专利名称：姜炙黄连炮制品的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种姜炙黄连的新用途，具体地，是在制备胰岛素增敏剂及PPAR Y激 动剂的药物中的用途。
背景技术：
据世界卫生组织《2008年世界卫生报告》城市化、老龄化和全球性的生活方式变 化三者结合，使糖尿病等慢性非传染性疾病成为越来越主要的疾病和死亡原因。据中华医 学会糖尿病学分会《中国2型糖尿病防治指南(2007版)》:中国糖尿病患病人群中，以2型 糖尿病为主(占93. 7% )，2025年预计将达到5500万人。糖尿病属于中医“消渴”病范畴， 中医药理论认为“消渴”的病机因恣食肥甘，或情志过极、房事不节、热病之后等，郁热内 蕴，气化失常，津液精微不能正常输布而下泄，阴虚燥热(GB/T 16751. 1-1997中医临床诊 疗术语疾病部分)。“凡积久饮酒，未有不成消渴。”(唐代《千金方》)黄连为常用中药，中医很早就认识到“治消渴”的用途，历代本草及名医验案多有 记载，梁代《名医别录》记载“止消渴”；唐代《新修本草》记载“黄连，疗渴为最”；清代《本草 备要》记载“单用能治消渴”。中药黄连也为治疗消渴病(糖尿病)的中成药处方中常用药味，2006年国内 医院糖尿病用药分析结果表明，在排名前十位的产品中，糖脉康颗粒(含黄连，市场分额 22. 1 %，约1亿元)、金芪降糖片(含黄连，市场分额11. 6%，约5000万元)，分列第2、4位， 在中医临床中广泛应用。但本草医籍对治消渴宜用的黄连饮片(炮制品)，或语焉不详，或统而概之，现代 研究中也缺少对黄连不同炮制品在“治消渴”用途上的实验证据，导致在中医临床实践中甚 至提出“黄连不是治疗消渴病(糖尿病)的主药”。目前黄连治疗消渴病(糖尿病)的研究主要集中在生品黄连及单一有效成分(小 檗碱)及生品黄连中提取的黄连总碱上，[黄笑夏，欧阳钦.黄连免煎颗粒治疗肝原性糖 尿病临床观察.天津药学.2008，20 (3) 41-42]等报道，在临床单独使用胰岛素及黄连素 免煎颗粒与胰岛素联合应用均能有效降低血糖，但黄连素免煎颗粒与胰岛素联合应用效 果更好，且黄连素免煎颗粒与胰岛素联合应用组血糖值控制得更为稳定。[Li-Qin Tang, Wei Wei，Li—MingChen，et al. Effects of berberine on diabetes induced by alloxan anda high-fat/high-cholesterol diet in rats. Journal ofEthnopharmacology. 2006, 108 (1) : 109 115]报道，对饮食诱导的糖尿病高脂血症大鼠模型(高脂/高胆固醇/四氧 嘧啶)，小檗碱抑制了糖尿病进程，作用机制可能与降血糖、调节血脂代谢等作用相关。[朱 红卫，唐礼可.黄连总碱对小鼠降糖作用研究.云南中医中药杂志.2008，29 (7) :59 60] 报道，黄连总碱具有显著降血糖作用，对正常小鼠的血糖水平没有影响。小檗碱对改善2型糖尿病患者胰岛素抵抗方面有明确作用，而黄连各种饮片规格 都含有小檗碱成分，不同的黄连炮制品的功效也有不同，而且含有小檗碱成分的黄柏、三颗 针等中药临床效用也有不同，为中医临床处方用药所困惑，早在清代《修事指南》就指出“炮制不明，药性不确，则汤方无准而病症不验也”，因此本发明发掘本草经验，系统研究了姜炙 黄连“治消渴”用途，对防治与胰岛素抵抗相关的代谢综合征、糖尿病或并发症具有一定的
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发明内容
本发明的技术方案是提供了 一种姜炙黄连炮制品的新用途。本发明提供了姜炙黄连在制备PPARY激动剂的药物中的用途。其中，所述的药物是抑制3T3-L1前脂肪细胞分化、提高3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖 利用率的药物或胰岛素增敏剂及。其中，所述的药物是降低血脂功能、改善胰岛素抵抗的药物。其中，所述的药物是治疗糖尿病及其并发症的药物。所述的姜炙黄连来源于《中国药典》2010年版一部第286页。与生品黄连、小檗碱比较，显著增加PPARY表达量，可以显著改善胰岛素抵抗，是 具有开发前景的胰岛素增敏剂。所述的姜炙黄连的主要指标成分包括药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴 马汀、小檗碱及其以上生物碱成分的盐酸盐，其中，所述的药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、 黄连碱、巴马汀、小檗碱的重量配比为4-7 5-10 14-16 28-33 25-27 100。进一步优选地，所述的药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱 的重量配比为4. 74-6. 99 5.81-9.25 14. 20-15. 20 28. 37-32. 99 25. 03-26. 79 10 0o更进一步优选地，所述的药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱 的重量配比为 5. 86 7. 53 14.70 30.68 25.91 100。本发明提供了一种具有抑制3T3-L1前脂肪细胞分化、提高3T3-L1前脂肪细胞葡 萄糖利用率的药物组合物，它是由下述方法制备而成取净姜炙黄连，加水煎煮1 3次，每 次0. 5 3小时，每次加水量为6 10倍量，滤过，合并提取液，浓缩，备用，加入药学上可 接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。进一步优选地，它是由下述方法制备而成取净姜炙黄连，加水煎煮3次，每次3小 时，每次加水量为10倍量，滤过，合并提取液，浓缩，备用。其中，所述的制剂是口服制剂。本发明涉及的姜炙黄连及其提取浸膏，作为PPAR y激动剂，具有抑制3T3-L1前脂 肪细胞分化功能的药物，可用于改善胰岛素抵抗及治疗糖尿病及其并发症，具有明确的药 效，且药效优于盐酸小檗碱和生品黄连。以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
图1姜炙黄连提取浸膏对3T3-L1前脂肪细胞模型增殖影响图2显微镜下的3T3-L1前脂肪细胞及3T3-L1脂肪细胞(X200)(其中，图2A 3T3-L1前脂肪细胞；图2B :3T3-L1脂肪细胞；图2C :3T3_L1脂肪细胞(油红0染色))图3姜炙黄连提取浸膏对3T3-L1前脂肪细胞株分化的影响图4姜炙黄连提取浸膏对3T3-L1脂肪细胞IR模型葡萄糖利用的影响图5姜炙黄连对PPAR y表达的影响(Western blot法)
具体实施例方式实施例1本发明姜炙黄连炮制品的制备取净黄连，照姜炙法(附录II D)炒干，每100kg黄连，用生姜12. 5kg。实验例2本发明姜炙黄连炮制品提取浸膏的制备取姜炙黄连，加水煎煮3次，每次3小时，每次加水量为10倍量，滤过，合并提取 液，浓缩，备用。根据上述工艺，提取制备了姜炙黄连、生品黄连的提取浸膏，在总生物碱测定的基 础上还测定了总多糖的含量。总生物碱的测定方法精密称取浸膏0. 4g，至25mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇 勻，照柱色谱法试验。精密量取5mL，置已处理好的氧化铝柱(内径约0. 9cm,中性氧化铝5g， 湿法装柱，用乙醇30mL预洗)上，用乙醇35mL洗脱，收集洗脱液置50mL量瓶中，用乙醇稀 释至刻度，摇勻。精密量取2mL转置50mL量瓶中，用0.05mol/l H2S04溶液，稀释至刻度， 摇勻。按照紫外分光光度法，在345nm波长处，测定吸收度，按盐酸小檗碱的吸收系数为728 计算，即得。总多糖的测定方法精密称取已经提取好的黄连炮制品提取浸膏，置离心管中，加 无水乙醇至80%，离心lOmin (3000r/min)，弃去上清液，用80%乙醇多次洗涤沉淀，至离心 上清液无色，沉淀用沸水分次使溶解，离心，上清液转移置100mL量瓶中，精密吸取5mL转移 置25mL量瓶中，加水稀释至刻度，作为供试品。分别吸取供试品溶液、葡萄糖对照品溶液 (0. 06mg/mL) 2mL至具塞试管中，加入蒽酮试剂8mL，涡旋30s，沸水lOmin，冷却至室温，在 620nm处测定其吸光度，计算以葡萄糖计算的黄连总多糖的含量。表1不同黄连炮制品提取浸膏总生物碱/总多糖测定结果
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样品名称总生物碱含量(g/100g浸膏)总多糖含量(g/100g浸膏)总生物碱/总多糖比率(倍) 姜炙黄连7.680. 735210.45
生品黄连7.600. 704410.81由上数据可知，生品黄连中总生物碱含量和总多糖含量与姜炙黄连相当。实施例3姜炙黄连的质量控制方法(1)薄层色谱鉴别取本品粉末0. lg，加甲醇50ml，超声处理30min，滤液作为供试品溶液。取盐酸药 根碱照品、非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀及盐酸小檗碱加甲醇制成 每1ml含0. lmg的溶液，作为对照品溶液。精密量取各对照品溶液1. 5ml加入同一 10ml量 瓶中，以甲醇稀释至刻度，作为混合对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部 附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙 酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水-三乙胺(3 3.5 1 1.5 0.5 1)并以氨水预饱和
520min后，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)含量测定方法采用XtimateTM C18(4. 6mmX 250mm, 5 u m)色谱柱，以 0. 三乙胺(碳酸 氢铵，氨水调PH为10)为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；流速lmL.min-l，柱温 30 °C，检测波长 270nm。结果盐酸药根碱在 0. 848 u g. ml/1 16. 96 u g. ml/1 (r = 0. 9997)、 非洲防己碱在 1. 248 u g. ml/1 24. 96 u g. ml/1 (r = 0. 9999)、表小檗碱在 2. 048 u g. ml/1 40. 96 u g. mL_1 (r = 0. 9999)、黄连碱在 3. 648 ii g. mL_1 72. 96 u g. mL_1 (r = 0. 9999)、 巴马汀在 2. 88 u g. mL-1 57.6iig. mL-1 (r = 0. 9998)、盐酸小檗碱在 13. 248 u g. mL-1 264. 96 ug. mL—1，(r = 0. 9996)呈现良好的线性关系。加样回收率及其RSD分别为102.4% (RSD 为 1. 17 % )、101. 8 % (RSD 为 1. 30 % )、100. 3 % (RSD 为 1. 76 % )、100. 7 % (RSD 为 1. 75% )U01. 2% (RSD 为 1.53% )和 97.9% (RSD 为 1. 97% ) 样品重复性良好，在 12h 内稳定。结论方法操作简便、准确性高、稳定性好，可用于姜炙黄连中6种生物碱的含量测 定。表姜炙黄连的含量测定结果 对以上含量测定数据采用SPSS统计软件进行进行两样本均数的比较分析 (Independent-Samples T Test)，统计分析结果表明与生品饮片比较，姜炙黄连中小檗碱 含量有显著性变化(P = 0.016)，小檗碱可能是姜炙黄连中与药效生物效应相关的重要成 分之一。表姜炙黄连含量测定结果(比例含量，以盐酸小檗碱含量为100计算) 按统计学意义的99%置信区间(下限值，上限值)，丄/2 = 2.56(0 =0.01)下 限值=平均值-Ua/2x标准偏差，上限值=平均值+Ua/2X标准偏差综上所述，姜炙黄连中，药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的 重量配比为4. 74-6. 99,5. 81-9. 25,14. 20-15. 20,28. 37-32. 99,25. 03-26. 79,100 或 4-7、 5-10、14-16、28-33、25-27、100以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。试验例1姜炙黄连提取浸膏对3T3-L1前脂肪细胞增值的影响3T3-L1前脂肪细胞株是小鼠胚胎来源、具有纤维母细胞形态的细胞株，在经典的 激素鸡尾酒，即胰岛素、地塞米松和1-甲基-3-异丁基黄嘌呤的刺激下，具有分化为成熟脂 肪细胞的能力，是目前国际上研究肥胖及体外脂肪细胞增殖和分化的细胞模型。通过干预 小鼠前脂肪细胞观察其对该细胞增殖和分化的影响，为肥胖的2型糖尿病的治疗提供可能 的途径。方法将3T3-L1前脂肪细胞悬液按5X 105/ml的密度接种到48孔培养板，于含 10%小牛血清的DMEM高糖培养基中，在37°C、5% C02、饱和湿度条件下培养，2d换液1次。 待3T3-L1前脂肪细胞贴壁后，按设计剂量分别加入不同浓度的受试药物干预，空白对照组 培养液中加入等体积药物溶剂PBS，每浓度组均设6个复孔。在37°C、体积分数5% C02中 培养2d。48h后，PBS漂洗，加入DMEM高糖培养液400 yl及5mg/ml MTT 40 u 1，孵育4h。 吸去培养液，并加入溶媒DMSO 300ia，490nm测定各组的0D值。计算3T3-L1前脂肪细胞 增殖变化率。相对变化率(％ )=(实验组平均0D值/空白对照组平均0D值-1) X 100%表2姜炙黄连提取浸膏对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响 注与正常组比较，*Ρ< 0. 05，**Ρ < 0. 01 ；增殖率1 各剂量组相对空白组的增殖变化率；增殖率2 姜炙组相对于同剂量组生品的增殖变化率。由表2、图1可知，姜炙黄连促进3T3-L1前脂肪细胞增殖作用优于黄连生品。试验例2姜炙黄连提取浸膏对对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响方法将3T3-L1前脂肪细胞悬液按5Χ 105/ml的密度接种到48孔培养板，于含 10%小牛血清的DMEM高糖培养基中，在37°C、5% CO2、饱和湿度条件下培养，2d换液1次。 待3T3-L1前脂肪细胞达到接触抑制后，用含1 μ mol/L的Dex、0. 5mmol/L IBMX及5mg/L胰 岛素的DMEM完全培养液诱导分化，48h后撤去Dex和IBMX，用10mg/L胰岛素再继续作用 48h，换正常完全培养液培养8 12天，隔天换液，直至3T3-L1细胞90 %多呈脂肪细胞表型 时。在诱导分化的同时，按表2设计剂量分别加入不同浓度的受试药物干预，空白对照组培 养液中加入等体积药物溶剂PBS，每浓度组均设6个复孔。药物与分化培养液同步更换至分 化结束。诱导分化结束后，吸去培养液，细胞经PBS清洗3次后，用4%多聚甲醛溶液固定 细胞lOmin，吸去固定液，PBS漂洗，加入油红0染液室温染色15min。弃去油红0染液，PBS 漂洗3次除去多余染液；置显微镜下观察，拍片；加入异丙醇，抽提脂肪细胞中油红0，510nm 测定OD值，计算细胞分化相对变化率。分化相对变化率(％ )=(实验组平均OD值/空白对照组平均OD值-1) X 100%由图2可知，未分化的3T3-L1前脂肪细胞呈梭形，胞浆中无脂滴存在，形态与成纤 维细胞相似(图2-A)。3T3-L1前脂肪细胞在地塞米松、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤和胰岛 素的共同作用下，逐渐诱导分化成为成熟的脂肪细胞，胞浆内出现脂滴，并随着分化程度的 加深而积聚增多(图2-B)。油红0为脂肪特征性染色剂，染色后胞浆中的脂滴呈红色(图 2-C)。表3姜炙黄连提取浸膏对3T3-L1前脂肪细胞株分化的影响(x叙，n=6) 注与正常组比较，*P< 0. 05，**P < 0. 01 ；由表3，图3可知，与正常组比较，姜炙黄连炮制品在一定剂量下能明显或部分抑 制3T3-L1前脂肪细胞的分化(P < 0. 05)，这与阳性药马来酸罗格列酮作用恰好相反，其中 尤以姜炙黄连H组的浓度下抑制作用最为明显，抑制率达到20. 28% ；同时，与黄连生品相 比较，姜炙黄连最高抑制分化率明显高于黄连生品。上述实验结果表明，药物在对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的影响方面，不同于阳 性药马来酸罗格列酮，姜炙黄连在一定剂量下抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化，提示姜炙黄 连炮制品可能不会引起脂肪的聚集而造成体重增加，这对防治与胰岛素抵抗相关的代谢综 合征或并发症具有一定的意义。综上试验结果，姜炙黄连对上述改善作用优于黄连生品。试验例3姜炙黄连提取浸膏对3T3-L1前脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型葡萄糖利 用的影响方法细胞分化完全后，除空白组加入正常培养基，其余各组均加入lymol/L的 地塞米松、lymol/L的胰岛素进行脂肪细胞的胰岛素抵抗，作用3d。待脂肪细胞胰岛素抵 抗成立后，换用无酚红DMEM高糖培养基，按设计剂量分别加入不同浓度的受试药物干预 3d，空白对照组培养液中加入等体积药物溶剂PBS，每浓度组均设6个复孔，观察药物对胰 岛素抵抗的改善作用。72h后取细胞培养上清液505nm比色测定葡萄糖的含量，计算细胞葡 萄糖利用相对变化率。 表4姜炙黄连提取浸膏对3T3-L1脂肪细胞IR模型葡萄糖利用的影响(；叙， n=6)
9 注与模型组比较，*P< 0. 05, **P < 0. 01 ；由表4，图4可知，与空白组比较，3T3-L1脂肪细胞在地塞米松和胰岛素作用下，模 型组对胰岛素的敏感性明显降低，培养液中葡萄糖的摄取明显减少，表明脂肪细胞胰岛素 抵抗模型造模成功(P <0.01)。与模型组比较，姜炙黄连能明显或部分降低培养液中葡萄 糖的含量(P <0.01)，提高脂肪细胞葡萄糖的利用率，改善胰岛素抵抗，作用与阳性药马来 酸罗格列酮相似，同时，与黄连生品相比较，姜炙黄连最高葡萄糖利用相对变化率高于黄连 生品。上述试验结果表明，姜炙黄连具有改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗，增强脂肪细 胞对葡萄糖摄取和利用的能力，从体外细胞水平上具有改善胰岛素抵抗的作用；同时，姜炙 黄连在一定剂量下抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化，提示姜炙黄连在增加细胞对葡萄糖摄 取的同时不会引起脂肪的聚集而造成体重增加，这对防治与胰岛素抵抗相关的代谢综合征 或并发症具有一定的意义。综上试验结果，与黄连生品相比较，姜炙黄连对上述改善作用最为明显，优于黄连 生品。试验例4姜炙黄连提取浸膏对3T3-L1前脂肪细胞PPAR γ的影响ilfi^^Blilli^^^Sf^ (Peroxisome Proliferator ActivatedReceptors, PPARs)，PPARs包括PAR α ,PPAR γ和PPAR δ等三种亚型。PPAR γ则主要在肝脏及脂肪、肌 肉组织表达，促进脂肪组织的分化、脂肪酸合成和储存，是脂肪形成的关键物质。PPARy与 配体或激活物结合后，可进一步激活脂肪细胞分化过程，参与调节脂肪细胞特异基因的表 达、脂质贮存和代谢。目前PPAR γ激动剂中的典型药物是罗格列酮，它是人工合成的PPAR 配体，它有胰岛素增敏及降血糖作用，可通过激活靶组织中的PPARy发挥改善胰岛素抵抗 (IR)、降低血糖、抑制血管平滑肌的增殖和迁移、改善内皮功能等多种生物学效应。对3T3-L1前脂肪细胞模型，按设计剂量分别加入不同浓度的受试药物干预， Western blot检测PPAR γ表达量，结果表明与生品比较，姜炙黄连使PPAR γ的蛋白表达 量显著上升，见图5。体外培养3T3-L1前脂肪细胞经小檗碱干预，在3T3-L1脂肪细胞分化过程中，小檗碱组脂肪细胞的PPAR YmRNA较对照组低48%，蛋白质免疫印迹结果也显示小檗碱抑制 PPARy的表达[周丽斌，杨颖，唐金凤，等.小檗碱对脂肪细胞糖代谢的影响.上海第二 医科大学学报.2002，22 (5) :412-414]。而PPAR Y表达的增加，可以促进葡萄糖的利用以 及胰岛素的增敏[成峰，蒋华良，陈凯先，等.PPARY激动剂的研究进展.中国药物化学杂 志2003，13 (2) 110-118,124]刘毅，娄少颖，何燕铭，等.小檗碱对3T3-L1前脂肪细胞增 殖及分化相关基因PPARy、C/EBPamRNA何蛋白表达的影响.中国中西医结合杂志.2008， 28(11) 10051009，小檗碱使PPARy表达量减少82%。按BandScan5. 0，默认值 经内参校正后结果表明，与生品黄连比较，姜炙黄连使PPARy表达量增加8. 50倍。以上文献与试验的结果表明与生品黄连、小檗碱不同，姜炙黄连明显增加 PPAR y的表达，可以促进葡萄糖的利用以及胰岛素的增敏，有希望成为一类2型糖尿病治 疗药物。该试验说明，本发明萸炙黄连可作为胰岛素增敏剂使用，胰岛素增敏剂是指噻唑 烷二酮(TZDs)衍生物，又称罗格列酮。1982年研究其降脂作用，同时发现还有减肥降低血 糖作用。其主要通过结合和活化过氧化物酶增殖物激活受体PPARy起作用，PPARy受体 被激活后通过诱导脂肪生成酶和与糖代谢调节相关蛋白的表达，促进脂肪细胞和其他细胞 的分化，并提高细胞对胰岛素作用的敏感性，减轻胰岛素抵抗，故被称为胰岛素增敏剂。(张 文，治疗糖尿病药物的发展历史，《中国执业药师》，2008年2期)胰岛素增敏剂除了包含胰 岛素增敏剂激动剂外，还包括维甲酸受体激动剂，3 3受体激动剂等(蔡小花，等，胰岛素增 敏剂类糖尿病药物研究进展，怀化医专学报，2002，1 (2)。试验例4姜炙黄连提取浸膏对糖尿病整体动物模型的影响方法(1)姜炙黄连对正常小鼠空腹血糖的影响取ICR小鼠，雌雄各半，体质量18 22g。按体质量分成随机分组，每组10只，即 正常对照组、二甲双胍对照组、盐酸小檗碱对照组、黄连生品组、姜炙黄连组。各组小鼠按表 4设计剂量灌胃给药，每日1次，连续7天。末次给药后45min (禁食不禁水8h)，小鼠眼眶 取血，3000r/min离心lOmin，分离血清，按试剂盒测定说明书测定小鼠空腹血糖(FBG)。表5姜炙黄连提取浸膏对正常小鼠FBG的影响) 注与正常组比较，P > 0.05由表5可知，与空白组相比较，姜炙黄连对正常小鼠空腹血糖(FBG)均无明显影响 (P > 0. 05)，盐酸小檗碱对正常小鼠空腹血糖(FBG)均无明显影响(P > 0. 05)。(2)姜炙黄连对四氧嘧啶致小鼠糖尿病模型的影响取ICR小鼠，雌雄各半，体质量18 22g。按体质量分层随机分组，每组10只，分 组同上。经文献改进，试验前小鼠禁食18h。第2日早晨小鼠尾静脉注射的四氧嘧啶溶液 40mg/kg造模，注射后4h模型小鼠灌胃50 %葡萄糖，0. 4ml/只，24h后小鼠再次尾静脉注射 四氧嘧啶溶液40mg/kg造模，同时4h后模型小鼠灌胃50%葡萄糖，0. 4ml/只。造模24h后， 各组小鼠按表4设计剂量灌胃给药，每日1次，连续7天。第7天末次给药后45min(禁食 不禁水8h)，小鼠眼眶取血，3000r/min离心lOmin，分离血清，按试剂盒测定说明书分别测 定小鼠糖化血清蛋白(GSP)和空腹血糖(FBG)的含量。表7姜炙黄连对四氧嘧啶小鼠糖尿病模型GSP和FBG的影响( ± s ) 注与模型组比较，*P< 0. 05，**P < 0.01由表7可知，与空白组比较，模型组小鼠尾静脉注射四氧嘧啶72h后，均出现多食、 多饮、多尿等症状，模型组小鼠糖化血清蛋白含量和空腹血糖含量明显升高，表明四氧嘧啶 致小鼠糖尿病模型造模成功(P <0.01)。与模型组比较，姜炙黄连能明显降低小鼠血清糖 化血清蛋白和空腹血糖的含量(p<0.01)，表明各给药组能通过减弱四氧嘧啶对胰岛β细 胞的损伤或改善受损伤的β细胞的功能来发挥降血糖作用，作用优于黄连生品。(3)姜炙黄连对STZ+高脂高糖高盐乳液复合2型糖尿病模型的影响取ICR小鼠，雌雄各半，体质量18 22g。按体质量分层随机分组，每组10只，分组 同2. 1. 2。实验时小鼠禁食18h，第2日早晨小鼠腹腔注射STZ缓冲液100mg/kg (空白组注射 等量的0. lmol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液)，注射后6h各组小鼠灌胃50%葡萄糖，0. 4ml/ 只，2d后除空白组外，各组小鼠开始灌胃给予高脂高糖高盐乳液0.4ml/只，连续14d。每天 给予高脂乳液同时，各组小鼠按表4设计剂量灌胃给药，末次给药后40min，小鼠眼眶取血， 3000r/min离心lOmin，分离血清，按试剂盒测定说明书分别测定小鼠空腹血糖(FBG)、糖化 血清蛋白(GSP)的含量。表8姜炙黄连提取浸膏对小鼠STZ复合模型GSP和FBG的影响(χ ^ ) 注与模型组比较，*P< 0. 05，**P < 0.01由表8可知，与空白组比较，模型组小鼠糖化血清蛋白含量和空腹血糖含量明显 升高，血脂TC、TG水平也明显升高，表明小鼠2型糖尿病糖脂紊乱复合模型造模成功(P < 0.01)。与模型组比较，姜炙黄连能明显降低小鼠血清糖化血清蛋白和空腹血糖的含量 (P < 0. 05 0. 01)。姜炙黄连降低糖化血清蛋白的作用优于黄连生品及盐酸小檗碱。实验研究结果表明，生品黄连中总生物碱含量和总多糖含量姜炙黄连相当的情况 下，姜炙黄连可以明显改善糖尿病的症状、缓解胰岛素抵抗，对正常血糖水平均无明显影 响，药效明显优于生品黄连。
权利要求
姜炙黄连在制备PPARγ激动剂的药物中的用途。
2.根据权利要求1的用途，其特征在于所述的药物是抑制3T3-L1前脂肪细胞分化、 提高3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖利用率的药物或胰岛素增敏剂。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的药物是降低血脂功能、改善胰 岛素抵抗的药物。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的药物是治疗糖尿病及其并发 症的药物。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的用途，其特征在于；所述的姜炙黄连的主要指标 成分包括药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱及其以上生物碱成分的盐 酸盐，其中，所述的药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的重量配比为 4-7 5-10 14-16 28-33 25-27 100。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述的药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄 连碱、巴马汀、小檗碱的重量配比为 4. 74-6. 99 5.81-9.25 14. 20-15. 20 28. 37-32. 9925. 03-26. 79 100。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于所述的药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄 连碱、巴马汀、小檗碱的重量配比为5. 86 7. 53 14. 70 30.68 25.91 100。
8.一种具有抑制3T3-L1前脂肪细胞分化、提高3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖利用率的药 物组合物，其特征在于它是由下述方法制备而成取净姜炙黄连，加水煎煮1 3次，每次 0. 5 3小时，每次加水量为6 10倍量，滤过，合并提取液，浓缩，备用，加入药学上可接受 的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于它是由下述方法制备而成取净姜 炙黄连，加水煎煮3次，每次3小时，每次加水量为10倍量，滤过，合并提取液，浓缩，备用。
10.根据权利要求8或9所述的药物组合物，其特征在于所述的制剂是口服制剂。
全文摘要
本发明提供了姜炙黄连在制备胰岛素增敏剂及PPARγ激动剂的药物中的用途，具有抑制3T3-L1前脂肪细胞分化、提高3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖利用率或作为胰岛素增敏剂或降低血脂功能及在改善胰岛素抵抗或糖尿病药物中的用途。本发明还提供了一种具有抑制3T3-L1前脂肪细胞分化、提高3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖利用率的药物组合物。本发明涉及的姜炙黄连及其提取浸膏，具有抑制3T3-L1前脂肪细胞分化功能的药物，可用于改善胰岛素抵抗及治疗糖尿病及其并发症，具有明确的药效，且药效优于盐酸小檗碱和生品黄连。
文档编号A61K125/00GK101874831SQ20101017484
公开日2010年11月3日 申请日期2010年4月30日 优先权日2009年4月30日
发明者孟宪丽, 张艺, 李佳川, 赖先荣, 郑海杰 申请人:成都中医药大学