用于预防和治疗心衰的组合物和方法

专利名称：用于预防和治疗心衰的组合物和方法
用于预防和治疗心衰的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求于2009年6月12日提交的美国临时申请第61/186，709号和于2009年6月17日提交的美国临时申请第61/187，905号的优先权，通过引用将上述申请的全部内容并入本文。发明背景
提供以下描述是为了有助于阅读者的理解，并不是承认提供的信息或引用的文献是本发明的现有技术。心衰(HF)是多种病理生理学改变和功能代偿的结果，所述病理生理学改变和代偿性变化导致左心室(LV)肥大、功能紊乱和扩张、全身血管阻力增加和神经内分泌系统激活。由于HF的发病率和死亡率高并且目前针对HF的可用治疗方法非常有限，所以HF的有效治疗已经引起了越来越广泛的注意。HF是危及生命的疾病状态，并且是西方国家中死亡率和发病率的主要原因之一，而且例如香港和中国的亚洲发达地区也表现了相似的趋势。仅在美国，约五百万人患有HF，并且每年诊断出约550，000的新病例。尽管最近的几十年来HF的医学治疗已得到显著提高，但是HF仍然是超过65岁人群的首要入院原因，一年死亡率为10%,五年后死亡率为50%。HF的特征为血液动力学参数(预负荷和心输出量)的改变，并伴随与对肥大心脏的刺激有关的亚细胞异常，所述心肌肥大还不足以保持足够的心输出量。尽管大量与HF相关的研究集中在受损组织的鉴定、定量和表征、不同治疗方式的评估和HF的根本机制的理解，但目前还没有HF的有效治疗方式。尽管如此，通过治疗引起心衰的基本疾病可以延缓HF的恶化速度。发明概述本发明涉及包含三萜类和多酚类化合物的组合物，所述组合物用于治疗心衰(HF)。一方面，本发明提供预防或治疗有需要的哺乳动物个体中的心衰的方法，包括给予所述哺乳动物个体有效量的三萜类和多酚类化合物的组合物(TPs)，其中所述的TPs三萜类和多酚类化合物的组合物包含(i) 一种或多种选自积雪草酸、Niga-ichigoside FI、Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草甙、委陵菜酸和羟基积雪草酸的三萜类化合物；和(ii) 一种或多种选自Gemin A、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸的多酚类化合物。在一个实施方案中，所述三萜类和多酚类化合物的组合物包含积雪草酸、Niga-ichigoside FI、Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草式、委陵菜酸、轻基积雪草酸、Gemin A、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸。在一个实施方案中，其中所述心衰是由以下引起的高血压；缺血性心脏病；暴露于心脏毒性化合物；心肌炎；甲状腺疾病；病毒感染；齿龈炎；药物滥用；酒精滥用；心包炎；动脉粥样硬化；血管病；肥厚型心肌病；急性心肌梗塞；左心室收缩功能障碍；冠状动脉搭桥手术；饥饿；饮食失调；或遗传缺陷。在一个实施方案中，所述个体是人。
在一个实施方案中，所述组合物是口服给药、局部给药、全身给药、静脉内给药、皮下给药、腹膜内给药或肌内给药。在一个实施方案中，所给予的组合物的量为O. 01mg/kg/天至2000mg/kg/天。在一个实施方案中,所述有效量的组合物是包含所述组合物和药学可接受的载体的制剂的形式。在一个实施方案中，所述方法还包括给予选自利尿剂、ACE抑制剂、地高辛和β阻断剂的其它治疗剂。另一方面，预防或治疗哺乳动物个体中的心衰的方法，所述方法包括给予有需要的个体有效量的日本路边青(Geum japonicum)有机提取物。在一个实施方案中，所给予的提取物的量为约O. OOlmg至约2000mg提取物/千克个体体重/天。在一个实施方案中，所述提取物是口服给药。在一个实施方案中，所述提取 物是通过皮下注射、肌内注射或静脉输注进行给药。在一个实施方案中，所述提取物是日本路边青的低级烷基醇提取物。在一个实施方案中，所述低级烷基醇具有1-6个碳原子。在一个实施方案中，所述低级烷基醇是乙醇。另一方面，本发明提供用于治疗哺乳动物个体中的心衰的药物组合物，其包含有效量的三萜类和多酚类化合物的组合物，其中所述三萜类和多酚类化合物的组合物包含(i) 一种或多种选自积雪草酸、Niga-ichigoside Fl> Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草甙、委陵菜酸和羟基积雪草酸的三萜类化合物；和(ii) 一种或多种选自GeminA、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸的多酚类化合物。在一个实施方案中，所述TPs包含积雪草酸、Niga-ichigoside Fl、Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草式、委陵菜酸、轻基积雪草酸、Gemin A、木麻黄鞋宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸。另一方面，本发明提供用于治疗哺乳动物个体中的心衰的药物组合物，其包含有效量的日本路边青有机提取物和药学可接受的载体。在一个实施方案中，所述有机提取物是乙醇提取物。在一个实施方案中，所述有机提取物是甲醇提取物。附图
简要描述图I提供的数据显示了 ECG测量。T表示TPs治疗组，C表示介质处理对照组。基线-T和基线-C :两个组在手术和治疗之前获取的ECG图。CHD-TO后和CHD-CO后两个组在手术完成当天获取的ECG图。CHD-T30后和CHD-C30后在CHD手术后30天、任何治疗之前，两个组表现出显著降低的ST段。CHD-T40后和CHD-C40后手术后40天并且TPs治疗或介质处理了 10天。CHD-T60后和CHD-C60后手术后60天后并且APs或介质处理了30天。图2提供的数据表明TPs治疗的心脏功能的改善。“假手术”表示进行开胸手术但不进行LAD结扎。B =LAD结扎之前。2W :结扎后2周。两组大鼠(治疗和对照)的LVEF值都显著下降。4W:结扎后4周，LVEF进一步下降，导致HF。在这次超声心动图测量之后立即开始TPs治疗。6W:结扎后6周且TPs治疗2周，LVEF增加了 20%。8W:结扎后8周且TPs治疗4周。LVEF进一步改善，相比之下，介质处理对照组的心脏(对照)的LVEF进一步下降。图3显示了 HF的组织学分析。i_c :介质处理对照组的心脏，左心室呈现灰白色、心室扩大、呈袋状；i_t TPs治疗的心脏的外观呈现红色并且紧实；ii_c LV前壁变薄且发白，心室扩大(虚线圈出);iit TPs治疗的心脏中的LV梗塞区呈现红色并且室壁较厚(虚线圈出):介质处理的心脏的梗塞区中的纤维化代替(Fib):观察到新血管
形成和心肌再生(RM)替代梗塞的心脏组织。Ctr :介质处理的心脏的整个梗塞区都被纤维瘢痕(马森(Manson)三色染色染成蓝色)所替代。Com :相比之下，在TPs治疗组中，心肌梗塞区显著较小，并且发现梗塞区的心肌被再生的心肌组织(RM)所替代。图4是TPs对HF患者的治疗效果的评价。超声心动图检查表明总体LV功能得到显著改善，被治疗患者的LV射血分数( EF)恢复了 25-94%，LV短轴缩短率(FS)恢复了31-100%。由于心衰导致的LV扩大而变薄的LV壁从平均厚度5. 5mm恢复至平均8mm, LV血液灌注(SPECT)显著改善并且在ECG中ST段恢复。图5显示了由于多次心脏病发作而患严重HF的患者的超声心动图。治疗之前，左心室直径(LVD)惊人地扩大至170. 8X78. 3mm。由于严重HF，左心室壁厚度变薄(6. 7mm)并且LVEF非常低(8%)。然而，4周药物治疗后，LVD显著恢复的至72X70mm;左心室壁厚度恢复至8mm并且LVEF增加了 260%，达到21%。发明详细描述在各个方面，本发明提供了用于预防或治疗心衰的化合物、提取物和方法。本文提供的化合物可以配制为可用于公开的方法的药物组合物和药物。还提供了所述化合物和提取物在制备药物制剂和药物中的用途。应当理解，为了提供对本发明的实质性理解，下文以不同详细程度描述了本发明的某些方面、模式、实施方案、变化和特征。以下术语在全文中按下文所述使用，除非上下文明确指明另外情况。本文中，试剂、药物或肽对个体的“给药”包括将化合物引入或递送至个体以行使化合物预期功能的任何途径。可以通过任何合适的途径进行给药，包括口服、鼻内、胃肠外(静脉内、肌内、腹膜内或皮下)或局部给药等。给药包括自给药和由他人给药。本文所用的术语“充血性心衰”(CHF)，“慢性心衰”,“急性心衰”和“心衰”(HF)可交换使用，并且是指特征为异常低的心输出量的任何疾病状态，其中心脏不能以足够的速率或足够的量进行泵血。当心脏不能充分泵血至身体的其它部分或当一个或多个心瓣变得狭窄或功能丧失时，血液会返回至肺中，导致肺中液体充塞。如果这种回流长期存在，会发生心衰。心衰的典型症状包括呼吸短促(呼吸困难)、疲劳、虚弱、平躺时难以呼吸和腿、踝或腹部肿胀(浮肿)。心衰的原因与多种病症有关，包括冠心病、系统性高血压、心肌病或心肌炎、先天性心脏病、心瓣异常或心脏瓣膜病、严重肺病、糖尿病、严重贫血、甲状腺机能亢进、心律失常或节律障碍以及心肌梗塞。充血性心衰的主要标志是心脏肥大(心脏变大)、呼吸急促(快速呼吸；在左侧衰竭时发生)和肝肿大(肝脏变大；在右侧衰竭时发生)。本文所用的术语组合物的“有效量”或“药学有效量”或“治疗有效量”是足以实现所需治疗和/或预防效果的量，例如，实现了与待治疗疾病相关的症状的预防或减少的量。给予个体的本发明组合物的量取决于疾病的类型、严重程度以及个体的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。其还取决于疾病的程度、严重性和类型。本领域技术人员根据这些因素以及其它因素能确定合适的剂量。本发明的组合物也可以与一种或多种其它治疗化合物联合给药治疗。
本文所用的术语“个体”是指哺乳动物，例如人，但也可以是动物，例如，家畜(例如，狗、猫等)，农畜(例如，牛、羊、猪、马等)和实验室动物(例如，猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠
坐^
寸/ ο本文所用的“基本上纯的”表示组合物或混合物被从天然伴随其的组分中分离出来。通常，当物质以重量计至少60%脱离与其天然伴随的其它天然存在的有机分子时，所述物质是基本上纯的。在某些实施方案中，制备物的纯度为以重量计至少75%、更优选至少90%、95%并且最优选至少99%。产生基本上化 学纯的化合物的化合物纯化方法是本领域技术人员已知的。然而，基本上化学纯的化合物可以是立体异构体的混合物。在这种情况下，进一步纯化能增加组合物的特异性活性。本文所用的术语“治疗(treating) ”或“治疗(treatment) ”或“缓解”是指治疗性处理和预防性(prophylactic)或预防性(preventative)措施,其目的是预防或延缓(减轻)所针对的病理疾病状态或病症。如果个体按照本文所述方法接受了治疗量的所述芳香-阳离子肽后，该个体一种或多种心衰指征和症状表现出可观察到的和/或可检测出的降低或改善，则个体的心衰被成功地“治疗” 了，所述心衰指征和症状例如心脏肥大、呼吸急促和肝肿大。还应当理解，所述的医学疾病状态的预防或治疗的各种方式意图表示“实质性的”，其不仅包括完全地预防或治疗，还包括未达到完全地预防或治疗，但实现了一些生物学或医学相关的结果。本文所用的治疗心衰还指治疗任何一种或多种可能引起心衰的疾病状态，包括但不限于降低的心肌收缩能力、异常舒张顺应性、降低的心搏量、肺充血和降低的心输出量。本文所用的病症或疾病状态的“预防(prevention) ”或“预防(preventing) ”是指在统计学样品中，相对于未处理的对照样品，化合物能减少处理的样品中病症或疾病状态的发生，或者相对于未处理的对照样品，化合物能延缓病症或疾病状态的一种或多种症状的发作或降低其严重程度。本文所用的预防心衰包括阻止心衰开始、延迟心衰开始、阻止心衰的发展或进展、减缓心衰的发展或进展、延迟心衰的发展或进展和使心衰的进展从晚期阶段改善到较早期的阶段。本发明的组合物本发明提供利用来自多种植物的提取物和化合物以及该化合物的衍生物预防或治疗心衰的方法，所述植物包括日本路边青；仙鹤草(也称龙牙草(Agrimonia pilosaLedeb.))(蔷薇科(Rosaceae));和野百里香(Thymus mongolicus Ronn)(唇形科(Lamiaceae)),地椒(Herba Thymi)或百里香(Mongolian Thyme Herb)。在一些实施方案中，所述化合物是日本路边青、仙鹤草(Xian he cao)(仙鹤草(龙牙草)(蔷薇科))和野百里香(唇形科)的全植物、提取物，所述提取物例如有机提取物。在具体实施方案中，所述化合物是日本路边青的甲醇/乙醇提取物或其活性部位。在一些实施方案中，所述化合物是日本路边青提取物的部分。本发明提供利用来自多种植物的试剂和/或提取物和化合物以及该化合物的衍生物预防或治疗心衰的方法，所述植物包括日本路边青。在一些实施方案中，所述试剂是日本路边青的提取物，例如日本路边青的有机提取物。在具体实施方案中，所述试剂是日本路边青的甲醇/乙醇提取物或其活性部位。在某些实施方案中，所述试剂是单宁类，包括可水解的单宁类，例如Gemin A、B、C、D、E和F或以上的衍生物。在其它实施方案中，所述试剂是胳类化合物，例如熊果酸、epimolic acid、山楂酸、野鸦椿酸、委陵菜酸、2_轻基熊果酸、2，19-二羟基-熊果酸、2 α，3β，19α，23-四羟基乌索-12-烯-28-酸、2 α，3β，19α，23_ 三羟基乌索-12-烯-23，28-二酸以及以上的葡糖苷衍生物，例如Niga-ichigoside F1、野蔷薇葡萄糖酯和甜叶苷R1，或以上的混合物。在一个实施方案中，所述三萜类和多酚类化合物的组合物包含(i) 一种或多种选自积雪草酸、Niga-ichigoside FU Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草式、委陵菜酸和羟基积雪草酸的三萜类化合物；和(ii) 一种或多种选自Gemin A、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸的多酚类 化合物。在一个实施方案中，所述三萜类和多酚类化合物的组合物包含积雪草酸、Niga-ichigoside FU Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草式、委陵菜酸、羟基积雪草酸、Gemin A、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸。化合物Nigiachigoside Fl可见于多种植物种类。最常见的植物插田泡(Rubuscoreanus)、四角风车子(Combretum quadrangulare)、Rubus imperialis、茅莓(Rubusparvifolius)、荼红木(Aphloia theiformis)、枸骨叶(Desfontainia spinosa)、冬青栎(Quercus ilex L)、红毛悬钩子(Rubus pinfaensis)、舌甘荼(Rubus suavissimus)、悬钩子属(Rubus L) ο 所有植物Acaena pinnatifida、亮叶杨桐(Adinandra nitida)、药用牛舌草(Anchusa officinalis L)、荼红木、紫珠(Callicarpa bodinieri)、刚毛藤山柳(Clematoclethra scandens)、四角风车子、药囊花(Cyphotheca montan)、枸骨叶、四季青(Folium ilicis Purpureae)、日本路边青、紫萼路边青(Geum rivale)、紫萼路边青(Geum rivale L)、木姜冬青(ilex litseaefolia)、长圆果冬青(Ilex oblonga)、紫花冬青(Ilex purpurea)、蜂斗菜(Japanese butterbur)、Margyricarpus setosus、Paradrymonia macrophylla、Polylepis incana (蔷薇科)、夏枯草(Prunella vulgaris)、山樓花(Prunus serrulata var spontanea)、麻栎(Quercus acutissima Carruthers)、土耳其栎(Quercus cerris L)、樹树(Quercus dentata Thunb·)、青同(Quercus glauca)、冬青栎、覆互状栎(Quercus imbricaria)、月桂叶栎树(Quercus laurifolia Michx)、欧洲栓皮栎(Quercus suber L)、弗吉尼亚栎(Quercus virginiana)、金樓子(Rosa laevigataMichx)、野蔷薇(Rosa multiflora)、野蔷薇(Rosa multiflora Thunb·)、高山蔷薇(Rosatransmorrisonensis)、覆盆子(Rubi fructus)(覆盆子(Bogbunja))、粗叶悬钩子(Rubusalceaefolius Poir)、美洲黑莓(Rubus allegheniensis)、秀 _ 莓(Rubus amabilis)、插田泡、Rubus coriifolius、剌枚蔷薇(Rubus crataegifolius)、Rubus imperialis、Rubus imperialist^ 蔷薇科)、悬钩子属、茅莓、红毛悬钩子、Rubus sanctus Schreber、悬钩子种、甜荼、黄果悬钩子(Rubus xanthocarpus)、黄鼠狼花(Salvia tricupis)、白山地偷(Sanguisorba hakusanensis)、小地偷(Sanguisorba minor)、地偷(Sanguisorbaofficinalis)、 Sarcopoterium spinosum、 Strasburgeria robusta、山蒲桃(Syzygiumlevinei)、Verbascum wiedemannianum、Vochysia divergens和 Vochysia pacifica。化合物野蔷薇葡萄糖酯可见于多种植物种类。最常见的植物野蔷薇、玫瑰(Rosa rugosa)、四角风车子、非洲栓木树(Musanga cecropioides)、我鸟域委陵菜(Potentilla anserine)、祁州漏芦(Rhaponticum unifIorum)和悬钩子属。所有植物麦哲伦剌果(Acaena magellanica)、Acaena pinnatifida、软麥称猴桃(Actinidiaarguta)、亮叶杨桐、龙牙草(Agrimonia pilosa)、合欢(Albizzia julibrissin Durazz)、Anchusa strigosa、荼红木、毛杭子梢(Campylotropis hirtella(Franch Schindl))、四角风车子、大血藤(Daxueteng(Caulis sargentodoxae))、牛筋条(Dichotomanthestristaniaecarpa)、柿(Diospyros kaki L)、蛇莓(Duchesnea indica Focke)、日本路边青、木姜冬青、薄叶龙船花(Ixora finlaysoniana)、Licania licaniaeflora、Licaniapyrifolia、Margyricarpus setosus、非洲栓木树、蜂斗菜(Petasites japonicus)、大茴序(Pimpinella magna)、我鸟域委陵菜(Potentilla anserina L)、我鸟域委陵菜(Potentillaanserine)、洋委陵菜(Potentilla erecta)、洋委陵菜根莖、长柔毛委陵菜(Potentillagriffithii var velutina)、祁州漏芦、山剌玫(Rosa davurica)、金樓子、野蔷薇(Rosamultiflora)、野蔷薇(Rosa mul tiflora Thunb.)、玫瑰、无杆剌梨(Rosa sterilis)、小金樓(Rosa taiwanensis)、高山蔷薇、野蔷薇葡萄糖酯、覆盆子、悬钩子属、Rubus sanctusSchreber、悬钩子种、黄鼠狼花(Salvia tricupis)、高山地偷(Sanguisorba alpina)、小地偷、地偷、Sarcopoterium spinosum、大血藤(Sargentodoxa cuneata)、Terminaliaargentea、Verbascum wiedemannianum 和黄荆(Vitex altissima)。化合物2 α，3 β，19 α，23-四羟基乌索_12_烯_28_酸可见于多种植物种类。最常见的植物插田泡、四角风车子、枸骨叶、凌霄花(Campsis grandiflora)、Myrianthusarboreus、冬青栎、金樓子、覆盆子、悬钩子属、红毛悬钩子和羊蹄(Rumex japonicus)。所有植物Actinidia deliciosa cv Golden King、中越称猴桃(Actinidia indochinensis)、药用牛舌草、凌霄花、积雪草、石胡荽(Centipeda minima)、刚毛藤山柳、安勃鞘蕊花(Coleus amboinicus Loureiro)、毛喉鞘蕊花(Coleus forskohlii)、四角风车子、Cussoniabancoensis、枸骨叶、柳叶菜(Epilobium hirsutum L)、批杷(Eriobotrya japonica)、Gambeya boukokoensis、日本路边青、Hyptis capitata、紫花冬青、唇形科植物、大花紫薇(Lagerstroemia speciosa)、长萼野烟(Lobelia longisepala)、紫荆木(Madhucapasquiery)、Miconia traiIiiλMyrianthus arboreus、Ocotea suaveoIensΛParadrymoniamacrophylla、大茴序、兰山与山揽(Planchonella dueIitan Bakhuizan)、Polylepisincana、Pourouma guianensis、麻栎(Quercus acutissima Carruthers)、冬青栎、月桂叶栎树、弗吉尼亚栎、三花悬钩子(R koehneanus)、Rmedius、五月莓(R microphyllus)、五叶莓(R trifidus)、日本杜鹽(Rhododendron japonicum)、金樓子、野蔷薇、高山蔷薇、覆盆子、寒莓(Rubus buergeri)、插田泡、捕圆悬钩子(Rubus ellipticus)、Rubus imperialis、悬钩子属、红毛悬钩子、香莓(Rubus pungens Camb var oldhamii)、Rubus sanctusSchreber、羊蹄、小地偷、Sarcopoterium spinosum、草毒(Strawberry cv Houkouwase)、华山帆(Symplocos chinensis)、白擅(Symplocos paniculata)、黄牛奶树(Symplocosspicata)、山蒲桃、Vochysia divergens 和 Vochysia pacifica。化合物甜叶苷可见于多种植物。最常见的植物茅莓、祁州漏芦、地榆、和悬钩子Mo 所有植物木瓜(Chaenomeles sinensis)、日本路边青、满树星(Ilex aculeolata)、散花冬青(Ilex godajam)、铁冬青(Ilex rotunda Thunb.)、返顾马先蒿(Pedicularisresupinata oppositifolia)、青网、Quercus robur stenocarpa、祁州漏芦、粗叶悬钩子、蛇泡筋(Rubus cochinchinensis)、插田泡、剌枚蔷薇、悬钩子属、小花悬钩子(RubusparvifIorus)、郝帽悬钩子(Rubus pileatus)、Rubus sanctus Schreber、甜荼、地偷和亚洲络石(Trachelospermum asiaticum)。
化合物委陵菜酸(野雅椿酸)可见于多种植物。最常见的植物枇杷、野蔷薇、非洲栓木树、木瓜、Myrianthus arboreus、紫苏(Perilla frutescens)、玫瑰、芒荀草(Acanthochlamys bracteata)、龙牙草、木瓜(Chaenomeles sinensis Koehne)、蛇毒(Duchesnea indica)、多裂委陵菜(Potentilla multifida L)、祁州漏芦、金樓子、掌叶覆盆子(Rubus chingii)、悬钩子属、羊蹄和地榆。所有植物长果黄麻(C. olitorius (黄麻植物))、Acaena pinnatif ida、芒荀草、龙牙草、Anchusa strigosa、紫金牛(Ardisiajaponica)、软紫草(Arnebia euchroma)、羊齿天门冬(Asparagus filicinus Bonpl)、紫珠(II)、凌霄花、毛杭子梢(Franch Schindl)、Cecropia lyratiloba miquel、木瓜、木瓜(Chaenomeles sinensis (Thouin) Koehne)、木瓜(Chaenomeles sinensis Koehne)、Cili (繅丝花(Rosa roxburgh ii))、安勃鞘蕊花、毛喉鞘蕊花(Coleus forskohlii) ΛColeusspicatus、黄麻(Corchorus capsularis)、西门土灰枸子(Cotoneaster simonsii)、Cowainea mexicana、无毛山植(Crataegus pinnatifida var psilosa)、Cunilalythrifolia、Debregeasia salicifolia、马蹄金(Dichondra repens Forst)、南川鸾鸶兰(Diuranthera inarticulata)、蛇莓、蛇莓、东紫苏(Elsholtzia bodinieri)、香薷属草药(Elsholtzia herb)、柳叶菜、台湾批杷(Eriobotrya deflexa)、批杷(Eriobotryajaponica)、批杷(Eriobotrya japonica calli)、批杷(Eriobotrya japonica L)、批杷(Eriobotrya japonica Lindl)、Eriope blanchetii、野牙鸟椿(Euscaphis japonica)、女贞子(Fructus ligustri lucidi)、紫萼路边青、Goreishi、对贺氏草(Hoslundiaopposita(唇形科)、Hyptis capitata、弯维香荼菜(Isodon Ioxothyrsus)、山地香荼菜(Isodon oresbius)、Jacaranda caucana Pittier (紫蔵科)、大花紫薇、LepechiniacaulescensλLeucoseptrum stellipillum、Licania pyrifolia、地異(Lycopus lucidus)、Margyricarpus setosus、Marsypianthes chamaedrys、梓樣留兰香(Mentha citrata)、非洲栓木树、Myrianthus arboreus、Myrianthus serratus、康藏荆芥(Nepeta prattii)、罗勒(Ocimum basilicum)、铜钱树(Paliurus hemsleyanus)、Paradrymonia macrophylla、紫苏、糖苏(Phlomis umbrosa)、中型风箱果(Physocarpus intermedius)、大茴序、Polylepis incana(蔷薇科)、■域委陵菜、翻白草(Potentilla discolor)、金露梅(Potentilla fruticosa)、长柔毛委陵菜、多裂委陵菜、多裂委陵菜(蔷薇科)、直立委陵菜(Potentilla tormenti I la)、Poterium ancistroides、Pourouma guianensis、夏枯草属(Prunella Linn)、夏枯草、大叶桂樓(Prunus zippeliana)、Pygeum acuminatumColeb、臀果木(Pygeum topengii)、豆梨(Pyrus calleryana decne)、多荀蔷薇(Rmultibracteata)、Rabdosia effusa HaraΛ 香荼菜属(Rabdosis)(花朵)Hasskarl、Relhania、祁州漏芦、美蔷薇(Rosa bella)、西北蔷薇(Rosa davidii)、山剌玫、金樓子、金樓子、野蔷薇(Rosa multiflora)、野蔷薇(Rosa multiflora Thunb.)、玫瑰、絹毛蔷薇(Rosa sericea)、川滇蔷薇(Rosa soulieana)、无籽剌梨、小金樓、高山蔷薇、粗叶悬钩子、寒莓、掌叶覆盆子、蛇泡筋、椭圆悬钩子(Rubus ellipticus Smith)、白叶莓(Rubusinnominatus)、灰毛泡(Rubus irenaeus)、悬钩子属、羽萼悬钩子(Rubus moluccanus (蔷薇科))、乌泡子(Rubus parkeri)根、红毛悬钩子、香莓、Rubus sieboldii、悬钩子种、木莓(Rubus swinhoei)、黄果悬钩子、羊蹄、毛梗豨莶(S glabrescens)、小花清风藤(Sabiaparviflorawallex Roxb)、构树鼠尾草(Salvia broussonetii)、日本鼠尾草(Salviajaponica)、丹参(Salvia par amiltiorrhiza)、粘毛鼠尾草(Salvia roborowskiiMaxim)、黄鼠狼花(Salvia tricupis)、三叶鼠尾草(Salvia trijuga Diels)、地榆、地榆族(Sanguisorbeae)、四齿四棱草(Schnabelia tetradonta)、单瓣李叶绣线菊(Spiraeaprunifolia var simpliciflora)、山牛蒡(Synurus excelsus)、Tecoma mollis Humb>厚皮香(Ternstroemia gymnanthera)愈伤组织、黄水枝(Tiarella polyphylla)、飞龙掌血(Toddalia asiatica)、锐尖山香圆(Turpinia arguta)叶片、马鞭草(Verbenaofficinalis)、Vismia guineensis 和黄荆。日本路边青有机提取物的制备 提供了制备日本路边青有机提取物的方法。该方法包括以下步骤(a)用醇提取日本路边青植物，所述醇选自C1-C4醇。该步骤可以室温下重复3-6次，通常5次。在进行步骤(a)之前，可以将植物材料制成粉末。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。通常，添加的醇的重量是待提取的日本路边青重量的ι- ο倍。所述方法还可以包括以下步骤(b)将获自步骤(a)的提取物干燥为干燥粉末；和(c)用C6烷、EtOAc和选自C1-C4醇的醇依次提取获自步骤(b)的粉末。C6烷包括具有6个碳原子的环状和非环状烷，包括，例如，环己烷、正己烷和新己烷等。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇。所用的有机溶剂的重量通常是待进一步提取的粉末重量的1-10倍。上文所述的方法还可以包括过滤提取物以去除其中的任何不溶性粉末。可以在高于室温的温度下(例如50°C )的减压下完成干燥步骤。在一个实施方案中，本发明的提取物、部位和化合物是利用水和/或有机溶剂从植物原材料提取得到的，包括以下过程I.将水和/或有机溶剂添加到植物材料，将整体进行诸如浸泡/浸滤、超声或微波的处理而进行提取；2.在提取过程之前或之后，利用石油醚、己烷或氯仿类型的溶剂进行脱脂；3.任选地，利用乙酸乙酯或乙醚类型的有机溶剂对回收的提取物进行进一步提取；4.任选地，将获得的粗提取物浓缩，并根据需要将其冻干。—方面，考虑到允许获得的富集，粗提取物可以接受色谱纯化过程。在一个实施方案中，使用离心分配色谱(CPC)。该技术具体描述于A. P. FOUCAULT，Ed.，CentrifugalPartition Chromatography (离心分配色谱)，Chromatographic Science Series, MarcelDekker Inc.,1995,68 或 W. D. CONWAY, Ed. , Countercurrent Chromatography apparatustheory and applications (逆流色谱装置理论和应用)，VCH Publishers Inc. ,1990。CPC是基于通过混合两种或更多种溶剂或溶液而制备的两种不混溶液相之间的溶质分配。所述两种相中的一种通过离心力保持静止。溶剂、它们的比例和流速的选择与CPC柱中静止相的稳定性和实际压力密切相关。因此，本领域技术人员能根据所需纯化的提取物的性质选择最合适的溶剂。这些不同的提取物，即粗提取物或富集的提取物，也在本发明的范围内。实施其它分离过程允许分离这些富集了一种或多种化合物的提取物。使用合适溶剂的按照适合于所选择的分离的比例的混合物，可以对从粗提取物富集的部分或对粗提取物自身进行这些分离。
用于预防或治疗心衰的方法和组合物心衰(HF)是一系列指征和症状，所有指征和症状都是由心脏泵血不足导致心输出量降低而引起的。HF可以由慢性高血压、心肌缺血、心肌梗塞或特发性心肌病等引起。与充血性衰竭症状相关的心脏病包括扩张型心肌病和肥厚型心肌病。HF的典型症状包括呼吸短促、浮肿和极度疲劳。随着疾病发展，心输出量的进一步减少可以引起其它身体器官的衰竭，导致心源性休克、心律失常、心电机械分离和死亡。一方面，本发明涉及通过给予三萜类和多酚类化合物的组合物(TPs)来治疗或预防心衰。本发明人发现TPs在培养的胎儿心肌 细胞对抗包括缺氧应激(hs)、产前应激(ps)和心脏毒素(ct)在内的应激中具有显著的保护效果。利用亚临床HF动物模型的进一步研究表明TPs在动物模型中能有效地治疗心肌梗塞引起的心衰动物模型。此外，本研究已将动物模型中有效治疗HF的结果成功转化为有效地治疗前期患有心肌梗塞、高血压和慢性冠心病的人类心衰患者。一方面，本发明涉及由三萜类和多酚类化合物组成的天然化合物组合物，用于治疗HF。合适的三職类化合物包括但不限于积雪草酸、Niga-ichigoside Fl、Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草甙、委陵菜酸、羟基积雪草酸，优选的多酚类化合物是Gemin A、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸。一方面，提供预防或治疗HF的方法，包括给予有需要的哺乳动物来自多种植物的试剂、活性部位和/或提取物和化合物和该化合物的衍生物，所述植物包括日本路边青、R. imperialis、Vochysia pacifica、插田泡、美洲黑莓、茅莓、龙牙草、蛇含委陵菜(Potentilla kleiniana)、台湾马桑(Coriaria japonica)和葡萄杆。在一些实施方案中，所述提取物是获自植物日本路边青的有机提取物。在某些实施方案中，所述试剂是日本路边青的甲醇/乙醇提取物或其活性部位。示例性的试剂包括三萜类化合物和多酚类化合物，包括可水解的单宁类，例如Gemin A、B、C、D、E和F或其衍生物。在其它实施方案中，所述试剂是職类化合物，例如例如熊果酸、epimoIic acid、山楂酸、野鸦椿酸、委陵菜酸、2-轻基熊果酸、2，19-二羟基-熊果酸、2 α，3β，19 α，23_四羟基乌索-12-烯-28-酸、2 α，3β，19 α，23-三羟基乌索-12-烯-23，28- 二酸及其葡糖苷衍生物，例如Niga-ichigoside Fl、野蔷薇葡萄糖酯和甜叶苷Rl或其混合物。另一方面，用于预防或治疗心衰的试剂是含有一种或多种赋形剂、载体或填充剂的药物组合物的一部分。在一个实施方案中，所述药物组合物以单位剂量形式包装。所述单位剂量形式能有效改善个体的心输出量、呼吸短促、浮肿和疲劳。在一些实施方案中，使用心衰的体内模型来评价试剂对个体的效果。合适的体内模型包括大鼠冠状动脉结扎和中毒性心肌病模型，后者包括给予动物个体阿霉素或蒽环霉素。研究了试剂在治疗动物个体中心衰的效果，并与合适的对照进行比较。药物组合物的制剂和剂量可以按照本文所述治疗的个体包括真核生物，例如哺乳动物，例如人、羊、牛、马、猪、犬科动物、猫科动物，非人灵长动物、小鼠和大鼠。可以处理的细胞包括真核细胞，例如来自上述个体的细胞、或植物细胞、酵母细胞，可以处理的细胞还包括原核细胞，例如细菌细胞。例如，可以给予农畜调节化合物来改善它们更长时间地对抗农场疾病的能力。在本发明的各个实施方案中，进行合适的体外或体内测定来确定本发明试剂(提取物、有效部位和化合物)的效果以及所述试剂的给药是否适用于治疗个体所患疾病或医学疾病状态。这些测定的实例在上文中结合具体疾病或医学治疗进行了描述。通常，足以实现预防或治疗效果的本发明组合物的有效量为约O. OOlmg/千克体重/天至约10，OOOmg/千克体重/天。合适的情况下，剂量为约O. Olmg/千克体重/天至约IOOOmg/千克体重/天。对于试剂给药，剂量范围可以为每天、每两天或每三天约O. 01至1000mg/kg宿主体重，更通常为O. I至500mg/kg宿主体重。示例性的治疗方案为每两天一次或每周一次或每月一次给药。通常多次给予所述试剂。单次剂量之间的间隔可以是每天、每周、每月或每年。或者，可以以缓释制剂的形式给予所述试剂，在这种情况下，需要较少的给药频率。剂量和频率根据试剂在个体中的半寿期而不同。给药的剂量和频率可以根据是预防性处理还是治疗性处理而不同。在预防性应用中，以相对低频率的间隔长期给予 相对低的剂量。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展被延缓或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善。在此之后，可以 给予患者预防方案。毒性合适的情况下，本文所述的有效量(例如，剂量)的试剂能提供治疗益处，而不会对个体产生明显毒性。可以通过标准药学程序在细胞培养物或实验动物中确定本文所述的试剂的毒性，例如，通过测定LD5tl(致50%群体死亡的剂量)或LDltltl(致100%群体死亡的剂量)。毒性效应和治疗效果的剂量比是治疗指数。获自这些细胞培养物分析和动物研究的数据可以用于制定人类中使用无毒性的剂量范围。本文所述的试剂的优选剂量处于包括有效剂量且仅具有很小的毒性或无毒性的循环浓度的范围内。根据所用剂型和给药途径，剂量可以在该范围内变化。确切的制剂、给药途径和剂量可以由医师根据个体的疾病状态来选择° 参见，例如，Fingl et al, In The Pharmacological Basis of Therapeutics,Ch. I (治疗的药理学基础，第一章)(1975)。根据本发明的方法，可以将所述试剂合并到适于给药的药物组合物中。在一些实施方案中，所述药物组合物可以包含适于对个体进行给药的形式的纯化的或基本纯化的TPs和药学可接受的载体。在其它实施方案中，所述药物组合物所包含的药学可接受的载体在一定程度上由所给予的具体组合物以及用于给予组合物的具体方法决定。因此，适于给予组合物的药物组合物制剂有很多种(参见,例如，Remington' s PharmaceuticalSciences (雷明顿制药科学)，Mack Publishing Co. , Easton, PA 18th ed. , 1990)。通常将药物组合物配制为无菌的、基本上等渗的并且完全符合美国食品与药品管理局的所有良好生产规范(GMP)规程。当形容组合物、载体、稀释剂和试剂时，术语“药学可接受的”、“生理学容许的”以及其语法变体可交换使用，并且表示该材料能够给予个体,并且不会产生需要禁止组合物给药的程度的不希望的生理学影响。例如，“药学可接受的赋形剂”表示该赋形剂可用于制备通常是安全的，无毒性的且满足需要的药物组合物，并且还包括兽医用途以及人类制药用途能接受的赋形剂。这些赋形剂可以是固体、液体、半固体，或者对于喷雾剂组合物来说，可以是气体。本领域技术人员可容易地确定本发明的具体药物和组合物的合适的给药时机、顺序和剂量。这些载体或稀释剂的合适的实例包括但不限于，水、盐溶液、林格氏液、葡萄糖溶液和5%人血清白蛋白。还可以使用脂质体和诸如不挥发性油的非水性载体。这些介质和化合物在药学活性物质中的使用是本领域公知的。除了与所述试剂不相容的任何常规介质或化合物之外，其它介质或化合物可用于组合物中。还可以将补充性活性化合物合并到组合物中。本发明的药物组合物的配制符合其预期的给药途径。本发明的组合物可以通过以下途径给药胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径或作为吸入剂。所述试剂可以任选地与在治疗各种疾病中至少有一定效果的其它试剂联合给药。胃肠外、真皮内或皮下施用的溶液 或悬液可以包括以下组分无菌稀释剂，例如注射用水、盐溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌化合物，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合化合物，例如乙二胺四乙酸(EDTA);缓冲液，例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的化合物，例如氯化钠或葡萄糖。适于注射使用的药物组合物包括无菌水性溶液(在可溶于水的情况下)或用于临时制备无菌注射液或分散液的分散剂和无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL (BASF,Parsippany,N. J.)或磷酸盐缓冲液(PBS)。无论在什么情况下，组合物必须是无菌的，并且其流动性应当易于注射。其在生产和贮存条件下必须稳定，并且必须能抵抗诸如细菌和真菌的微生物的污染活动。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液态聚乙二醇等)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。可以例如通过使用诸如卵磷脂的包被、保持需要的颗粒尺寸(在分散液的情况下)和施用表面活性剂来保持合适的流动性。可以利用各种抗菌和抗真菌化合物实现微生物活动的预防，所述抗菌和抗真菌化合物例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸，硫柳汞等。在很多情况下，优选在组合物中包含等渗化合物，例如糖，诸如甘露醇、山梨醇的多元醇，氯化钠。可以通过在组合物中包含延缓吸收的化合物实现注射组合物的持续吸收，所述化合物例如单硬脂酸铝和明胶。可以通过将所需量的试剂合并入含有一种上文所列成分或上文所列成分的组合的合适的溶剂中然后视情况进行过滤灭菌来制备无菌注射液。通常，通过将结合剂合并到含有基本分散介质和上文所列的所需其它成分的无菌介质中来制备分散剂。对于用于制备无菌注射液的无菌粉末，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，从而从之前过滤灭菌的溶液得到活性成分和任何其它所需成分的粉末。可以以积存注射(depot injection)或植入制剂的形式给予本发明的试剂，植入制剂的制备形式能允许活性成分的持续释放或脉冲释放。口服组合物通常包含惰性稀释剂或可食用的载体。可以将口服组合物封装在明胶胶囊中或压缩成片剂。为了口服治疗给药，结合剂可以与赋形剂合并，并用于片剂、锭剂或胶囊的形式。还可以使用用于漱口水的流体载体来制备口服组合物，其中流体载体中化合物是经口施用、漱口和吐出或吞下。药学相容的结合化合物和/或辅助材料可以作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有任何下述成分或具有相似性质的化合物粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解化合物，例如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes ;助流剂,例如胶态二氧化娃；甜味剂化合物，例如蔗糖或糖精；或调味剂化合物，例如薄荷油、水杨酸甲酯或桔子香精。
在一个实施方案中，所述试剂与能保护所述试剂免于从体内快速清除的载体一起进行制备，例如控释制剂，包括植入物和微胶囊化的递送体系。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。此类制剂的制备方法对于本领域技术人员是显而易见的。还可以从Alza Corporation和NovaPharmaceuticals, Inc购买所述材料。脂质体悬液(包括祀向于感染细胞的具有针对病毒抗原的单克隆抗体的脂质体)也可用作药学可接受的载体。可以根据本领域已知的方法进行制备，例如，美国专利第4，522，811号中的描述。
实施例通过以下实施例进一步阐述本技术 ，但这些实施例不应解释为以任何方式进行限制。实施例I.具有保护心肌细胞对抗应激和改善心肌血液灌注的双重作用的化合物的活性组合物的鉴定使用由生物测定引导的分离策略来筛选天然成分，从而鉴定表现出保护心肌细胞对抗应激和改善心肌血液灌注的双重作用的化合物的组合物。大鼠新生心肌细胞原代培养和来自大面积心肌梗塞导致的HF大鼠模型被用作生物测定系统。植物材料柔毛路边青(Geumjaponicun Thunb. var. chinense)和积雪草的全植物于 2007年9月收集自贵州省。凭证样本保存于中国首都医科大学化学生物学与药学学院和香港创新医学实验室。提取和分离将风干的柔毛路边青(3. 5kg)和积雪草(I. 5kg)全植物切成小块，并于室温下在20L甲醇中浸泡I周(3次)。真空蒸发溶剂之后，回收剩余物(510g)。我们发现，该提取物表现出保护心肌细胞对抗应激和改善心肌血液灌注的双重作用。用由生物测定引导的组成分析表明活性化合物主要属于两类化合物(多酚类和三萜类化合物)，其由GeminA、木麻黄鞋宁、特里马素II、蛇含鞋质、鞋花酸、Niga-ichigoside FI、Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草甙、委陵菜酸和羟基积雪草酸组成。当将三萜类化合物部分(30 μ g/ml)施加于新生心肌细胞培养物时，发现含有三職类化合物的亚组合物能保护心肌细胞对抗hs、ps和ct应激。当将多酹部分(100mg/kg/天，给药2周)灌胃给予MI诱导的心衰大鼠模型时，发现多酚部分能显著增加衰竭心脏的血液灌注。使用液相色谱联合质谱和核磁共振波谱法来确定两种亚组合物中含有的主要生物活性化合物的成份。我们发现，表现出对心肌细胞的保护效果的亚组合物主要含有三職类化合物，包括积雪草酸、Niga-ichigoside Fl> Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草甙、委陵菜酸、羟基积雪草酸。我们发现，来自柔毛路边青和积雪草的甲醇提取物的两组化合物的天然比例对于治疗HF具有活性。实施例2. TPs组合物保护培养的新生心肌细胞在体内，由于细胞凋亡造成的心肌细胞的丧失，继而导致心衰。细胞中促凋亡信号的超表达和/或抗凋亡(存活)信号的下调密切参与HF发展过程。能增强心肌细胞存活或阻止心肌细胞凋亡性死亡的物质可以作为治疗HF中潜在治疗应用的候选者。因此，我们测试了 TPs是否能增强培养的新生心肌细胞的存活能力或阻止其凋亡的能力。原代心肌细胞获自I日龄新生大鼠。在含10%小牛血清(BCS)和I %谷氨酰胺-青霉素-链霉素(GPS)的DMEM中制备25，000细胞/ml的新生大鼠心肌细胞悬液，并置于24孔培养板中，在37°C下孵育24小时。然后将培养基更换为O. 5ml DMEM,5% BCS，将受试样品(含50 μ g TPs的10 μ I 5% DMSO)添加到每个孔。相同体积的5% DMSO作为对照。将培养物在37°C和5%CO2下分别培养24、48和72小时。测试了通过在环境室中孵育而导致缺氧培养的心肌细胞。环境室中氧气浓度保持在IOmmHg,持续24小时。结果表明与介质处理的对照组心肌细胞相比，在缺氧期中用TPs(50l·! g/ml)处理培养的心肌细胞能显著增加诸如Aktl、BCL2和EGF等细胞存活因子的表达，并且抑制细胞由于缺氧导致的死亡。在介质处理的对照心肌细胞中，凋亡细胞随缺氧时间的延长而增加。相比之下，TPs治疗抑制半胱天冬酶3、7的活化并减少凋亡细胞(P < O. 01)。
实施例3. TPs在HF动物模型中的治疗效果心肌缺血或梗塞是人类充血性HF发展的常见风险因素。缺血或梗塞心脏经历不断的左心室重构，包括几何学、结构和功能的改变。尽管不断的重构在最初是代偿性的，但最终会促使心脏的失代偿，导致HF。HF的最常见原因是心肌梗塞、高血压和化疗引起的心肌损伤。因此，我们首先测试了 TPs在HF动物模型中的治疗效果，该模型中的HF由心肌梗塞发展而来。由于心肌梗塞(MI)是HF的最常见原因之一，所以使用MI诱导的充血性HF模型来评价TPs的治疗效果。继发于MI的HF的大鼠模型可用于研究心功能障碍的进展和测试治疗方法。在本实施例中，我们在SD大鼠中用冠状动脉左前降支(LAD)的永久结扎来制造LV的大面积梗塞引起的HF模型。利用该大鼠模型，我们进一步研究了结扎后1-8周LV功能障碍和扩张的过程。由于心肌缺血，ECG的ST段显著降低，提示心室缺血(图I)。对照大鼠LV射血分数(EF)在LAD结扎前为56-68% ；LAD结扎后I周，EF降至48±6%，2周时降至38±5%，4周时降至36±4%，8周时降至29±3% (P < O. 001，结扎与假手术相比)。假手术大鼠的LV舒张末期容积(LVEDV)为O. 36-0. 45ml。MI组的LVEDV在术后第I周、第2 周、第 4 周和第 8 周分别增至 O. 63±0· 03,0. 69±0· 05,0. 76±0· 06 和 O. 81±0· 07ml (与假手术组的LVEDV相比，P < O. 001)。LV舒张末期压力在所有时间点都显著提高。将溶解于5 % DMSO (O. 5ml)的TPs (300mg/kg/天)灌胃给予结扎后4周的MI大鼠，每天给药，给药4周，将等量的5% DMSO给予对照介质处理的MI大鼠。对于假手术大鼠(η = 8)，进行胸廓切开术但不进行LAD结扎。我们发现，3-4周TPs的治疗显著恢复ECG中由于缺血而降低的ST段(图I)并且改善了心脏功能的表现。其中显著增加的LVEDV (O. 763 土 O. 06ml)和降低的心输出量(96 土 12ml/分钟/kg)分别恢复至O. 58±0. 03ml和172± 16ml/分钟/kg。显著降低的EF从治疗前的36. 3±5%增加至4周TPs治疗后的42. 3±3. 9% (图2)。相比之下，在介质处理的对照中，LVEDV增加至O. 83±0· 08ml, EF 降低至 28. 6±3· 9% (图 2)(与 TPs 治疗相比 P < O. 001)。在结扎后第8周进行最后一次超声心动图测量之后，处死动物。取出处死的大鼠的心脏，并用PBS洗涤。介质处理的对照组心脏，特别是左心室呈现白色、心腔扩大，并呈袋状。相比之下，TPs治疗的心脏外观呈现红色并且紧实(图3)。将所有获得的样本切片用于组织学和免疫组化分析或用于Western印迹和DNA微阵列研究。我们观察到，与介质处理的心脏薄且白色的LV前壁相比，TPs治疗心脏的LV梗塞区呈现红色并且梗塞区的心室壁较厚。对于组织学检查，将心脏的左心室分离，并从心尖至心底切成3个横向薄块，并包埋在石蜡中。相应地测量LV的梗塞面积的大小和血管密度。我们发现，介质处理组中，梗塞面积较大，并且LV壁厚度显著变薄(图3)，整个梗塞区全部被纤维瘢痕(马森三色染色染成蓝色)所取代(图3)。相比之下，在TPs治疗组中，梗塞区面积显著较小，并且心脏左心室前壁较厚并呈现红色(图3)。组织学分析还表明，在TPs治疗组中，再生的心脏组织取代了梗塞的心肌(图3)。为了对LV中的毛细血管平均数目进行定量，分析了来自每个横向薄块的6个切片，每个心脏取3个薄块，总共对每个心脏的18个切片进行了分析。我们发现，TPs治疗的心脏LV的毛细血管平均密度显著高于介质处理对照组(图3) (P < O. 01)。实施例4. TPs组合物对人类个体H F的治疗效果本实施例也初步测试了含有TPs的获自柔毛路边青和积雪草的提取物对于人HF的治疗效果。我们对心衰末期的患者出名患者，其中有男性和女性，在患者和其家属完全知情并获得了书面同意)进行4周的提取物口服给药(2g/天)。这些患者患有已知的心脏病，例如心脏梗塞、高血压和慢性冠心病，并有HF历史。治疗2周后，所有患者都报告了静止时HF症状的显著改善，例如头晕、下肢浮肿、疲劳、恶心、咳嗽等症状的改善。超声心动图检查表明，所有患者的左心室(LV)功能都显著改善，LV射血分数(EF)恢复了 30-61%，LV短轴缩短率(FS)恢复了 21-76. 9%。由于LV扩张而变薄的LV壁的平均厚度(6. 2mm)恢复至平均7. 7mm,并且室壁运动显著改善(图4和表I)。在运动耐量试验中，治疗前从静坐到爬6-10个台阶就会诱发胸闷，治疗2-4周治疗后，这些患者爬50-60个台阶也不会引起胸闷(表2)。对于在同一家医院接受常规治疗的其它患有相似HF的患者，未观察到症状和超声心动图测量的明显改善。这些结果表明，给予含有TPs的提取物能显著改善HF患者的症状，甚至那些对常规治疗反应不好的受试患者的的症状，并且HF的改善可以保持数月或数年。测试了 TPs提取物对重度心衰患者的治疗效果。在受试时,一名男性患者患有重度反复发作性心衰并处于疾病的晚期，他曾经经历了多次心肌梗塞，高血压，并且安装了心脏起搏器。他的心脏由于HF而极度扩张(左心室直径170. 8X78. 3mm)(图5)，并且心脏中大于80%的区域灌注不足(图5)。他的心脏功能非常差，LVEF为约8%。然而，4周药物治疗(2g/天)，左心室直径显著恢复至72 X 70mm，并且LVEF增加了 260%，达到21%。在运动耐量试验中，治疗前从静坐到慢走或爬3-6个台阶就会引起胸闷，但是用含TPs的提取物治疗4周后，该患者爬20个台阶不会引起胸闷。对于在同一家医院接受常规治疗的其它相似患者，未观察到症状和超声心动图测量的明显改善。这些结果表明，给予含有TPs的植物提取物能显著改善对常规治疗反应不好的HF症状，并且HF的改善可以保持数月或数年。表I.心衰患者左心室功能评价(η = 6)
治疗前治疗后
运动耐量试验5-10个台阶会引起胸闷50-60个台阶不会引起胸闷
权利要求
1.预防或治疗有需要的哺乳动物个体中的心衰的方法，包括给予所述哺乳动物个体有效量的三萜类和多酚类化合物的组合物，其中所述三萜类和多酚类化合物的组合物包含 (i)一种或多种选自积雪草酸、Niga-ichigoside Fl、Kaji_ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草甙、委陵菜酸和羟基积雪草酸的三萜类化合物；和 (ii)一种或多种选自GeminA、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸的多酚类化合物。
2、Niga-ichigoside Fl、Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草式、委陵菜酸、轻基积雪草酸、GeminA、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸。
3.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述心衰是由以下引起的心肌梗塞，高血压；缺血性心脏病；暴露于心脏毒性化合物；心肌炎；甲状腺疾病；病毒感染；齿龈炎；药物滥用；酒精滥用；心包炎；动脉粥样硬化；血管病；肥厚型心肌病；急性心肌梗塞；左心室收缩功能障碍；冠状动脉搭桥手术；饥饿；饮食失调；或遗传缺陷。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述个体是人。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述组合物通过口服给药、局部给药、全身给药、静脉内给药、皮下给药、腹膜内给药或肌内给药。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，还包括给予选自利尿剂、ACE抑制剂、地高辛和@阻断剂的其它治疗剂。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所给予的组合物的量为0.01mg/kg/天至1000mg/kg/ 天。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述有效量的组合物是包含所述组合物和合适的载体或赋形剂的药物制剂的形式。
9.预防或治疗哺乳动物个体中的心衰的方法，所述方法包括给予有需要的个体有效量的日本路边青(Geum japonicum)独自的有机提取物或日本路边青与积雪草(CentellaAsiatica)的组合的有机提取物。
10.如权利要求9所述的方法，其中所给予的提取物的量为约0.OOlmg至约2000mg提取物/千克个体体重/天。
11.如权利要求9-10中任一项所述的方法，其中所述提取物通过口服给药。
12.如权利要求9-11中任一项所述的方法，其中所述提取物通过皮下注射、肌内注射或静脉输注给药。
13.如权利要求9-12中任一项所述的方法，其中所述提取物是日本路边青独自的低级烷基醇提取物或日本路边青与积雪草的组合的低级烷基醇提取物。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述低级烷基醇具有1-6个碳原子。
15.如权利要求13所述的方法，其中所述低级烷基醇是乙醇。
16.如权利要求9-15中任一项所述的方法，其中所述个体是人。
17.用于治疗哺乳动物个体中的心衰的药物组合物，其包含有效量的三萜类和多酚类化合物的组合物，其中所述三萜类和多酚类化合物的组合物包含 (i)一种或多种选自积雪草酸、Niga-ichigoside Fl、Kaji_ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草甙、委陵菜酸和羟基积雪草酸三萜类化合物；和(ii)一种或多种选自GeminA、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸的多酚类化合物。
18.如权利要求17所述的药物组合物，其中所述三萜类和多酚类化合物的组合物包含积雪草酸、Niga-ichigoside FI、Kaji-ichigoside F1、野鸦椿酸、积雪草式、委陵菜酸、轻基积雪草酸、Gemin A、木麻黄鞣宁、特里马素II、蛇含鞣质和鞣花酸。
19.用于治疗哺乳动物个体中的心衰的药物组合物，其包含有效量的日本路边青(Geumjaponicum)有机提取物和药学可接受的载体。
20.如权利要求19所述的组合物，其中所述有机提取物是乙醇提取物。
21.如权利要求19所述的组合物，其中所述有机提取物是甲醇提取物。
全文摘要
本发明公开了植物日本路边青(Geum japonicum)独自或日本路边青与积雪草(Centella Asiatica)的组合的化合物、提取物和活性部位，以及预防或治疗心衰的方法。本发明提供的化合物可以配制为可用于所公开的方法的药物组合物和药物。还提供了所述化合物和提取物在制备药物制剂和药物中的用途。
文档编号A61K31/56GK102711768SQ201080026141
公开日2012年10月3日 申请日期2010年6月11日 优先权日2009年6月12日
发明者李中玉, 李明 申请人:基因雷克斯制药有限公司