专利名称：四磨汤制剂的多指标成分同时测定及其指纹图谱构建方法
技术领域：
本发明涉及一种四磨汤制剂的多指标成分同时测定方法，以及四磨汤制剂指纹图谱的构建方法。
背景技术：
四磨汤中药方包括木香、枳壳、乌药和槟榔四味药材。该方具有顺气降逆，消积止痛功效，可用于婴幼儿乳食内滞证(证见腹胀、腹痛、啼哭不安、厌食纳差、腹泻或便秘)，中老年气滞、食积症(证见脘腹胀满、腹痛、便秘)，以及腹部手术后促进肠胃功能的恢复。此外，还有文献报道其用于治疗新生儿黄疸、胃食管返流、病毒性肠炎、便秘型肠易激综合征和中毒性肠麻痹等疾病的成功病例。现有技术中，根据四磨汤中药方，已制得多种剂型的四磨汤制剂。通常的制备工艺一般为将四味原药材采用水蒸气蒸馏法提取芳香水，芳香水富集挥发油后直接备用或包合后备用，再将药渣用水提醇沉得水提液，水提液可浓缩干燥得干膏粉，将上述芳香水或挥发油，以及水提液或干膏粉，选择合适的辅料，即制备成口服液、滴丸、乳化剂、胶囊、软胶囊、片剂、颗粒剂等多种剂型。例如，中国专利94110842. 2 (公开号CN1106288)公开了一种四磨汤口服液。其采用中药槟榔10 25%、木香10 25%、枳壳20 30%、乌药20 30%，取上述药材饮片提取芳香性成分，另存；将药渣加水煎煮，合并滤液，浓缩，加乙醇静置，滤取清液，减压回收乙醇，加水煮沸，过滤去渣，滤液中加入芳香性成分水液及适量辅料、滤过、分装、灭菌即得。四磨汤包括槟榔、木香、枳壳和乌药，所含成分复杂多样。据文献报道，木香主要成分包括萜类、生物碱、留体和氨基酸，枳壳主要成分包括黄酮苷、烯烃和生物碱，乌药主要成分包括萜类和生物碱，槟榔主要成分包括生物碱、鞣质和氨基酸。但四磨汤口服液现有的质量标准为部颁标准WS-10040(ZD-0040)_2002该标准 “鉴别”项采用TLC法对木香和槟榔进行鉴别取四磨汤口服液成品，用有机溶剂进行提取， 经前处理后制备成供试品溶液；对照药材用适宜有机溶剂提取，经前处理后制备成对照药材溶液；供试品溶液和对照药材溶液点板于硅胶G薄层板，采用适宜展开剂展开，显色剂显色，进行药材鉴别。“含量测定”项采用高效液相色谱法测定指标性成分柚皮苷含量用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇醋酸(38 62)为流动相；检测波长为283nm。四磨汤口服液成品经Dltll型大孔吸附树脂柱洗脱，收集洗脱液，制备成供试品溶液；取柚皮苷对照品制备成对照品溶液；采用外标法计算柚皮苷含量。该标准未对其他有效成分进行定量检测，存在一定局限性，不能全面反映中药产品的质量水平。指纹图谱技术是新发展的中药质量控制方法。但通常的指纹图谱停留在指纹性鉴别或整体相似度的评价，注重宏观特征，对于微观特征如具体色谱峰化学信息和物质含量没有较好体现。多指标成分同时测定联合指纹图谱技术是进一步发展的质量控制方法，其结合谱效学研究手段和分离技术明确中药主要有效成分(或主要有效成分群)，确定指纹图谱重点监控的指标成分。多指标同时测定联合指纹图谱技术既注重宏观特征，又监控多个有效成分的含量，可实现微观和宏观的有机结合，符合中医药整体、宏观、复杂的特点，可从整体上评价和控制中药制剂的质量，是中药现代化关键技术之一。对于四磨汤制剂，亟需建立检测方法，构建多指标成分同时测定联合指纹图谱技术，以更全面准确的监控四磨汤制剂的质量。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的四磨汤制剂的质量检测方法所检测的有效成分单一，不能全面反应四磨汤制剂质量的缺陷，而提供一种四磨汤制剂多指标成分同时测定方法，以及四磨汤制剂指纹图谱的构建方法。本发明通过谱效学方法以及分离纯化技术，确定了指纹图谱需监控的主要指标成分，即去甲异波尔定、异柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和山梨酸钾。进一步经实验摸索， 最终建立了一种专属性强、操作简便，且稳定性、精密度、重现性和加样回收率均良好的检测方法，从而首次建立了科学合理的四磨汤制剂的多指标成分指纹图谱。本发明的四磨汤制剂多指标成分同时测定方法包括如下步骤将四磨汤制剂的供试品溶液进行高效液相色谱法检测，即可；所述的高效液相色谱法的色谱条件为色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分比0. 1 %的甲酸水溶液， 洗脱梯度如表1所示，检测波长为283nm。表权利要求
1. 一种四磨汤制剂多指标成分同时测定方法，其特征在于其包括如下步骤将四磨汤制剂的供试品溶液进行高效液相色谱法检测，即可；所述的高效液相色谱法的色谱条件为 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分比0. 的甲酸水溶液，洗脱梯度如表1所示； 表1时间(分钟)流动相(v/v%)0至3 55 15%流动相A和85 95%流动相B3-5 至 20 25线性梯度改变至15 40%流动相A和60 85%流动相B20-25 至 32 37线性梯度改变至85 100%流动相A和0 15%流动相B32~37至40以上， 较佳的至40 5085~100%流动相A和0~15%流动相B检测波长为283nm。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的四磨汤制剂主要由下述重量份数的原药材制得100份木香、50 150份枳壳、50 150份乌药和50 150份槟榔。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述的四磨汤制剂为由下述方法制得的四磨汤制剂将原药材经水蒸气蒸馏法提取的挥发性成分，与药渣经水提醇沉提取的水提物， 按现有常规方法制成口服液、滴丸、乳化剂、胶囊、片剂或颗粒剂。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的四磨汤制剂的供试品溶液按下述方法制得当所述的四磨汤制剂为四磨汤口服液时，直接将四磨汤口服液用微孔滤膜过滤，滤液不经稀释，或经稀释至原体积100倍以下，即为供试品溶液；当所述的四磨汤制剂为除四磨汤口服液外的其他剂型时，将溶有四磨汤制剂的溶液经超声处理，冷却，之后用微孔滤膜过滤，滤液即为供试品溶液。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的高效液相色谱法检测的进样量为 2 50 μ L，较佳的为5 20 μ L。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的高效液相色谱法检测的柱温为15 500C，较佳的为20 40°C ；和/或，所述的高效液相色谱法检测的流速为0. 5 1. 5mL/min, 较佳的为0. 8 1. 2mL/min。
7.如权利要求1或6所述的方法，其特征在于所述的十八烷基硅烷键合硅胶柱为 Venusil XBP-C18 柱或 Agilent ZORBAX SB-C18 柱。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述的十八烷基硅烷键合硅胶柱的径长规格为 4. 6mm X 250mm 或 4. 6mm X 150mm。
9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于所述的洗脱梯度如表2所示；表2
10. 一种四磨汤制剂指纹图谱的构建方法，其特征在于其包括如下步骤采用如权利要求1 9任一项所述的方法检测四磨汤制剂，再采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，模拟生成四磨汤制剂指纹图谱。
全文摘要
本发明公开了一种四磨汤制剂多指标成分同时测定方法将四磨汤制剂的供试品溶液进行高效液相色谱法检测，即可；色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分比0.1％的甲酸水溶液，采用梯度洗脱，检测波长为283nm。本发明还公开了四磨汤制剂指纹图谱的构建方法采用该测定方法进行检测，再经计算机模拟，即可得四磨汤制剂指纹图谱。本发明的测定方法操作简便、专属性强、且具有优异的稳定性、精密度、重现性和加样回收率，可较全面的检测四磨汤制剂中多种主要有效成分，从而获得科学合理的四磨汤制剂指纹图谱，完整、准确的评价四磨汤制剂的有效性、安全性、稳定性和质量均一性。
文档编号A61P1/14GK102221590SQ201110074548
公开日2011年10月19日 申请日期2011年3月25日 优先权日2011年3月25日
发明者刘东文, 刘令安, 易跃能, 杨华, 王长虹, 程雪梅, 邓义德 申请人:湖南汉森制药股份有限公司