和抗生素的用药量。4奶牛乳房炎的预防效果将进入干奶期无临床型乳房炎奶牛180头随机分为3组，第一组乳头灌注中药乳房灌注液，共60头236个乳区，将奶牛每个乳区的乳头进行消毒处理，然后无菌灌注本乳房灌注液50mL，5d后再灌注一次；第二组乳头灌注抗生素，共60头235个乳区，患病乳区灌注青霉素钠160万单位、链霉素100万单位，5d天后再灌注一次；第三组联合治疗，共60头234个乳区，采用乳房灌注液和抗生素灌注结合。观察奶牛进入下一产奶周期产犊后2周内临床型乳房炎发病情况。结果见表8表8中药乳房灌注剂预防临床型乳房炎效果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>实验结果显示，在奶牛干奶期乳头灌注中药乳房灌注剂，显著降低奶牛产犊后的乳房炎发病率，具有很好的预防效果上。本中药乳房灌注液的中药组方添加辅料后可制成兽医药剂学允许的多种剂型，如散剂、煎剂、注射剂等。尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解为在不脱离本发明的原理和精神的情况下对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。权利要求用于治疗奶牛乳房炎的中药乳房灌注液，其特征在于包括以下组分瓜子金10-40重量份，鸡血藤10-30重量份，元宝草10-25重量份，半枝莲10-25重量份，青皮10-20重量份，甜地丁10-40重量份，毛诃子10-20重量份，紫花地丁10-40重量份，香附10-20重量份，黄芪10-30重量份，泽兰10-30重量份。2.—种制备权利要求1所述中药乳房灌注液的方法，其特征在于包括以下步骤(1)原药材的挑拣除杂将原药材铺放于挑拣台上，逐个将原药材中的杂质拣出；(2)称量按重量份数称取瓜子金10-40份，鸡血藤10-30份，元宝草10-25份，半枝莲10-25份，青皮10-20份，甜地丁10-40份，毛诃子10-20份，紫花地丁10-40份，香附10-20份，黄芪10-30份，泽兰10-30份;(3)提取取青皮、香附加蒸馏水4-6倍，加热，回流l-2h后蒸馏，收集的蒸馏液约为加入蒸馏水体积的1/2，所得蒸馏液重蒸馏，收集的重蒸馏液为加入蒸馏水体积的1/4-1/6，加入O.5%-1%吐温_80，密封，1001:湿热灭菌30111111后备用；所得药渣与其余的瓜子金、鸡血藤等九味药加蒸馏水浸泡3h，煎煮三次第一次加8倍量蒸馏水煎煮lh，第二次加6倍量蒸馏水煎煮40min，第三次加6倍量蒸馏水煎煮30min，滤去药渣，合并滤液，并在7(TC温度下减压浓縮至每毫升相当于含生药2g，得水煎浓縮液；(4)纯化①醇处理取所述水煎浓縮液放冷，在搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达到70%，静置冷藏40h以上，滤除杂质，回收乙醇，并浓縮至每毫升相当于含生药5g;再加乙醇使醇含量达到80%，静置冷藏40h以上，滤除杂质，回收乙醇，并浓縮至每毫升相当于含生药5g;②水处理取上述浓縮液加10倍量的蒸馏水，搅匀，静置冷藏24h以上，滤除杂质，将滤液浓縮至每毫升相当于含生药2g，放冷，再用同法滤过一次，加入20%的NaOH水溶液将pH值调至7.0-7.2;③活性炭处理上液中加入O.2X针用活性炭，煮沸20min，稍冷后抽滤；(5)配液取上述滤液与步骤(3)所得重蒸馏液合并，加注射用水至lg/mL，混匀，调pH值至6.8-7.0，粗滤，再用垂熔玻璃漏斗抽滤，最后灌装、灭菌、包装后得到所述中药乳房灌注液。全文摘要本发明属于兽用中药领域，特别涉及的是一种用于治疗奶牛乳房炎的中药乳房灌注液及制备方法，所述中药乳房灌注液包括以下组分瓜子金10-40重量份，鸡血藤10-30重量份，元宝草10-25重量份，半枝莲10-25重量份，青皮10-20重量份，甜地丁10-40重量份，毛诃子10-20重量份，紫花地丁10-40重量份，香附10-20重量份，黄芪10-30重量份，泽兰10-30重量份。本发明是由中药提取物制成的纯中药制剂，有效成分含量高，对引起奶牛乳房炎的常见病原菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等均有较强的抑制作用，而且组方合理，安全有效，原料易得，制备工艺简单，易于操作，且生产成本低。文档编号A61P15/14GK101780199SQ20101013297公开日2010年7月21日申请日期2010年3月24日优先权日2010年3月24日发明者冯士彬,刘崎山,吴金节,周凡,孟庆娟,李志明,李锦春,王希春,邹松阳,韩春阳申请人:安徽农业大学;安徽白帝乳业有限公司