专利名称：一种补肾养血方的提取方法及其药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种补肾养血方的提取方法，以及含有该提取物的药物组合物。
背景技术：
补肾养血方来源于《部颁中药第五册》标准号为WS3-B-0948-91的补肾养血丸，由 制何首乌、当归、黑豆、牛膝(盐制)、茯苓、菟丝子、补骨脂(盐制)、枸杞子组成。具有补 肝肾，益精血的功效。其中制何首乌补肝益肾，涩精固气；枸杞子、菟丝子均入肝肾，填精补 肾，固精止遗；当归补血养肝，牛膝强健筋骨，黑豆具有补肝肾的作用，以上诸药共同达到滋 补肝肾之阴的效果，药性较平。补骨脂可温补肾阳，此取之于“善补阴者，则阳中求阴”，使 阴得阳升而泉源不竭；茯苓淡渗以泄浊，乃补中有泻，诸药配伍，共奏补肝益肾，涩精固本之 功，故可广泛应用于身体虚弱，血气不足，遗精，须发早白等症状，广泛用于临床中肝肾不足 的各种疾患。原剂型为蜜丸及水丸，蜜丸及水丸为全粉入药，服用量分别为9g、6g，服用量大，且 服用不便，目前尚无针对补肾养血方进行提取方法的研究，因此该药物剂型陈旧，病人的顺 应性差，随着社会的发展，人们生活水平的提高，剂型改造势在必行。
发明内容
本发明的目的在于针对补肾养血处方，提供一种提取方法，将得到的提取物加入 辅料，制成新剂型。补肾养血方见《部颁中药第五册》标准号为WS3-B-0948-91的补肾养血丸，由制何 首乌80g、当归20g、黑豆40g、牛膝(盐制)20g、茯苓20g、菟丝子20g、补骨脂(盐制)10g、 枸杞子20g组成，原制法为以上八味，粉碎成细粉，过蹄，混勻，每100粉末加炼蜜110 120g制成大蜜丸，或加炼蜜40 50g与适量的水泛丸，包衣，干燥，即得。本发明的提取工艺如下按照补肾养血丸的重量比称取制何首乌、当归、黑豆、牛 膝(盐制)、茯苓、菟丝子、补骨脂(盐制)、枸杞子，加乙醇提取，合并煎液，滤过，滤液回收 乙醇得清膏；醇提后的药渣加水煎煮两次滤过，滤液回收得清膏。合并两个清膏，浓缩，得提 取物。其中醇提采用5 10倍量40 95%乙醇提取2 3次，每次0. 5 3小时，合并 煎液，滤过，滤液回收乙醇得清膏。醇提优选采用加8倍量70%乙醇提取3次，每次1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液回
收乙醇得清膏。醇提后的药渣加5 15倍量水煎煮2次，每次0. 5 2小时，滤过，滤液回收得清 膏。合并两个清膏，浓缩，得提取物备用。
醇提后的药渣优选加10倍量水煎煮2次，每次1小时，滤液回收得清膏。合并两 次清膏，浓缩，得提取物。本发明的另一个目的在于提供含有上述提取物的药物组合物。该药物组合物含 有有效量的补肾养血提取物以及药物学上可以接受的载体和赋形剂，该组合物可以是口服 液、合剂、糖浆剂、膏滋、硬胶囊、软胶囊、片剂、颗粒剂、微丸。含有补肾养血提取物的软胶囊由药液和囊壳两部分制成。药液主要由补肾养血提取物、稀释剂、助悬剂及润湿剂按重量比为1 0.6 1 0. 01 0. 08 0 0. 06 制成。稀释剂选自大豆油、聚乙二醇400。稀释剂优选大豆油。助悬剂选自蜂蜡、单硬脂酸甘油酯。助悬剂优选蜂蜡。润湿剂选自卵磷脂。囊壳材料由明胶、甘油、水和防腐剂组成。选择明胶、甘油、水的重量百分比为明 胶甘油水=1 0. 3 0. 7 0. 8 1。软胶囊的具体制备方法稀释剂、助悬剂及润湿剂加热，80°C使混溶，放冷，将筛后的补肾养血干粉逐渐加 入混合油中，搅拌混勻，用胶体磨研磨，使其形成均勻的混悬液，压制成软胶囊。本发明提取工艺的优点1、制剂的质量标准中增加了有效成分二苯乙烯苷的含量控制指标，增加了当归、 补骨脂、制何首乌三味药材的薄层鉴别，与原丸剂相比，本品的质量更加可控；2、本品进行提取后在不降低药效的基础上减少了服用量，使患者服用、携带更加 方便。药效学试验显示1、补肾养血提取物能明显增强其免疫功能；2、补肾养血提取物能加速RBC和Hb的恢复；3、补肾养血提取物能明显改善其肾功能。
具体实施例方式本发明由下列实施例来说明，但不应当构成对本发明的限制。补肾养血方见部颁中药第五册标准号为WS3-B-0948-91的补肾养血丸，即由制何 首乌80g、当归20g、黑豆40g、牛膝(盐制)20g、茯苓20g、菟丝子20g、补骨脂(盐制)10g、 枸杞子20g组成。实施例一补肾养血提取工艺称取补肾养血组方，加8倍量70%乙醇提取3次，每次1. 5小时，合并煎液，滤过， 滤液回收乙醇得清膏；药渣加10倍量水煎煮两次，每次1小时，滤过，滤液回收得清膏。合 并两个清膏，浓缩，得提取物。实施例二 补肾养血提取工艺称取补肾养血组方，加8倍量80%乙醇提取3次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤 液回收乙醇得清膏；药渣加8倍量水煎煮两次，每次0.5小时，滤过，滤液回收得清膏。合并两个清膏，浓缩，得提取物。实施例三补肾养血提取工艺称取补肾养血组方，加6倍量75%乙醇提取2次，每次1. 5小时，合并煎液，滤过， 滤液回收乙醇得清膏；药渣加5倍量水煎煮两次，每次1小时，滤过，滤液回收得清膏。合并 两个清膏，浓缩，得提取物。实施例四补肾养血提取工艺称取补肾养血组方，加6倍量70%乙醇提取2次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤 液回收乙醇得清膏；药渣加10倍量水煎煮两次，每次1小时，滤过，滤液回收得清膏。合并 两个清膏，浓缩，得提取物。实施例五补肾养血软胶囊采用实施例一制备补肾养血提取物(按出膏率25 % )，干燥得干粉备用，补肾养血
软胶囊组方如下组方重量(g)补肾养血提取物干粉100大豆油60卵磷脂2蜂蜡2总重量1641、制备方法按上述组方混合均勻，压制成软胶囊。制成300粒，每天服用2 3 次，每次3粒。2、含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。(1)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙 腈-水(18 82)为流动相；检测波长为320nm。理论板数按2，3，5，4 ‘-四羟基二苯乙 烯-2-0- β -D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。(2)对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2_0_β -D-葡萄 糖苷对照品约15mg，置50ml量瓶中，加50%乙醇适量，超声使溶解，加50%乙醇稀释至刻 度，摇勻；精密量取5ml至50ml量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇勻，滤过，即得(每Iml 中含2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-0-3-D-葡萄糖苷约30 μ g)。(3)供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混勻，取约0. 15g，精密称 定，置50ml量瓶中，加50%乙醇适量，超声处理15min，放冷至室温，加50%乙醇稀释至刻 度，摇勻，滤过，即得。6、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测 定，按外标法以峰面积计算，即得。7、本品含制何首乌以2，3，5，4 ‘-四羟基二苯乙烯-2_0_ β-D-葡萄糖苷 (CltlH12N5O4,简称为二苯乙烯苷)计，每粒或者每片不得少于2. Img0检测结果每粒软胶囊中含二苯乙烯苷4. Img0实施例六补肾养血软胶囊采用实施例一制备补肾养血提取物(出膏率为25% )，干燥得干粉备用，补肾养血 软胶囊组方如下
组方重量(g)补肾养血提取物干粉100大豆油100卵磷脂6蜂蜡6总重量212制备方法按上述组方混合均勻，压制成软胶囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用实施例五的含量测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 3mgo实施例七补肾养血软胶囊采用实施例一制备补肾养血提取物(出膏率为25% )，干燥得干粉备用，补肾养血
软胶囊处方如下组方重量(g)补肾养血提取物干粉100大豆油80卵磷脂2蜂蜡3总重量185制备方法按上述组方混合均勻，压制成软胶囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用实施例五的含量测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 2mgo实施例八补肾养血软胶囊采用实施例一制备补肾养血提取物(出膏率为25% )，干燥得干粉备用，补肾养血
软胶囊组方如下组方重量(g)补肾养血提取物干粉100大豆油80卵磷脂3蜂蜡4总重量187制备方法按上述组方混合均勻，压制成软胶囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用实施例5的含量测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷3. Smg0实施例九补肾养血软胶囊采用实施例一制备补肾养血提取物(出膏率为25% )，干燥得干粉备用，补肾养血
软胶囊组方如下组方重量(g)补肾养血提取物干粉100聚乙二醇80
总重量185制备方法按上述组方混合均勻，压制成软胶囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用实施例五的含量测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 3mgo实施例十补肾养血软胶囊采用实施例一制备补肾养血提取物(出膏率为25% )，干燥得干粉备用，补肾养血
软胶囊组方如下组方重量(g)补肾养血提取物干粉100大豆油80单硬脂酸甘油酯1. 8总重量181制备方法按上述组方混合均勻，压制成软胶囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用实施例五的含量测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 2mgo实施例十一补肾养血软胶囊采用实施例二制备补肾养血提取物(出膏率为25% )，干燥得干粉备用，补肾养血
软胶囊组方如下组方重量(g)补肾养血提取物干粉100大豆油90单硬脂酸甘油酯4总重量194制备方法按上述组方混合均勻，压制成软胶囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用实施例五的含量测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 2mgo实施例十二 补肾养血软胶囊采用实施例二制备补肾养血提取物(出膏率为25% )，干燥得干粉备用，补肾养血
软胶囊组方如下组方重量(g)补肾养血提取物干粉100大豆油100单硬脂酸甘油酯12总重量212制备方法按上述组方混合均勻，压制成软胶囊。制成300粒，每天服用2 3次， 每次3粒。采用实施例五的含量测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. Img0实施例十三补肾养血胶囊采用实施例三制备补肾养血提取物(出膏率为25% )，干燥得干粉备用，补肾养血软胶囊组方如下
组方
重量(g)补肾养血提取物干粉大豆油单硬脂酸甘油酯总重量
100 80制备方法按上述组方混合均勻，压制成软胶囊。制成300粒，服用方法同实施例五。采用实施例五的含量测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷4. 5。实施例十四补肾养血胶囊采用实施例一制备的提取物(出膏率为25% )，干燥取100g，灌装胶囊，每粒胶囊 装量为0. 33g。采用实施例五的含量测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷3. 6mg。实施例十五补肾养血片采用实施例一制备的提取物(出膏率为25% )，干燥，得干粉备用。补肾养血干粉IOOg淀粉20g制备方法按上述组方混合均勻，用95%的乙醇制软材，制粒，干燥，压制成片，规 格0. 3g/片，每次服用四粒。采用实施例五的含量测定方法，本品每片含二苯乙烯苷4. 5mg。实施例十六补肾养血颗粒剂采用实施例一制备的提取物，干燥，得干燥粉备用。补肾养血干粉IOOg蔗糖150g糊精50g混合均勻，用75%的乙醇制软材，制粒，干燥，分装成2g/袋，每天服用2 3次，每
次服用一袋。采用实施例五的测定方法，本品每粒含二苯乙烯苷12. 9mg。以实施例一的提取物为基本药物，与阳性药物补肾养血丸相比较，用多种动物模 型对补肾养血软胶囊的增强免疫、益精血、增强肾功能等作用进行药效试验，具体方法及其 结果如下实施例十七对正常小鼠淋巴细胞转化率的影响试验药物实施例一提取的提取物干燥得到的干粉，每Ig干粉相当于4g生药(简 称补肾养血)。阳性药物补肾养血丸，每Ig丸重相当于0.69g生药。洛阳君山制药有限 公司生产。上述药物临用前以0.5% CMC(羧甲基纤维素)配制成所需浓度的药液，供动物 灌胃给药用。试验动物ICR小鼠，体重19. 2士0. 9(18 21) g，雌雄各半，北京维通利华实验动 物技术有限公司提供。试验方法ICR小鼠50只，按性别、体重随机分为5组，每组10只。对照组灌胃给予0. 5% CMC，受试药组灌胃给予补肾养血，剂量分别为2. 5、5、10g生药/kg，阳性药组灌胃 给予补肾养血丸，剂量为5g生药/kg，给药体积均为20ml/kg，每日一次，连续14天。末次给药后24h剪尾取血涂片，瑞氏染色，油镜下计数100个淋巴细胞中淋巴母细 胞和过度态细胞数，计算淋巴细胞转换率，观察药物对免疫细胞的影响。试验结果与对照组比较，给予补肾养血后2. 5、5、IOg生药/kgl4天后，小鼠的淋 巴母细胞分别增加了 17. 0% (P > 0. 05),45.9% (P < 0.01),55.9% (P < 0.01)；过渡态 细胞分别增加了 5. 5% (P>0. 05),18.8% (P < 0. 05),24.3% (P < 0. 01)。补肾养血丸阳 性药组，其淋巴母细胞和过渡态细胞分别增加了 40. 6% (P < 0. 01)和16. 3% (P < 0. 05)。 等剂量的补肾养血与丸剂作用相当。结果见表1。表1 补肾养血对正常小鼠淋巴细胞转化率的影响(X±s，n = 10)
组别剂量(g/kg)淋巴母细胞(％)过渡态细胞(％)对照一22.9±6.6132.5±5·54补肾养血2.526.8±6·1834.3±6.18补肾养血533.4 士 7.09Μ38.6±5.48終补肾养血1035.7±7.2严40·4±5·44@补肾养血丸532.2±6.46狄37.8±5.55χ注与对照组比较※P < 0. 05，※吁< 0. 01 ；等剂量补肾养血与丸剂比较P > 0. 05。试验结果表明补肾养血可增强小鼠细胞免疫功能。实施例十八对小鼠溶血素(IgM)的影响试验药物同实施例十七。试验动物ICR小鼠，体重19. 5士 1. 1(18 22) g，雌雄各半，北京维通利华实验动 物技术有限公司提供。试验方法ICR小鼠60只，按性别、体重随机分为6组，每组10只。正常对照组及 免疫对照组灌胃给予0. 5% CMC,受试药组灌胃给予补肾养血，剂量分别为2. 5、5、10g生药 /kg,阳性药组灌胃给予补肾养血丸，剂量为5g生药/kg ；给药体积均为20ml/kg，每日一次， 连续给药14天。试验的第8天，除正常对照组外，其它各组小鼠分别腹腔注射5%鸡血红细 胞生理盐水混悬液0. 2ml/只，进行致免。免疫后第7天，末次给药后lh，所有各组均摘眼球取血约0. 5ml，离心，取血清用生 理盐水稀释100倍，取上述稀释血清Iml与5%鸡红细胞悬液0. 5ml混勻，冰浴)中加 入10%补体0. 5ml，370°C恒温水浴箱中保温30min后，冰水浴中终止反应，离心，取上清液 于722分光光度计540nm处比色(以不加血清的空白管调零)，测吸光度(OD)，观察药物对 体液免疫的影响。试验结果给予腹腔注射5%鸡血红细胞生理盐水混悬液0. 2ml后，第七天，免疫 对照组的OD值明显增加。给予补肾养血2.5、5、10g生药/kg，与免疫对照组相比，OD值分 别增加了 9. 7% (P>0. 05),17.4% (P < 0.01),20. 1% (P < 0. 01)。补肾养血丸组，其 OD 值增加了 15. 3% (P <0.05)。等剂量的补肾养血与丸剂作用相当。结果见表2。表2 补肾养血对小鼠溶血素生成的影响(I±s，n = 10)
权利要求
1.一种补肾养血方的提取方法，按照《部颁中药第五册》标准号为WS3-B-0948-91的 补肾养血丸处方量的重量比称取制何首乌、当归、黑豆、牛膝(盐制)、茯苓、菟丝子、补骨脂 (盐制)、枸杞子，其特征在于加乙醇提取，合并煎液，滤过，滤液回收乙醇，得清膏；醇提后 的药渣加水煎煮两次滤过，滤液回收得清膏，合并两个清膏，浓缩，得提取物。
2.根据权利要求1所述的补肾养血方的提取方法，其特征在于醇提采用5 10倍量 40 95%乙醇提取2 3次，每次0. 5 3小时。
3.根据权利要求2所述的补肾养血方的提取方法，其特征在醇提采用加8倍量70%乙 醇提取3次，每次1.5小时。
4.根据权利要求1所述的补肾养血方的提取方法，其特征在于醇提后的药渣加5 15 倍量水煎煮2次，每次0. 5 2小时。
5.根据权利要求4所述的补肾养血方的提取方法，其特征在于醇提后的药渣加10倍量 水煎煮2次，每次1小时。
6.一种含有权利要求1所述的补肾养血方提取物的药物组合物，其特征是含有有效量 的补肾养血提取物以及药物学上可以接受的载体和赋形剂。
7.根据权利要求6所述的含有补肾养血方提取物的药物组合物，其特征是口服液、合 剂、糖浆剂、膏滋、硬胶囊、软胶囊、片剂、颗粒剂、微丸。
8.根据权利要求6所述的含有补肾养血方提取物的药物组合物，其特征是软胶囊， 由药液和囊壳两部分构成，药液由补肾养血提取物、稀释剂、助悬剂及润湿剂按重量比为 1 0.6 1.0 0.01 0.08 0 0.06 制成。
全文摘要
本发明涉及一种补肾养血方的提取方法，以及含有该提取物的药物组合物。该药物组合物含有有效量的补肾养血提取物以及药物学上可以接受的载体和赋形剂，该组合物可以是口服液、合剂、糖浆剂、膏滋、硬胶囊、软胶囊、片剂、颗粒剂、微丸。
文档编号A61K36/815GK102085273SQ20111002302
公开日2011年6月8日 申请日期2006年4月30日 优先权日2006年4月30日
发明者刘海丽, 刘翠艳, 张宏武, 梁敏, 湛福春, 申东民 申请人:石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司