专利名称：一种含有人参皂苷类成分药材及制剂指纹图谱的建立方法
技术领域：
本发明属于中药材及其提取物制剂的质量控制方法技术领域，进一步讲是提供一种含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂的指纹图谱，涉及西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶药材及其提取物制成制剂的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法和标准指纹图谱。
背景技术：
本发明涉及的含有人参皂苷类成分药材及制剂包括西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶药材及其提取物制成制剂的一种或多种混合物。目前，对于含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂的质量控制主要采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)进行研究,但由于它们的主要成分三萜皂苷，例如人参皂苷Rg1和Re、人参皂苷Rb2和Rb3等，在HPLC上难以达到基线分离，要达到较好的分离，往往需要很长的分析时间，通常需要广2个小时；此外，西洋参茎叶药材及其原料和制剂中含有的部分三萜皂苷，如拟人参皂苷F11,不具有紫外吸收，且含量较高，具有较好药理活性，常用的紫外(UV)、二极管阵列检测器(DAD)等无法检测到这类物质，因此，存在特征性成分分析不全面、不能从整体上对西洋参和西洋参茎叶等含有人参皂苷类成分药材及其提取物制剂进行质量控制的缺欠。因此针对西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶等药材及其制成的中药原料药和中药制剂质量控制方法有待进一步完善。
发明内容
本发明目的是提供一种含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂的指纹图谱，通过超高效液相色谱与蒸发光检测器联用新技术，建立一种含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂的UPLC-ELSD指纹图谱的方法，并由此得到西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶等药材及其提取物制成制剂的共有模式的分析鉴别方法。为达到本发明的目的所采用的技术方案用超高效液相色谱法联合蒸发光检测器新技术建立人参、西洋参、三七系列药用部位及其提取物制成制剂指纹图谱的方法，具体包括如下步骤
I)供试品溶液的制备
称取待测药材O. f 2 g，加氯仿(Γ100 ml，加热回流(Γ3小时，弃去氯仿液，药渣挥尽氯仿，2(T100 ml水或甲醇或正丁醇提取后，挥尽溶剂，加水5 50 ml使溶解，加石油醚(30^600C )5-50 ml提取1_4次，弃去石油醚液，水液通过大孔吸附树脂柱，以水5(Tl00 ml、20%乙醇50 100 ml和70% 80%乙醇70 200 ml顺序洗脱，收集70% 80%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，置5 50 ml容量瓶中定容，滤膜过滤，即得供试品溶液；2)参照物 溶液的制备
分别取人参皂苷Re、拟人参皂苷Fn、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd中的一种或多种，用甲醇溶解，制成每I ml含包括人参皂苷Re、拟人参皂苷F11、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd中的一种或多种O. Γ1. O mg的溶液，滤膜过滤，作为参照物溶液；
3)色谱条件
采用超高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器联用技术(简称UPLC-ELSD)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱填料粒径I. 5 μ πΓ3. 5 μ m,柱温2(Γ60 V;流动相以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，梯度如下；
其中O分钟分钟时，流动相A为19°/Γ20%的乙腈、流动相B为81°/Γ80%的水；
8分钟、分钟时，流动相A为20% 24%的乙腈、流动相B为80°/Γ76%的水；
9分钟 19分钟时，流动相A为24°/Γ31%的乙腈、流动相B为76-69%的水；
19分钟 21分钟时，流动相A为31°/Γ35%的乙腈、流动相B为69%飞5%的水；
21分钟 23分钟时，流动相A为35 36%的乙腈、流动相B为65飞4%的水；
23分钟 25分钟时，流动相A为36 40%的乙腈、流动相B为64飞0%的水；
25分钟 28分钟时，流动相A为4(Γ55%的乙腈、流动相B为60 45%的水；
28分钟 28. 5分钟时，流动相A为55 19%的乙腈、流动相B为45 81%的水；
28. 5分钟 33分钟时，流动相A为19%的乙腈、流动相B为81%的水；
流速0· 2 2. O mL · min — 1 ;漂移管温度30 60 °C，气体压力'2. 5 4. O bar ;进样量为Γ20 μ L ;时间:5 60 min ；
4)测定吸取供试品溶液f20 μ L注入超高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱；
5)标准指纹图谱的制定以上述方法作为制定待测药材及制剂的指纹图谱的测试手段；根据10批或10批以上供试品所测得的指纹图谱，经指纹图谱相似度计算软件生成对照图谱，作为标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有峰的相对保留时间，上述标准指纹图谱中，共有峰3 30个；
6)以1)1)所述方法作为待测药材及制剂的指纹图谱的构建方法，制备待测样品的指纹图谱；
7)将待测药材及制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部内容
①计算待测药材及制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为O.8(Tl. 00 ；
②待测药材及制剂的指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10%;
③待测药材及制剂的指纹图谱中有30°/Γ80%的共有峰面积的对数的比值(相对峰面积对数值)与标准指纹图谱中对应的各共有峰面积的对数的比值比较，其差值不大于±50% ο本发明所述的待测药材及制剂包括西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶及其提取物制成制剂的一种或多种混合。本发明得到的指纹图谱可用于在整体上控制上述药材以及从上述药材中提取得到的皂苷提取物及其提取物制剂的质量，所述制剂包括固体制剂和液体制剂，如注射剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、饮料、合剂和口服液等。
本发明的积极效果在于
(1)首次应用UPLC-ELSD技术建立了含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂的标准指纹图谱，确定了共用峰，可用于这类药材及其制剂的全面质量控制；更加全面的反映这类药材及其制剂整体质量，通过考察指纹图谱的精密度、重现性、稳定性，确定该方法可行。实现高效、快速、全面、准确的质量控制；
(2)指纹图谱注重各个构成指纹特征峰的顺序和相互关系，注重整体面貌特征，可弥补通过只测定少数化学成分而判定药材、原料及其制剂质量的不足； (3)为含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂质量的有效控制提供了综合的、宏观的和可量化的方法。本方法通过对药材及其提取物制成的制剂进行指纹图谱研究，建立起一套完整的药材、原料药和成品紧密相关的质量评价体系，从而保证含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂质量的稳定性和一致性。
图I为西洋参茎叶标准指纹图谱；
图2为西洋参根标准指纹图谱；
图3为人参根标准指纹图谱；
图4为人参茎叶标准指纹图谱；
图5为三七根标准指纹图谱；
图6为三七茎叶标准指纹图谱；
图7为注射用西洋参茎叶皂苷标准指纹图谱。
具体实施例方式下面通过实施例及其附图详细阐述本发明的技术方案，所列举的实施例及附图对本发明没有限制。实施例I :
西洋参茎叶
I)供试品溶液的制备称取西洋参茎叶O. 2 g，置索氏提取器中，加氯仿100 ml，加热回流I小时，弃去氯仿液，药渣挥尽氯仿，加甲醇50 ml，加热回流3小时，提取液低温蒸干，加水10 ml使溶解，加石油醚(3(T60°C)提取2次，每次10 ml，弃去醚液，水液通过DlOl型大孔吸附树脂柱(内径为I. 5 cm，柱长为15 cm)，以水70 ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇50 ml洗脱，弃去20%乙醇洗脱液，继用80%乙醇80 ml洗脱，收集洗脱液70 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，置10 ml容量瓶中，定容，作为供试品溶液，分析前过O. 22 ym滤膜。2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rb3,甲醇溶解，制成每I ml含人参皂苷Rb3 0.6 mg的溶液，作为参照物溶液，分析前过O. 22 ym滤膜。3)色谱条件仪器超高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；色谱柱AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱(4· 6 X 50 mm，I. 8 μ m)，柱温 25 °C;流动相以乙腈为流动相A，以水为流动相B，组成的梯度洗脱；流速1. O mL/min ;蒸发光散射检测器参数漂移管温度40 °C，气体压力3. 2 bar, Gain :7。在步骤3) O分钟 8分钟时，流动相A为19°/Γ20%的乙腈、流动相B为81°/Γ80%的水；
8分钟、分钟时，流动相A为20% 24%的乙腈、流动相B为80°/Γ76%的水；
9分钟 19分钟时，流动相A为24°/Γ31%的乙腈、流动相B为76-69%的水；
19分钟 21分钟时，流动相A为31°/Γ35%的乙腈、流动相B为69%飞5%的水；
21分钟 23分钟时，流动相A为35 36%的乙腈、流动相B为65飞4%的水；
23分钟 25分钟时，流动相A为36 40%的乙腈、流动相B为64飞0%的水；
25分钟 28分钟时，流动相A为4(Γ55%的乙腈、流动相B为60 45%的水；
28分钟 28. 5分钟时，流动相A为55 19%的乙腈、流动相B为45 81%的水；
28. 5分钟 33分钟时，流动相A为19%的乙腈、流动相B为81%的水。4)按照本发明所提供指纹图谱的建立方法所得的西洋参茎叶药材的指纹图谱中有23个特征共有峰，其中，6号色谱峰为人参皂苷Re色谱峰，15号色谱峰为拟人参皂苷Fn色谱峰，20号色谱峰为人参皂苷Rb2色谱峰，21号色谱峰为人参皂苷Rb3色谱峰，22号色谱峰为人参皂苷Rd色谱峰。图谱总长度为33 min，23个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有5个，它们是I号峰、6号峰、15号峰、21号峰和22号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有4个，它们是I号峰、15号峰、21号峰和22号峰，以最强峰为21号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值IgA。参见图I，具体峰值如下
I号峰，平均保留时间RT为O. 60 min，平均相对保留时间为O. 0288，RSD为O. 38% ;平均相对IgA为O. 8693 ；
2号峰，平均保留时间RT为O. 92 min，平均相对保留时间为O. 0442，RSD为O. 50% ;平均相对IgA为O. 4845 ；
3号峰，平均保留时间RT为I. 32 min，平均相对保留时间为O. 0635，RSD为O. 43% ;平均相对IgA为O. 5052 ；
4号峰，平均保留时间RT为I. 78 min，平均相对保留时间为O. 0854，RSD为I. 01% ;平均相对IgA为O. 3031 ；
5号峰，平均保留时间RT为7. 07 min，平均相对保留时间为O. 3393，RSD为I. 27% ;平均相对IgA为O. 4001 ；
6号峰，平均保留时间RT为7. 51 min，平均相对保留时间为O. 3602，RSD为I. 32% ;平均相对IgA为O. 8231 ；
7号峰，平均保留时间RT为12. 20 min，平均相对保留时间为O. 5850，RSD为O. 10% ;平均相对IgA为O. 1043 ；
8号峰，平均保留时间RT为12. 41 min，平均相对保留时间为O. 5950，RSD为O. 13% ;平均相对IgA为O. 4595 ；
9、10号峰，平均保留时间RT为13. 04 min，平均相对保留时间为O. 6253，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 5232 ；11号峰，平均保留时间RT为13. 51 min，平均相对保留时间为O. 6478，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 4610 ；
12号峰，平均保留时间RT为13. 64 min，平均相对保留时间为O. 6540，RSD为O. 12% ；平均相对IgA为O. 3439 ；13号峰，平均保留时间RT为13. 82 min，平均相对保留时间为O. 6628，RSD为O. 17% ；平均相对IgA为O. 4244 ；
14号峰，平均保留时间RT为14. 29 min，平均相对保留时间为O. 6856，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 4755 ；
15号峰，平均保留时间RT为14. 91 min，平均相对保留时间为O. 7153，RSD为O. 11% ；平均相对IgA为O. 9388 ；
16号峰，平均保留时间RT为16. 67 min，平均相对保留时间为O. 7996，RSD为O. 09% ；平均相对IgA为O. 0820 ；
17号峰，平均保留时间RT为17. 40 min，平均相对保留时间为O. 8348，RSD为O. 09% ；平均相对IgA为O. 2033 ；
18号峰，平均保留时间RT为18. 41 min，平均相对保留时间为O. 8829，RSD为O. 07% ；平均相对IgA为O. 3646 ；
19号峰，平均保留时间RT为19. 35 min，平均相对保留时间为O. 9280，RSD为O. 06% ；平均相对IgA为O. 3551 ；
20号峰，平均保留时间RT为20. 42 min，平均相对保留时间为O. 9794，RSD为O. 04% ；平均相对IgA为O. 6659 ；
21号峰，平均保留时间RT为20. 85 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ;
22号峰，平均保留时间RT为21. 99 min，平均相对保留时间为I. 0545，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 9754 ；
23号峰，平均保留时间RT为24. 85 min，平均相对保留时间为I. 1918，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 3463。实施例2:
西洋参根
I)供试品溶液的制备称取西洋参根I g，置索氏提取器中，加甲醇100 ml，加热回流3小时，提取液低温蒸干，加水50 ml使溶解，加石油醚(3(T60°C)提取2次，每次50 ml，弃去醚液，水液通过DlOl型大孔吸附树脂柱(内径为I. 5 cm，柱长为15 cm),以水100 ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇100 ml洗脱，弃去20%乙醇洗脱液，继用80%乙醇150 ml洗脱，收集洗脱液100 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，置10 ml容量瓶中，定容，作为供试品溶液，分析前过O. 22 μπι滤膜。2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1,甲醇溶解，制成每I ml含人参皂苷Rb1 O. 0936 mg的溶液，作为参照物溶液，分析前过O. 22 ym滤膜。3)色谱条件仪器超高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；色谱柱AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱(4· 6 X 50 mm，I. 8 μ m)，柱温 25 °C;流动相以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，梯度如下；
其中O分钟分钟时，流动相A为19°/Γ20%的乙腈、流动相B为81°/Γ80%的水；
8分钟、分钟时，流动相A为20% 24%的乙腈、流动相B为80°/Γ76%的水；
9分钟 19分钟时，流动相A为24°/Γ31%的乙腈、流动相B为76-69%的水；
19分钟 21分钟时，流动相A为31°/Γ35%的乙腈、流动相B为69%飞5%的水；21分钟 23分钟时，流动相A为35 36%的乙腈、流动相B为65飞4%的水；
23分钟 25分钟时，流动相A为36 40%的乙腈、流动相B为64飞0%的水；
25分钟 28分钟时，流动相A为4(Γ55%的乙腈、流动相B为60 45%的水； 28分钟 28. 5分钟时，流动相A为55 19%的乙腈、流动相B为45 81%的水；
28. 5分钟 33分钟时，流动相A为19%的乙腈、流动相B为81%的水；
流速1. O mL/min ;蒸发光散射检测器参数漂移管温度40 °C，气体压力3.2 bar,Gain :7。4)按照本发明所提供指纹图谱的建立方法所得的西洋参根药材的指纹图谱中有11个特征共有峰，其中，4号色谱峰为人参皂苷Re色谱峰，6号色谱峰为人参皂苷Rb1色谱峰。图谱总长度为33 min，ll个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有3个，它们是I号峰、4号峰、6号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有2个，它们是I号峰、6号峰，以强峰6号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值。
参见图2，具体峰值如下
I号峰，平均保留时间RT为O. 60 min，平均相对保留时间为O. 032，RSD为O. 001% ;平均相对IgA为I. 095 ；
2号峰，平均保留时间RT为O. 79 min，平均相对保留时间为O. 042，RSD为O. 004% ;平均相对IgA为O. 754 ；
3号峰，平均保留时间RT为7. 33 min，平均相对保留时间为O. 391，RSD为O. 465% ;平均相对IgA为O. 224 ；
4号峰，平均保留时间RT为7. 79 min，平均相对保留时间为O. 415，RSD为O. 447% ;平均相对IgA为O. 840 ；
5号峰，平均保留时间RT为15. 07 min，平均相对保留时间为O. 803，RSD为O. 046% ;平均相对IgA为O. 430 ；
6号峰，平均保留时间RT为18. 75 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ;
7号峰，平均保留时间RT为19. 55 min，平均相对保留时间为I. 043，RSD为O. 008% ;平均相对IgA为O. 561 ；
8号峰，平均保留时间RT为20. 94 min，平均相对保留时间为I. 116，RSD为O. 016% ;平均相对IgA为O. 252 ；
9号峰，平均保留时间RT为21. 58 min，平均相对保留时间为I. 151，RSD为O. 013% ;平均相对IgA为O. 498 ；
10号峰，平均保留时间RT为22. 08 min，平均相对保留时间为I. 177，RSD为O. 024% ；平均相对IgA为O. 594 ；
11号峰，平均保留时间RT为23. 10 min，平均相对保留时间为I. 232，RSD为O. 023% ；平均相对IgA为O. 652。实施例3 人参根
I)供试品溶液的制备称取待测人参根2 g,加氯仿40 ml,加热回流I小时,弃去氯仿液，药洛挥尽氯仿，80 ml水或甲醇或正丁醇提取后，挥尽溶剂，加水30 ml使溶解，加石油醚(3(T60°C) 30 ml提取1_4次，每次30 ml，弃去醚液，水液通过大孔吸附树脂柱，以水50ml,20%乙醇60 ml和75%乙醇70 ml顺序洗脱，收集75%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，置250 ml容量瓶中定容，滤膜过滤，即得供试品溶液。2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1,甲醇溶解，制成每I ml含人参皂苷Rb1 O. 0936 mg的溶液，作为参照物溶液，分析前过O. 22 ym滤膜。3)色谱条件仪器超高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；色谱柱AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱(4· 6 X 50 mm，I. 8 μ m)，柱温 25 °C;以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，梯度如下； 其中O分钟分钟时，流动相A为19°/Γ20%的乙腈、流动相B为81°/Γ80%的水；
8分钟、分钟时，流动相A为20% 24%的乙腈、流动相B为80°/Γ76%的水；
9分钟 19分钟时，流动相A为24°/Γ31%的乙腈、流动相B为76-69%的水；
19分钟 21分钟时，流动相A为31°/Γ35%的乙腈、流动相B为69%飞5%的水；
21分钟 23分钟时，流动相A为35 36%的乙腈、流动相B为65飞4%的水；
23分钟 25分钟时，流动相A为36 40%的乙腈、流动相B为64飞0%的水；
25分钟 28分钟时，流动相A为4(Γ55%的乙腈、流动相B为60 45%的水；
28分钟 28. 5分钟时，流动相A为55 19%的乙腈、流动相B为45 81%的水；
28. 5分钟 33分钟时，流动相A为19%的乙腈、流动相B为81%的水；
流速1. O mL/min ;蒸发光散射检测器参数漂移管温度40 °C，气体压力3.2 bar,Gain :7。4)按照本发明所提供指纹图谱的建立方法所得的人参根药材的指纹图谱中有14个特征共有峰，其中，3号色谱峰为人参皂苷Rg1色谱峰，4号色谱峰为人参皂苷Re色谱峰，7号色谱峰为人参皂苷Rb1色谱峰。图谱总长度为33 min，14个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有2个，它们是I号峰和7号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有I个，它们是I号峰，以强峰7号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值。参见图3，具体峰值如下
I号峰，平均保留时间RT为O. 609 min，平均相对保留时间为O. 032，RSD为O. 498% ;平均相对IgA为I. 393 ；
2号峰，平均保留时间RT为O. 801 min，平均相对保留时间为O. 042，RSD为O. 541% ;平均相对IgA为O. 950 ；
3号峰，平均保留时间RT为7. 518 min，平均相对保留时间为O. 393，RSD为I. 261% ;平均相对IgA为O. 800 ；
4号峰，平均保留时间RT为7. 979 min，平均相对保留时间为O. 417，RSD为I. 315% ;平均相对IgA为O. 860 ；
5号峰，平均保留时间RT为14. 426 min，平均相对保留时间为O. 715，RSD为O. 127% ；平均相对IgA为O. 660 ；
6号峰，平均保留时间RT为18. 642 min，平均相对保留时间为O. 754，RSD为O. 026% ；平均相对IgA为O. 327 ；
7号峰，平均保留时间RT为19. 131min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ;
8号峰，平均保留时间RT为20. 544 min，平均相对保留时间为I. 074，RSD为O. 034% ；平均相对IgA为O. 784 ；
9号峰，平均保留时间RT为20. 970 min，平均相对保留时间为I. 096，RSD为O. 032% ；平均相对IgA为O. 505 ；
10号峰，平均保留时间RT为22. 276 min，平均相对保留时间为I. 164，RSD为O. 050% ；平均相对IgA为O. 791 ；
11号峰,平均保留时间RT为22. 865 min，平均相对保留时间为I. 195，RSD为O. 050% ；平均相对IgA为O. 313 ；
12号峰，平均保留时间RT为24. 331 min，平均相对保留时间为I. 272，RSD为O. 080% ；平均相对IgA为O. 450 ；
13号峰，平均保留时间RT为25. 423 min，平均相对保留时间为I. 329，RSD为O. 102% ；平均相对IgA为O. 487 ；
14号峰，平均保留时间RT为26. 197 min，平均相对保留时间为I. 369，RSD为O. 144% ；平均相对IgA为O. 315。实施例4 人参茎叶
I)供试品溶液的制备取人参茎叶粉末O. 2 g，精密称定，置于索式提取器中，加三氯甲烧100ml,加热回流I小时,弃去氯仿液,药洛挥尽氯仿,加甲醇50 ml,加热回流3小时,合并提取液，提取液低温蒸干，加水10 ml使溶解，加石油醚(3(T60°C)提取2次，每次10 ml,弃去醚液，水液通过DlOl型大孔树脂柱(内径为1.5 cm，柱长15 cm)，以水70 ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇50 ml洗脱，弃去20%乙醇洗脱液，继用80%乙醇80 ml洗脱，收集洗脱液70 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分析前过O. 22 ym滤膜。2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Re，甲醇溶解，制成每I ml含人参皂苷Re O. 2016 mg的溶液，作为参照物溶液，分析前过O. 22 μπι滤膜。3)色谱条件仪器超高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；色谱柱AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱(4· 6 X 50 mm，I. 8 μ m)，柱温 25 °C;以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，梯度如下；
其中O分钟分钟时，流动相A为19°/Γ20%的乙腈、流动相B为81°/Γ80%的水；
8分钟 9分钟时，流动相A为20% 24%的乙腈、流动相B为80% 76%的水；
9分钟 19分钟时，流动相A为24°/Γ31%的乙腈、流动相B为76-69%的水；
19分钟 21分钟时，流动相A为31°/Γ35%的乙腈、流动相B为69%飞5%的水；
21分钟 23分钟时，流动相A为35 36%的乙腈、流动相B为65飞4%的水；
23分钟 25分钟时，流动相A为36 40%的乙腈、流动相B为64飞0%的水；
25分钟 28分钟时，流动相A为4(Γ55%的乙腈、流动相B为60 45%的水；
28分钟 28. 5分钟时，流动相A为55 19%的乙腈、流动相B为45 81%的水；
28. 5分钟 33分钟时，流动相A为19%的乙腈、流动相B为81%的水；
流速1. O mL/min ;蒸发光散射检测器参数漂移管温度40 °C，气体压力3.2 bar,Gain :7。4)按照本发明所提供指图谱的建立方法所得的人参茎叶药材的指纹图谱中有18个特征共有峰，其中，5号色谱峰为人参皂苷Rg1色谱峰，6号色谱峰为人参皂苷Re色谱峰，15号色谱峰为人参皂苷Rd色谱峰。图谱总长度为33 min，18个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有3个，它们是5号峰、6号峰和15号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有3个，它们是5号峰、6号峰和15号峰，以最强峰6号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值。参见图4，具体峰值如下
I号峰，平均保留时间RT为O. 616 min，平均相对保留时间为O. 078，RSD为O. 443% ;平均相对IgA为O. 684 ；
2号峰，平均保留时间RT为O. 814 min，平均相对保留时间为O. 102，RSD为O. 457% ;平均相对IgA为O. 495 ；
3号峰，平均保留时间RT为O. 932 min，平均相对保留时间为O. 117，RSD为O. 413% ;平均相对IgA为O. 552 ；
4号峰，平均保留时间RT为I. 358 min，平均相对保留时间为O. 171，RSD为O. 353% ;平均相对IgA为O. 515 ；
5号峰，平均保留时间RT为7. 479 min，平均相对保留时间为O. 942，RSD为O. 074% ;平均相对IgA为O. 794 ；
6号峰，平均保留时间RT为7. 943 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ;
7号峰，平均保留时间RT为12. 688 min，平均相对保留时间为I. 597，RSD为O. 303% ；平均相对IgA为O. 340 ；
8号峰，平均保留时间RT为15. 012 min，平均相对保留时间为I. 890，RSD为O. 291% ；平均相对IgA为O. 341 ；
9号峰，平均保留时间RT为15. 791 min，平均相对保留时间为I. 988，RSD为O. 287% ；平均相对IgA为O. 480 ；
10号峰，平均保留时间RT为16. 363 min，平均相对保留时间为2. 060，RSD为O. 286% ；平均相对IgA为O. 647 ；
11号峰，平均保留时间RT为16. 708 min，平均相对保留时间为2. 103，RSD为O. 278% ；平均相对IgA为O. 447 ；
12号峰，平均保留时间RT为17. 597 min，平均相对保留时间为2. 215，RSD为O. 262% ；平均相对IgA为O. 564 ；
13号峰，平均保留时间RT为18. 733 min，平均相对保留时间为2. 358，RSD为O. 255% ；平均相对IgA为O. 587 ；
14号峰，平均保留时间RT为18. 098 min，平均相对保留时间为2. 404，RSD为O. 272% ；平均相对IgA为O. 624 ；
15号峰，平均保留时间RT为21. 236 min，平均相对保留时间为2. 673，RSD为O. 252% ；平均相对IgA为O. 818 ；
16号峰，平均保留时间RT为24. 278 min，平均相对保留时间为3. 056，RSD为O. 335% ；平均相对IgA为O. 297 ；
17号峰，平均保留时间RT为25. 004 min平均相对保留时间为3. 148，RSD为O. 349% ；平均相对IgA为O. 417 ;
18号峰，平均保留时间RT为26. 696 min，平均相对保留时间为3. 361，RSD为O. 372% ；平均相对IgA为O. 629。实施例5 三七根
I)供试品溶液的制备称取待测三七O. 6 g，加甲醇提取后，挥尽溶剂，加水20 ml使溶解，加石油醚(3(T60°C)20 ml提取2次，每次20 ml，弃去醚液，水液通过大孔吸附树脂柱，以水60 ml,20%乙醇60 ml和70%乙醇110 ml顺序洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，置10 ml容量瓶中定容；滤膜过滤，即得供试品溶液。2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1,甲醇溶解，制成每I ml含人参皂苷Rb1 O. 0936 mg的溶液，作为参照物溶液，分析前过O. 22 ym滤膜。3)色谱条件仪器超高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；色谱柱AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱(4· 6 X 50 mm，I. 8 μ m)，柱温 25 °C;以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，梯度如下；
其中O分钟分钟时，流动相A为19°/Γ20%的乙腈、流动相B为81°/Γ80%的水；
8分钟 9分钟时，流动相A为20% 24%的乙腈、流动相B为80% 76%的水；
9分钟 19分钟时，流动相A为24°/Γ31%的乙腈、流动相B为76-69%的水；
19分钟 21分钟时，流动相A为31°/Γ35%的乙腈、流动相B为69%飞5%的水；
21分钟 23分钟时，流动相A为35 36%的乙腈、流动相B为65飞4%的水；
23分钟 25分钟时，流动相A为36 40%的乙腈、流动相B为64飞0%的水；
25分钟 28分钟时，流动相A为4(Γ55%的乙腈、流动相B为60 45%的水；
28分钟 28. 5分钟时，流动相A为55 19%的乙腈、流动相B为45 81%的水；
28. 5分钟 33分钟时，流动相A为19%的乙腈、流动相B为81%的水；
流速1. O mL/min ;蒸发光散射检测器参数漂移管温度40 °C，气体压力3.2 bar,Gain :7。4)按照本发明所提供指图谱的建立方法所得的三七根药材的指纹图谱中有12个特征共有峰，其中，3号色谱峰为人参皂苷Rg1色谱峰，8号色谱峰为人参皂苷Rb1色谱峰。图谱总长度为33 min, 12个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有3个，它们是I号峰、3号峰和8号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有3个，它们是I号峰、3号峰和8号峰，以强峰8号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值。参见图5，具体峰值如下
I号峰，平均保留时间RT为O. 607 min，平均相对保留时间为O. 032，RSD为O. 218% ;平均相对IgA为I. 193 ；
2号峰，平均保留时间RT为5. 528 min，平均相对保留时间为O. 290，RSD为O. 526% ;平均相对IgA为O. 652 ；
3号峰，平均保留时间RT为8. 138 min，平均相对保留时间为O. 427，RSD为O. 409% ;平均相对IgA为O. 970 ；4号峰，平均保留时间RT为8. 689 min，平均相对保留时间为O. 456，RSD为O. 437% ;平均相对IgA为O. 580 ；
5号峰，平均保留时间RT为17. 548 min，平均相对保留时间为O. 920，RSD为O. 021% ；平均相对IgA为； 6号峰，平均保留时间RT为17. 773 min，平均相对保留时间为O. 932，RSD为O. 025% ；平均相对IgA为O. 329 ；
7号峰，平均保留时间RT为18. 470 min，平均相对保留时间为O. 968，RSD为O. 023% ；平均相对IgA为O. 306 ；
8号峰，平均保留时间RT为19. 074 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ;
9号峰，平均保留时间RT为20. 109 min，平均相对保留时间为I. 054，RSD为O. 048% ；平均相对IgA为O. 428 ；
10号峰，平均保留时间RT为26. 344 min，平均相对保留时间为I. 381，RSD为O. 051% ；平均相对IgA为O. 734 ；
11号峰，平均保留时间RT为27. 317 min，平均相对保留时间为I. 432，RSD为O. 074% ；平均相对IgA为O. 476 ；
12号峰，平均保留时间RT为29. 032 min，平均相对保留时间为I. 522，RSD为O. 097% ；平均相对IgA为O. 357 ；
实施例6 三七茎叶
I)供试品溶液的制备取三七茎叶粉末O. 8 g，精密称定，置于索式提取器中，加三氯甲烧40 ml,加热回流I小时,弃去氯仿液,药洛挥尽氯仿,加甲醇40 ml,加热回流3小时,合并提取液，提取液低温蒸干，加水5 ml使溶解，加石油醚(3(T60°C)提取2次，每次20 ml,弃去醚液，水液通过DlOl型大孔树脂柱(内径为I. 5 cm，柱长15 cm),以水80 ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇80 ml洗脱，弃去20%乙醇洗脱液，继用80%乙醇200 ml洗脱，收集洗脱液70 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分析前过O. 22 ym滤膜。2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1,甲醇溶解，制成每I ml含人参皂苷Rb1 O. 0936 mg的溶液，作为参照物溶液，分析前过O. 22 ym滤膜。3)色谱条件仪器超高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；色谱柱AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱(4· 6 X 50 mm，I. 8 μ m)，柱温 25 °C;流动相以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，梯度如下；
其中O分钟分钟时，流动相A为19°/Γ20%的乙腈、流动相B为81°/Γ80%的水；
8分钟 9分钟时，流动相A为20% 24%的乙腈、流动相B为80% 76%的水；
9分钟 19分钟时，流动相A为24°/Γ31%的乙腈、流动相B为76-69%的水；
19分钟 21分钟时，流动相A为31°/Γ35%的乙腈、流动相B为69%飞5%的水；
21分钟 23分钟时，流动相A为35 36%的乙腈、流动相B为65飞4%的水；
23分钟 25分钟时，流动相A为36 40%的乙腈、流动相B为64飞0%的水；
25分钟 28分钟时，流动相A为4(Γ55%的乙腈、流动相B为60 45%的水；28分钟 28. 5分钟时 ，流动相A为55 19%的乙腈、流动相B为45 81%的水；
28. 5分钟 33分钟时，流动相A为19%的乙腈、流动相B为81%的水；
流速1. O mL/min ;蒸发光散射检测器参数漂移管温度40 °C，气体压力3.2 bar,Gain :7。4)按照本发明所提供指纹图谱的建立方法所得的三七茎叶药材的指纹图谱中有14个特征共有峰，其中，5号色谱峰为人参皂苷Rb3色谱峰。图谱总长度为33 min, 14个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有3个，它们是I号峰、5号峰和10号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有3个，它们是I号峰、5号峰和10号峰，以强峰5号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值。参见图6，具体峰值如下
I号峰，平均保留时间RT为O. 607 min,平均相对保留时间为O. 030 ;平均相对IgA为O. 985 ；
2号峰，平均保留时间RT为18. 958 min，平均相对保留时间为O. 932 ;平均相对IgA为O. 752 ；
3号峰，平均保留时间RT为19. 224 min，平均相对保留时间为O. 945 ;平均相对IgA为O. 674 ；
4号峰，平均保留时间RT为20. 095 min，平均相对保留时间为O. 988 ;平均相对IgA为O. 697 ；
5号峰，平均保留时间RT为20. 346 min，平均相对保留时间为I ;平均相对IgA为I ;
6号峰，平均保留时间RT为20. 974 min，平均相对保留时间为I. 031 ;平均相对IgA为O. 750 ；
7号峰，平均保留时间RT为21. 722 min，平均相对保留时间为I. 068 ;平均相对IgA为O. 537 ；
8号峰，平均保留时间RT为22. 360 min，平均相对保留时间为I. 099 ;平均相对IgA为O. 764 ；
9号峰，平均保留时间RT为22. 778 min，平均相对保留时间为I. 120 ;平均相对IgA为O. 612 ；
10号峰，平均保留时间RT为22. 968 min，平均相对保留时间为I. 129 ;平均相对IgA为O. 923 ；
11号峰，平均保留时间RT为23. 511 min，平均相对保留时间为I. 156 ;平均相对IgA为O. 348 ；
12号峰，平均保留时间RT为24. 061 min，平均相对保留时间为I. 183 ;平均相对IgA为O. 605 ；
13号峰，平均保留时间RT为24. 353 min，平均相对保留时间为I. 197 ;平均相对IgA为O. 506 ；
14号峰，平均保留时间RT为25. 132 min，平均相对保留时间为I. 235 ;平均相对IgA为O.567。实施例7
注射用西洋参茎叶皂苷I)供试品溶液的制备取注射用西洋参茎叶皂苷，精密称定，加甲醇溶解制成每I ml含5 mg样品的供试品溶液，分析前过O. 22 μπι滤膜。
2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rb3,甲醇溶解，制成每I ml含人参皂苷Rb3 0.6 mg的溶液，作为参照物溶液，分析前过O. 22 ym滤膜。3)色谱条件仪器超高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；色谱柱AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱(4· 6 X 50 mm，I. 8 μ m)，柱温 25 °C;流动相以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，梯度如下；
其中O分钟分钟时，流动相A为19°/Γ20%的乙腈、流动相B为81°/Γ80%的水；
8分钟 9分钟时，流动相A为20% 24%的乙腈、流动相B为80% 76%的水；
9分钟 19分钟时，流动相A为24°/Γ31%的乙腈、流动相B为76-69%的水；
19分钟 21分钟时，流动相A为31°/Γ35%的乙腈、流动相B为69%飞5%的水；
21分钟 23分钟时，流动相A为35 36%的乙腈、流动相B为65飞4%的水；
23分钟 25分钟时，流动相A为36 40%的乙腈、流动相B为64飞0%的水；
25分钟 28分钟时，流动相A为4(Γ55%的乙腈、流动相B为60 45%的水；
28分钟 28. 5分钟时，流动相A为55 19%的乙腈、流动相B为45 81%的水；
28. 5分钟 33分钟时，流动相A为19%的乙腈、流动相B为81%的水；
流速1. O mL/min ;蒸发光散射检测器参数漂移管温度40 °C，气体压力3.2 bar,Gain :7。4)按照本发明所提供指纹图谱的建立方法所得的注射用西洋参茎叶皂苷的指纹图谱中有23个特征共有峰，其中，4号色谱峰为人参皂苷Re色谱峰，13号色谱峰为拟人参皂苷F11色谱峰，18号色谱峰为人参皂苷Rb2色谱峰，19号色谱峰为人参皂苷Rb3色谱峰，20号色谱峰为人参皂苷Rd色谱峰。图谱总长度为33 min，23个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有4个，它们是5号峰、13号峰、19号峰和20号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有3个，它们是13号峰、19号峰和20号峰，以最强峰为19号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值。参见图7，具体峰值如下
I号峰，平均保留时间RT为O. 62 min，平均相对保留时间为O. 0298，RSD为O. 32% ;平均相对IgA为O. 3147 ；
2号峰，平均保留时间RT为O. 92 min，平均相对保留时间为O. 0441，RSD为O. 46% ;平均相对IgA为O. 5175 ；
3号峰，平均保留时间RT为I. 78 min，平均相对保留时间为O. 0854，RSD为O. 83% ;平均相对IgA为O. 2084 ；
4号峰，平均保留时间RT为7. 05 min，平均相对保留时间为O. 3387，RSD为I. 18% ;平均相对IgA为O. 4481 ；
5号峰，平均保留时间RT为7. 48 min，平均相对保留时间为O. 3595，RSD为I. 24% ;平均相对IgA为O. 8425 ；
6号峰，平均保留时间RT为12. 16 min，平均相对保留时间为O. 5845，RSD为O. 10% ;平均相对IgA为O. 1567 ；
7号峰，平均保留时间RT为12. 37 min，平均相对保留时间为O. 5946，RSD为O. 12% ;平均相对IgA为0. 4956 ；
8、9号峰，平均保留时间RT为13. 00 min，平均相对保留时间为0. 6247，RSD为0. 11% ；平均相对IgA为0. 5627 ；
10号峰，平均保留时间RT为13. 59 min，平均相对保留时间为0. 6533，RSD为0. 14% ；平均相对IgA为3122 ；
11号峰，平均保留时间RT为13. 75 min，平均相对保留时间为0. 6605，RSD为0. 12% ；平均相对IgA为0. 2688 ；
12号峰，平均保留时间RT为14. 23 min，平均相对保留时间为0. 6838，RSD为0. 13% ；平均相对IgA为0. 2055 ；
13号峰，平均保留时间RT为14. 88 min，平均相对保留时间为0. 7149，RSD为0. 14% ；平均相对IgA为0. 9220 ；
14号峰，平均保留时间RT为16. 61 min，平均相对保留时间为0. 7984，RSD为0. 12% ；平均相对IgA为0. 1291 ；
15号峰，平均保留时间RT为17. 35 min，平均相对保留时间为0. 8339，RSD为0. 10% ；平均相对IgA为0. 3167 ；
16号峰，平均保留时间RT为18. 35 min，平均相对保留时间为0. 8816，RSD为0. 08% ；平均相对IgA为0. 3806 ；
17号峰，平均保留时间RT为19. 28 min，平均相对保留时间为0. 9265，RSD为0. 06% ；平均相对IgA为0. 3846 ；
18号峰，平均保留时间RT为20. 36 min，平均相对保留时间为0. 9784，RSD为0. 04% ；平均相对IgA为0. 7023 ；
19号峰，平均保留时间RT为20. 81 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ;
20号峰，平均保留时间RT为21. 95 min，平均相对保留时间为I. 0550，RSD为0. 14% ；平均相对IgA为0. 9772 ；
21号峰，平均保留时间RT为24. 48 min，平均相对保留时间为I. 1765，RSD为0. 13% ；平均相对IgA为0.3119 ；
22号峰，平均保留时间RT为24. 80 min，平均相对保留时间为I. 1918，RSD为0. 13% ；平均相对IgA为0. 6301 ；
23号峰，平均保留时间RT为26. 39 min，平均相对保留时间为I. 2681，RSD为0. 16% ；平均相对IgA为0. 3796。
权利要求
1.一种含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成的制剂指纹图谱的建立方法，具体包括如下步骤 .1)供试品溶液的制备 称取待测药材O. f 2 g，加氯仿(TlOO ml，加热回流(Γ3小时，弃去氯仿液，药渣挥尽氯仿，20-100 ml水或甲醇或正丁醇提取后，挥尽溶剂，加水5 50 ml使溶解，加石油醚(3(T60°C)5 50 ml提取1_4次，弃去石油醚液，水液通过大孔吸附树脂柱，以水5(Tl00 ml、20%乙醇50 100 ml和70% 80%乙醇70 200 ml顺序洗脱，收集70% 80%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，置5 50 ml容量瓶中定容，滤膜过滤，即得供试品溶液； .2)参照物溶液的制备 分别取人参皂苷Re、拟人参皂苷Fn、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd中的一种或多种，用甲醇溶解，制成每I ml含包括人参皂苷Re、拟人参皂苷F11、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd中的一种或多种O. Γ1. O mg的溶液，滤膜过滤，作为参照物溶液； .3)色谱条件 采用超高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器联用技术(简称UPLC-ELSD)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱填料粒径I. 5 μ πΓ3. 5 μ m,柱温2(Γ60 V;流动相以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，梯度如下； 其中O分钟分钟时，流动相A为19°/Γ20%的乙腈、流动相B为81°/Γ80%的水； 8分钟、分钟时，流动相A为20% 24%的乙腈、流动相B为80°/Γ76%的水； 9分钟 19分钟时，流动相A为24°/Γ31%的乙腈、流动相B为76-69%的水； 19分钟 21分钟时，流动相A为31°/Γ35%的乙腈、流动相B为69%飞5%的水； 21分钟 23分钟时，流动相A为35 36%的乙腈、流动相B为65飞4%的水； 23分钟 25分钟时，流动相A为36 40%的乙腈、流动相B为64飞0%的水； 25分钟 28分钟时，流动相A为4(Γ55%的乙腈、流动相B为60 45%的水； 28分钟 28. 5分钟时，流动相A为55 19%的乙腈、流动相B为45 81%的水； 28. 5分钟 33分钟时，流动相A为19%的乙腈、流动相B为81%的水； 流速0· 2 2. O mL · miiT1 ;漂移管温度30 60 °C，气体压力'2. 5 4. O bar ;进样量为Γ20 μ L ;时间:5 60 min ； .4)测定吸取供试品溶液f20 μ L注入超高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。
2.权利要求I所述指纹图谱的建立方法，其特征在于所述的含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂包括西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶药材及其提取物制成制剂的一种或多种混合物。
3.一种西洋参茎叶药材的指纹图谱，其特征在于包括23个特征共有峰，其中，6号色谱峰为人参皂苷Re色谱峰，15号色谱峰为拟人参皂苷F11色谱峰，20号色谱峰为人参皂苷Rb2色谱峰，21号色谱峰为人参皂苷Rb3色谱峰，22号色谱峰为人参皂苷Rd色谱峰，图谱总长度为33 min, 23个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有5个，它们是I号峰、6号峰、15号峰、21号峰和22号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有4个，它们是I号峰、15号峰、21号峰和22号峰；以最强峰为21号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值IgA ；、I号峰，平均保留时间RT为O. 60 min，平均相对保留时间为O. 0288，RSD为O. 38% ;平均相对IgA为O. 8693 ；、 2号峰，平均保留时间RT为O. 92 min，平均相对保留时间为O. 0442，RSD为O. 50% ;平均相对IgA为O. 4845 ；、 3号峰，平均保留时间RT为I. 32 min，平均相对保留时间为O. 0635，RSD为O. 43% ;平均相对IgA为O. 5052 ； 、 4号峰，平均保留时间RT为I. 78 min，平均相对保留时间为O. 0854，RSD为I. 01% ;平均相对IgA为O. 3031 ； 、5号峰，平均保留时间RT为7. 07 min，平均相对保留时间为O. 3393，RSD为I. 27% ;平均相对IgA为O. 4001 ； 、 6号峰，平均保留时间RT为7. 51 min，平均相对保留时间为O. 3602，RSD为I. 32% ;平均相对IgA为O. 8231 ； 、7号峰，平均保留时间RT为12. 20 min，平均相对保留时间为O. 5850，RSD为O. 10% ;平均相对IgA为O. 1043 ；、 8号峰，平均保留时间RT为12. 41 min，平均相对保留时间为O. 5950，RSD为O. 13% ;平均相对IgA为O. 4595 ； 、 9、10号峰，平均保留时间RT为13. 04 min,平均相对保留时间为O. 6253，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 5232 ；、 11号峰，平均保留时间RT为13. 51 min，平均相对保留时间为O. 6478，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 4610 ； 、12号峰，平均保留时间RT为13. 64 min，平均相对保留时间为O. 6540，RSD为O. 12% ；平均相对IgA为O. 3439 ； 、13号峰，平均保留时间RT为13. 82 min，平均相对保留时间为O. 6628，RSD为O. 17% ；平均相对IgA为O. 4244 ； 、14号峰，平均保留时间RT为14. 29 min，平均相对保留时间为O. 6856，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 4755 ； 、 15号峰，平均保留时间RT为14. 91 min，平均相对保留时间为O. 7153，RSD为O. 11% ；平均相对IgA为O. 9388 ； 、 16号峰，平均保留时间RT为16. 67 min，平均相对保留时间为O. 7996，RSD为O. 09% ；平均相对IgA为O. 0820 ； 、 17号峰，平均保留时间RT为17. 40 min，平均相对保留时间为O. 8348，RSD为O. 09% ；平均相对IgA为O. 2033 ； 、 18号峰，平均保留时间RT为18. 41 min，平均相对保留时间为O. 8829，RSD为O. 07% ；平均相对IgA为O. 3646 ； 、 19号峰，平均保留时间RT为19. 35 min，平均相对保留时间为O. 9280，RSD为O. 06% ；平均相对IgA为O. 3551 ；、 20号峰，平均保留时间RT为20. 42 min，平均相对保留时间为O. 9794，RSD为O. 04% ；平均相对IgA为O. 6659 ； 、21号峰，平均保留时间RT为20. 85 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ; 22号峰，平均保留时间RT为21. 99 min，平均相对保留时间为I. 0545，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 9754 ； 23号峰，平均保留时间RT为24. 85 min，平均相对保留时间为I. 1918，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 3463。
4.一种西洋参根药材的指纹图谱，其特征在于包括有11个特征共有峰，其中，4号色谱峰为人参皂苷Re色谱峰，6号色谱峰为人参皂苷Rb1色谱峰，图谱总长度为33 min, 11个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有3个，分别是I号峰、4号峰、6号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有2个，为I号峰和6号峰；以强峰6号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值 I号峰，平均保留时间RT为O. 60 min，平均相对保留时间为O. 032，RSD为O. 001% ;平均相对IgA为I. 095 ； 2号峰，平均保留时间RT为O. 79 min，平均相对保留时间为O. 042，RSD为O. 004% ;平均相对IgA为O. 754 ； 3号峰，平均保留时间RT为7. 33 min，平均相对保留时间为O. 391，RSD为O. 465% ;平均相对IgA为O. 224 ； 4号峰，平均保留时间RT为7. 79 min，平均相对保留时间为O. 415，RSD为O. 447% ;平均相对IgA为O. 840 ； 5号峰，平均保留时间RT为15. 07 min，平均相对保留时间为O. 803，RSD为O. 046% ;平均相对IgA为O. 430 ； 6号峰，平均保留时间RT为18. 75 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ; 7号峰，平均保留时间RT为19. 55 min，平均相对保留时间为I. 043，RSD为O. 008% ;平均相对IgA为O. 561 ； 8号峰，平均保留时间RT为20. 94 min，平均相对保留时间为I. 116，RSD为O. 016% ;平均相对IgA为O. 252 ； 9号峰，平均保留时间RT为21. 58 min，平均相对保留时间为I. 151，RSD为O. 013% ;平均相对IgA为O. 498 ； 10号峰，平均保留时间RT为22. 08 min，平均相对保留时间为I. 177，RSD为O. 024% ；平均相对IgA为O. 594 ； 11号峰，平均保留时间RT为23. 10 min，平均相对保留时间为I. 232，RSD为O. 023% ；平均相对IgA为O. 652。
5.一种人参根药材的指纹图谱，其特征在于包括有14个特征共有峰，其中，3号色谱峰为人参皂苷Rg1色谱峰，4号色谱峰为人参皂苷Re色谱峰，7号色谱峰为人参皂苷Rb1色谱峰，图谱总长度为33 min, 14个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有2个，分别是I号峰和7号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有I个，为I号峰；以强峰7号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值 I号峰，平均保留时间RT为O. 609 min，平均相对保留时间为O. 032，RSD为O. 498% ;平均相对IgA为I. 393 ；2号峰，平均保留时间RT为O. 801 min，平均相对保留时间为O. 042，RSD为O. 541% ;平均相对IgA为O. 950 ； 3号峰，平均保留时间RT为7. 518 min，平均相对保留时间为O. 393，RSD为I. 261% ;平均相对IgA为O. 800 ； 4号峰，平均保留时间RT为7. 979 min，平均相对保留时间为O. 417，RSD为I. 315% ;平均相对IgA为O. 860 ； 5号峰，平均保留时间RT为14. 426 min，平均相对保留时间为O. 715，RSD为O. 127% ；平均相对IgA为O. 660 ； 6号峰，平均保留时间RT为18. 642 min，平均相对保留时间为O. 754，RSD为O. 026% ；平均相对IgA为O. 327 ； 7号峰，平均保留时间RT为19. 131 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ; 8号峰，平均保留时间RT为20. 544 min，平均相对保留时间为I. 074，RSD为O. 034% ；平均相对IgA为O. 784 ； 9号峰，平均保留时间RT为20. 970 min，平均相对保留时间为I. 096，RSD为O. 032% ；平均相对IgA为O. 505 ； 10号峰，平均保留时间RT为22. 276 min，平均相对保留时间为I. 164，RSD为O. 050% ；平均相对IgA为O. 791 ； 11号峰,平均保留时间RT为22. 865 min，平均相对保留时间为I. 195，RSD为O. 050% ；平均相对IgA为O. 313 ； 12号峰，平均保留时间RT为24. 331 min，平均相对保留时间为I. 272，RSD为O. 080% ；平均相对IgA为O. 450 ； 13号峰，平均保留时间RT为25. 423min，平均相对保留时间为I. 329，RSD为O. 102% ；平均相对IgA为O. 487 ； 14号峰，平均保留时间RT为26. 197 min，平均相对保留时间为I. 369，RSD为O. 144% ；平均相对IgA为O. 315。
6.一种人参茎叶药材的指纹图谱，其特征在于包括有18个特征共有峰，其中，5号色谱峰为人参皂苷Rg1色谱峰，6号色谱峰为人参皂苷Re色谱峰，15号色谱峰为人参皂苷Rd色谱峰，图谱总长度为33 min, 18个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有3个，分别是5号峰、6号峰和15号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有3个，分别是5号峰、6号峰和15号峰；以最强峰6号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值 1号峰，平均保留时间RT为O. 616 min，平均相对保留时间为O. 078，RSD为O. 443% ;平均相对IgA为O. 684 ； 2号峰，平均保留时间RT为O. 814 min，平均相对保留时间为O. 102，RSD为O. 457% ;平均相对IgA为O. 495 ； 3号峰，平均保留时间RT为O. 932 min，平均相对保留时间为O. 117，RSD为O. 413% ;平均相对IgA为O. 552 ； 4号峰，平均保留时间RT为I. 358 min，平均相对保留时间为O. 171，RSD为O. 353% ;平均相对IgA为O. 515 ； .5号峰，平均保留时间RT为7. 479 min，平均相对保留时间为O. 942，RSD为O. 074% ;平均相对IgA为O. 794 ； .6号峰，平均保留时间RT为7. 943 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ; . 7号峰，平均保留时间RT为12. 688 min，平均相对保留时间为I. 597，RSD为O. 303% ；平均相对IgA为O. 340 ； .8号峰，平均保留时间RT为15. 012 min，平均相对保留时间为I. 890，RSD为O. 291% ；平均相对IgA为O. 341 ； .9号峰，平均保留时间RT为15. 791 min，平均相对保留时间为I. 988，RSD为O. 287% ；平均相对IgA为O. 480 ； .10号峰，平均保留时间RT为16. 363 min，平均相对保留时间为2. 060，RSD为O. 286% ；平均相对IgA为O. 647 ； 11号峰，平均保留时间RT为16. 708 min，平均相对保留时间为2. 103，RSD为O. 278% ；平均相对IgA为O. 447 ； .12号峰，平均保留时间RT为17. 597 min，平均相对保留时间为2. 215，RSD为O. 262% ；平均相对IgA为O. 564 ； .13号峰，平均保留时间RT为18. 733 min，平均相对保留时间为2. 358，RSD为O. 255% ；平均相对IgA为O. 587 ； 14号峰，平均保留时间RT为18. 098 min，平均相对保留时间为2. 404，RSD为O. 272% ；平均相对IgA为O. 624 ； .15号峰，平均保留时间RT为21. 236 min，平均相对保留时间为2. 673，RSD为O. 252% ；平均相对IgA为O. 818 ； .16号峰，平均保留时间RT为24. 278 min，平均相对保留时间为3. 056，RSD为O. 335% ；平均相对IgA为O. 297 ； .17号峰，平均保留时间RT为25. 004 min平均相对保留时间为3. 148，RSD为O. 349% ；平均相对IgA为O. 417 ; .18号峰，平均保留时间RT为26. 696 min，平均相对保留时间为3. 361，RSD为O. 372% ；平均相对IgA为O. 629。
7.—种三七根药材的指纹图谱，其特征在于包括有12个特征共有峰，其中，3号色谱峰为人参皂苷Rg1色谱峰，8号色谱峰为人参皂苷Rb1色谱峰，图谱总长度为33 min, 12个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有3个，分别是I号峰、3号峰和8号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有3个，为I号峰、3号峰和8号峰；以强峰8号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值 .1号峰，平均保留时间RT为O. 607 min，平均相对保留时间为O. 032，RSD为O. 218% ;平均相对IgA为I. 193 ； .2号峰，平均保留时间RT为5. 528 min，平均相对保留时间为O. 290，RSD为O. 526% ;平均相对IgA为O. 652 ； .3号峰，平均保留时间RT为8. 138 min，平均相对保留时间为O. 427，RSD为O. 409% ;平均相对IgA为O. 970 ； 4号峰，平均保留时间RT为8. 689 min，平均相对保留时间为O. 456，RSD为O. 437% ;平均相对IgA为O. 580 ； 5号峰，平均保留时间RT为17. 548 min，平均相对保留时间为O. 920，RSD为O. 021% ；平均相对IgA为； 6号峰，平均保留时间RT为17. 773 min，平均相对保留时间为O. 932，RSD为O. 025% ；平均相对IgA为O. 329 ； 7号峰，平均保留时间RT为18. 470 min，平均相对保留时间为O. 968，RSD为O. 023% ；平均相对IgA为O. 306 ； 8号峰，平均保留时间RT为19. 074 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ; 9号峰，平均保留时间RT为20. 109 min，平均相对保留时间为I. 054，RSD为O. 048% ；平均相对IgA为O. 428 ； 10号峰，平均保留时间RT为26. 344 min，平均相对保留时间为I. 381，RSD为O. 051% ；平均相对IgA为O. 734 ； 11号峰，平均保留时间RT为27. 317 min，平均相对保留时间为I. 432，RSD为O. 074% ；平均相对IgA为O. 476 ； 12号峰，平均保留时间RT为29. 032 min，平均相对保留时间为I. 522，RSD为O. 097% ；平均相对IgA为O. 357。
8.8、一种三七茎叶药材的指纹图谱，其特征在于包括有14个特征共有峰，其中，5号色谱峰为人参皂苷Rb3色谱峰，图谱总长度为33 min, 14个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有3个，分别是I号峰、5号峰和10号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有3个，为I号峰、5号峰和10号峰；以强峰5号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值 I号峰，平均保留时间RT为O. 607 min，平均相对保留时间为O. 030 ;平均相对IgA为、O. 985 ； 2号峰，平均保留时间RT为18. 958 min，平均相对保留时间为O. 932 ;平均相对IgA为、O. 752 ； 3号峰，平均保留时间RT为19. 224 min，平均相对保留时间为O. 945 ;平均相对IgA为、O. 674 ； 4号峰，平均保留时间RT为20. 095 min，平均相对保留时间为O. 988 ;平均相对IgA为、O. 697 ； 5号峰，平均保留时间RT为20. 346 min，平均相对保留时间为I ;平均相对IgA为I ; 6号峰，平均保留时间RT为20. 974 min，平均相对保留时间为I. 031 ;平均相对IgA为、O. 750 ； 7号峰，平均保留时间RT为21. 722 min，平均相对保留时间为I. 068 ;平均相对IgA为、O. 537 ； 8号峰，平均保留时间RT为22. 360 min，平均相对保留时间为I. 099 ;平均相对IgA为、O. 764 ；9号峰，平均保留时间RT为22. 778 min，平均相对保留时间为I. 120 ;平均相对IgA为O. 612 ； 10号峰，平均保留时间RT为22. 968 min，平均相对保留时间为I. 129 ;平均相对IgA为O. 923 ； 11号峰，平均保留时间RT为23. 511 min，平均相对保留时间为I. 156 ;平均相对IgA为O. 348 ； 12号峰，平均保留时间RT为24. 061 min，平均相对保留时间为I. 183 ;平均相对IgA为O. 605 ； 13号峰，平均保留时间RT为24. 353 min，平均相对保留时间为I. 197 ;平均相对IgA为O. 506 ； 14号峰，平均保留时间RT为25. 132 min，平均相对保留时间为I. 235 ;平均相对IgA为O.567。
9.一种注射用西洋参茎叶皂苷的指纹图谱，其特征在于包括有23个特征共有峰，其中，19号色谱峰为人参皂苷Rb3色谱峰，图谱总长度为33 min, 23个特征共有峰中，单峰面积超总面积5%的色谱峰有4个，它们是5号峰、13号峰、19号峰和20号峰；单峰面积超总面积10%的色谱峰有3个，它们是13号峰、19号峰和20号峰；以强峰19号色谱峰为参照峰，计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积对数值 I号峰，平均保留时间RT为O. 62 min，平均相对保留时间为O. 0298，RSD为O. 32% ;平均相对IgA为O. 3147 ； 2号峰，平均保留时间RT为O. 92 min，平均相对保留时间为O. 0441，RSD为O. 46% ;平均相对IgA为O. 5175 ； 3号峰，平均保留时间RT为I. 78 min，平均相对保留时间为O. 0854，RSD为O. 83% ;平均相对IgA为O. 2084 ； 4号峰，平均保留时间RT为7. 05 min，平均相对保留时间为O. 3387，RSD为I. 18% ;平均相对IgA为O. 4481 ； 5号峰，平均保留时间RT为7. 48 min，平均相对保留时间为O. 3595，RSD为I. 24% ;平均相对IgA为O. 8425 ； 6号峰，平均保留时间RT为12. 16 min，平均相对保留时间为O. 5845，RSD为O. 10% ;平均相对IgA为O. 1567 ； 7号峰，平均保留时间RT为12. 37 min，平均相对保留时间为O. 5946，RSD为O. 12% ;平均相对IgA为O. 4956 ； .8、9号峰，平均保留时间RT为13. 00 min，平均相对保留时间为O. 6247，RSD为O. 11% ；平均相对IgA为O. 5627 ； 10号峰，平均保留时间RT为13. 59 min，平均相对保留时间为O. 6533，RSD为O. 14% ；平均相对IgA为3122 ； 11号峰，平均保留时间RT为13. 75 min，平均相对保留时间为O. 6605，RSD为O. 12% ；平均相对IgA为O. 2688 ； 12号峰，平均保留时间RT为14. 23 min，平均相对保留时间为O. 6838，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 2055 ；13号峰，平均保留时间RT为14. 88 min，平均相对保留时间为O. 7149，RSD为O. 14% ；平均相对IgA为O. 9220 ； 14号峰，平均保留时间RT为16. 61 min，平均相对保留时间为O. 7984，RSD为O. 12% ；平均相对IgA为O. 1291 ； 15号峰，平均保留时间RT为17. 35 min，平均相对保留时间为O. 8339，RSD为O. 10% ；平均相对IgA为O. 3167 ； 16号峰，平均保留时间RT为18. 35 min，平均相对保留时间为O. 8816，RSD为O. 08% ；平均相对IgA为O. 3806 ；17号峰，平均保留时间RT为19. 28 min，平均相对保留时间为O. 9265，RSD为O. 06% ；平均相对IgA为O. 3846 ； 18号峰，平均保留时间RT为20. 36 min，平均相对保留时间为O. 9784，RSD为O. 04% ；平均相对IgA为O. 7023 ； 19号峰，平均保留时间RT为20. 81 min，平均相对保留时间为1，RSD为0% ;平均相对IgA 为 I ; 20号峰，平均保留时间RT为21. 95 min，平均相对保留时间为I. 0550，RSD为O. 14% ；平均相对IgA为O. 9772 ； 21号峰，平均保留时间RT为24. 48 min，平均相对保留时间为I. 1765，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 3119 ； 22号峰，平均保留时间RT为24. 80 min，平均相对保留时间为I. 1918，RSD为O. 13% ；平均相对IgA为O. 6301 ； 23号峰，平均保留时间RT为26. 39 min，平均相对保留时间为I. 2681，RSD为O. 16% ；平均相对IgA为O. 3796。
全文摘要
本发明提供一种含有人参皂苷类成分药材及制剂指纹图谱的建立方法，涉及西洋参、西洋参茎叶药材、及西洋参、西洋参茎叶提取物制剂的超高效液相色谱法指纹图谱的构建方法和标准指纹图谱，本发明得到的指纹图谱可用于在整体上控制上述药材以及从上述药材中提取得到的皂苷提取物及其提取物制剂的质量，所述制剂包括固体制剂和液体制剂，如注射剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、饮料、合剂和口服液等。
文档编号G01N30/88GK102621264SQ201210073930
公开日2012年8月1日 申请日期2012年3月20日 优先权日2012年3月20日
发明者刘悦, 徐东铭, 徐雅娟, 解生旭 申请人:吉林省中医药科学院