专利名称：基于a-m模型的中药新药发现策略和药物及其组合的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药新药研发策略和基于该方法发现的药物组份及组合物，这些药物涉及调节胃肠道机能和抗真菌活性，具体讲就是基于药物吸收一代谢模型从中药方剂金铃子散、艾叶散和草药博落回中筛选出有效部位的方法与用途。极大的降低了中药药效物质基础研究的难度，提高了中药新药发现的效率。
背景技术：
药物研究是一个复杂的过程，可以有多种不同方法、技术和策略，但都有一个共同的目标，即开发新的治疗疾病的药物。数千年的临床实践已经证实了中药(包括复方)在临床上的确切疗效，但是由于其化学成份组成复杂性，中药药效物质基础的研究一直以米难获突破。目前主流的中药物质基础研究方法仍以中药化学、天然药物化学方法为主，根据成分极性分段对有效成分进行提取、分离，采用现代药理模型进行体内外活性筛选，对活性物质进行体内实验，这种方法已经不能高效、便利的发现新药和新先导化合物。对于中药新药开发的难点在于适合中药自身特点的研发思路和策略，寻找新的研究方法和策略比具体的新技术和方案意义重大影响更加深远。新药设计是指先导化合物的发现和优化的过程。新药的设计是整个新药创制流程中的关键步骤。是否能够找到合适的候选药物，则决定着该药后期开发的风险和最终能否上市注册为新药。经典的天然产物设计，尤其是一些中药有效成分或已上市的天然药物是通过系统的提取和分离，将组分或单体富集，建立合适的体外活性评价模型系统进行评价， 通过药物化学技术对其进一步结构改造，以求获得更高活性、更低毒性的药物候选物。这一方法曾经推动我国中药现代化的进程。近百年来国内外科学家从中药中先后分离报道了几千个单体化合物，并对其中许多成分进行过生物活性研究，其中一些活性成分已被广泛用于临床。在传统的药物没计流程中，对于候选化合物，最关心的往往是对于特定靶点的活性以及对于相关靶点的选择性。至于这个化合物能否在肠道中溶解，能否通过肠道的黏膜细胞进入循环系统，在肝脏的代谢和转化情况，能否通过血液循环到达有效部位等问题，人们极少关注。此外，化合物是否能够在体内对靶点保持足够长的药效而不被肝脏和肾脏降解或排出也是值得关注的问题。组分中药是以中医药理论为基础，遵循方剂的配伍理论与原则，有效组分、有效部位或者提取物配伍而成的现代中药；是运用植物化学、现代分析技术等，将各种中药材的有效组分、协同有效组分、有效部位或者定向提取物等都进行分析、研究，基本搞清楚物质基础，然后按照中医辨证施治的原则，进行有效成分的组合和配方，成为现代新药。除少数局部用药物外，药物要发生药效作用，大多数口服药物要通过胃肠道吸收进入血液循环达到靶组织部位发挥调节作用。因此，中药药效作用物质基础首先是能通被肠道吸收进入血液循环系统的成分，而且这些成分还必须有较好的药代特性。前期研究表明，中药成分复杂，单一一味中药成分多达千种，复方配伍之后成分就更多更加复杂；但是这些成分中能被吸收入血的占少数，吸收入血的成分中有一些也不具备合适的药代特性而发挥药效作用。所以，基于A-M模型的中药药效物质基础研究大大降低了研究的难度艾叶为菊科植物艾的干燥叶，能散寒止痛，温经止血。用于少腹冷痛，经寒不调，温经上血；广泛用于妇科温经上痛和止血。艾叶散(《圣惠》卷七十九)主治产后脓血痢久不愈，不思饮食，渐加羸瘦。艾叶散组成艾叶1两(微炒)，黄柏3分(涂蜜微炙，锉)，赤芍药3分，黄连3分(去须，微炒)，地榆3分(挫)，甘草半两(炙微赤，锉)，干姜半两(炮裂，锉)，阿胶3分(捣碎，炒令黄燥)。金铃散(《素问病机气宜保命集》卷中金铃子散，金铃子，玄胡各1两)疏肝泄热， 行气止痛。治肝气不舒，气郁化火，致患心腹胁肋诸痛，临床上主要用于治疗肝郁化火诸痛证的代表方剂。博落回(Macleaya cordata)是罂粟科博落回属的一种多年生草本植物，全草带根入药，有大毒，可治跌打损伤、恶疮和蜂螫伤等。由于含有多种生物碱，博落回提取物还可用为农药和抗菌消炎药。上述三者(艾叶散、金铃子散和博落回)的应用一直以来都是停留在传统的药物形态(直接药材入药)，药效物质基础不清楚，临床疗效尚无大规模的询证医学的证据来支持。现代科技的发展要求我们来挖掘和丰富传统中药的内涵，三氧化二砷(俗称砒霜)治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)分子机制和临床循证医学研究便是一个很好的例证。因此，建立适合于中药新药的基于A-M模型的新药发现策略对于指导新药发现十分必要，同时在基本搞清药效物质基础上进行中药新药开发还有利于传统中药被国际社会接受、进入国际市场。为了有效的进行中药药效物质基础研究加快中药新药开发，本发明人提供了一种新的适合于复杂体系中药的研究策略利方法，并基于这一方法进行了部分方剂和草药的研本发明人还发明了针对胃肠机能调节和抗真菌作用的中药(包括中药组合物)、 草药(包括草药组合物)及有效组份(包括有效组份组合物)。
发明内容
技术问题本发明目的在于提供一种适合中药新药发现的方法和策略；以及基于该方法的针对胃肠机能调节和抗真菌作用的中药(包括中药组合物)、草药(包括草药组合物)及有效组份(包括有效组份组合物)。技术方案本发明提供一种适合中药新药发现的方法和策略。其特征在于基于药物的吸收和代谢(A-M)从中药药效物质基础出发，以此为突破点和基础指导中药新药开发和设计新药。简述如下1.制备A-M模型，并对模型的性能进行验证2.将传统中药方剂或者适合的给药形式(包括中药提取物)加到A-M系统中3.分析和定量A-M系统中被吸收和代谢组分4.对吸收和代谢组分进行与方剂功能主治相关联的活性确认和比较
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5.确定方剂的功能主治相关活性成分的种类及种类间的数量关系、即确定药效物质群6.以药效物质群为目标，采用现代化学定向提取、分离纯化或其它方法制备7.通过工业化制备药效物质群后，进行候选药物新药系统研究。本发明提供了系列方剂和中草药在基于上述方法筛选和发现的新中药组合物 (包括中药有效组分及组合物、中药有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)，验证了基于A-M模型的中药新药发现策略和方法的可行性。详述如下1.按照常规方法制备外翻肠囊和肝微粒体肝微粒体的制各①健康Wistar大鼠禁食Mh，脱颈处死；②打开开腹腔，细塑料管插入肝门静脉，通过蠕动泵将冰冷的KCL溶液灌洗肝脏至土黄色；③然后摘除肝脏，加入磷酸缓冲液搅勻，勻浆；取肝勻浆组织于4°C，IOOOOXg离心20min，取上清液，105000 Xg离心两次，分别为60min和20min，分别得沉淀，为微粒体。 将微粒体板重悬于磷酸缓冲液中，分装于-80°C保存，测定肝微粒体蛋白含量备用。肠外翻球囊的制备参照大鼠经典肠外翻实验[WilsonT H,Wiseman G. The use of sacs of everted small intestine for the study of the transference of substances from the mucosal to the serosal surface [J]. J Physiol, 1954,123(1) :116]大鼠，实验前 12h 禁食，自由饮水。脱颈处死，打开腹腔，迅速取出约IOcm长的十二指肠、空肠、回肠、7cm结肠各段。放入冰Tyrode液中，冲洗，剥离肠系膜和脂肪。将肠管翻转，结扎肠段下端，使之形成囊状肠管。2. A-M体系构建和药物加入向上述肠囊内注入2mL特定浓度肝微粒体的Tyrode液，作为代谢体系。将其放入已有Tyrode液的麦氏浴槽中，实验过程中保持37°C恒温，并向浴槽中通入95% O2/5% CO2. 平衡5min后，注入配制好的不同浓度的药液(艾叶散、金铃子散和博落回提取物)50mL，在给药后不同时间点从肠囊内取样。肠管球囊作为离体肠吸收体系。3. A-M体系中药物吸收和代谢组分分析取样在4°C条件下离心或者其他适当方法处理，HPLC-LC分析吸收成分和代谢成分的种类和数量，并确定主要相关组分的药代参数。4.对吸收和代谢组分进行与方剂功能主治相关联的活性确认和比较艾叶散的主要功能散寒止痛、温经止血，主治少腹冷痛、经寒不调，为妇科痛证之要药。金铃子散是治疗肝郁化火诸痛证的代表方剂，疏肝泄热，活血止痛。用于胸腹胁肋疼痛，也可用于痛经和疝痛以及胃及十二指肠溃疡、慢性胃炎、慢性肝炎、胆囊炎等属肝郁化火者。博落回功能散瘀、祛风、解毒、止痛、杀虫。临床曾用于各种致病微生物所致的感染。 艾叶散和金铃子散在临床上均有用于胃肠疾病的治疗，因此确定调节胃肠机能作为其主要目标活性、进行离体和在体试验筛选和确认药效组分群(或部位)。观察主要艾叶散和金铃子散有效组分群对离体大鼠胃条平滑肌自发性收缩活动以及贤上腺素、去甲贤上腺素引起离体鼠胃条平滑肌舒张的影响，同时还观察各药物对5-羟色胺引起大鼠胃条收缩的影响。 大鼠禁食48h，用铁棒猛击枕骨致昏迷后，立即剖开腹腔，取出胃立即放入克氏液中，沿胃小弯剪开胃腔，去除胃粘膜，并在胃底部横向剪下胃肌条，将胃肌条放入37摄氏度的氏液中并通以C0295 %和5 % 02，稳定20min后，用二道生理记录仪记录正常值后，分别加入不同剂量的上述组分，记录肠道平滑肌在加入药物后收缩活动。
观察艾叶散和金铃子散主要有效组分群对小鼠镇痛和抗炎作用。。抗炎实验小鼠按体重随机分成正常对照组，艾叶散和金铃子散有效组分群大、中、 小3个剂量组(相当于6. 8g生药/kg，3. 4g生药/kg和1. 7g生药/kg)，各组每日经口给予相应的药物一次(0.2mL/10g)，空白组给予相同剂量的生理盐水。连续给药3天。并于第3 天药后40min，各鼠由尾静脉注入0. 5%伊文斯蓝0. lml/10g,随即腹腔内注射0. 6%的HAc 溶液0. lml/10g, 30min后将小鼠脱颈椎处死，腹腔内注入生理盐水5mL，轻揉数下，剪开腹部，用吸管吸出洗涤液，3000r. min离心15min，取上清液于590nm处测定吸光度，以OD值高低表示抗炎作用的强弱。镇痛实验动物分组与给药与上相同，在对小鼠腹腔内注射0. 6 %的HAc溶液 0. lml/10g以后，观察20分钟内各组小鼠出现扭体反应的次数，以腹腔内凹，伸展后肢，臀部抬高为阳性指标。并计算药物对扭体反应得抑制率。
权利要求
1.基于药物吸收-代谢(A-M)模型的适合中药新药发现和新药设计的方法和策略。
2.基于权利要求1所述的方法的川楝子提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)、延胡索提取物(有效组分及组合物、 有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)、金铃子散提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)之一新药或者新药组合物。
3.基于权利要求1所述的方法的艾叶提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)、黄柏提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)、黄连提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)、地榆提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)、赤芍提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)艾叶散提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)之一新药或者新药组合物。
4.基于权利要求1所述的方法的博落回提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)。
5.用于预防和治疗胃肠疾病的组合物，其中所含权利要求2和3任何一项或几项所述的活性提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)。
6.用于预防和治疗真菌感染相关疾病的组合物，其中所含权利要求4所述任一的活性提取物(有效组分及组合物、有效部位及组合物、特定提取物及组合物或上述三者的配伍组合物)。
全文摘要
本发明涉及一种中药新药研发策略和基于该方法发现的药物组份及组合物，这些药物涉及调节胃肠道机能和抗真菌活性，具体讲就是基于药物吸收一代谢模型从中药方剂金铃子散、艾叶散和中草药博落回中筛选出有效部位的方法与用途。基于本发明的中药新药具有药效物质基础基本明确的特点，因此质量控制就有针对性很，能被国际市场广泛接受。
文档编号A61P31/10GK102445513SQ201110282220
公开日2012年5月9日 申请日期2011年9月22日 优先权日2011年9月22日
发明者成龙 申请人:成龙