专利名称：早产新生儿的治疗的制作方法
早产新生儿的治疗本发明涉及对早产新生儿(pre-term neonate)的治疗,例如涉及减小或防止与早产有关的死亡和患病。早产影响着5% 10%的发达国家人口和约25%的发展中国家人口 L早产占新生儿死亡的大部分，并且占据了新生儿重症监护病房工作量的绝大部分。这意味着巨大的成本负担，在2006 2007年，一天的新生儿重症监护花费约1000英镑，在英国的总年度花费据估算为4. 2亿英镑2。在新生儿重症监护中最成功的措施之一是在出生后立即将合成的表面活性剂施用到早产儿的肺中。该措施减小了与早产有关的死亡率和患病率(综述见Soil3)。在动物研究中鉴定出了表面活性剂，在这些研究中发现，当新生儿进行其第一次呼吸时表面活性剂在降低肺部表面张力上起关键作用。在妊娠期的最后1/3表面活性剂在肺内的表达升高，并且，在包括人在内的多种物种中，这受到胎儿中的皮质类固醇的诱导。对表面活性剂 的使用是如何可以将对出生准备生物学的理解转化为可行的且可获益的治疗措施的实例。本发明涉及以下发现编码对氧磷酶3 (paraoxonase 3, P0N3)和血清淀粉样蛋白A3 (serum amyloid A like protein 3, SAA3)的转录本在正常哺乳动物妊娠末期的胎儿中上调，并且在使新生儿适应在出生时从母体环境分娩后所出现的变化中起重要作用。因此，对氧磷酶3(P0N3)和/或血清淀粉样蛋白A3(SAA3)可用作减小或防止早产新生儿中的死亡和患病的治疗剂。本发明的一方面提供治疗早产新生儿的方法，所述方法包括提高早产新生儿的对氧磷酶3 (P0N3)多肽的水平或活性。本发明的另一方面提供治疗早产新生儿的方法，所述方法包括提高早产新生儿的血清淀粉样蛋白A3 (SAA3)多肽的水平或活性。早产新生儿是在正常妊娠期结束之前出生的婴儿。在人类中，通常认为在妊娠期少于37周(从对估计到期日的最佳临床估计中推算得到，其中估计到期日等于40周O天)时分娩的婴儿是早产的。在一些实施方式中，早产新生儿可以是极早产新生儿，例如，在妊娠期少于32周时分娩的人类婴儿。适于本文中所述治疗的早产新生儿可以是哺乳动物早产新生儿，优选为人类早产新生儿。适于本文中所述治疗的早产新生儿可缺乏P0N3。换言之，该早产新生儿的P0N3水平或活性可低于足月新生儿的P0N3水平或活性。在一些实施方式中，直接地通过测量分娩前或分娩后的P0N3水平，或者间接地通过鉴定与P0N3缺乏相关的一种或多种症状(例如与氧化应激有关的并发症)，可以在治疗前鉴定早产新生儿缺乏P0N3。在另外一些实施方式中，可以在未鉴定早产新生儿缺乏P0N3的情况下对其进行所述治疗。适于本文中所述治疗的早产新生儿可缺乏SAA3。换言之，该早产新生儿的SAA3水平或活性可低于足月新生儿的SAA3水平或活性。在一些实施方式中，直接地通过测量分娩前或分娩后的SAA3水平，或者间接地通过鉴定与SAA3缺乏相关的一种或多种症状(例如与氧化应激有关的并发症)，可以在治疗前鉴定早产新生儿缺乏SAA3。在另外一些实施方式中，可以在未鉴定早产新生儿缺乏SAA3的情况下对其进行所述治疗。鉴定具有患病和/或死亡风险的早产新生儿的方法可以包括确定从该新生儿获得的样品中的P0N3和/或SAA3的水平或活性；其中，与对照相比P0N3和/或SAA3的水平或活性降低表明该早产新生儿具有患病和/或死亡风险。使用标准技术(例如诸如ELISA等免疫测定)或者使用酶活测定，可以在从早产新生儿获得的样品(例如血液或血清样品)中确定P0N3和/或SAA3的水平。
具有患病和/或死亡风险的早产新生儿相对于足月新生儿可具有升高的死亡和/或患病风险。对于被鉴定具有患病和/或死亡风险的早产新生儿，可以按本文所述进行治疗。提高本文所述的早产新生儿的P0N3多肽和/或SAA3多肽的水平或活性，可以降低死亡和/或患病的程度、严重性或风险。例如，本文所述的治疗可以防止或降低早产的医学并发症(例如，与氧化应激相关的并发症)的严重性或风险。可以治疗的早产并发症包括呼吸并发症，例如呼吸窘迫综合征、肺性高血压和支气管肺发育不良；神经学并发症，例如早产儿呼吸暂停、低氧缺血性脑病(HIE)、颅内出血、早产儿视网膜病变(ROP)、发育性残疾和脑瘫；心血管并发症，例如动脉导管未闭(PDA)；胃肠及代谢并发症，例如低血糖症、喂食困难和坏死性小肠结肠炎(NEC);以及血液学并发症，例如早产儿贫血、血小板减少症和高胆红素血症(黄疸)及核黄疸。在一些实施方式中，本文所述的可以治疗的早产并发症不包括败血症或感染或者与败血症或感染相关的病况。可以使对氧磷酶3 (P0N3)多肽的水平或活性在新生儿中系统性地升高，或者在特定器官或组织(例如，早产新生儿的肺、血管系统和/或其他组织)中局部性地升高。优选的是，通过向早产新生儿施用P0N3多肽来提高P0N3多肽的水平。对氧磷酶3(P0N3 ；GeneID: 5446)是与血清中的高密度脂蛋白关联的磷酸二酯酶(EC 3. I. 8. I)。人P0N3的氨基酸序列的Genbank数据库识别号为NP_000931. IGI: 29788996，并示于SEQ ID NO: 2中。编码人Ρ0Ν3的核苷酸序列的Genbank数据库识别号为NM_000940. 2GI:94538355，并示于 SEQ ID Ν0:1 中。发明人还鉴定了具有 SEQ IDN0:4 所示的氨基酸序列的人P0N3剪接变体。编码该人P0N3剪接变体的核苷酸序列示于SEQ ID NO:3中。适合于本文所述应用的其他P0N3多肽可以包括来自非人哺乳动物(例如牛或猪)的P0N3的氨基酸序列，或者可以是其片段、变体或等位基因产物。牛P0N3 (GeneID:510953)的氨基酸序列的Genbank数据库识别号为ΝΡ_001068947. IGI: 115496165。编码牛P0N3的核苷酸序列的Genbank数据库识别号为NM_001075479. IGI: 115496164。猪 P0N3 (GeneID: 733674)的氨基酸序列的 Genbank 数据库识别号为 ΝΡ_001038069. IGI: 113205866。适合于本文所述应用的P0N3多肽可以包括参照P0N3序列的氨基酸序列(例如SEQ ID N0:2或SEQ ID NO:4)或者该参照P0N3序列的片段、等位基因产物或变体。例如，参照P0N3序列(例如SEQ ID N0:2或SEQ ID NO:4)的等位基因产物或变体可以包含与参照P0N3序列的序列同一性为至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%的氨基酸序列。通过插入、增加、替换或缺失I个、2个、3个、4个、5 10个、10 20个或20 30个氨基酸，P0N3多肽可以包含例如与参照P0N3序列(例如SEQ ID N0:2或SEQ ID NO:4)不同的氨基酸序列。P0N3多肽可以是全长P0N3氨基酸序列(例如SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4)的片段，或者是SEQ ID N0:2或SEQ ID N0:4的变体或等位基因产物。片段是截短的多肽，由比、全长序列更少的氨基酸组成，且保留了对氧磷酶3的活性。适合的片段可以包含全长序列中的至少100、至少150、至少200、至少250或至少300个氨基酸。适合的片段保留了 P0N3活性。适合于本文所述应用的P0N3多肽可以由核苷酸序列SEQ ID NO: I或SEQ IDNO: 3编码，或者可以由SEQ ID N0:1或SEQ ID NO: 3的等位基因或变体编码。例如，P0N3多肽可以由与核苷酸序列SEQ ID NO: I或SEQ ID NO:3的序列同一性为至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%的核苷酸序列编码。通过插入、增加、替换或缺失I个、2个、3个、4个、5 10个、10 20个或20 30个核苷酸，编码P0N3多肽的核苷酸序列可以例如与SEQ ID NO: I或SEQ ID NO: 3不同。类似地，可以使血清淀粉样蛋白A3(SAA3)多肽的水平或活性在早产新生儿中系统性地升高，或者在特定器官或组织(例如，该新生儿的肺、血管系统和/或其他组织)中局部性地升高。优选的是，通过向早产新生儿施用SAA3多肽来提高SAA3多肽的水平。人SAA3的氨基酸序列的Genbank数据库识别号为AA048437. IGI: 28864698，并示于SEQ ID NO:6中。编码人SAA3的核苷酸序列的Genbank数据库识别号为AY209188. IGI:28864697，并示于 SEQ ID N0:5 中。适合于本文所述应用的其他SAA3多肽可以包括来自非人哺乳动物(例如牛、大鼠或小鼠)的SAA3的氨基酸序列，或者可以是其片段、变体或等位基因产物。鼠SAA3 (GeneID: 20210)的氨基酸序列的 Genbank 数据库识别号为 NP_035445. 1GI:6755396。编码鼠SAA3的核苷酸序列的Genbank数据库识别号为NM_011315. 3GI: 118130197。编码大鼠SAA3的核苷酸序列的Genbank数据库识别号为BF282318 GI: 11213489，并且在Rat230_2阵列上与Affymetrix探针1392647_at杂交。牛SAA3 (GeneID: 281474)的氨基酸序列的Genbank数据库识别号为NP_851359. 2GI: 38566696。编码牛SAA3的核苷酸序列的Genbank数据库识别号为 NM_181016. 3GI: 38566695。适合于本文所述应用的SAA3多肽可以包括参照SAA3序列的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:6)或者该参照SAA3序列的片段、等位基因产物或变体。例如，参照SAA3序列(例如SEQ ID NO:6)的等位基因产物或变体可以包含与参照SAA3序列的序列同一性为至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%的氨基酸序列。通过插入、增加、替换或缺失I个、2个、3个、4个、5 10个、10 20个或20 30个氨基酸，SAA3多肽可以包含例如与参照SAA3序列(例如SEQ ID NO:6)不同的氨基酸序列。
SAA3多肽可以是全长SAA3氨基酸序列(例如SEQ ID NO:6)的片段，或者是SEQIDNO:6的变体或等位基因产物。片段是截短的多肽，由比全长序列更少的氨基酸组成，且保留了血清淀粉样蛋白A3的活性。适合的片段可以包含全长序列中的至少30、至少40或至少50个氨基酸。适合的片段保留了血清淀粉样蛋白A3的活性。适合于本文所述应用的SAA3多肽可以由核苷酸序列SEQ ID N0:5编码，或者可以由SEQ ID NO: 5的等位基因或变体编码。例如，SAA3多肽可以由与核苷酸序列SEQ ID NO: 5的序列同一性为至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%的核苷酸序列编码。通过插入、增加、替换或缺失I个、2个、3个、4个、5 10个、10 20个或20 30个核苷酸，编码SAA3多肽的核苷酸序列可以例如与SEQ ID NO:5不同。通常，参照GAP 算法(GCG Wisconsin Package , Accelrys, San Diego CA)来定义
核苷酸和氨基酸序列同一性。GAP使用Needleman & Wunsch算法36来比对两条完整序列，使匹配数最大化且使空位数最小化。通常，使用默认参数，即空位建立罚分=12，空位延伸罚分=4。可以优选使用GAP，但也可以使用其他算法，例如BLAST或TBLASTN (其使用Altschul等，(1990) J. Mol. Biol. 215:405-410 中的方法),FASTA(其使用 Pearson 和 Lipman (1988)PNAS USA 85:2444-2448 中的算法)或 Smith-Waterman 算法(Smith 和 Waterman (1981) J.Mol Biol. 147:195-197)，通常采用默认参数。可以将一个或多个异源氨基酸(例如异源肽或异源多肽序列)接合或融合至本文所述的P0N3或SAA3氨基酸序列。例如，P0N3多肽可以包含与一个或多个异源氨基酸连接或融合的上文所述的P0N3氨基酸序列。所述一个或多个异源氨基酸可以包括来自非P0N3来源的序列。类似地，SAA3多肽可以包含与一个或多个异源氨基酸连接或融合的上文所述的SAA3氨基酸序列。所述一个或多个异源氨基酸可以包括来自非SAA3来源的序列。P0N3或SAA3多肽可以包含在融合蛋白中。在一些实施方式中，在用于治疗本文所述的早产儿之前，融合蛋白可以经加工而产生成熟的P0N3或SAA3多肽。例如，除了 P0N3或SAA3多肽以外，融合蛋白可以在N端或C端包含一个或多个异源氨基酸，这些异源氨基酸构成位点特异性蛋白酶识别序列的全部或一部分。通过切割该位点特异性蛋白酶识别序列(例如使用位点特异性蛋白酶，如凝血酶或因子Xa)，可以从该融合蛋白得到成熟的P0N3或SAA多肽。融合蛋白可以包含纯化标签，在纯化后用位点特异性蛋白酶将该纯化标签除去。适合的纯化标签包括谷胱甘肽-S-移转酶(来自日本血吸虫(Schistosoma japonica))。P0N3和SAA3多肽可以用任何常规技术来制造，并且有多种适合的方法可供使用。可以从非人哺乳动物(例如猪或牛)中分离和/或纯化出P0N3和SAA3多肽。可以通过化学合成产生完整或部分的P0N3和SAA3多肽。例如，可以使用以下方式来合成多肽使用液相或固相合成法；在溶液中；或者使用固相、液相和溶液化学的任何组合，例如，首先完成各肽部分，随后，如有需要且合适，在除去所存在的任何保护性基团后，凭借相应的碳酸或磺酸或其反应性衍生物的反应来引入残基X。多肽的化学合成在本领域中是公知的(J. M. Stewart和J. D. Young, Solid PhasePeptide Synthesis,第 2 版,Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois (1984)；M. Bodanzsky和A. Bodanzsky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer Verlag, NewYork(1984) ；J. H. Jones, The Chemical Synthesis of Peptides. Oxford UniversityPress, Oxfordl991 ；Applied Biosystems 430A Users Manual, ABI Inc. , Foster City,California ；G. A. Grant，(编)Synthetic Peptides, A User’s Guide. W. H. Freeman &Co.，New York 1992 ；E. Atherton 和 R. C. Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis, APractical Approach. IRL Press 1989 ；G. B. Fields,(编)Solid_Phase PeptideSynthesis(Methods in Enzymology 第 289 卷).Academic Press, New York and London1997)o可以用重组技术产生完整或部分的P0N3和SAA3多肽。例如，编码P0N3或SAA3多肽的核酸可以在宿主细胞中表达，并且可以从细胞培养物中分离和/或提纯所表达的多肽。为了产生重组P0N3或SAA3多肽，可以将编码P0N3或SAA3多肽的核酸序列(即P0N3核酸或SAA3核酸)包含在表达载体中。可以选择或构建合适的载体，其包含适合的调控序列，包括启动子序列、终止子片段、多腺苷酸化序列、增强子序列、标志基因和其他适合的序列。优选的是，载体包含适合的调控序列来驱动P0N3或SAA3核酸在宿主细胞中的表达。驱动异源核酸编码序列在多种表达系统中的表达的适合的调控序列在本领域是公 知的，其包括组成型启动子，例如病毒启动子(例如CMV或SV40)和诱导型启动子(例如Tet-on控制的启动子)。载体还可以包含诸如复制起点和选择性标记等序列，这些序列使得可以对其进行选择并且可以使其在细菌宿主(例如大肠杆菌)和/或真核细胞(例如酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞)中复制和表达。适用于表达P0N3或SAA3核酸的载体包括质粒和病毒载体(例如噬菌体或噬菌粒)，而对载体的精确选择将取决于所用的特定表达系统。P0N3或SAA3多肽可以在任何便利的表达系统中表达，并且在本领域中有多种适合的系统可供使用，包括细菌、酵母、昆虫或哺乳动物的细胞表达系统。更多细节参见例如《分子克隆实验指南》(MolecularCloning:a Laboratory Manual)(第 3 版)，Russell 等，2001, Cold Spring HarborLaboratory Press。用于在细胞培养物中表达重组多肽以及其随后的分离和纯化的技术和操作规程在本领域中是公知的(参见例如Protocols in Molecular Biology,第2版，Ausubel 等编，John Wiley & Sons, 1992 ；Recombinant Gene Expression ProtocolsEd RSTuan(1997 年 3 月)Humana Press Inc.)。如上所述，P0N3或SAA3多肽可以作为包含P0N3或SAA3多肽序列和纯化标签的融合蛋白在表达系统中表达。优选的是，蛋白酶识别位点位于P0N3或SAA3多肽与纯化标签之间。在表达后，可以使用可与纯化标签结合的固定试剂通过亲和层析来分离出融合蛋白。在分离后，可以使用例如凝血酶或因子Xa来以蛋白水解方式切割融合蛋白，从而产生P0N3或SAA3多肽。纯化标签是构成特异性结合对的一个成员的异源氨基酸序列。通过所述特异性结合对的另一个成员与多肽的结合，可以检测、分离和/或纯化包含所述纯化标签的多肽。例如，该纯化标签可以构成抗体分子所结合的表位。多种适合的纯化标签在本领域中是已知的，例如包括MRGS册6、DYKDDDDK (FLAG )、T7-、S- (KETAAAKFERQHMDS)、聚 Arg(R5_6)、聚 His (H2_10)、聚 Cys (C4)聚Phe (F11)聚 Asp (D5_16)、Strept-tag 11 (WSHPQFEK) > c_myc (EQKLISEEDL)、Influenza-HA 标签(Murray, P. J.等，(1995) Anal Biochem 229，170-9)、Glu-Glu-Phe 标签(Stammers, D.K.等，(1991)FEBS Lett 283, 298-302) ,Tag. 100(Qiagen ;源自哺乳动物MAP激酶2 的 12氨基酸标签)和Cruz tag 09 (MKAEFRRQESDR, Santa Cruz Biotechnology Inc.)和Cruz tag22 (MRDALDRLDRLA, Santa Cruz Biotechnology Inc·)。在 Terpe(2003)Appl. Microbiol.Biotechnol. 60523-533中综述了已知的标签序列。在一些优选实施方式中，可以采用谷胱甘肽-S-移转酶纯化标签。在表达后，可以使用固定的谷胱甘肽通过亲和层析来分离出包含P0N3或SAA3多肽和谷胱甘肽-S-移转酶的融合蛋白。对谷胱甘肽-S-移转酶融合蛋白的纯化在本领域中是公知的。在分离后，可以以蛋白水解方式切割该融合蛋白，从而产生P0N3或SAA3多肽。可以向上文所述的早产新生儿施用P0N3多肽和/或SAA3多肽。虽然可以单独施用P0N3或SAA3多肽，但优选使其呈现为药物组合物(例如，制剂)，所述药物组合物包含上文定义的P0N3多肽和/或SAA3多肽，以及一种或多种药物可接受的载剂、佐剂、赋形剂、 稀释剂、填充剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂或本领域技术人员公知的其他材料，以及可选的其他治疗药物或预防性药剂。本文所述的包含与一种或多种药物可接受的载剂、赋形剂、缓冲剂、佐剂、稳定剂或其他材料混合或配制在一起的P0N3多肽和/或SAA3多肽的药物组合物可以用于上文所述的方法中。本发明的另一方面提供制备药物组合物的方法，所述方法包括提供上述P0N3多肽和/或SAA3多肽，和将所述P0N3多肽和/或SAA3多肽与药物可接受的赋形剂混合。本文所用的术语“药物可接受的”是描述在可靠的医学判断范围内适合用于与受试对象(例如人或其他哺乳动物)的组织接触且不会引起过量的毒性、刺激、过敏反应或者其他问题或并发症的化合物、材料、组合物和/或剂型，具有合理的益处/风险比。各载剂、赋形剂等还必须在与制剂中其他成分相容的意义上也是“可接受的”。适合的载剂、赋形剂等可见于标准的药学教科书中，例如，RemingtonJ sPharmaceutical Sciences,第 18 版,Mack Publishing Company,Easton, Pa.，1990。可以方便地使制剂以单位剂型形式存在，并且可以用药学领域中公知的任何方法来制备该制剂。此类方法包括使P0N3多肽和/或SAA3多肽与可以构成一种或多种附属成分的载剂结合的步骤。通常，通过使活性化合物与液体载剂和/或细分的固体载剂均匀紧密地结合，并随后视需要使产品成形，来制备制剂。优选的制剂可以为液体或溶液形式，或者为缓释植入物或胶囊形式，例如用于口服施用。可以通过任何方便的施用途径向受试对象施用P0N3多肽、SAA3多肽或者包含P0N3多肽和/或SAA3多肽的药物组合物。在一些实施方式中，通过注入静脉内途径、皮下途径、鞘内途径或气管内途径等胃肠外途径来进行施用。例如，可以通过注射、特别是静脉内注射来施用P0N3多肽和/或SAA3多肽。在其他实施方式中，通过肠内途径来进行施用，例如，通过鼻空肠管或气管内管(endotracheal tube)。适合于胃肠外施用(例如通过注射，包括静脉内注射)的制剂包括水性或非水性的、等渗的、无致热原的无菌注射溶液，该溶液可以包含抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定齐U、抑菌剂和使所述制剂与计划的接受者的血液等渗的溶质；和水性或非水性的悬液，所述悬液可以包含悬浮剂和增稠剂。用于此类制剂中的适合的等渗载质的实例包括氯化钠注射液、林格氏液或乳酸林格氏注射液。通常，活性化合物在溶液中的浓度为约I μ g/ml 约100mg/ml,例如约 10 μ g/ml 约 50mg/ml。适合于肠内施用(例如通过吞入)的制剂可以呈现为离散单元，例如胶囊剂、扁囊剂或片剂，其中每个单元都包含预定量的P0N3多肽和/或SAA3多肽；散剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液或悬液；水包油乳液或油包水乳液；推注剂；药糖剂；或糊剂。可以可选地为片剂或胶囊提供肠溶衣，从而使其释放在肠的各部分中而不是胃中。包含P0N3多肽和/或SAA3多肽的制剂可以为单位剂量或多剂量封装的容器(例如，安瓿瓶和小药水瓶(vial))中，并且可以储存在冷冻干燥(冻干)的条件下，从而仅需在使用前即刻添加无菌液体载剂(例如注射用水)。应认识到的是，P0N3多肽和/或SAA3多肽以及包含P0N3多肽和/或SAA3多肽的药物组合物的适合剂量可以根据情况而在患者间有所不同。对最佳剂量进行确定会通常涉 及到在治疗益处水平与施用所带来的任何风险或有害副作用之间进行权衡。选定的剂量水平将取决于多种因素，包括但不限于施用途径，施用时间，P0N3多肽和/或SAA3多肽的排泄率，组合使用的其他药物、化合物和/或材料，以及早产儿的成熟度、性别、体重、病况和整体健康情况。P0N3多肽和/或SAA3多肽的量以及施用途径最终将由医师的判断来决定，但通常该剂量将实现足以产生有益效果且不引起较大的有害或有毒副作用的P0N3多肽和/或SAA3多肽的血清浓度。体内施用可以以一个剂量持续地或间歇性地(例如，具有适当间隔的分割的剂量)实现。确定最有效的施用方式和施用剂量的方法对本领域的技术人员而言是公知的，并且根据制剂和受治疗的受试对象而有所变化。用医师所选定的剂量水平和方式，可以进行单次或多次施用。P0N3多肽和/或SAA3多肽优选在早产新生儿分娩后立即或短时间内施用。例如，P0N3多肽和/或SAA3多肽可以在分娩后I小时内、3小时内、6小时内、12小时内、24小时内或48小时内施用。在其他实施方式中，P0N3多肽和/或SAA3多肽可以在出生后超过48小时后施用。在分娩后，或者在早产新生儿显示出一种或多种与P0N3缺乏相关的症状(例如与氧化应激有关的并发症)时，可以预防性地施用P0N3多肽。在分娩后，或者在早产新生儿显示出一种或多种与SAA3缺乏相关的症状时，可以预防性地施用SAA3多肽。在一些实施方式中，可以将SAA3多肽施用至未受到机械通气和/或肺损伤或炎症的早产新生儿中。P0N3多肽和/或SAA3多肽以及包含P0N3多肽和/或SAA3多肽的药物组合物可以与其他治疗剂组合施用，例如上文所述的表面活性剂和类固醇。本发明的其他方面提供用于治疗早产新生儿的上述P0N3多肽和/或SAA3多肽，以及P0N3多肽和/或SAA3多肽在制造用于治疗早产新生儿的药物中的应用。如上文所述，使用P0N3多肽和/或SAA3多肽对早产新生儿进行的治疗可以减小死亡和/或患病的程度、严重性或风险。本发明的其他各方面和实施方式将因本公开内容而对本领域的技术人员而言变得显而易见。将本说明书中提及的所有文献都通过援弓I完整地并入本文。将在申请日时具有数据库(例如Genbank)登录号的上述序列也通过援引完整地并入本文。本文所用的“和/或”应理解为对两种具体特征或组成部分中的每一个或两个的具体公开。例如“A和/或B”应理解为对⑴A、(ii)B和(iii)A和B中的每一个的具体公开，相当于在本文中对每个都进行了单独叙述。除非上下文另有说明，否则上文所述的对特征的描述和定义不限于本发明的任何特定方面或实施方式，并且等同地适用于所描述的所有方面和实施方式。下文将通过实施例并结合附图
来阐明本发明的某些方面和实施方式。图I显示了用于鉴定在妊娠后期胎儿中发生上调或下调的转录本的实验方案。
图2显示了对在起始阵列中所用大鼠的同胞的肺组织(A)、肠(B)和肝(C)中的与18S RNA相对的Pon3mRNA的RT-PCR分析的结果，对在孕龄为16天和20天时分娩的大鼠进行了比较(二者均为η=ιο，每只动物来自一次独立的产崽)。P值使用学生未配对T检验比较了给定组织中的在两个孕龄时的对数转换后的Pon3转录本水平(相对于18S RNA)。图3显示了对妊娠期最后1/3的不同孕龄(每组中n=5)的羊的肺㈧和肠⑶中的相对于四种管家基因的几何平均值的P0N3mRNA的RT-PCR分析的结果。柱=平均值；条=SEM。P值来自对数转换后的Pon3转录本水平(相对于四种管家基因)对孕龄的线性回归。斯皮尔曼等级相关系数P在A中为O. 94，在B中为O. 79，两者的P都小于O. 001。图C和D是对数转换后的Pon3水平对对数转换后的皮质醇值的作图。P值来自对数转换后的Pon3水平对对数转换后的皮质醇的线性回归。斯皮尔曼等级相关系数P在C中为O. 94，在D中为O. 80，两者的P都小于O. 001。图4显示了对130天孕龄的经地塞米松处理的羊和对照羊(每组中n=5)的肺和肠中的P0N3 mRNA的PR-PCR分析的结果。柱=平均值；条=SEM。显示了相对于四种管家基因的几何平均值的P0N3 mRNA水平。图5显示了对经历了未足月时(115dGA 188dGA)肾上腺切除术的羊和对照羊的肺和肠中的P0N3 mRNA的PR-PCR分析的结果，这两组均在145天孕龄时分娩(每组中n=5)。柱=平均值；条=SEM。显示了相对于四种管家基因的几何平均值的P0N3mRNA水平。图6显示了对成体血液(Ad)和来自4个早产儿和4个足月婴儿的脐带血中的P0N3的蛋白质印迹分析，比较了使用不同的商购抗体的情况(上图)。还显示了对信号的密度计量结果，从而对足月和早产进行了比较(下图)。图7显示了对孕龄为16天和20天时的大鼠的肺(A和C)和肠(B和D)的蛋白质印迹分析。图A和B采用了对P0N3有特异性的抗体。图C和D采用了分别与A和B相同的印迹，对其进行剥离，并用对GAPDH有特异性的抗体再次探测。图A和C :泳道I和2为来自16dGA的肺，泳道3和4为来自20dGA的肺。图B和D :泳道I和2=合并了来自16dGA的小肠和大肠；泳道3和4=来自20dGA的小肠；泳道5和6=来自20dGA的大肠。图8A显示了对来自8个早产儿和10个足月婴儿的脐带血清中的P0N3的蛋白质印迹分析。图8B显示了对信号的密度计量结果，从而对足月和早产进行了比较。P值为对数转换后的密度计量值，用学生未配对T检验比较了早产和足月。表I示出了用于在羊中进行实时RT-PCR的引物和探针。
表2示出了在基因阵列上选定转录本在16天和20天孕龄(dGA)之间的倍数变化。实骀方法动物样品所有实验程序都是按照《英国动物(科学程序)法案1986》在适合的内政部执照下且在当地伦理审查过程的许可下进行的。用过量CO2将孕龄(dGA)为16天(n=10)和20天(n=10)的交配20次的怀孕Wistar
大鼠无痛处死，其中将阴栓日(day of plug)定义为第O天，而足月期是21天。使用剖腹生产术使幼崽分娩，通过颈椎脱位术将其无痛处死，并在解剖显微镜下摘除它们的器官。将来自多个同胞动物的组织在液氮中急速冷冻，随后储藏在_80°C下以用于后续的分析。对羊进行的实验按之前所详细描述的进行7。简言之，将孕龄已知的怀孕威尔士山脉母羊置于单独的围栏中，并以200g/日的精料维持，且可以自由获取干草、水和舐食岩盐块。为了研究孕龄对基因表达的影响，在孕期的第100天(n=5)、第114 116天(n=5)、第129 131天(n=5)和第144 145天(n=5)(足月期为145±2天)在全身麻醉(静脉内施用20mg/kg的戊巴比妥钠)下用剖腹生产术使正常胎畜分娩，以便进行组织收集。为了研究对足月时出现的内源皮质类固醇的正常上升进行阻止所造成的影响，在第116 120dGA时在全身麻醉(在I: I的O2:N2O中的I. 5%氟烷)下对胎儿(n=5)进行肾上腺切除，随后使其足月分娩。之前已显示，这会使皮质醇水平降低到正常足月水平的15%。为了研究母体糖皮质激素处理的效果，用两份剂量的12mg地塞米松或者用盐水从125dGA开始24小时时处理母羊(每组n=5)，在第二次注射后10小时，用剖腹生产术使胎儿分娩。在所有情况中，新生的羊在分娩后立即用戊巴比妥钠(200mg/kg)无痛处死。在分娩后获得脐带血。使用经验证可用于绵羊血浆的放射免疫测定2°，测量了皮质醇浓度。皮质醇的最小可检测量是I. 5ng/ml,测定间变动系数为11%。在尸体剖检过程中，将胎儿的肺和空肠(幽门括约肌和回肠-盲肠连接处之间的中部)的样品在液态中冷冻，并储藏在_80°C直至进行分析。人脐带血样品用于获得人脐带血的操作规程已得到剑桥本地第2研究伦理委员会的许可。所有的女性都提供了书面通知的同意书。早产儿如果在孕龄完成了 24 28周时活产，则适于进行研究。将足月期定义为大于等于37周。RNA抽提和cDNA合成使用·ΓΚ ζ Γ_ (Invitrogen, Paisley,英国)根据制造商的使用说明从冷冻的组织中分离出总RNA,并且用DNaseI (Promega, Southampton,英国)在37 °C下处理30分钟。添加终止溶液并在65°C下加热10分钟来使反应终止。使用分光光度计和Agilent2100Bioanalyzer确认了 RNA的完整性。仅将OD 260/280〉I. 8的RNA用于定量PCR，并将RNA完整性指数大于7的RNA用于阵列杂交。在定量RT-PCR中，使用随机六聚体弓I物(Bioline，伦敦，英国)和Superscript II逆转录酶(Invitrogen, Paisley,英国)将总RNA逆转录为cDNA。微阵列分析采用了 Affymetrix大鼠基因组230. 2基因芯片。使用标准Affymetrix双循环靶标标记和杂交操作规程对总RNA进行了加工。使用鲁棒性多阵列平均技术(robustmultiarray averaging)对数据进行了预标准化,并使用LIMMA软件包(微阵列数据的线性模型，http://bioinf.wehi.edu.au/limma/)实现了标准化。使用两种独立的方法，即Cyber-T算法和排名结果(Rank Product)分析21’22，在16dGA和20dGA之间对标准化的转录本丰度数据进行比较。Cyber-T算法是通过包含基于数据集中其他转录本的方差的贝叶斯先验信息(Bayesian prior)而修饰过的未配对T检验。将使用Cyber-T (贝叶斯P值〈O. 001，差异表达的后验概率>0.99)和排名结果分析(P〈0.0001)时都具有统计学显著性的转录本鉴定为是差异表达的。使用NetAffx 分析中心(AfTymetrix)对微阵列数据进行了注释。大鼠cDNA的定量实时RT-PCR所有实时PCR都是在ABIPrism 7900HT 系统(Applied Biosystems, Warrington,、英国)上完成的，并且是在含有IOOng cDNA模板、I XABI PCR Mix No AmpEraseUNG (Applied Biosystems, Warrington,英国)和为对氧憐酶 3 (Pon3)和 18S 预先设计并预先优化的基因表达测定试剂(购自Applied Biosystems,分别为Rn01500926_ml和Rn00824548_ml)的IOyl体积中进行。这些专卖的引物-探针组的序列未知。PCR循环包括在95°C下进行20秒的起始变性，随后进行40个循环的95°C下I秒和60°C下20秒。对所有样品都以三等分试样进行分析。使用ddCt法对相对于18S的表达水平进行了定量。羊cDNA的克隆和定量实时RT-PCR由于绵羊Pon3基因的序列尚未公开，发明人使用牛Pon3mRNA (nm_001075479)在NCBI表达序列标签(EST)数据库中进行了搜索。该搜索鉴定出了与牛基因的同一性超过95%的若干羊EST。为了克隆推定的羊Pon3cDNA的片段，发明人使用了显示出最高同源性的两个EST (EE859920和EE792195)来设计PCR方案。引物如下正向(5' -CCCTAGTCGGGGAGAGATTT-3 ')，反向(5 ' -TTCTATGCCACCAGAGACCA-3 ')。所用的模板是从胎羊的肠产生的cDNA。PCR在含有最终浓度为I. 25nM的MgCl2、200ii M的每种dNTP、800nM的每种引物和0. I单位/ Ul的BioTaq DNA聚合酶(Bioline，伦敦，英国)的50 u I中进行。PCR程序的组成如下，在95°C下进行5分钟的起始变性，随后进行40个循环95°C下45秒、60°C下45秒、72°C下60秒，和72°C下10分钟的最终延伸步骤。在I. 5%琼脂糖凝胶上分析PCR产物，切下具有预期大小的条带并使用Qiaquick 凝胶抽提试剂盒(Qiagen, Crawley,英国)进行纯化,随后将其克隆至pGEM-T-Easy 质粒(Promega)中。测序验证了三个克隆。使用对绵羊P0N3克隆的部分cDNA和公众可获得的绵羊管家基因序列数据(NCBI)用Applied Biosystems File Builder 3. I设计了米用带6-FAM标记的大沟结合剂(MGB)探针的实时PCR测定(表I)。针对四种管家基因(18S、GAPDH、亲环素A和￠-肌动蛋白)的几何平均值对Pon3进行了相对定量，这是因为发明人在羊中观察到了更大的动物间变化性，并且该方法据报道优于使用任何单一参照基因23。PCR在含有IOOng cDNA模板、IX TaqMan Fast Universal PCR Mix No AmpErase UNG(Applied Biosystems, Warrington,英国)和定制设计的引物-探针组的10 体积中进行。PCR循环包括在95°C下进行20秒的起始变性，随后进行40个循环95°C下I秒和60°C下20秒。使用参照样品的梯度稀释液为每个测定制作了相对标准曲线，并且用相对标准曲线法分析结果。蛋白质印迹
为了分析大鼠肠中的Pon3蛋白表达，使用玻璃匀浆器在每IOml含有I片Complete Mini无EDTA蛋白酶抑制剂混合片剂(Roche)的IXRIPA缓冲液(Millipore)中使冷冻的组织均质化。使用BioRad DC蛋白测定来确定蛋白浓度。通过添加Nupage样品还原剂(Invitrogen)来还原含有20 y g蛋白的样品，使之热变性并将其加载到10%NovexBis-Tris凝胶(Invitrogen)上。电泳后，将蛋白转移到PVDF膜(Invitrogen)上，用TBS-tween-20 (0. 05%)中的5%脱脂奶封闭I小时，随后在振荡器上用0. 2 u g/ml的山羊多克隆抗人Pon3抗体(Lifespan Biosciences)于4°C过夜探测。用偶联有辣根过氧化物酶的兔抗山羊二抗(DAKO)检测抗体结合。随后使用ECL底物(Amersham Biosciences)来使结合可视化。用Restore 蛋白质印迹剥离缓冲液(Pierce)在室温下对膜进行15分钟的剥离，随后用0. 2 u g/ml的针对人GAPDH的兔多克隆抗体再次探测，从而确认等量的蛋白载量。
为了分析人胎儿中的Pon3表达，将脐带血样品收集在肝素锂管中，并通过在4 °C下以3000rpm离心10分钟来进行分离。将血清样品以1:10稀释在PBS中，通过添加Nupage样品还原剂(Invitoogen)来进行还原，随后使之热变性。将3 iU以1:10稀释的样品加载至Ij 10%Novex Bis-Tris凝胶(Invitrogen)上。电泳后，将蛋白转移到PVDF膜(Invitrogen)上，用PBS-tween20 (0. 05%)中的5%脱脂奶封闭I小时，随后按上文所述用抗人Pon3抗体(LifespanBiosciences, LB)进行探测。对蛋白质印记再次探测来确认等量的载量并不是必要的，因为所有泳道都载有等体积的血清。因此，并没有与蛋白抽提效率的变化性或与蛋白浓度测量有关的干扰。通过用丽春红S对印迹进行染色来估算总蛋白。统计学对转录本和皮质醇的水平进行对数转换，随后使用学生未配对T检验对平均值进行比较。使用斯皮尔曼等级相关和线性回归来评估两个连续变量之间的关联。在P〈0.05时认为有统计学显著性，且所有的P值都是双侧的。结果总结发明人研究了大鼠和羊的肺和肠，它们在种系发生上关系甚远。在这两种哺乳动物的全部两种组织中的上调说明该基因在哺乳动物(通常包括人)出生的系统性准备中很重要,例如在防御氧化应激中很重要。发明人研究了多种不同孕龄，还研究了皮质类固醇在羊中的效果，这是因为这些因素与准备出生的胎儿中多种关键过程的上调有关。该实验方案示于图I中。阵列实验显示了编码对氧磷酶3的mRNA在第16天和第20天之间在肺(24倍)和肠(31倍)中的上调。使用定量TaqMan RT-PCR进行的样本外验证(out of samplevalidation)确认了来自独立系列的动物的肺和肠中(图2A和2B)以及肝中(图2C)的相似幅度的变化。随后，发明人克隆了羊的P0N3cDNA的片段，设计了用于RT-PCR的引物和探针，并使用定量TaqMan RT-PCR分析了四组动物(每组有5只在孕期最后1/3期间分娩的动物)的P0N3 mRNA水平。小肠样品取自幽门括约肌和回肠-盲肠连接处之间的中点。P0N3 mRNA随着孕龄的推进而线性增加，并且全部两种组织中的变化具有高度的统计学显著性。在肺和肠中(图3A和3B)都观察到了约5倍的上调。
发明人研究了在暴露于外源合成皮质类固醇(地塞米松)和载质的早产羊胎儿中P0N3的表达。该研究显示出，皮质类固醇使肺和肠中的P0N3mRNA增加，但是由于样本间的变化性较大，该差异在肠中不具有统计学显著性(图4A和4B)。随后，发明人在足月(145天)分娩的动物中检验了内源皮质类固醇对P0N3mRNA水平的影响。将对照动物与在孕龄约115 118天时通过肾上腺切除术阻止了孕后期内源皮质类固醇增加的动物进行了比较。肾上腺切除与足月时的全部两种组织的较低P0N3mRNA相关，但是该差异也因较大的样品间变化性而在肠中不具有统计学显著性(图5A和5B)。这些结果显示在大鼠和羊的肺和肠中的R0N3mRNA在出生前发生上调。随后，通过获得脐带血(在4个早产儿和4个足月出生的婴儿出生时获得)，发明人比较了在早产人胎儿和足月人胎儿中循环的P0N3的水平。足月婴儿中的P0N3蛋白水平与成年人的相仿，但是早产儿的脐带血中的P0N3表达水平却较低(图6)。
孕后期的大鼠胎儿中的Pon3表达肺和肠中的微阵列分析均展示在阵列上在16dGA和20dGA之间上调大于20倍的四种基因(表2):血清淀粉样蛋白A3、对氧磷酶3 (Pon3)、溶质运载家族34成员2和细胞内氯离子通道5。相比之下，Pon基因家族的另两个成员(Ponl和Pon2)的表达没有显著变化。发明人通过实时定量RT-PCR分析了阵列中所用的动物的同胞动物的Pon3的表达，确认了在大鼠肺、肠和肝中Pon3mRNA在16dGA和20dGA之间的上调(图2)。对16dGA和20dGA时的大鼠肺和肠的蛋白质印记分析显示出，Pon3蛋白在16dGA时检测不到，但是在20dGA时存在具有恰当分子量的清晰条带(图7)。胎羊中的Pon3表达由于绵羊P0N3基因序列尚未公开，发明人克隆了直系同源绵羊基因的部分cDNA。发明人获得了在核苷酸水平上与牛Pon3的同源性为96%且与人Pon3的同源性为87%的505bp序列。相比之下，该序列与牛PONl的同源性(62%)和与牛P0N2的同源性(70%)较低。使用该克隆序列设计了定量RT-PCR方案(表2)。随后，发明人分析了 P0N3在四组动物中的表达，其中每组具有5只在孕期最后1/3期间分娩的动物。在肺和肠中，P0N3表达均随着孕龄的推进(图3A和3B)和皮质醇水平的增加(图3C和3D)而线性增加，且所有变化都具有高度的统计学显著性。随后，发明人对暴露于外源合成皮质类固醇(地塞米松)或载质的早产羊胎儿进行了比较。该比较显示出，地塞米松使肺和肠中的P0N3表达均增加，但是由于样本间的变化性较大，该差异在肠中不具有统计学显著性(图4A和4B)。随后，通过将对照足月动物与在115 IlSdGA时进行了胎儿肾上腺切除的足月动物进行比较，发明人检验了对正常的孕后期内源糖皮质激素升高的阻断给足月(145天)分娩的动物的P0N3表达带来的影响。肾上腺切除与足月时的两种组织的较低P0N3表达均有关，但是该差异也因较大的样品间变化性而在肠中不具有统计学显著性(图4C和4D)。人脐带血中的Pon3蛋白使用对人脐带血清的蛋白质印迹,可检测到具有适合大小的P0N3条带。对8个早产儿和10个足月婴儿的脐带血清的P0N3水平进行了比较。早产儿的平均孕龄为27周零3天，平均出生体重为986g。4个为正常分娩，4个通过剖腹生产术分娩。一个婴儿在出生前已接受单剂量的倍他米松，而其余全部婴儿则完成了出生前类固醇疗程。在8个婴儿中，有6个的起始CRP小于5mg/l，有2个的起始CRP更高(14mg/l和68mg/l)。在出生后测试的第一个样品中，没有一个婴儿具有阳性血培养或阳性CSF培养。足月时的P0N3水平更高，达6.3倍(图8)。如果表达相对于总蛋白(通过丽春红S染色来估算)的P0N3，足月时的水平高达4. 9倍，而且对数转换后的平均值的比较结果保持了高的统计学显著性(P〈0. 001)。在阵列上的28，532个基因中，仅有4个在孕后期大鼠的肺和肠中的上调超过20倍，对氧磷酶3是其中之一。该上调在同胞动物中得到了验证。之前的研究还显示出，在人类中，P0N3主要在肝中表达24，而且，发明人还观察到了在孕后期大鼠中Pon3在该器官中的上调。蛋白质印迹确认了蛋白水平上的上调。发明人确认了在胎羊(种系发生上远距离的哺乳动物物种)中P0N3 mRNA在孕期最后1/3期间发生明显的系统性上调。此外，像表面活性剂一样19，胎羊P0N3 mRNA的表达受到糖皮质激素的控制，这可以在下述现象中得到证实与内源皮质醇水平的强相关性，在母体已接受了地塞米松的早产动物中表达升高，在115 118dGA时接受了肾上腺切除术的足月胎儿中表达下降。P0N3在血液中与低密度脂蛋白关联地循环25。因此，通过测量脐带血清浓度，发明人能够研究该蛋白是否在孕后期的 人婴儿中也上调。发明人发现，尽管所研究的8个早产儿中有7个曾接受完整的出生前倍他米松疗程，但足月出生的人婴儿的P0N3水平更高，超过6倍。从这些分析中发明人得到如下结论在大鼠、羊和人的胎儿中都观察到的P0N3上调可能是出生的系统性准备过程，且受到糖皮质激素的控制。对氧磷酶家族由编号为I 3的3种蛋白组成。编码这些蛋白的基因位于人类染色体7q21_22上的簇中，具有约65%的同源性。全部三种蛋白都是水解酶，具体而言，水解多种内酯和羟基酸。两项研究表明，P0N3作为抗氧化剂起作用。已发现，P0N3(而非P0N2)保护低密度脂蛋白(LDL)不发生铜诱导的体外氧化25。最近的研究表明，人Pon3在小鼠骨骼肌中的转基因表达与四氯化碳(CCl4)的肝毒素效应下降有关26。施用CCl4会通过肝内诱导自由基而引起肝损伤。转基因的人P0N3使脂质过氧化水平降低，并且减少了 CCl4引起的肝损伤的生物化学和组织学现象。此外，转基因的人Pon3使内源抗氧化剂谷胱甘肽和过氧化物歧化酶的正常肝内水平得到保持，而这两者在对照动物中都发生了消耗。另据显示，人Pon3在小鼠中的转基因表达抑制粥样硬化病变形成和肥胖27。P0N3在孕后期大鼠胎儿中的上调的系统性特征表示其具有为不同器官中的不同细胞类型所需的某种作用。此外，Pon3在孕后期大鼠和羊中的系统性上调现象表示该上调与出生前后的各种哺乳动物物种所共有的过程有关。出生后，在所有哺乳动物物种中动脉氧分压快速上升。在羊中，胎儿动脉血中的氧分压为约18 28mmHg，在出生后几分钟内，该分压上升至约lOOmmHg28。出生后氧张力的升高是心血管系统进行出生后适应(例如促进动脉导管的闭合16a和提高肺血流3°)的关键触发因素。然而，氧张力的快速上升能够导致产生反应性氧物种(ROS)，可以将其定义为描述“出现在生理环境中的氧的所有氧化态和激发态，最高从超氧化物开始，但不包括水”31。鉴于出生后氧分压的急剧上升，新生儿可能暴露于出生后ROS的增量生成。鉴于Pon3的抗氧化剂效果，由于对出生后立即限制氧化应激的共同需要，该酶在孕后期的系统性上调可能在多种物种中是保守性的。早产与死亡率和患病率的升高相关。这与以下事实有关婴儿在新生生命的正常准备性变化前出生，而这些变化出现在孕后期的胎儿中。表面活性剂疗法是成功的临床措施的实例，其基于为早产儿补充通常在孕后期上调的物质。这些结果说明，向早产的人类新生儿施用P0N3可能因此改善早产的后果并提供抵抗上述早产儿并发症的保护。P0N3的关键性质是其出现在血清中。首先，这允许我们通过测量获自脐带血样的血清中的水平来确认人婴儿中的上调。其次，如果P0N3在新生儿中的作用在部分上由该蛋白循环水平的升高的介导， 这表示向早产新生儿静脉内施用外源Pon3可以是有益的。这些解释得到了上述小鼠中转基因人P0N3研究的支持。Pon3在骨骼肌中的转基因表达导致血液中Pon3内酯酶活性升高，这与CCl4所诱导的肝中自由基生成效应的下降有关26。因此，这些观察支持了循环中的Pon3的系统性效果。对不同的对氧磷酶的生物化学研究表明，虽然三种亚型具有一些相同的底物，但它们每一个还能够水解特定的底物32。在孕后期的大鼠肺和肠中，还有另外3种基因的上调超过20倍。其中两种是离子通道(溶质运载家族34成员2和细胞内氯离子通道5)。因此，这两者均不是潜在的候选替代性治疗剂，但是它们在孕后期的系统性的、有意义的上调表明它们可能在出生前后的适应过程中有重要作用。另外一个上调的转录本，血清淀粉样蛋白A3，是急性期蛋白。先前的研究已涉及了机械通气、内毒素和糖皮质激素对该蛋白在胎羊中的表达的影响33_35。然而，本文首次显示出在孕后期大鼠胎儿中的转录本水平上的生理上调。因此，血清淀粉样蛋白A3(SAA3)也代表了早产新生儿中的候选新型疗法。参考文献(I)Steer P. BJOG 2005; 112Suppll: 1-3.(2) National Audit Office (UK). Caring for Vulnerable Babies : Thereorganisation of neonatal services in England.London:The StationeryOffice;2007.(3)Suresh GK, Soil RF. J Perinatol 2005;25Suppl 2:S40_S44.(4)Heymann MA, Rudolph AM. Physiol Rev 1975;55 (I):62-78.(5)Nathan C. J Clin Invest 2003;111 (6):769-778.(6)Draganov DI.Circ Res 2007;100 (8):1104-1105.(7)Crowley P. Cochrane Database Syst Rev 2000; (2):CD000065.(8)Soil RF. Cochrane Database Syst Rev 2000; (2):CDOOl149.(9) Forhead AJ 等，Endocrinology 2002; 143 (4) : 1166-1173.(IO)Draganov DI 等，J. Lipid Res 2005; 46 (6) : 1239-1247.(Il)Draganov DI 等，J Biol Chem 2000; 275 (43) : 33435-33442.(12) Rudolph AM 等，Circ Res 1970; 26 (3) :289-299.(13)Smith GCS. Pharmacol Rev 1998;50 (I):35-58.(14)Clements JA. Annu Rev Physiol 1997;59:1-21.(15)Soil RF. Cochrane Database Syst Rev 2000; (2):CDOOl149.(16)Brion LP,Bell EF 等，Cochrane Database Syst Rev 2003; (3):CD003665.(17) Suresh GK 等，Cochrane Database Syst Rev 2001; (I) : CD001968.(18) Soghier LM 等，Cochrane Database Syst Rev 2006; (4) : CD004869.
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1141 aaactgataa ttgtatgata agtggcactg taagtaaata gcaaacacca aaaaaaaaaa1201 aSEQ ID NO:l(Genbank NM_000940. 2 GI:94538355)I mgklvalvll gvglslvgem flafrervna srevepvepe nchlieeles gsedidilps61 glafissglk ypgmpnfapd epgkiflmdl neqnpraqal eisggfdkel fnphgisifi121 dkdntvylyv vnhphmkstv eifkfeeqqr slvylktikh ellksvndiv vlgpeqfyat181 rdhyftnsll sffemildlr wtyvlfyspr evkvvakgfc sangitvsad qkyvyvadva 241 aknihimekh dnwdltqlkv iqlgtlvdnl tvdpatgdil agchpnpmkl lnynpedppg301 sevlriqnvl sekprvstvy anngsvlqgt svasvyhgki ligtvfhktl ycelSEQ ID N0:2(Genbank NP_000931. IGI:29788996)ATGGGGAAGCTCGTGGCGCTGGTCCTGCTGGGGGTCGGCCTGTCCTTAGTCGGGGAGATGTTTCTGGCGTTTAGAGAAAG 80GGTGAATGCCTCTCGAGAAGTGGAGCCAGTAGAACCTGAAAACTGCCACCTTATTGAGGAACTTGAAAGTGGCTCTGAAG 160ATATTGATATACTTCCTAGTGGGCTGGCTTTTATCTCCAGT
G Tes&mmaTtte&mumcaamMmmmm mmSG8C*TCCSCCT E*IQJWSS GATTAAAATATCCAGGCATGCCAAACTTTGCGCCAGATGAACCAGGAAAAATCTTCTTGA 400 TGGATCTGAATGAACAAAACCCAAGGGCACAAGCACTAGAAATCAGTGGTGGATTTGACAAAGAATTATTTAATCCACAT 480GGGATCAGTATTTTCATCGACAAAGACAATACTGTGTATCTTTATGTTGTGAATCATCCCCACATGAAGTCCACTGTGGA 560GATATTTAAATTTGAGGAACAACAACGTTCTCTGGTATACCTGAAAACTATAAAACATGAACTTCTCAAAAGTGTGAATG 640ACATTGTGGTTCTTGGACCAGAACAGTTCTATGCCACCAGAGACCACTATTTTACCAACTCCCTCCTGTCATTTTTTGAG 720ATGATCTTGGATCTTCGCTGGACTTATGTTCTTTTCTACAGCCCAAGGGAGGTTAAAGTGGTGGCCAAAGGATTTTGTAG 800TGCCAATGGGATCACAGTCTCAGCAGACCAGAAGTATGTCTATGTAGCTGATGTAGCAGCTAAGAACATTCACATAATGG 880AAAAACATGATAACTGGGATTTAACTCAACTGAAGGTGATACAGTTGGGCACCTTAGTGGATAACCTGACTGTCGATCCT 960GCCACAGGAGACATTTTGGCAGGATGCCATCCTAATCCTATGAAGCTACTGAACTATAACCCTGAGGACCCTCCAGGATC 1040AGAAGTACTTCGCATCCAGAATGTTTTGTCTGAGAAGCCCAGGGTGAGCACCGTGTATGCCAACAATGGCTCTGTGCTTC 1120AGGGCACCTCTGTGGCTTCTGTGTACCATGGGAAAATTCTCATAGGCACCGTATTTCACAAAACTCTGTACTGTGAGCTC 1200TAG 1203SEQ ID N0:3P0N3长异构核苷酸序列(额外序列以黑体示出)MGKLVALVLLGVGLSLVGEMFLAFRERVNASREVEPVEPENCHLIEELESGSEDIDILPSGLAFIS
S wmsasmsMtc 80GLKYPGMPNFAPDEPGKIFLMDLNEQNPRAQALEISGGFDKELFNPH 160GISIFIDKDNTVYLYVVNHPHMKSTVEIFKFEEQQRSLVYLKTIKHELLKSVNDIVVLGPEQFYATRDHYFTNSLLSFFE 240
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权利要求
1.一种治疗早产新生儿的方法，所述方法包括 向所述早产新生儿施用对氧磷酶3 (P0N3)多肽。
2.如权利要求I所述的方法，其中，所述治疗降低了所述新生儿死亡的风险和/或患病的程度、严重性或风险。
3.如权利要求I或2所述的方法，其中，所述P0N3多肽与SEQID NO: 2的序列同一性为至少80%。
4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述PON3多肽配制在药物组合物中。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述PON3多肽胃肠外施用。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述PON3多肽静脉内施用。
7.如权利要求I 4中任一项所述的方法，其中，所述PON3多肽肠内施用。
8.一种用于治疗早产新生儿的PON3多肽。
9.PON3多肽在制造用于治疗早产新生儿的药物中的应用。
10.一种治疗早产新生儿的方法，所述方法包括 向所述早产新生儿施用血清淀粉样蛋白A3(SAA3)多肽。
11.如权利要求10所述的方法，其中，所述治疗降低了所述新生儿死亡的风险和/或患病的程度、严重性或风险。
12.如权利要求10或11所述的方法，其中，所述SAA3多肽与SEQID NO:6的序列同一性为至少80%。
13.如权利要求10 12中任一项所述的方法，其中，所述SAA3多肽配制在药物组合物中。
14.如权利要求10 13中任一项所述的方法，其中，所述SAA3多肽胃肠外施用。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述SAA3多肽静脉内施用。
16.如权利要求10 13中任一项所述的方法，其中，所述SAA3多肽肠内施用。
17.如权利要求10 16中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述早产新生儿施用对氧磷酶3(PON3)多肽。
18.一种用于治疗早产新生儿的SAA3多肽，或用于治疗早产新生儿的组合的SAA3多肽与PON3多肽。
19.SAA3多肽或组合的SAA3多肽与PON3多肽在制造用于治疗早产新生儿的药物中的应用。
20.如权利要求I 7和10 17中任一项所述的方法,所述方法包括在所述施用前，鉴定所述早产新生儿为缺乏PON3和/或SAA3。
21.一种鉴定有患病和/或死亡风险的早产新生儿的方法，所述方法包括 确定从所述新生儿获得的样品中的PON3和/或SAA3的水平或活性； 其中，与对照相比PON3和/或SAA3的水平或活性降低表明该早产新生儿具有患病和/或死亡风险。
全文摘要
本发明涉及用对氧磷酶3(PON3)或血清淀粉样蛋白A3(SAA3)对早产新生儿的治疗，以减小或防止与早产相关的患病率和死亡率。
文档编号A61K38/46GK102740876SQ201080054902
公开日2012年10月17日 申请日期2010年10月22日 优先权日2009年10月22日
发明者D·S·查诺克-琼斯, 戈登·史密斯 申请人:剑桥企业有限公司