专利名称：Fviii衍生肽的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种肽。具体地说，本发明涉及至少其核心序列可衍生自因子 VIII (FVIII)的肽。这些肽可以用来减少或阻止因子VIII抑制剂抗体(factor VIII inhibitor antibody)的形成，例如在A型血友病治疗和获得性血友病中。
背景技术：
血友病血友病(haemophilia)属于一组遗传性血液病症，包括A型血友病、B型血友病 (克里斯马斯病(Christmas disease))和血管性血友病(Von Willebrand' sdisease)。在血友病中，血液凝固能力由于某种关键的凝血因子的部分或全部缺失而严重降低，导致出血时间增加。A型血友病是一种凝血因子VIII缺陷，而B型血友病是一种凝血因子IX缺陷。在这两种疾病中，出问题的基因均存在于X染色体上，因此这些症候是X连锁的。A型血友病的常见程度是B型血友病的五倍。血友病是一种终身性、遗传性的基因疾病，其影响女性(作为携带者)和遗传了这种症候的男性。大约三分之一的新确诊病例没有过往家族史。这种疾病在全世界都有出现， 在所有种族中均有发生。在英国大约有6000人受血友病影响。血友病人(haemophiliacs)在受伤后发生长时间的出血。外部损伤，如切割伤或擦伤，通常不会造成严重问题往往可以通过施加一定程度的压力和包覆受伤区域(例如用石膏)即可止血。主要的问题是向关节、肌肉和软组织中的内出血，这些可能自发发生。内出血，例如向脑中的出血，非常难以处理，且可能致命。关节中的重复出血会导致急性疼痛，并可导致致残的长期性关节损伤和/或关节炎。血友病的治疗通常是通过替代(!^placement)缺失的凝血因子。在轻度或中度的血友病中，可以在发生出血时提供注射(应求式(on-demand)疗法)。但是，在严重血友病中，则有规律地提供预防性注射，以帮助血液凝固并尽可能减小长期性关节损伤的可能性。A型血友病凝血因子(coagulation factor)替代治疗的一个潜在的严重并发症是会产生可中和因子VIII的促凝血功能的抗体。因子VIII抑制剂在大约25%的严重A型血友病人中出现。由于先天性A型血友病人可能具有FVIII的遗传缺陷，抑制剂的合成是一种针对为了预防或治疗出血事件而施用的外来蛋白的同种异体免疫应答。⑶4+T细胞在针对FVIII的免疫应答中扮演着中枢角色。FVIII被抗原呈递细胞 (APC)掺入后，经过蛋白水解性降解成为肽片段(Reding等Q006)Haemophilia 12(supp 6) 30-36)。然后这些肽与II类MHC分子结合呈递在APC的表面。然后，该复合物由对FVIII 特异性的⑶4+细胞的T细胞受体所识别。在合适的共刺激信号的存在下，这种识别作用最终导致CD4+细胞去指导B细胞合成抗体。抑制剂形成的频度最开始随着因子VIII治疗的次数增加而增加，但是在暴露 50-100天后似乎达到平台。抑制剂形成在严重血友病中比在中度或轻度的病中常见得多， 而且某些分子缺陷，最明显的是因子VIII轻链中的大段缺失和无义突变，似乎引起抑制剂形成的倾向。替代因子的浓度、类型(纯化的或重组的)、以及治疗历史等参数也可能影响抗体产生的可能性。管理携带抑制剂的血友病患者是正在面临的挑战。使用脱敏技术的免疫耐受诱导 (ITI)在一些携带抗因子VIII的同种抗体的患者中获得了成功。这种治疗手段要求正在暴露于因子替代治疗，因此是一种长期性的策略。虽然ITI可能取得成功，但有相当比例(大约30% )的患者对ITI无应答。抑制剂效价高的患者对治疗应答的可能性低得多。另一个明显起作用的因素是开始ITI时的年龄，当患者大于20岁时成功率大大降低(Hay等Q005) kminars in Thrombosis and Hemostasis 32:15-21)。当ITI疗法不成功时，抑制剂一般会持续终身，而由于这样的患者通常是高应答者，需要使用FVIII旁路产品，如活化的凝血酶原复合物浓缩物(FEIBA )和重组-活化的 FVII，来治疗出血事件。然而，使用此类药剂与弥漫性血管内凝血、急性心肌梗死、肺栓塞和血栓等不良事件相关(Acharya 和 DiMichele (2006)Best Practice&Research Clinical Haematology 19 :51-66)。对于不应答ITI的患者有时使用免疫抑制疗法。治疗包括施用非特异性地靶向免疫系统的免疫抑制药如环磷酰胺(cyclophosphamide)、强的松(prednisone)、硫唑嘌呤 (azathioprine)和环孢菌素(cyclosporine)。这些治疗可能具有与普遍性免疫抑制相关的副作用。人们对利用利妥昔单抗(Rituximab )——一种针对B细胞⑶20抗原的人源化单克隆抗体——进行的选择性B细胞耗竭又产生了兴趣。但是，用这种药物治疗一些儿童时， 发生了输注反应、血清病和机会性感染(DiMichele Q007) J Thromb Haemost 5:143-50)。获得性血友病获得性血友病是一种罕见的自身免疫病症，在每100万人中有1至4人罹患此病。 在此病症中，生来不具有血友病的受试者产生对抗一种凝血因子如因子VIII的抗体。人们认为妊娠和自身免疫疾病如类风湿性关节炎及癌症可能增加发生获得性血友病的风险。 虽然在导致其产生的潜在免疫机制方面有所不同，但应答于凝血因子替代治疗而产生的 FVIII抑制剂与获得性血友病中产生的FVIII抑制剂的临床表现是相似的。获得性血友病患者的死亡率接近25%，部分地是由于获得的抑制剂与严重的出血并发症有关联。对获得性自身抗体抑制剂的治疗，主要是根据控制或阻止急性出血性并发症的需要(这些并发症常常危及生命和四肢)，其次是去除自身抗体以恢复正常凝血的需要。对于某些伴随有低效价自身抗体抑制剂(< 5个Bethesda单位)的出血，可以通过高剂量施用FVIII浓缩物来有效治疗。先前，猪FVIII浓缩物被看作针对获得性血友病相关出血的关键的一线治疗，因为它是唯一提供了在实验室中实际测量输注后FVIII凝血活性水平的机会的替代治疗。由于猪血浆池被猪细小病毒污染，该产品于2004年下市。目前，最常用的是“旁路(bypassing) ”药物，但存在产生血栓的潜在风险，而且每种产品的效力仅有约80%。可能需要通过血浆去除术和体外免疫吸附进行血浆交换，以暂时性将抑制剂效价降低，该降低足以使旁路药物或FVIII替代法提供充分的止血。自身抗体抑制剂的根除取决于免疫抑制措施，如(1)施用皮质类固醇，在3-6周内的效力为30% -50%； (2)使用细胞毒性和骨髓抑制性化疗剂，例如环磷酰胺、环孢菌素、 2-氯脱氧腺苷；C3)用静脉内免疫球蛋白进行的免疫调节；和(4)用利妥昔单抗进行的选择性B淋巴细胞耗竭。利妥昔单抗(Rituximab )应答者可能需要同时使用类固醇，复发可对再次治疗有应答。因此，目前所有可用来减少与A型血友病治疗相关的同种异体抗体产生、以及获得性血友病中自身抗体产生的方法，都存在着缺点。因此需要改进的方法来解决A型血友病和获得性血友病中抗-VIII抗体的问题。本发明人发现，通过用FVIII衍生肽预耐受化患者，来阻止FVIII抑制剂抗体形成是可能的。
发明内容
因此，本发明的第一个方面涉及至少部分序列可从FVIII衍生的、能够诱导或恢复对FVIII的耐受的肽。在第一个实施方案中，本发明提供一种肽，其包含下列FVIII衍生序列之一
权利要求
1.一种肽，其包含下列F VIII衍生序列之一
2.一种肽，其包含序列 X(aa)n-核心序列 _(aa)m 其中X是荷电亲水性残基； aa是氨基酸；η是0-5的整数； m是0-5的整数；并且所述“核心序列”选自下列F VIII衍生肽组成的组LYISQFIIMFIIMYSLDGIARYIRLHPLIIFKNQASLTRYYSSFVMVTFRNQAS LRIHPQSffV所述肽无需进一步抗原加工就能够结合II类MHC分子，并能由因子VIII特异性T细胞所识别。
3.权利要求1所述的肽，其包含序列)(DNIMVTFRNQAS。
4.一种肽，其包含序列 Y(aa)n-核心序列 _(aa)mZ其中Y和Z是具有相反极性的荷电氨基酸； aa是氨基酸； η是0-5的整数； m是0-5的整数；并且所述“核心序列”选自下列FVIII衍生肽组成的组LYISQFIIMFIIMYSLDGIARYIRLHPLIIFKNQASLTRYYSSFVMVTFRNQASLRIHPQSffV所述肽无需进一步抗原加工就能够结合II类MHC分子，并能由因子VIII特异性T细胞所识别。
5.权利要求4所述的肽，其包含序列YDNIMVTFRNQASZ。
6.权利要求4或5所述的肽，其中Y是荷正电的氨基酸并且Z是荷负电的氨基酸。
7.权利要求4、5或6所述的肽，其中Z是K或R。
8.权利要求2-7中任一项所述的肽，其中X或Y是D或E。
9.任一前述权利要求所述的肽，其包含序列EDNIMVTFRNQASR。
10.任一前述权利要求所述的肽，其由序列EDNIMVTFRNQASR组成。
11.一种包含多种肽的组合物，其包括一种或多种任一前述权利要求所述的肽。
12.权利要求1-10中任一项所述的肽或权利要求11所述的组合物，用于阻遏或防止因子VIII抑制剂抗体在体内的产生。
13.权利要求1-10中任一项所述的肽或权利要求11所述的组合物在制备用于阻遏或防止因子VIII抑制剂抗体的在体内产生的药物中的用途。
14.一种阻遏或防止受试者中因子VIII抑制剂抗体的产生的方法，所述方法包括对受试者施用权利要求1-10中任一项所述的肽或权利要求11所述的组合物的步骤。
15.一种治疗受试者中血友病的方法，所述方法包括对受试者施用权利要求1-10中任一项中所述的肽或权利要求11所述的组合物的步骤。
16.权利要求14或15所述的方法，其中所述受试者患有A型血友病，并且正在接受或即将接受因子VIII替代治疗。
17.权利要求14或15所述的方法，其中所述受试者患有获得性血友病，或者有感染获得性血友病的风险。
18.权利要求14-17中任一项所述的方法，其中所述受试者为HLA-DR2。
全文摘要
本发明提供至少部分地衍生自FVIII的肽，所述肽无需进一步的抗原加工就能够结合II类MHC分子，并能由因子VIII特异性T细胞所识别。具体地说，本发明提供一种肽，其包括序列EDNIMVTFRNQASR或由序列EDNIMVTFRNQASR组成。本发明还涉及这样的肽用于防止或阻遏A型血友病和/或获得性血友病中抑制剂抗体形成的用途。
文档编号A61K38/37GK102458445SQ201080032337
公开日2012年5月16日 申请日期2010年5月17日 优先权日2009年5月18日
发明者D.赖思 申请人:艾匹托普技术(布里斯托尔)有限公司