专利名称：新颖的缀合物、其制备方法及其治疗用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及念珠藻素(cryptophycin)缀合物(conjugate)、包含它们的组合物和它们的治疗用途尤其是作为抗癌剂的用途。本发明还涉及制备这些化合物的方法和念珠藻素衍生物本身。
背景技术：
[技术领域]念珠藻素类化合物作为次级代谢物属于由念珠藻属的蓝细菌产生的缩酚酸肽大环类。它们的名称表明它们对隐球菌属的酵母具有高度的细胞毒性。该类分子的第一种代表性化合物即念珠藻素-I(C-I)在1990年从蓝细菌念珠藻属种(ATCC 53789)中分离(参见 Ei β Ier S.，et al. ,Synthesis 2006，22，3747-3789)。这些化合物的结构、通式和碳原子编号(参见WO 98/08505)如下所述
权利要求
1.式(II)念珠藻素衍生物
2.权利要求1的念珠藻素衍生物，其中Rltl表示苯基母核上的至少一个取代基且选自 H, -OH, (C1-C4)烷氧基和卤素原子。
3.权利要求1或2的念珠藻素衍生物，其中RCGl表示-S、或_C(= 0)-ZbRb。
4.权利要求1至3的念珠藻素衍生物，其中+sO(CH2)n+表示以下7种基团中的一种
5.权利要求1至4的念珠藻素衍生物，其中η为1。
6.权利要求1的念珠藻素衍生物，其中L选自
7.权利要求1的念珠藻素衍生物，其中L选自
8.权利要求7的念珠藻素衍生物，其中R12表示H。
9.权利要求7的念珠藻素衍生物，其中R12表示(C1-C6)烷基，更具体为甲基。
10.权利要求1至9的念珠藻素衍生物，其中、表示H、-S(C1-C6)烷基尤其是甲基S-或-S-杂芳基尤其是一s、sO 或 4Rb 表示-O (C1-C6)烷基、-OH、-OCH3、-OCH2CH = CH2、
11.权利要求1至10中任一项的念珠藻素衍生物，其具有以下结构式中的一种，其中L 优选位于对位
12.权利要求1的念珠藻素衍生物，其选自
13.式(III)念珠藻素衍生物
14.权利要求13的念珠藻素衍生物，其中Y表示-N3；-NR12-CH2-C ε CH，其中R12表示H 或(C1-C6)烷基；甲磺酰基O-；或-OC ( = 0) -0- (4-硝基苯基)。
15.权利要求1至12中任一项的念珠藻素衍生物或权利要求13的式(III)念珠藻素衍生物，其中G = -(CH2)nY,其中Y = -Cl、-N3、-OH、-NH2、马来酰亚氨基或卤代乙酰氨基且旨在与结合剂缀合。
16.权利要求15的念珠藻素衍生物，其中所述结合剂为配体、蛋白质、抗体更具体为单克隆抗体、蛋白质片段或抗体片段、肽、寡核苷酸或寡糖。
17.制备与至少一个念珠藻素衍生物连接的称为缀合物的结合剂的方法，所述方法包括(i)使任选经缓冲的结合剂的水溶液与权利要求1至16中任一项的念珠藻素衍生物的溶液接触且使它们发生反应；( )然后任选使步骤(i)中形成的缀合物与念珠藻素衍生物和/或未反应的结合剂和 /或所形成的任何聚集物分离。
18.权利要求17的方法，其中 在包含-S、型反应性化学基团RCGl的念珠藻素衍生物存在下，所述结合剂包含 ■在RCGl表示-SH的情况下，所述结合剂包含二硫化物化学基团； ■在RCGl表示-S、且、兴H的情况下，所述结合剂包含巯基化学基团； ■在RCGl表示-SH的情况下，所述结合剂包含马来酰亚氨基或碘乙酰氨基化学基团； 在包含_C( = 0)-ZbRb型反应性化学基团RCGl的念珠藻素衍生物存在下，使所述念珠藻素衍生物与所述结合剂中的氨基官能团尤其是抗体中由赖氨酸残基(Lys)的侧链所带有的ε-氨基反应； 在其中G = -(CH2)nY的式(III)念珠藻素衍生物存在下，所述结合剂当Y = -Cl或马来酰亚氨基时包含-SH，当Y = -N3时包含-C ^ CH,或当Y = -OH或-NH2时包含羧基； 在包含马来酰亚氨基或卤代乙酰氨基型反应性化学基团RCGl的念珠藻素衍生物存在下，所述结合剂包含巯基化学基团。
19.权利要求17或18的方法，其中 在包含-S、型反应性化学基团RCGl的念珠藻素衍生物存在下，所述结合剂用改性剂改性，所述改性剂选自下式化合物
20.缀合物，其可通过权利要求17至19中任一项的方法来得到。
21.权利要求20的缀合物，其特征在于通过对HRMS谱进行解卷积而确定的DAR大于 1，优选为2至10，且更具体为2至7。
22.权利要求20的缀合物，其特征在于使用UV分光光度计而确定的DAR大于0.5，优选大于1，更具体为1至10，且甚至更具体为2至7，其中所述DAR通过以下方程来计算DAR = cD/cA 其中Cd= [( ε Αλ ΧΑλ2)-( ε Αλ2ΧΑλ1)]/[( ε Βλ2Χ ε Αλ1)-( ε Αλ2Χ ε Βλ1)] cA = [AA1-(cDX ε Βλ1)]/ ε Αλ1Αλ1和Αλ2分别表示缀合物溶液分别在波长λ 1和λ 2的吸光度； ε dm和ε Βλ2分别表示念珠藻素衍生物在缀合前在波长λ 1和λ 2的摩尔吸光系数， 这些系数通过其中\ =甲基S-的-S、型式(II)化合物或其中4Rb =甲基0-或-OCH2-CH =CH2的_C( = 0)-ZbRb型式(II)化合物来测量；ε Αλ1和ε Αλ2分别表示裸抗体在缀合前在两种波长λ 1和λ 2的摩尔吸光系数。
23.权利要求22的缀合物，其中λ1 = 280nm，且λ 2在具体波长范围M6nm-252nm内选择。
24.缀合物溶液，其可通过权利要求17至19中任一项的方法来得到或包含权利要求 20至23中任一项的缀合物。
25.权利要求1至13中任一项的念珠藻素衍生物在制备与至少一个所述念珠藻素衍生物连接的结合剂中的用途。
26.念珠藻素衍生物在制备与至少一个所述念珠藻素衍生物连接的结合剂中的用途， 所述念珠藻素衍生物具有式(III)vv
27.念珠藻素衍生物在制备与至少一个念珠藻素衍生物连接的结合剂中的用途，所述念珠藻素衍生物选自以下物质中的一种
28.下式念珠藻素衍生物
29.权利要求1至15中任一项的念珠藻素衍生物，其用作抗癌剂。
30.权利要求20至23的缀合物，其用作抗癌剂。
31.权利要求M的缀合物溶液，其用作抗癌剂。
32.权利要求1至15中任一项的念珠藻素衍生物在制备抗癌药物中的用途。
33.权利要求20至23的缀合物在制备抗癌药物中的用途。
34.权利要求对的缀合物溶液在制备抗癌药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及与至少一个念珠藻素连接的式(I)靶向剂，其中R1为卤素原子且R2为-OH、由氨基酸AA衍生的酰基或(C1-C4)烷酰基氧基；或R1和R2一起形成环氧单元；AA表示天然或非天然氨基酸；R3为C1-C6)烷基；R4和R5都为H或一起形成在C13和C14之间的双键CH＝CH；R6和R7彼此独立为H或(C1-C6)烷基；R8和R9彼此独立为H或(C1-C6)烷基；R10为苯基母核上的至少一个取代基且选自H、-OH、(C1-C4)烷氧基、卤素原子、-NH2、-NH(C1-C6)烷基或-N((C1-C6)烷基)2；R11为苯基母核上的至少一个取代基且选自H和(C1-C4)烷基；靶向剂和念珠藻素衍生物共价连接且连接位置在带有CR1单元的苯基母核的邻位(o)、间位(m)或对位(p)。
文档编号A61P35/00GK102482238SQ201080038575
公开日2012年5月30日 申请日期2010年5月20日 优先权日2009年6月29日
发明者A.康默康, H.博查德, J.张, M-P.布龙 申请人:赛诺菲