专利名称：具有脂肪分解促进作用的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有脂肪分解促进作用的组合物，其胃蛋白酶和胰蛋白酶的分解产物具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制作用。更具体地说，本发明涉及含有鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物和鸡胶原的组合物，含有所述组合物的口服摄取用的脂肪分解促进剂，以及含有所述组合物的口服摄取用的ACE抑制剂。
背景技术：
脂肪是以食物的形式摄取的过量能量蓄积在白色脂肪组织中的物质。过量蓄积的白色脂肪组织导致肥胖，结果，不仅导致了多种与生活方式相关的疾病，而且在美容方面也有很大问题。特别是最近在科学上已经明确了 在内脏周围(肠系膜的)的白色脂肪组织的增多可诱发高血压、胰岛素抗性、糖耐量异常或高血脂症，由此引起代谢综合症。因此，人类社会迫切期望其预防和改善。因蓄积脂肪引起的脂肪细胞的肥大会降低来自脂肪细胞的有益脂肪细胞因子的分泌，这又导致各种无益脂肪细胞因子(例如TNF α和抵抗素)的分泌，引起胰岛素抗性 (即胰岛素敏感性低下)。结果，无法充分地降低血糖值。因此为了控制血糖值会过量地分泌胰岛素，形成高胰岛素血症。在高胰岛素血症的作用下，过量胰岛素对脂质代谢的影响会引发代谢综合症。脂联素是一种有益的脂肪因子，其可促进脂肪酸的燃烧和糖的摄入，并改善胰岛素抗性(非专利文献1)。脂联素的脂肪酸燃烧作用并不是在脂肪细胞发生，而是通过激活肝脏和骨骼肌中的AMP活化蛋白激酶(AMPK)而发生。脂联素在肝脏中会抑制糖原异生并刺激脂肪酸燃烧，然而在骨骼肌中它会刺激糖摄入和脂肪酸燃烧。脂联素的表达是伴随着脂肪前体细胞分化为脂肪细胞而被诱导出来的。脂联素由不肥大的脂肪细胞活跃地分泌。相比之下，来自肥大的脂肪细胞的脂联素由于TNFa等而具有更弱的作用。另外，在肥大的脂肪细胞中，脂联素的转录受到抑制，而导致的脂联素缺乏会引起代谢异常(非专利文献1)。有报导指出，来自蔬菜或果实的类胡萝卜素可抑制胰岛素诱导时的脂肪前体细胞向脂肪细胞的分化(专利文献1)。如上所述，如果脂肪前体细胞向脂肪细胞的分化受到抑制，则脂联素的表达也受到抑制。因此，人们猜测抑制向脂肪细胞的分化是否可直接导致抗肥胖的作用。人们已对通过限制摄取能量来预防和改善肥胖做了各种研究，例如限制饮食、延迟和阻碍过量能量的吸收，或者探索消化道内的糖分吸收抑制剂。然而，能量摄取的限制也是基础代谢率降低的因素，因此未必能改善肥胖问题。因此，为了消除肥胖，理想的方式是积极地使蓄积的脂肪代谢、分解，并以热能的形式发散。由此，近年来从食材中探索具有脂肪分解促进使用的功能性成分的工作得到了活跃地开展，因此人们提出了很多脂肪分解促进剂和饮食品。目前已知的来自天然的脂肪分解促进剂的有效成分包括芸香科植物(专利文献2)、蓟族植物(专利文献幻、胡椒科植物(专利文献4)、橙叶、橙花、款冬叶以及菖蒲根(专利文献幻、薏苡、大麦、决明子、番石榴和普洱茶(专利文献6)等。此外，最近发现的脂肪分解促进剂的例子还包括以莲科植物或其提取物作为有效成分的脂肪分解促进剂(专利文献7)、含有桦木科的白桦提取液和禾本科维氏熊竹提取物中的至少一种成分的脂肪分解促进剂(专利文献8)，以及含有小麦蛋白水解物的脂肪蓄积抑制和促进剂(专利文献9)等。另一方面，高血压是代谢综合症的一种代表性症状，该患者的人数逐年增加。已知高血压可引发脑出血、蛛网膜下出血、脑梗塞、心肌梗塞、心绞痛和肾硬化症等各种并发症， 人们对高血压的发病机理进行了各种研究，并且已经知道了与血压升压有关的肾素-血管紧张素系统以及与血压降压有关的激肽释放酶-激肽系统起到了重要的作用。在肾素-血管紧张素系统中，主要由肝脏分泌的血管紧张素原通过在肾脏中生产的肾素而形成血管紧张素I，并且通过血管紧张素转化酶(ACE)进一步转化为血管紧张素II。该血管紧张素II 使血管平滑肌收缩，使血压升高。另一方面，降压系统的激肽释放酶作用于激肽原，生成缓激肽。该缓激肽具有扩张血管、降低血压的效果，但是ACE有分解该缓激肽的作用。如上所述，已经明确ACE通过升压肽即血管紧张素II的生成和降压肽即缓激肽的失活两种作用而参与血压的升高。因此，抑制该ACE的酶活性可以抑制血压的升高。例如，在高血压的治疗中广泛应用了卡托普利或依那普利，它是作为ACE抑制活性物质而开发的脯氨酸衍生物。最近，有人报道了食材蛋白质的酶解产物肽中存在ACE抑制活性。例如，明胶的胶原酶分解产物(专利文献10)、酪蛋白的胰蛋白酶分解产物(专利文献11到16)、Y-酪蛋白的嗜热菌蛋白酶分解产物(专利文献17)、沙丁鱼肉的胃蛋白酶分解产物(专利文献 18)、干鲣鱼片的嗜热菌蛋白分解产物(专利文献19)、芝麻蛋白的嗜热菌蛋白分解产物(专利文献20)、κ-酪蛋白的胃蛋白酶等的分解产物等(专利文献21)，已有很多报道。现有技术文献专利文献专利文献1 日本特开2003-95930号公报专利文献2 日本特开平8-81382号公报专利文献3 日本特开平8-301780号公报专利文献4 日本特开平8-MM10号公报专利文献5 日本特开平11-228431号公报专利文献6 日本特开2002-275078号公报专利文献7 日本特开2004-307365号公报专利文献8 日本特开2006-045120号公报专利文献9 日本特开2007-106683号公报专利文献10 日本特开昭52-148631号公报专利文献11 日本特开昭58-109425号公报专利文献12 日本特开昭59-44323号公报专利文献13 日本特开昭60-23086号公报专利文献14 日本特开昭60-23087号公报专利文献15 日本特开昭61-362 号公报
专利文献16 日本特开昭61-36227号公报专利文献17 日本特开平2-32127号公报专利文献18 日本特开平3-11097号公报专利文献19 日本特开平4-144696号公报专利文献20 日本特开平8-231588号公报专利文献21 日本特开平8469088号公报非专利文献非专利文献1 门胁孝等人“脂联素与糖尿病心血管病的分子机理”，第1 回日本医学会研讨会记录集“糖尿病与动脉硬化”，2004年12月2日，34-45页。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可口服摄取的组合物，其具有脂肪分解促进作用和 ACE抑制作用，且作为食品在副作用或毒性等安全性方面不存在问题。本发明人对于各种食材的脂肪分解促进作用和ACE抑制活性进行了深入的研究， 结果发现采用鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物和鸡胶原组合制备的混合物具有优异的脂肪分解促进作用，并且将大麦苗、鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物和鸡胶原的混合物用作为消化酶的胃蛋白酶和胰蛋白酶进行处理，所得到的消化混合物显示出 ACE抑制活性。由此完成了本发明。S卩，本发明涉及(1) 一种组合物，含有鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物和鸡胶原， 其中该组合物具有脂肪分解促进作用，且其胃蛋白酶和胰蛋白酶分解产物具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制作用。(2)根据上述(1)的组合物，其中含有相对于每100重量份大麦苗提取物为 14. 0-14. 5重量份鲑鱼精巢提取物、2. 8-3. 2重量份啤酒酵母提取物和5. 7-6. 2重量份鸡胶原。(3)根据上述(1)或( 的组合物，其中鲑鱼精巢提取物是对鲑鱼精巢进行酶解处理得到的含有分解至低聚核苷酸和低聚肽的低分子成分的提取物。(4)根据上述(1)或( 的组合物，其中啤酒酵母提取物是对啤酒酵母进行酶解处理得到的含有低分子化RNA成分的提取物。(5)根据上述(1)或O)的组合物，其中大麦苗提取物含有30%的难消化性糊精。(6) 一种口服用脂肪分解促进剂，含有上述(1)-(5)中任一项的组合物。(7) 一种口服用血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂，含有上述(1)-( 中任一项的组合物。(8) 一种食品或饮料，含有上述(1)-( 中任一项的组合物。根据本发明，可提供具有优异的脂肪分解促进作用且其消化物具有ACE抑制作用的组合物。本发明的组合物可作为食品，没有副作用或毒性等问题。因此，可以长时间持续、 简便地摄取，并且对于肥胖或高血压等成人疾病的预防或改善极为有用。
图1表示了与在鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物或鸡胶原单独存在下培养的脂肪细胞的培养上清液中的甘油量进相比，在本发明组合物的存在下培养的脂肪细胞的培养上清液中的甘油量显著地增加。图的纵轴表示以无添加区的培养上清液中的甘油量为基准的百分比值。图2表示了在本发明组合物的存在下培养的脂肪细胞的存活率与在鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物或鸡胶原单独存在下培养的脂肪细胞的存活率之间未见显著差异。图的纵轴表示以无添加区的脂肪细胞的存活率为基准的百分比值。图3表示了本发明的组合物的胃蛋白酶和胰蛋白酶处理物的ACE抑制活性显著优于与经胃蛋白酶和胰蛋白酶处理的单独的鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物或鸡胶原的ACE抑制活性。
具体实施例方式
具有脂肪分解促进作用且在由胃蛋白酶和胰蛋白酶分解后具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制作用的本发明的组合物并无特别的限制，只要该组合物含有鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物和鸡胶原即可。特别优选为，该组合物含有，相对于每 100重量份大麦苗提取物，14. 0-14. 5重量份鲑鱼精巢提取物、2. 8-3. 2重量份啤酒酵母提取物和5. 7-6. 2重量份鸡胶原。上述鲑鱼精巢提取物没有特别的限制，只要是可作为食品使用的即可。优选为通过对鲑鱼精巢进行酶解处理而含有分解至低聚核苷酸和低聚肽的低分子成分的鲑鱼精巢提取物。特别优选为含有20-50%的分子量为1000-3000的低聚核苷酸和低聚肽的鲑鱼精巢提取物。上述鲑鱼精巢提取物例如可从Nissei Bio公司等获得。上述啤酒酵母提取物没有特别的限制，只要是可作为食品使用的即可。优选为通过对啤酒酵母进行酶解处理而含有低分子化RNA的啤酒酵母提取物。特别优选含有 20-50%的分子量为1000-3000的RNA的啤酒酵母提取物。上述啤酒酵母提取物例如可从 Nissei Bio公司等获得。上述大麦苗提取物没有特别的限制，可优选使用在低温下喷雾干燥得到的食用大麦苗提取物。还可使用含有难消化性糊精的大麦苗提取物。含有难消化性糊精的大麦苗提取物的优选例子包括Laxon公司制造的含有20-30%难消化性糊精的大麦苗提取物。上述鸡胶原没有特别的限制，可优选使用食用鸡胶原。优选的例子有L S Factory 公司制造的鸡胶原。本发明的组合物除作为口服用的脂肪分解促进剂之外，还可作为口服用的脂肪蓄积抑制剂、肥胖预防剂、肥胖改善剂。另外，除作为口服用ACE抑制剂之外，本发明的组合物还可作为血压升高抑制剂、高血压的预防剂或改善剂，其与卡托普利等的合成药物不同，在摄取后没有副作用或极少副作用。并且，本发明的组合物可混合在饮食品中使用，可以使饮食品具有脂肪分解促进作用和ACE抑制作用。如下述实施例所述，本发明的组合物在用消化酶-胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后显示出优异的ACE抑制作用。因此，本发明的组合物可通过食品的形式口服摄取，具备高血压的预防或改善效果。将本发明的组合物混合于饮食品中使用时，可以例如在饮食品制造的原料阶段或成品阶段等中添加、混合该有效成分的有效量。这里，“有效成分的有效量”是指在摄取各种饮食品的常用饮用量时有效成分的被摄取含量，这取决于接受者的年龄和体重、症状、给予次数、剂型、给予方法、制剂的组合等。本发明的饮食品没有特别的限制，只要含有本发明的组合物即可。具体的例子可包括将本发明的组合物直接作为饮食品或制备成膳食补充剂，或者进一步混合各种蛋白质、糖类、脂肪、微量元素、维生素类等中，或者制成液状、半液体状或固体状的产品，或者将本发明的组合物添加或混合于一般的饮食品中。并且，本发明的饮料食品可以是健康食品、功能性食品、特定保健用食品或病患者用食品。本发明的口服用脂肪分解促进剂、口服用ACE抑制剂和食品或饮料在其制造时可以使用通常所使用的添加物或配合剂，例如赋型剂、膨胀剂、粘结剂、崩解剂、润滑剂、分散剂、保存剂、润湿剂、增溶剂、防腐剂、稳定剂、胶囊基质、食材等的助剂。该助剂中的成分的具体例子可包括乳糖、果糖、葡萄糖、淀粉、明胶、碳酸镁、合成硅酸镁、滑石粉、硬脂酸镁、 碳酸钙、甲基纤维素、羧甲基纤维素或其盐、阿拉伯胶、聚乙二醇、糖浆、凡士林、甘油、乙醇、 丙二醇、柠檬酸、氯化钠、亚硫酸钠、磷酸钠、普鲁兰多糖、卡拉胶、糊精、还原帕拉金糖、山梨醇、木糖醇、甜菊糖、合成甜味剂、柠檬酸、抗坏血酸、酸化剂、小苏打、蔗糖酯、植物氢化油脂、氯化钾、红花油、蜜蜡、大豆磷脂和香料等。以下通过实施例来更具体地说明本发明，但本发明的技术范围并不受到这些例子的限制。实施例1(1)试样的制备在本发明的实施例中，通过单独地或组合地使用鲑鱼精巢提取物(由Nissei Bio 公司制造)、啤酒酵母提取物(由Nissei Bio公司制造)、大麦苗提取物(由Laxon公司制造，含有30%难消化性糊精)、鸡胶原(由L S Factory公司制造)来制备评价所用的试样。 试样制备中所用的各成分的浓度如表1所示。表 1
材料试样1试样2试样3试样4①大麦苗提取物405 μ g/ml810 μ g/ml4. 05mg/ml8. lmg/ml②鲑鱼精巢提取物58 μ g/ml116 μ g/ml580 μ g/ml1. 16mg/ml③啤酒酵母提取物12 μ g/ml24 μ g/ml120 μ g/ml240 μ g/ml④鸡胶原24 μ g/ml48 μ g/ml240 μ g/ml480 μ g/ml⑤混合物(①+②+③+④)500 μ g/mllmg/ml5mg/mllOmg/ml(2)向脂肪细胞的分化及脂肪分解活性的测定将小鼠脂肪前体细胞株3T3-L1细胞接种于96孔培养板上，浓度为3 X IO4细胞 /250 μ 1/孔，使用含有10 % CS的DMEM培养基(10 % CS/DMEM)温育2天，培养至细胞汇合(第0天)。将脂肪细胞分化诱导剂W. 5mM异丁基甲基黄嘌呤(ΙΒΜΧ)、1 μ M地塞米松 (DEX)、10 μ g/ml胰岛素]添加到培养基中，将细胞进一步培养3天以诱导其分化为脂肪细胞。将诱导分化后的细胞在含有10μ g/ml胰岛素的10% FBS/DMEM培养基中培养3天，然后在基本培养基中培养6天。在该6天的培养中，每隔2天更换培养基，以使脂肪滴蓄积。 然后添加表1所述的混合物，以及单独添加鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物和鸡胶原，进一步培养细胞48小时。培养结束后回收上清液，使用脂肪分解测定试剂盒测定培养上清液中的甘油量。将该培养上清液中的甘油量作为脂肪分解的指标。甘油游离率是以对照值为100%时的相对值。脂肪分解促进率％ = [Α/Β] X 100其中A是添加了提取物的样品中的游离甘油量，B是未添加提取物的样品中的游
离甘油量。(3)试验结果如上所述，脂肪分解促进作用是由脂肪分解生成的甘油量的测定值作为指标来判定的。图1是显示了结果的图表，其数值显示在表2中。在添加了含有大麦苗提取物的混合物(试样)的区域中，在lmg/ml和5mg/ml的浓度下分别显示为相对于对照的208. 67% 和504. 17%的值。相比之下，单独添加了各成分的区域中的脂肪分解率是大麦提取物添加区在810 μ g/ml下为141. 57%、在4. 05mg/ml下为255. 22% ；鲑鱼精巢提取物添加区在 116 μ g/ml下为95%、在580 μ g/ml下为95. 44% ；啤酒酵母提取物添加区在M μ g/ml下为95%、在120 μ g/ml下为81. 6% ；鸡胶原添加区在48 μ g/ml下为87. 67%、在240 μ g/ml 下为116. 7%。这些结果表明，用大麦苗提取物、鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物和鸡胶原成分组合制备的试样所显示出的显著的脂肪分解促进作用在用各单独成分制备的试样中并未见到，并且显示了通过组合使用大麦苗提取物、鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物和鸡胶原成分而可见显著的协同效果。表权利要求
1.一种组合物，含有鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物和鸡胶原，其特征在于所述组合物具有脂肪分解促进作用，并且其胃蛋白酶和胰蛋白酶的分解产物具有血管紧张素转化酶抑制作用。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述组合物含有，相对于每100重量份大麦苗提取物，14. 0-14. 5重量份鲑鱼精巢提取物、2. 8-3. 2重量份啤酒酵母提取物和 5. 7-6. 2重量份鸡胶原。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于鲑鱼精巢提取物是对鲑鱼精巢进行酶解处理得到的含有分解至低聚核苷酸和低聚肽的低分子成分的提取物。
4.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于啤酒酵母提取物是对啤酒酵母进行酶解处理得到的含有低分子化RNA成分的提取物。
5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于大麦苗提取物含有30%难消化性糊精。
6.一种口服用脂肪分解促进剂，含有根据权利要求1到5中任一项所述的组合物。
7.一种口服用血管紧张素转化酶抑制剂，含有根据权利要求1到5中任一项所述的组合物。
8.一种饮食品，含有根据权利要求1到5中任一项所述的组合物。
全文摘要
本发明的目的是提供具有脂肪分解促进作用和血管紧张素转化酶(ACE)抑制作用、且作为食品在副作用或毒性等安全性方面不存在问题的、可口服摄取的组合物，以及含有该组合物的饮食品以及膳食补充剂。发明人对于可提供脂肪分解促进作用和ACE抑制作用的食用组合物的各种食材进行了深入的研究，结果发现，通过使用鲑鱼精巢提取物、啤酒酵母提取物、大麦苗提取物和鸡胶原组合物来制备的组合物具有优异的脂肪分解促进作用和ACE抑制活性作用。通过使用本发明的组合物作为有效成分，可以提供具有脂肪分解促进作用和ACE抑制作用的饮食品以及膳食补充剂。
文档编号A61K31/7105GK102573885SQ201080043430
公开日2012年7月11日 申请日期2010年9月28日 优先权日2009年10月2日
发明者许善花 申请人:最终未来国际股份有限公司