治疗方法

专利名称：治疗方法
技术领域：
本发明一般涉及分子生物学和生长因子调控的领域。更具体地，本发明涉及用于病理状况(诸如癌症)治疗的联合疗法。
背景技术：
癌症仍然是对人类健康的最致命威胁之一。在美国，癌症每年影响近130万新患者，而且是位于心脏病之后的第二位死因，占4例死亡中的大约I例。乳腺癌是癌症的第二位最常见形式，而且是美国女性中的第二位癌症杀手。还预测癌症可能在5年内超越心血管疾病成为第一位死因。实体瘤对大多数上述死亡负有责任。虽然某些癌症的医学治疗中已经取得了重大进步，但是所有癌症的总体5年存活率在最近20年里只改进了约10%。癌症(或称作恶性肿瘤)以不受控制的方式快速生长和转移，使得及时检测和治疗极端困难。乳腺癌是在美国每年杀死许多女性的一种疾病。根据美国癌症学会，大约40，000人会在2008年死于该疾病。每年诊断超过180，000例乳腺癌新病例，而且估计8位女性中I位会发生乳腺癌。这些数目指示乳腺癌是今天女性面对的最危险疾病之一。转移性乳腺癌一般是不能治愈的，只有少数患者在标准化疗之后实现长期存活(Greenberg等，J. Clin.Oncol.14:2197-2205(1996))。由于癌症仍然是最致命威胁之一，因此患者需要别的癌症疗法。本发明解决这些和其它需要，正如阅读下述公开后会显而易见的。通过提及完整收录本文中引用的所有参考文献(包括专利申请和出版物)。发明概述一方面，本发明提供用于治疗乳腺癌的方法，包括对雌激素受体(ER)阴性、孕酮受体(PR)阴性和HER2阴性(统称三重阴性)转移性乳腺癌患者施用有效量的抗c-met抗体和紫杉烧。一方面，本发明提供用于治疗乳腺癌的方法，包括对ER阴性、PR阴性和HER2阴性(统称三重阴性)转移性乳腺癌患者施用有效量的抗c-met抗体、抗VEGF抗体、和紫杉烷。一方面，本发明提供用于治疗乳腺癌的方法，包括对ER阴性、PR阴性、和HER2阴性(ER-、PR-、和HER2-;或三重阴性)转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛，例如用于延长患者的存活、降低患者 的癌症复发风险和/或提高患者的存活可能性。
另一方面，本发明提供宣传抗c-met抗体(例如单价抗c_met抗体,例如MetMAb)与紫杉烷组合用于治疗转移性三重阴性乳腺癌患者的方法，例如用于延长患者的存活、降低患者的癌症复发风险和/或提高患者的存活可能性。在一些实施方案中，紫杉烷为帕利他赛。在一些实施方案中，该治疗包含对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb)及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。宣传可以通过任何可得手段来进行。在一些实施方案中，该宣传通过伴随抗c-met抗体之商业性配制剂的包装插页来进行。该宣传也可以通过伴随紫杉烷之商业性配制剂的包装插页来进行。宣传可以通过书面或口头告知内科医师或健康护理提供者来进行。在一些实施方案中，该宣传通过包装插页来进行，其中包装插页提供说明书来接受抗c-met抗体和/或紫杉烷的疗法。在一些实施方案中，该宣传之后是在有或无紫杉烷的情况中用抗c-met抗体治疗患者。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。又一方面，本发明提供宣传紫杉烷与抗c-met抗体组合用于治疗转移性三重阴性乳腺癌患者的方法，其中紫杉烷可以为例如帕利他赛，例如用于延长患者的存活、降低患者的癌症复发风险和/或提高患者的存活可能性。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c_met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些方面，本发明的特征在于指导具有三重阴性转移性乳腺癌的患者的方法，其通过提供接受抗c-met抗体和紫杉烷治疗以例如延长患者的存活、降低患者的癌症复发风险和/或提高患者的存活可能性的说明书来进行。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。本发明提供商业方法，包括销售抗c-met抗体，用于在人患者中治疗三重阴性转移性乳腺癌，例如用于延长存活、降低患者的癌症复发可能性、和/或提高患者的存活可能性。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些实施方案中，该方法进一步包括销售紫杉烷，用于在人患者中治疗三重阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，该销售之后是在有或无紫杉烷的情况中用抗c-met抗体治疗患者。还提供商业方法，包括销售抗c-met抗体和紫杉烷，用于在人患者中治疗三重阴性转移性乳腺癌，例如用于延长存活、降低患者的癌症复发可能性、和/或提高患者的存活可能性。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些实施方案中，该销售之后是在有或无紫杉烷的情况中用抗c-met抗体治疗患者。
还有一方面,本发明提供制品,其包含抗c-met抗体(例如单价抗c_met抗体,例如MetMAb)和/或抗VEGF抗体和/或紫杉烷，及带有治疗三重阴性转移性乳腺癌患者的说明书的包装插页或标签。在一些实施方案中，紫杉烷为帕利他赛.在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些实施方案中，该治疗进一步包括以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗体(例如贝伐单抗)。还有一方面，本发明提供制造制品的方法，其中该制品包含抗c-met抗体(例如单价抗c-met抗体，例如MetMAb)和/或抗VEGF抗体和/或紫杉烷，及带有治疗三重阴性转移性乳腺癌患者的说明书的包装插页或标签。在一些实施方案中，紫杉烷为帕利他赛。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些实施方案中，该治疗进一步包括以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗体(例如贝伐单 抗)。一方面，本发明提供用于治疗乳腺癌的方法，包括对ER阴性、PR阴性、和HER2阴性(ER-、PR-、和HER2-;或三重阴性)转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb)，以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗体(例如贝伐单抗),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛，例如用于延长存活、降低患者的癌症复发可能性、和/或提高患者的存活可能性。另一方面，本发明提供方法，其包括施用抗VEGF抗体。如此，在一些方面，本发明提供宣传抗c-met抗体(例如单价抗c-met抗体,例如MetMAb)与抗VEGF抗体(例如贝伐单抗)和紫杉烷组合用于治疗转移性三重阴性乳腺癌患者的方法，例如用于延长患者的存活、降低患者的癌症复发风险和/或提高患者的存活可能性。在一些实施方案中，紫杉烷为帕利他赛。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c_met抗体(例如MetMAb),以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗体(例如贝伐单抗),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。宣传可以通过任何可得手段来进行。在一些实施方案中，该宣传通过伴随抗c-met抗体之商业性配制剂的包装插页来进行。该宣传也可以通过伴随抗VEGF抗体之商业性配制剂的包装插页来进行。该宣传也可以通过伴随紫杉烷之商业性配制剂的包装插页来进行。宣传可以通过书面或口头告知内科医师或健康护理提供者来进行。在一些实施方案中，该宣传通过包装插页来进行，其中包装插页提供说明书来接受抗c-met抗体、抗VEGF抗体和/或紫杉烷的疗法。在一些实施方案中，该宣传之后是在有或无紫杉烷或抗VEGF抗体的情况中用抗c-met抗体治疗患者。在又一个方面，本发明提供宣传抗VEGF抗体(例如贝伐单抗)与抗c-met抗体(例如MetMAb)和紫杉烷(诸如帕利他赛)组合用于治疗转移性三重阴性乳腺癌患者的方法。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天抗VEGF抗体(例如贝伐单抗),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。又一方面，本发明提供宣传紫杉烷与抗c-met抗体和抗VEGF抗体组合用于治疗转移性三重阴性乳腺癌患者的方法，其中紫杉烷可以例如为帕利他赛，例如用于延长患者的存活、降低患者的癌症复发风险和/或提高患者的存活可能性。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天抗VEGF抗体(例如贝伐单抗)，及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些方面，本发明的特征在于指导具有三重阴性转移性乳腺癌的患者的方法，其通过提供接受抗c-met抗体、抗VEGF抗体和紫杉烷治疗以例如延长患者的存活、降低患者的癌症复发风险和/或提高患者的存活可能性的说明书来进行。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天 施用抗c-met抗体(例如MetMAb),以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天抗VEGF抗体(例如贝伐单抗),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。本发明提供商业方法，包括销售抗c-met抗体，用于在人患者中治疗三重阴性转移性乳腺癌，例如用于延长存活、降低患者的癌症复发可能性、和/或提高患者的存活可能性。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb)，以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗体(例如贝伐单抗),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些实施方案中，该方法进一步包括销售抗VEGF抗体和紫杉烷，用于在人患者中治疗三重阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，该销售之后是在有或无紫杉烷和/或抗VEGF抗体的情况中用抗c-met抗体治疗患者。在一些实施方案中，该销售之后是在有或无紫杉烷或抗c-met抗体的情况中用抗VEGF抗体治疗患者。还提供商业方法，其包括销售抗c-met抗体、抗VEGF抗体、和紫杉烷，用于在人患者中治疗三重阴性转移性乳腺癌，例如用于延长存活、降低患者的癌症复发可能性、和/或提高患者的存活可能性。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),以IOmg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天抗VEGF抗体(例如贝伐单抗),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些实施方案中，该销售之后是在有或无紫杉烷或抗VEGF抗体的情况中用抗c-met抗体治疗患者。在一些实施方案中，该销售之后是在有或无紫杉烷或抗c-met抗体的情况中用抗VEGF抗体治疗患者。还有一方面,本发明提供制品,其包含抗c-met抗体(例如单价抗c_met抗体,例如MetMAb)和/或抗VEGF抗体和/或紫杉烷，及带有治疗三重阴性转移性乳腺癌患者的说明书的包装插页或标签。在一些实施方案中，紫杉烷为帕利他赛。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些实施方案中，该治疗进一步包括以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗体(例如贝伐单抗)。还有一方面，本发明提供制造制品的方法，其中该制品包含抗c-met抗体(例如单价抗c-met抗体，例如MetMAb)和/或抗VEGF抗体和/或紫杉烷，及带有治疗三重阴性转移性乳腺癌患者的说明书的包装插页或标签。在一些实施方案中，紫杉烷为帕利他赛。在一些实施方案中，该治疗包括对三重阴性转移性乳腺癌患者以10mg/kg的剂量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗体(例如MetMAb),及以90mg/m2的剂量通过IV输注在该28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他赛。在一些实施方案中，该治疗进一步包括以10mg/kg的剂量在该28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗体(例如贝伐单抗)。
在一些实施方案中，三重阴性转移性乳腺癌患者没有为三重阴性转移性乳腺癌(例如在先抗癌药物疗法)接受过在先治疗。在一些实施方案中，三重阴性转移性乳腺癌患者为三重阴性转移性乳腺癌接受过在先治疗。在一些实施方案中，患者具有三重阴性转移性或局部复发性乳腺癌。在一些实施方案中，三重阴性转移性或局部复发性乳腺癌患者没有为三重阴性转移性或局部复发性乳腺癌接受过在先治疗(例如在先抗癌药物疗法)。在一些实施方案中，三重阴性转移性或局部复发性乳腺癌患者为三重阴性转移性或局部复发性乳腺癌接受过在先治疗。在又一个实施方案中，并行施用抗c-met抗体和紫杉烧。在还有一个实施方案中，以任意次序序贯施用抗c-met抗体和紫杉烷。在另一个实施方案中，抗c-met抗体的施用在紫杉烷的施用之前。在又一个实施方案中，抗c-met抗体(例如MetMAb)和紫杉烷(例如帕利他赛)的施用导致协同效应。在还有一个实施方案中,抗c-met抗体(例如MetMAb)和紫杉烷(例如帕利他赛)的施用相对于没有抗c-met抗体的治疗延长人患者的存活。在一个具体的实施方案中，无进展存活(PFS)和/或总体存活(OS)得到延长。在一些实施方案中，该治疗将PFS或OS比通过对患者施用紫杉烷实现的PFS或OS延长至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%或更多。在又一个实施方案中，并行施用抗c-met抗体、抗VEGF抗体和紫杉烧。在还有一个实施方案中，以任意次序序贯施用抗c-met抗体、抗VEGF抗体和紫杉烷。在另一个实施方案中，抗c-met抗体的施用在抗VEGF抗体和紫杉烷的施用之前。在又一个实施方案中，抗c-met抗体(例如MetMAb)、抗VEGF抗体(例如贝伐单抗)和紫杉烷(例如帕利他赛)的施用导致协同效应。在还有一个实施方案中，抗c-met抗体(例如MetMAb)、抗VEGF抗体(例如贝伐单抗)和紫杉烷(例如帕利他赛)的施用相对于没有抗c-met抗体的治疗延长人患者的存活。在一个具体的实施方案中，无进展存活(PFS)和/或总体存活(OS)得到延长。在一些实施方案中，该治疗将PFS或OS比通过对患者施用抗VEGF抗体和紫杉烷实现的PFS (progression free survival)或 OS (overallsurvival)延长至少约 5%、至少约 10%、至少约15%、至少约20%或更多。虽然本发明的方法可以在没有癌症治疗的任何其它手段的情况中，例如在没有另一种治疗剂(包括化疗剂)的情况中实施，但是该方法可以任选包含施用另一种选自下组的治疗剂化疗剂，不同的抗c-met抗体，不同的抗VEGF抗体，针对肿瘤相关抗原的抗体，抗激素化合物，心脏保护剂，细胞因子，抗血管发生剂，酪氨酸激酶抑制剂，COX抑制剂，非类固醇抗炎药，法呢基转移酶抑制剂，结合癌胚蛋白CA125的抗体，Raf或ras抑制剂，脂质体多柔比星，拓扑替康，不同的紫杉烷，治疗恶心的药物，预防或治疗皮疹的药物或标准痤疮疗法，治疗或预防腹泻的药物，降体温药物，和造血生长因子。在本发明的又一个方面，依照本文中任何实施方案的紫杉烷为例如TAXOLC 帕利他赛(Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N. J. ) > ΓΛΧΟ ! LRIiA多西他赛(Rh6ne -Poulenc Rorer, Antony, France) > 或 ABRAXANE 不含克列莫佛(Cremophor)、清蛋白改造纳米颗粒剂型帕利他赛(American PharmaceuticalPartners, Schaumberg, Illinois)。在一些实施方案中，紫杉烧为帕利他赛，以90mg/m2的剂量通过IV输注在每一个28天周期的第I天、第8天、和第15天施用。可以在要施用的混合物中使用两种或更多种紫杉烷，与抗c-met抗体和抗VEGF抗体的施用组合。在本发明的又一方面，依照本文中任何实施方案的抗体是单克隆抗体，包括嵌合、人源化或人抗体。在一个实施方案中，抗体是抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双抗体、单臂抗体、或F(ab’ )2片段。在另一个实施方案中，抗体是全长抗体，例如完整IgG抗体或 其它抗体类或同种型，如本文中定义的。在另一个实施方案中，抗体是裸抗体。在又一个实施方案中，抗体是与药物偶联的。在本发明的另一个方面，抗c-met抗体是单价、单臂抗体。本申请公开在人中施用单价单臂抗体，其包含与包含所述抗原结合臂的Fab分子相比提高所述抗体片段稳定性的Fe区。参见例如W02005/063816。全长抗体可以在一些情况中在结合靶抗原时展现激动效应(这可能是不想要的)，尽管它作为Fab片段是拮抗性抗体。参见例如美国专利No. 6，468，529。在拮抗效应是想要的治疗功能时，这种现象是不幸的。在这些情况中，单臂抗体(即包含单一抗原结合臂的抗体)的单价性状在抗体结合靶分子时导致和/或确保拮抗功能，适合于治疗需要拮抗功能和抗体的二价性导致不想要的激动效应的病理状况。此外，包含本文所述Fe区的单臂抗体特征在于与具有相似/基本上相同的抗原结合特征的Fab形式相比卓越的药动学属性(诸如延长的半衰期和/或降低的体内清除速率)，如此克服使用常规单价Fab抗体时的主要缺点。因而，在一些实施方案中，抗c-met抗体是包含Fe区的单臂抗体(即重链可变域和轻链可变域形成单一抗原结合臂)，其中Fe区包含第一和第二Fe多肽，其中第一和第二Fe多肽以复合物存在且形成与包含所述抗原结合臂的Fab分子相比提高所述抗体片段稳定性的Fe区。在一些实施方案中,抗c-met抗体为抗c_met抗体或其抗体片段,其中该抗体包含(a)第一多肽，其包含重链可变域、CHl序列和第一 Fe多肽，所述重链可变域含有序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1) ; (b)第二多肽，其包含轻链可变域和CLl序列，所述轻链可变域含有序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:2);和(c)第三多肽，其包含第二 Fe多肽，其中重链可变域和轻链可变域作为复合物存在且形成单一抗原结合臂，其中第一和第二 Fe多肽以复合物存在且形成与包含所述抗原结合臂的Fab分子相比提高所述抗体片段稳定性的Fe区。在一些实施方案中，第一多肽包含

图1(SEQ ID NO: 3)所绘Fe序列且第二多肽包含图2 (SEQ ID NO: 4)所绘Fe序列。在一些实施方案中，第一多肽包含图2 (SEQ ID NO:4)所绘Fe序列且第二多肽包含图1(SEQ ID NO: 3)所绘 Fe 序列。在一些实施方案中,抗c-met抗体为抗c_met抗体或其抗体片段,其中该抗体包含(a)包含重链可变域的第一多肽，该多肽包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:21) ; (b)包含轻链可变域的第二多肽，该多肽包含序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN·FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO: 22);和包含Fe序列的第三多肽，该多肽包含序列DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 4)，其中重链可变域和轻链可变域作为复合物存在且形成单一抗原结合臂，其中第一和第二 Fe多肽以复合物存在且形成与包含所述抗原结合臂的Fab分子相比提高所述抗体片段稳定性的Fe区。在一个实施方案中，抗c-met抗体包含重链可变域，其包含图1 (SEQ IDNO: 5, 6, 7)所绘⑶R1-HC、⑶R2-HC和⑶R3-HC序列中的一项或多项。在一些实施方案中，抗体包含轻链可变域，其包含图1 (SEQ ID NO:8，9，10)所绘CDR1-LC、CDR2-LC和CDR3-LC序列中的一项或多项。在一些实施方案中，重链可变域包含图1 (SEQ ID NO: 11，12，13，14)所绘FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和FR4-HC序列。在一些实施方案中，轻链可变域包含图1 (SEQIDNO: 15，16，17，18)所绘 FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC 和 FR4-LC 序列。在一些实施方案中，抗c-met抗体为onartuzumab (可互换称作MetMAb)。本文中描述了且本领域知道其它适合于在本发明方法中使用的抗c-met抗体。抗肝细胞生长因子(HGF)抗体也适合于在涉及抗c-met抗体的本发明方法中使用(与抗c-met抗体组合或作为抗c-met抗体的替代)。正如本领域知道的，HGF是c_met受体的配体。在一些实施方案中，抗c-met抗体包含至少一项促进抗体片段内的Fe序列异二聚化，同时将同二聚化降至最低的特征。此类特征改善免疫球蛋白群的收率和/或纯度和/或同质性。在一个实施方案中，抗体包含构成“结”和“穴”的Fe突变，如记载于W02005/063816。例如，穴突变可以是Fe多肽中的T366A、L368A和/或Y407V中的一项或多项，而结突变可以是T366W。还有一方面，依照本文中任何实施方案的抗VEGF抗体可以用VEGF特异性拮抗剂来替代，例如VEGF受体分子或嵌合VEGF受体分子，如下文描述的。在本发明方法的某些实施方案中，抗VEGF抗体为贝伐单抗。在本发明方法中有用的例示性抗体包括贝伐单抗(AVASTIN )、G6抗体、B20抗体、及其片段。在某些实施方案中，抗VEGF抗体具有包含下述氨基酸序列的重链可变区EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT NYGMNWVRQAPGKGLEffVGffINTYTGEPTY AADFKRRFTF SLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS (SEQID NO: 31)和包含下述氨基酸序列的轻链可变区DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQYSTVPffTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:32)。在本发明的另一个方面，在本文中提供的方法的一些实施方案中，患者的癌表达c-met。在一些实施方案中，来自患者的血清表达高水平的IL8(展示高水平的IL8表达，诸如IL8蛋白质表达)。在一些实施方案中，来自患者的血清表达比约150pg/ml要多的IL8，或在一些实施方案中，比约50pg/ml要多的IL8。在一些实施方案中，来自患者的血清表达比约10pg/ml、20pg/ml、30pg/ml或更多要多的IL8。用于测定IL8血清浓度的方法是本领域已知的。在一些实施方案中，来自患者的血清表达高水平的HGF (展示高水平的HGF表达，诸如HGF蛋白质表达)。在一些实施方案中，来自患者的血清表达比约5，000、10，000、或50, 000pg/ml 要多的 HGF。附图简述
图1 :描绘 MetMAb (onartuzumab 或 0Α 5ν2)的框架(FR)、CDR、第一恒定域(CL或CHl)和Fe区(Fe)的氨基酸序列。描绘的Fe序列包含“穴”(空穴)突变T366S、L368A和 Y407V，如记载于 W02005/063816。图2 :描绘包含“结”(突起)突变T366W的Fe多肽的序列，如记载于W02005/063816。在一个实施方案中，包含这种序列的Fe多肽与包含图1Fc序列的Fe多肽形成复合物以生成Fe区。图3 :描绘患者诊断、治疗分组和给药周期。BEV=贝伐单抗(bevacizumab) ;CR=完全响应；*=剂量限制毒性(dose-limiting toxicity)。图4 :描绘肿瘤负荷自基线起的变化及最佳响应，所有患者。SLD=最长直径之和；*=因剂量限制毒性而无数据；**=未进行。发明详述I 定义如本文中所使用的，除非另有说明，术语“肝细胞生长因子”或“HGF”指能够在容许HGF/c-met信号途经发生的条件下激活所述过程的任何天然或变异的(或是天然的或是合成的)HGF多肽。术语“野生型HGF” 一般指包含天然发生HGF蛋白质的氨基酸序列的多肽。术语“野生型HGF序列”一般指在天然发生HGF中发现的氨基酸序列。c-met是HGF的一种已知受体，HGF细胞内信号传导经由c-met实施生物学作用。如本文中所使用的，除非另有说明，术语“雌激素受体”或“ER”指任何天然或变异的(或是天然的或是合成的)ER多肽。术语“野生型ER” 一般指包含天然发生ER蛋白质的氨基酸序列的多肽。术语“野生型ER序列” 一般指在天然发生ER中发现的氨基酸序列。表述“ErbB2”和“HER2”在本文中可互换使用，指例如Semba等，PNAS (USA) 82:6497-6501 (1985)和 Yamamoto 等 Nature319:230-234 (1986)中记载的人HER2蛋白质(Genebank登录号X03363)。术语“erbB2”指编码人ErbB2的基因，而“neu”指编码大鼠Pl85neu的基因。优选的HER2是天然序列人HER2。如本文中所使用的，除非另有说明，术语“孕酮受体”或“PR”指任何天然或变异的(或是天然的或是合成的)PR多肽。术语“野生型PR” 一般指包含天然发生PR蛋白质的氨基酸序列的多肽。术语“野生型PR序列”一般指在天然发生PR中发现的氨基酸序列。
“天然序列”多肽包括与衍生自自然界的多肽具有相同氨基酸序列的多肽。如此，天然序列多肽可以具有来自任何哺乳动物的天然存在多肽的氨基酸序列。此类天然序列多肽可以从自然界分离，或者可以通过重组或合成手段来生产。术语“天然序列”多肽明确涵盖该多肽的天然存在的截短或分泌形式(例如胞外结构域序列)、天然存在的变体形式(例如可变剪接形式)、及天然存在的等位变体。多肽“变体”意指与天然序列多肽具有至少约80%氨基酸序列同一性的生物学活性多肽。此类变体包括例如在多肽的N-末端或C-末端添加或删除一个或多个氨基酸残基的多肽。通常，变体与天然序列多肽将具有至少约80%的氨基酸序列同一性，更优选的是，至少约90%的氨基酸序列同一性，和甚至更优选的是，至少约95%的氨基酸序列同一性。“抗c-met抗体”指任何以足够亲和力和特异性结合c_met的抗体。所选择的抗体正常情况下会具有足够强的对c-met的结合亲和力，例如抗体可以以介于IOOnM-1pM之间的Kd值结合人c-met。抗体亲和力可通过例如基于表面等离振子共振的测定法(诸如BIAcore测定法，如PCT申请公开文本No. W02005/012359中所记载的)；酶联免疫吸附测定法(ELISA);和竞争测定法(例如RIA)来测定。在某些实施方案中，抗c-met抗体能在靶向 和干扰涉及c-met活性的疾病或状况中用作治疗剂。还有，可以将所述抗体提交其它生物学活性测定法，例如为了评估它作为治疗剂的效力。此类测定法是本领域已知的，而且取决于抗体的靶抗原和预定用途。“酪氨酸激酶抑制剂”指一定程度抑制酪氨酸激酶(诸如c-met受体)的酪氨酸激酶活性的分子。蛋白质“表达”指基因中编码的信息转换成信使RNA(mRNA)，然后转换成蛋白质。在本文中，“表达”感兴趣蛋白质(诸如c-met蛋白质)的样品或细胞指其中测定出存在编码该蛋白质的mRNA或蛋白质(包括其片段)的样品或细胞。如本文中所使用的，除非另有说明，术语“白介素8”或“ IL8”或“ IL-8”指能够在容许IL8信号途经发生的条件下激活所述过程的任何天然或变异的(或是天然的或是合成的)IL8多肽。术语“野生型IL8”一般指包含天然发生IL8蛋白质的氨基酸序列的多肽。术语“野生型IL8序列”一般指在天然发生IL8中发现的氨基酸序列。 术语“ VEGF”或“ VEGF-A”用于指165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子及相关的121个、189个和206个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子，如Leung等Science, 246:1306 (1989);及 Houck 等 Mol. Endocrin. , 5:1806 (1991)所述，及其天然存在的等位基因形式和加工形式。VEGF-A是包括VEGF-B、VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F和PlGF在内的基因家族的一部分。VEGF-A主要结合两种高亲和力受体酪氨酸激酶，即VEGFR-1 (Flt-1)和VEGFR-2 (Flk-1/KDR)，后者是VEGF-A血管内皮细胞有丝分裂信号的主要递质。另外，神经毡蛋白-l(neim)pilin-l)已经被鉴定为肝素结合VEGF-A同种型(isoform)的受体，而且可在血管发育中发挥作用。术语“VEGF”或“VEGF-A”还指来自非人物种诸如小鼠、大鼠或灵长类动物的VEGF。有时，来自特定物种的VEGF表示如下，hVEGF表示人VEGF，mVEGF表示鼠VEGF。术语“VEGF”还用于指包含165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子的氨基酸第8-109位或第1-109位的截短形式多肽。本申请中可能通过例如“VEGF(8-109) ”、“VEGF(1-109) ”或“VEGF165”来鉴别任何此类形式VEGF。“截短的”天然VEGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示编号。例如，截短的天然VEGF中的第17位氨基酸(甲硫氨酸)也是天然VEGF中的第17位(甲硫氨酸)。截短的天然VEGF具有与天然VEGF相当的对KDR和Flt-1受体的结合亲和力。术语“VEGF变体”如本文中所使用的指在天然VEGF序列中包括一处或多处氨基酸突变的VEGF多肽。任选的是，所述一处或多处氨基酸突变包括氨基酸替代。为了本文中所描述的VEGF变体的速记名称的目的，应注意数字指沿推定天然VEGF氨基酸序列的氨基酸残基位直(在Leung等，见上文和Houck等，见上文中提供)。“VEGF生物学活性”包括对任何VEGF受体的结合或任何VEGF信号传导活性，诸如调节正常的和异常的血管发生(angiogenesis)和脉管发生(vasculogenesis) (Ferrara和 Davis-Smyth(1997)Endocrine Rev.18:4-25;Ferrara(1999)J. Mol. Med. 77:527-543)；促进胚胎脉管发生和血管发生(Carmeliet等(1996) Nature380:435-439; Ferrara等(1996) Nature380:439-442);及调控雌性生殖道中的和为了骨生长和软骨形成的周期性血管增殖(Ferrara 等(1998)Nature Med. 4:33 6-340;Gerber 等(1999)NatureMed. 5:623-628)。在作为血管发生和脉管发生中的血管发生因子之外，VEGF，作为多效生长因子，在生理过程诸如内皮细胞存活、血管通透性和血管舒张、单核细胞趋化性和钙流入中展现出多种生物学效应(Ferrara和Davis-Smyth (1997)，见上文；及Cebe-Suarez等Cell. Mol. LifeSc1. 63:601-615 (2006))。此外，最近的研究报道了 VEGF对少数非内皮细胞类型诸如视网膜色素上皮细胞、胰导管细胞、和许旺(Schwann)细胞的促有丝分裂效应(Guerrin 等(1995)J. Cell Physiol. 164:385-394;Oberg-Welsh 等(1997)Mol. Cell.Endocrinol. 126:125-132;Sondell 等(1999)J. Neurosc1. 19:5731-5740)。“血管发生抑制剂”或“抗血管发生剂”指或直接或间接抑制血管发生(angiogenesis)、血管生成(vasculogenesis)、或不想要的血管通透性的小分子量物质、多核苷酸、多肽、分离的蛋白质、重组蛋白、抗体、或其偶联物或融合蛋白。应当理解，抗血管发生剂包括那些结合并阻断血管发生因子或其受体的血管发生活性的药剂。例如，抗血管发生剂是上文定义的血管发生剂的抗体或其它拮抗剂，例如VEGF-A的抗体、VEGF-A受体(例如KDR受体或Flt-1受体)的抗体、抗TOGFR抑制剂诸如GLEEVEC (Imatinib Mesylate)。抗血管发生剂还包括天然血管发生抑制剂，例如血管他丁(angiostatin)、内皮他丁(endostatin)等。参见例如 Klagsbrun 和 D’Amore, Annu. Rev.Physiol. 53:217-39 (1991) ; Streit 和 Detmar, 0ncogene22:3172-3179 (2003)(例如列举恶性黑素瘤中抗血管发生疗法的表3) ; Ferrara和Alitalo, Nature Medicine5 (12) : 1359-1364(1999) ;Tonini等，0ncogene22:6549-6556 (2003)(例如列举已知抗血管发生因子的表2) ; Sato, Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206 (2003)(例如列举临床试验中所使用的抗血管发生剂的表I)。“VEGF拮抗剂”指能够中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰VEGF活性(包括其与一种或多种VEGF受体的结合)的分子(肽基或非肽基分子)。在某些实施方案中，VEGF拮抗剂将VEGF的表达水平或生物学活性降低或抑制了至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一个实施方案中，受到VEGF拮抗剂抑制的VEGF是VEGF(8-109)、VEGF(1-109)、或VEGF165。在本发明的方法中有用的VEGF拮抗剂包括特异性结合VEGF的肽基或非肽基化合物，诸如抗VEGF抗体及其抗原结合片段、特异性结合VEGF的多肽或其片段、和特异性结合VEGF由此使其隔绝与一种或多种受体(例如可溶性VEGF受体蛋白质或其VEGF结合片段，或嵌合VEGF受体蛋白质)结合的受体分子及衍生物、至少与编码VEGF多肽的核酸分子的片段互补的反义核酸寡聚物；至少与编码VEGF多肽的核酸分子的片段互补的小RNA ;祀向VEGF的核酶；针对VEGF的肽体；及VEGF适体。“抗VEGF抗体”指以足够亲和力和特异性结合VEGF的抗体。所选择的抗体通常会具有足够强的对VEGF的结合亲和力，例如，该抗体可以以介于IOOnM-1pM之间的Kd值结合hVEGF。抗体亲和力可通过例如基于表面等离振子共振的测定法(诸如PCT申请公开文本No. W02005/012359中所记载的BIAcore测定法);酶联免疫吸附测定法(ELISA);和竞争测定法(例如RIA)来测定。在某些实施方案中，本发明的抗VEGF抗体可用作治疗剂，用于靶向和干扰其中涉及VEGF活性的疾病或疾患。还有，可对该抗体进行其它生物学活性测定法，例如为了评估其作为治疗剂的效力所进行的生物学活性测定法。此类测定法是本领域已知的，而且取决于抗体的靶抗原和预定用途。例子包括HUVEC抑制测定法(如下文实施例中所描述的);肿瘤细胞生长抑制测定法(如例如W089/06692中所记载的);抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)和补体介导的细胞毒性(CDC)测定法(美国专利5，500，362);及激动 活性或造血测定法(参见W095/27062)。抗VEGF抗体通常不会结合其它VEGF同系物，诸如VEGF-B或VEGF-C，也不会结合其它生长因子，诸如P1GF、PDGF或bFGF。在某些实施方案中，抗VEGF抗体包括与杂交瘤ATCC HB10709所生成的单克隆抗 VEGF 抗体 A4. 6.1 ;依照 Presta 等 Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体结合相同表位的单克隆抗体。在一个实施方案中，抗VEGF抗体是“贝伐单抗” (Bevacizumab, BV)，也称作“rhuMAbVEGF”或.''''STiN(护，它包含突变的人IgGl框架区和来自鼠抗hVEGF单克隆抗体A. 4. 6.1 (其阻断人VEGF对其受体的结合)的抗原结合互补决定区。贝伐单抗大约93%的氨基酸序列，包括大部分框架区，衍生自人IgGl，而大约7%的序列衍生自鼠抗体A4. 6.1。贝伐单抗具有约149，000道尔顿的分子量，而且是糖基化的。贝伐单抗已经被FDA批准与化疗方案联合用于治疗转移性结肠直肠癌(CRC)和非小细胞肺癌(NSCLC) (Hurwitz等，N. Engl.J. Med. 350:2335-42 (2004) ; Sandler 等，N. Engl. J. Med. 355:2542-50 (2006))。当前，许多正在进行的用于治疗各种癌症适应症的临床试验中正在研究贝伐单抗(Kerbel，J.Clin. Oncol. 19 : 45S-51S (2001) ; De Vore 等，Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 19 : 485a.(2000);Hurwitz 等,Clin. Colorectal Cancer6:66-69(2006);Johnson 等,Proc. Am. Soc.Clin. Oncol. 20:315a(2001);Kabbinavar 等，J. Clin. Oncol. 21:60-65(2003) ;Miller等,Breast Can. Res. Treat. 94:Suppl1:S6 (2005))。贝伐单抗和其它人源化抗VEGF抗体进一步记载于2005年2月26日公告的美国专利No. 6，884，879。别的抗体包括G6或B20系列抗体(例如，G6-31、B20-4. 1)，如PCT公开文本 No. W02005/012359、PCT 公开文本 No. W02005/044853、和 US 专利申请 60/991，302中所记载的，通过述及将这些专利申请的内容明确收入本文。关于别的抗体，参见美国专利 No. 7，060，269;6, 582，959;6, 703，020;6, 054，297;W098/45332;W096/30046;W094/10202; EP0666868B1;美国专利申请公开文本 No. 2006009360, 20050186208, 20030206899, 20030190317, 20030203409,和 20050112126;及 Popkov 等，Journal of ImmunologicalMethods288:149-164 (2004)。其它抗体包括那些结合人VEGF上功能性表位的抗体，所述功能性表位包含残基？17、] 18、019、￥21、￥25、089、191、K101、E103、和C104或者包含残基F17、Y21、Q22、Y25、D63、183 和 Q89。依照本发明的“G6系列抗体”指自G6抗体的序列衍生的抗VEGF抗体或依照PCT公开文本No. W02005/012359的图7、24_26、和34-35之任一的G6衍生抗体，通过述及将其整个公开内容收入本文。还可参见PCT公开文本No. W02005/044853，通过述及将这些专利申请的内容明确收入本文。在一个实施方案中，G6系列抗体结合人VEGF上的功能性表位，该表位包含残基 F17、Y21、Q22、Y25、D63、183 和 Q89。依照本发明的“B20系列抗体”指自B20抗体的序列衍生的抗VEGF抗体或依照PCT公开文本No. W02005/012359的图27-29之任一的B20衍生抗体，通过述及将其整个公开内容收入本文。还可参见PCT公开文本No. W02005/044853和美国专利申请60/991，302，通过述及将这些专利申请的内容明确收入本文。在一个实施方案中，B20系列抗体结合人VEGF上的功能性表位，其包含残基？17、] 18、019、￥21、￥25、089、191、K101、E103、和 C104。依照本发明的“功能性表位”指抗原中有力地促进抗体结合的氨基酸残基。有力促 进抗原中残基任一个的突变(例如，通过丙氨酸或同系物突变对野生型VEGF进行的突变)会破坏抗体的结合，使得抗体的相对亲和力比值(突变型VEGF IC50/野生型VEGF IC50)会大于5(参见W02005/012359的实施例2)。在一个实施方案中，相对亲和力比是通过溶液结合噬菌体展示ELISA测定的。简言之，将96孔Maxisorp免疫板(NUNC)用Fab形式的待测试抗体以PBS中2ug/ml的浓度于4° C包被过夜，并用ros、0. 5%BSA、和O. 05%Tween20 (PBT)于室温封闭2小时。首先将展示hVEGF丙氨酸点突变体(残基8-109形式)或野生型hVEGF (8-109)的噬菌体在PBT中的连续稀释液在Fab包被的板上于室温温育15分钟，并用PBS,O. 05%Tween20 (PBST)清洗板。用在PBT中1:5000稀释的抗M13单克隆抗体辣根过氧化物酶(AmershamPharmacia)偶联物检测所结合的曬菌体,用3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺(TMB, Kirkegaard&Perry Labs, Gaithersburg, MD)底物显色大约 5 分钟，用1. 0MH3P04 淬灭，并以分光光度法于450nm读数。IC50值的比(IC50, ala/IC50, wt)代表了结合亲和力的降低倍数(相对结合亲和力)。“免疫偶联物”(可互换地称作“抗体-药物偶联物”或“ADC”)指抗体偶联至一种或多种细胞毒剂，诸如化疗剂，药物，生长抑制剂，毒素(例如蛋白质毒素，细菌，真菌，植物，或动物起源的酶活性毒素，或其片段)，或放射性同位素(即放射偶联物)。贯穿本说明书和权利要求书，免疫球蛋白重链中的残基编号方式是如Kabat 等,Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. PublicHealthService, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)(通过述及明确收入本文)中的EU索引的编号方式。“如Kabat中的EU索引”指人IgGlEU抗体的残基编号方式。术语“抗体”以最广义使用，明确覆盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、单价抗体、多价抗体、及抗体片段，只要它们展现出期望的生物学活性。“抗体片段”只包含完整抗体的一部分，其中所述部分优选保留该部分存在于完整抗体中时通常与之有关的至少一项、优选大多数或所有功能。在一个实施方案中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，如此保留结合抗原的能力。在另一个实施方案中，抗体片段，例如包含Fe区的抗体片段，保留通常与Fe区存在于完整抗体中时通常与之有关的至少一项生物学功能，诸如FcRn结合、抗体半衰期调控、ADCC功能和补体结合。在一个实施方案中，抗体片段是体内半衰期与完整抗体基本上相似的单价抗体。例如，此类抗体片段可包含一个抗原结合臂且其与能够赋予该片段以体内稳定性的Fe序列相连。在一个实施方案中，本发明的抗体是如W02005/063816中所记载的单臂抗体。在一个实施方案中，单臂抗体包含如W02005/063816中所记载的构成“结(knob) ”和“穴(hole) ”的Fe突变。例如，穴突变可以是Fe多肽中的T366A、L368A和/或Y407V中的一个或多个，而结突变可以是T366W。“阻断性”抗体或抗体“拮抗剂”指抑制或降低其所结合的抗原的生物学活性的抗体。在一些实施方案中，阻断性抗体或拮抗性抗体完全抑制抗原的生物学活性。除非另有说明，贯穿本说明书，表述“多价抗体”用于指包含三个或更多个抗原结合位点的抗体。多价抗体优选改造成具有三个或更多个抗原结合位点，而且一般不是天然序列IgM或IgA抗体。“Fv”片段是包含完整抗原识别和结合位点的抗体片段。该区域由紧密结合(该结合的本质可以是共价的，例如在scFv中)的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组 成。正是在这种构造中，每个可变域的三个⑶R相互作用而在Vh-' 二聚体表面上限定了一个抗原结合位点。六个CDR或其子集(subset) —起赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或是只包含对抗原特异性的三个CDR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，只是通常亲和力低于完整结合位点。在用于本文时，“抗体可变域”指抗体分子的轻链和重链中包含互补决定区(CDR;即CDR1、CDR2、和CDR3)和框架区(FR)氨基酸序列的那部分。重链可变域。八指轻链可变域。依照本发明所使用的方法，归为CDR和FR的氨基酸位置可以依照Kabat (Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(National Institutes ofHealth, Bethesda, Md.，1987和1991))来限定。抗体或抗原结合片段的氨基酸编号方式也依照Kabat。在用于本文时，术语“互补决定区(⑶R;即⑶R1、⑶R2、和⑶R3)指抗体可变域中其存在是抗原结合所必需的氨基酸残基。每个可变域通常具有三个CDR，鉴定为CDR1、⑶R2和⑶R3。每个互补决定区可以包含来自如Kabat定义的“互补决定区”的氨基酸残基(即大约是轻链可变域的残基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97 (L3)及重链可变域的残基 31-35(HI)、50_65(H2)和 95-102(H3) ；Kabat 等,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes ofHealth，Bethesda，MD. (1991))和/或来自“高变环”的残基(即大约是轻链可变域的残基 26-32 (LI)、50-52 (L2)和 91-96 (L3)及重链可变域的残基 26-32 (Hl)、53-55 (H2)和96-101 (H3) ;Chothia 和 Lesk, J.Mol.Biol. 196:901-917(1987))。在有些情况中，互补决定区可以包含来自Kabat定义的⑶R区和高变环二者的氨基酸。例如，抗体4D5重链的⑶RH I包含氨基酸26-35。“框架区”(以下的FR)指可变域中⑶R残基以外的残基。每个可变域通常具有四个FR，鉴定为FR1、FR2、FR3和FR4。如果CDR是依照Kabat定义的，那么轻链FR残基位于大约轻链残基 1-23 (LCFRl) ,35-49 (LCFR2) ,57-88 (LCFR3)、和 98-107 (LCFR4)，而重链 FR残基位于大约重链残基 1-30 (HCFRl) ,36-49 (HCFR2)、66_94 (HCFR3)、和 103-113 (HCFR4)。如果⑶R包含来自高变环的氨基酸残基，那么轻链FR残基位于大约轻链残基1-25 (LCFRl)、33-49 (LCFR2)、53-90 (LCFR3)、和97-107 (LCFR4)，而重链FR残基位于大约重链残基1-25 (HCFRl)、33-52 (HCFR2)、56-95 (HCFR3)、和 102-113 (HCFR4)。在有些情况中，在 CDR包含来自Kabat定义的⑶R和高变环二者的氨基酸时，FR残基将做相应的调整。例如，当CDRHl包含氨基酸H26-H35时，重链FRl残基位于1_25位，而FR2残基位于36-49位。“Fab”片段包含轻链的可变域和恒定域及重链的可变域和第一恒定域(CHl)。F(ab' )2抗体片段包含一对Fab片段，这对Fab片段一般通过它们之间的铰链半胱氨酸在它们羧基末端附近共价连接。本领域还知道抗体片段的其它化学偶联形式。如本文中使用的，短语“抗原结合臂”指本发明的抗体片段有能力特异性结合感兴趣靶分子的组成部分。一般地且优选地，抗原结合臂是免疫球蛋白多肽序列(例如免疫球蛋白轻链和重链CDR和/或可变域序列)的复合物。如本文中使用的，短语“N端截短的重链”指包含部 分但非整个全长免疫球蛋白重链的多肽，其中缺失的部分是那些在正常情况中位于重链N端区的。缺失的部分可包括但不限于可变域、CH1、和部分或整个铰链序列。一般地，如果野生型铰链序列不存在，那么N端截短的重链中的剩余恒定域会包含能够连接另一 Fe序列(即本文中描述的“第一” Fe多肽)的成分。例如，所述成分可以是能够形成二硫化物连接的添加的半胱氨酸残基或经修饰残基。如本文中所使用的，术语“Fe区” 一般指包含免疫球蛋白重链C端多肽序列的二聚体复合物，其中C端多肽序列是通过木瓜蛋白酶消化完整抗体可获得的。Fe区可包含天然或变体Fe序列。虽然免疫球蛋白重链的Fe序列的边界可以有所变化,但是人IgG重链Fe序列通常定义为Fe序列自位于大约位置Cys226的氨基酸残基,或自大约位置Pro230,至羧基端的区段。Fe区的C端赖氨酸(依照EU编号系统的残基447)可以消除，例如在抗体纯化期间，或者通过对编码抗体的核酸进行重组工程改造消除。因而，依照本发明包含具有Fe区的抗体的组合物可包含具有K447的抗体、消除了所有K447的抗体、或有和无K447残基的抗体的混合物。免疫球蛋白的Fe序列一般包含两个恒定域，CH2域和CH3域，且任选包含CH4域。“Fe多肽”在本文中指构成Fe区的多肽之一。可以自任何合适的免疫球蛋白获得Fe多肽，诸如IgG1, IgG2, IgG3,或IgG4亚型，IgA, IgE, IgD或IgM0在一些实施方案中，Fe多肽包含部分或整个野生型铰链序列(一般位于其N端)。在一些实施方案中，Fe多肽不包含功能性或野生型铰链序列。术语“Fe受体”和“FcR”用于描述能结合抗体Fe区的受体。例如，FcR可以是天然序列人FcR。一般地，FcR是能结合IgG抗体的FcR( Y受体)，包括Fe Y R1、Fe Y RII和Fe Y RIII亚类的受体，包括这些受体的各等位变体和各可变剪接形式。FcyRII受体包括Fe YRIIA(“活化受体”)和Fe Y RIIB (“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在于其胞质结构域。某些FcR还能结合其它同种型的免疫球蛋白(参见例如Janeway等，ImmunoBiology:the immunesystem in health and disease, (Elsevier Science Ltd. , NY)(4thed.，1999))。活化受体Fe Y RIIA在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体Fe Y RIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(综述见 Da e ron, Annu. Rev.1mmunol. 15:203-234 (1997) )。FcR 的综述参见 Ravetch和 Kinet, Annu. Rev.1mmunol. 9:457-492 (1991) ; Capel 等，Immunomethods4:25-34 (1994);及 de Haas 等，J. Lab. Clin. Med. 126: 330-341 (1995)。术语“FcR”在本文中涵盖其它 FcR,包括那些未来将会鉴定的。该术语还包括新生儿受体，FcRn，其负责将母体IgG转移给胎儿(Guyer 等,J.1mmunol. 117:587 (1976);及 Kim 等,J.1mmunol. 24:249 (1994))。如本文中所使用的，“铰链区”，“铰链序列”，及其变化形式包括本领域知道的含义，其例不于例如 Janeway 等，Immuno Biology: the immune system inhealth anddisease, (Elsevier Science Ltd.，NY)(第 4 版，1999) ;Bloom 等，ProteinScience (1997)
,6:407-415 !Humphreys 等，J.1mmunol. Methods(1997), 209:193-202。“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的Vh和\结构域，其中这些结构域存在于一条多肽链上。一般而言，Fv多肽在Vh与\结构域之间进一步包含多肽接头，其使得scFv能够形成结合抗原的期望结构。关于scFv的综述参见Pluckthun,于《The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies》，第 113 卷，Rosenburg 和 Moore 编，Springer-Verlag, New York,第 269-315 页，1994。术语“双抗体”指具有两个抗原结合位点的小型抗体片段，该片段在同一条多肽链(%及')中包含相连的重链可变域(Vh)和轻链可变域(')。通过使用过短的接头使得同一条链上的两个结构域之间不能配对，迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对，从而产生两个抗原结合位点。双抗体更完整的记载于例如EP404，097 ；W093/11161 ；Hollinger等，Proc. Natl. Acad. Sc1. USA90:6444-6448 (1993)。表述“线性抗体”指Zapata 等，Protein Eng.，8 (10) : 1057-1062 (1995)中所描述的抗体。简言之，这些抗体包含一对串联的Fd区段(Vh-Ch1-Vh-ChI),该区段与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的，或者是单特异性的。修饰语“单克隆”指示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，有待依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法(例如Kohler和Milstein. , Nature, 256:495-97(1975) ；Hongo 等,Hybridoma, 14(3):253-260(1995), Harlow 等,Antibodies:ALaboratory Manual, (Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 2nd ed. 1988) ；HammerIing等，in:Monoclonal Antibodies and T-CellHybridomas563-681(Elsevier, N. Y. , 1981))>重组DNA法(参见例如美国专利No. 4，816，567)、噬菌体展示技术(参见例如Clackson等，Nature352:624-628(1991) ；Marks 等，J.Mol. Biol. 222:581-597 (1992) ；Sidhu 等，J.Mol. Biol. 338(2) : 299-310 (2004) ；Lee 等，J. Mol. Biol. 340 (5) : 1073-1093 (2004)；Fellouse, Proc. Nat. Acad. Sc1. USAlOl (34) : 12467-12472 (2004) ；Lee 等,J.1mmunol.Methods284 (1-2) : 119-132 (2004))、及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术(参见例如W01998/24893 ；W01996/34096 ；W01996/33735 ；W01991/10741 Jakobovits 等,Proc. Natl.Acad. Sc1. USA90:2551 (1993) ；Jakobovits 等，Nature362:255-258(1993) ；Bruggemann等，Yearinlmmunol. 7:33(1993);美国专利 No. 5，545，807 ;5，545，806 ;5，569，825 ;5，625，126 ;5，633，425 ;5，661，016 ;Marks 等,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg 等，Nature368:856-859 (1994) ；Morrison, Nature368:812-813 (1994)；FishwiId 等，Nature Biotechnol. 14:845-851 (1996) ；Neuberger,NatureBiotechnol. 14:826(1996) ;Lonberg 和 Huszar,Intern.Rev.1mmunol. 13:65-93(1995))。单克隆抗体在本文中明确包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(参见例如美国专利No. 4，816，567 ;及Morrison 等，Proc. Natl. Acad. Sc1. USA81:6851-6855 (1984))。嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其中抗体的抗原结合区衍生自通过用感兴趣抗原免疫短尾猴(macaque monkey)而生成的抗体。非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的高变区残基用具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类的高变区残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有发现的残基。进行这些修饰是为了进一步改进抗体的性能。通常，人源化抗体包含至少一个、通常两个基本上整个如下可变区，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白 的高变环，且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见Jones等,Nature321:522-525(1986) ；Riechmann 等,Nature332:323-329(1988) ；Presta, Curr.Op.Struct. Biol. 2:593-596(1992)。“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成。在一个实施方案中，人抗体是从噬菌体文库选择的，该噬菌体文库表达人抗体(Vaughan 等，Nature Biotechnology14:309-314(1996) ； Sheets 等，Proc. Natl. Acad.Sc1. 95:6157-6162(1998) ；Hoogenboom 和 Winter, J. Mol. Biol.227:381 (1991) ；Marks等，J.Mol.Biol. 222:581 (1991))。人抗体还可通过将人免疫球蛋白基因座导入内源免疫球蛋白基因已经部分或完全灭活的转基因动物(例如小鼠)来生成。在受到攻击时，观察到人抗体生成，它在所有方面与在人体中看到的极其相似，包括基因重排、装配和抗体全集。这种方法记载于例如美国专利No. 5，545，807 ;5，545，806 ;5，569，825 ;5，625，126 ；5，633，425 ;5，661，016，及以下科学出版物=Marks 等，Bio/TechnologylO: 779-783 (1992)；Lonberg 等，Nature368:856-859(1994) ；Morrison,Nature368:812-13(1994)；Fishwild 等,Nature Biotechno Iogy14:845-5 I (1996) ；Neuberger, NatureBiotechnologyl4:826(1996) ；Lonberg 和 Huszar, Intern. Rev.1mmunol. 13:65-93(1995)。或者，人抗体可通过生成针对靶抗原的抗体的人B淋巴细胞的永生化来制备(此类B淋巴细胞可从个体回收，或者可在体外免疫)。参见例如Cole等，Monoclonal Antibodies andCancerTherapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) ;Boerner 等，J.1mmunol. 147 (I) : 86-95 (1991)；及美国专利No. 5，750, 373。“裸抗体(裸露的抗体)”指未偶联异源分子诸如细胞毒性模块或放射性标记物的抗体。“亲和力成熟的”抗体指在抗体的一个或多个CDR中具有一处或多处改变、导致该抗体对抗原的亲和力与没有这些改变的亲本抗体相比有所改进的抗体。优选的亲和力成熟的抗体将具有纳摩尔或甚至皮摩尔量级的对靶抗原的亲和力。亲和力成熟的抗体可通过本领域已知规程来生成。Marks等，Bio/TechnologylO: 779-783 (1992)记载了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。以下文献记载了 CDR和/或框架残基的随机诱变Barbas 等,Proc. Nat. Acad. Sc1. USA91:3809-3813 (1994) ；Schier等，Genel69:147-155 (1995) ；Yelton 等，J.1mmunol. 155:1994-2004 (1995) Jackson等，J.1mmunol. 154(7):3310-9(1995) ；Hawkins 等，J. Mol. Biol. 226:889-896(1992)。具有指定抗体的“生物学特征”的抗体指拥有该指定抗体区别于其它结合相同抗原的抗体的一项或多项生物学特征的抗体。为了筛选结合抗原上感兴趣抗体所结合的表位的抗体，可以实施常规交叉阻断测定法，诸如 Antibodies, ALaboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory, Ed Harlow和David Lane (1988)中所记载的。
抗体的“功能性抗原结合位点”指能够结合靶抗原的位点。抗原结合位点的抗原结合亲和力不必像衍生该抗原结合位点的亲本抗体那样强，但是结合抗原的能力必须是使用已知用于评估抗体对抗原结合的多种方法之任一可测量到的。此外，本文中多价抗体的每个抗原结合位点的抗原结合亲和力不必在量上相同。对于本文中的多聚体抗体，功能性抗原结合位点的数目可以使用超速离心分析来评估，如美国专利申请公开文本No. 20050186208中所记载的。依照这种分析方法，将靶抗原与多聚体抗体以不同比例混合，并计算复合物的平均分子量，其中假设不同数目的功能性结合位点。将这些理论值与得到的实际实验值进行比较以评估功能性结合位点的数目。“物种依赖性抗体”指这样一种抗体，其对来自第一哺乳动物物种的抗原具有强于对来自第二哺乳动物物种的该抗原同系物的结合亲和力。通常，物种依赖性抗体“特异性结合”人类抗原(即具有不超过约1χ10_7Μ，优选不超过约1χ10_8Μ，最优选不超过约1x10_9M的结合亲和力(Kd))，但对来自第二非人哺乳动物物种的该抗原同系物具有比其对人类抗原的结合亲和力弱至少约50倍，或至少约500倍，或至少约1000倍的结合亲和力。物种依赖性抗体可以是如上定义的各种类型的抗体。在一个实施方案中，物种依赖性抗体是人源化抗体或人抗体。在用于本文时，“抗体突变体”或“抗体变体”指物种依赖性抗体的氨基酸序列变体，其中物种依赖性抗体的一个或多个氨基酸残基发生了修饰。此类突变体与物种依赖性抗体必然具有小于100%的序列同一性或相似性。在一个的实施方案中，抗体突变体所具有的氨基酸序列与物种依赖性抗体的重链可变域或轻链可变域的氨基酸序列具有至少75%、更优选至少80%、更优选至少85%、更优选至少90%、最优选至少95%的氨基酸序列同一'丨生或相似性。关于此序列的同一性或相似性在本文中定义为在比对序列并在必要时引入缺口以实现最大百分比序列同一性后，候选序列中与物种依赖性抗体残基相同(即相同残基)或相似(即根据共同侧链特性来自同一组的氨基酸残基，见下文)的氨基酸残基的百分比。N-末端、C-末端、或对可变域(区)之外的抗体序列内部的延伸、删除、或插入都不应视为影响序列同一'I"生或相似性。“嵌合VEGF受体蛋白”指具有衍生自至少两种不同蛋白质(其中至少一种是VEGF受体蛋白)的氨基酸序列的VEGF受体分子。在某些实施方案中，嵌合VEGF受体蛋白能够结合VEGF并抑制VEGF的生物学活性。
“分离的”多肽或“分离的”抗体指已经鉴定且与/由其天然环境的一种成分分开和/或回收的。多肽或抗体的天然环境的污染性成分指将会干扰其诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将多肽或抗体纯化至(I)根据Lowry法的测定，多肽或抗体重量超过95%且最优选重量超过99%，(2)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据使用考马斯蓝或优选的银染色的还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE，达到同质。既然多肽的天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的多肽或抗体包括重组细胞内的原位多肽或抗体。然而，分离的多肽或抗体通常通过至少一个纯化步骤来制备。如本文中所使用的，术语“生物标志物”或“标志物” 一般指其在哺乳动物组织或细胞中或上的表达或分泌可以通过已知方法(或本文中所公开的方法)来检测且预示或可用于预测(或帮助预测)细胞、组织或患者对治疗方案的响应性的分子，包括基因、mRNA、蛋白质、碳水化合物结构、或糖脂。“患者样品”指从癌症患者得到的相似细胞的集合。组织或细胞样品的来源可以是实体组织，像来自新鲜的、冷冻的和/或保存的器官或组织样品或 活检样品或穿刺样品；血液或任何血液组分；体液，诸如脑脊液、羊膜液(羊水)、腹膜液(腹水)、或间隙液；来自受试者的妊娠或发育任何时间的细胞。组织样品可能包含在自然界中天然不与组织混杂的化合物，诸如防腐剂、抗凝剂、缓冲剂、固定剂、营养物、抗生素、等等。肿瘤样品的例子在本文中包括但不限于肿瘤活检、循环中的肿瘤细胞、血清或血浆、循环中的血浆蛋白质、腹水、衍生自肿瘤或展现出肿瘤样特性的原代细胞培养物或细胞系，以及保存的肿瘤样品，诸如福尔马林固定的、石蜡包埋的肿瘤样品或冷冻的肿瘤样品。在一个实施方案中，所述样品包含3N MBC肿瘤样品。患者对药物治疗的“有效响应”或“响应性”及类似用语指在施用癌症药物后对处于癌症(例如3N MBC)风险或患有癌症(例如3N MBC)的患者给予的临床或治疗好处。此类好处包括如下任何一项或多项延长存活(包括总体存活和无进展存活)；导致客观响应(包括完全响应或部分响应);或改善癌症体征或症状，等。在一个实施方案中，使用生物标志物(例如c-met表达，例如使用IHC测定的)来鉴定预期在用药物(例如抗c-met抗体)治疗时相对于不以相同水平表达该生物标志物的患者具有更大无进展存活(PFS)的患者。在一个实施方案中，使用生物标志物来鉴定预期在用药物治疗时相对于不以相同水平表达该生物标志物的患者具有更大总体存活(OS)的患者。本文中生物标志物的发生有效预测或以高灵敏度预测此类有效响应。“处理”和“治疗”(treatment)指治疗性处理和预防性措施二者。需要治疗的受试者包括那些早就患有良性、癌前、或非转移性肿瘤的以及要预防发生或复发的。术语“治疗有效量”指在哺乳动物中治疗或预防疾病或病症的治疗剂量。在癌症的情况中，治疗有效量的治疗剂可减少癌细胞的数目；缩小原发性肿瘤的尺寸；抑制(即一定程度的减缓，优选阻止)癌细胞浸润入周围器官；抑制(即一定程度的减缓，优选阻止)肿瘤转移；一定程度的抑制肿瘤生长；和/或一定程度的减轻一种或多种与病症有关的症状。根据药物可阻止现有癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度，它可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。对于癌症疗法，体内功效可以通过例如评估存活持续时间、距疾病进展的时间(TTP)、响应率(RR)、响应持续时间、和/或生活质量来测量。术语“癌(症)”和“癌(性)的”指向或描述哺乳动物中典型的以不受调节的细胞生长为特征的生理疾患。此定义中包括良性和恶性癌症。“早期癌症”或“早期肿瘤”指非侵入性的或转移性的，或者归为O期、I期、或II期癌症的癌症。癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤(包括髓母细胞瘤和视网膜母细胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜细胞肉瘤)、神经内分泌肿瘤(包括类癌瘤、胃泌素瘤和胰岛细胞癌)、间皮瘤、施旺氏细胞瘤(包括听神经瘤)、脑膜瘤、腺癌、黑素瘤、和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌包括小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺的腺癌和肺的鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric或stomach cancer)包括胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer或hepaticcarcinoma)、膀胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney或renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肛门癌、阴茎癌、睾丸癌、食道癌、胆管肿瘤、及头和颈癌。在一些实施方案中，癌症是三重阴性转移性乳腺癌，包括任何经组织学确认的具有局部复发性转移性疾病的三 重阴性(ER-、PR-、HER2_)乳腺癌，例如局部复发疾病不适合具有治愈目的的切除术的情况。“转移”指癌自其原发部位传播至身体中的其它位置。癌细胞能脱离原发性肿瘤，渗透入淋巴和血管，经由血流而循环和在身体中其它地方的正常组织中的远端病灶(转移)中生长。转移可以是局部的或远端的。转移是一个连续过程，视肿瘤细胞自原发性肿瘤脱落、经由血流而传播、并在远端部位停止而定。在新的部位，该细胞建立血供且能生长至形成危及生命的团块。在本文中“病情进展前时间”(time to disease progression)或“TTP”指自初始治疗(例如使用抗c-met抗体,诸如MetMAb)时起,到癌症进展(progress)或恶化(worsen)止的时间，一般以周或月计。这样的进展可以由熟练临床医师来评估。例如，在三重阴性转移性乳腺癌的情况中，可以通过RECIST来评估进展。“延长TTP”意味着使接受治疗的患者的病情进展前时间相对于未接受治疗的患者(即相对于未用抗C-met抗体,诸如MetMAb治疗的患者)、和/或相对于用已获批准的抗肿瘤剂治疗的患者有延长。“存活”(survival)指患者保持存活,而且包括总体存活(overall survival)和无进展存活(progress free survival)。“总体存活”指保持一定时期诸如I年、5年等存活的患者，自诊断或治疗时起计
笪
ο“无进展存活”指保持存活且癌症没有进展或恶化的患者。“延长存活”意味着使接受治疗的患者的总体存活或无进展存活相对于未接受治疗的患者(即相对于未用抗c-met抗体,诸如MetMAb治疗的患者),和/或相对于用已获批准的抗肿瘤剂治疗的患者有延长。“客观响应”(objective response)指可测量的响应,包括完全响应(CR)或部分响应。“完全响应"(complete response)或“CR”指癌症的所有体征响应治疗而消失。这并不总是意味着癌症已经治愈。“部分响应”(partial response)指一处或多处肿瘤或损害的大小或体内癌症的程度响应治疗而减小。
“原发性肿瘤”或“原发性癌”指初始的癌症，而不是位于受试者身体中另一组织、器官、或位置中的转移病灶。“受试者”指哺乳动物，包括但不限于人或非人哺乳动物，诸如牛，马，犬，绵羊，或猫。优选地，受试者是人。在本文中，患者也是受试者。术语“抗癌疗法”指在治疗癌症中有用的疗法。抗癌治疗剂的例子包括但不限于例如化疗剂、生长抑制剂、细胞毒剂、放射疗法中所使用的药剂、抗血管发生剂、凋亡剂、抗微管蛋白剂、和其它治疗癌症的药剂，抗CD20抗体、血小板衍生生长因子抑制剂(例如Gleevec (Imatinib Mesylate) )、C0X-2 抑制剂(例如 celecoxib)、干扰素、细胞因子、结合一种或多种以下靶物的拮抗剂(例如中和性抗体)(ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR- β、BlyS、APRIL、BCMA受体、TRAIL/Apo2)、和其它生物活性和有机化学剂，等。本发明还包括它们的组合。术语“细胞毒剂”在用于本文时指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞破坏的物质。该术语意图包括放射性同位素(例如Im、I125、Y9°和Re186)、化疗剂、和毒素诸如细菌、真 菌、植物或动物起源的酶活毒素或其片段。“化疗剂”指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的例子包括可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的例子包括烧化剂类(alkylating agents),诸如塞替派(thiotepa)和CYTOXAN 环磷酰胺(cyclophosphamide);磺酸烧基酯类(alkyl sulfonates)，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan);氮丙唳类(aziridines),诸如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa);乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines),包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(triethyIenephosphoramide)、三乙撑硫代憐酉先胺(triethyIenethiophosphoramide)和三轻甲蜜胺(trimethylolomelamine);番蒸枝内酯类(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));喜树喊(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan));苔藓抑素(bryostatin) ；callystatin ；CC-1065 (包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物);隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素I和隐藻素8);多拉司他汀(dolastatin) ；duocarmycin(包括合成类似物，Kff-2189 和 CB1-TM1);艾槽塞洛素(eleutherobin) ；pancratistatin ；sarcodictyin ;海绵抑素(spongistatin);氮芥类(nitrogen mustards),诸如苯丁酸氣芥(chlorambucil)、蔡氣芥(chlornaphazine)、胆憐酸胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环憐酸胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆留醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲憐胺(trofosfamide)、尿卩密唳氮芥(uracil mustard);亚硝脲类(nitrosoureas),诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(Iomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(例如加利车霉素(calicheamicin),尤其是加利车霉素Y II 和加利车霉素 ω Il (参见例如 Agnew(1994)Chem.1ntl. Ed. Engl. 33:183-186);蒽环类抗生素(dynemicin),包括dynemicin A ; 二膦酸盐类(bisphosphonates),诸如氯0 _ (StrePtOZOCin) Λ^雖贫 _ (tubercidin) > 啦讲#迎(UbenimeX) Λ)#·^#τ(ZinOStatin) y^BttM (ZOrUbiCin) ；ifc^ili#狀，i錄咎霜厚(methotrexate)菩 5-ρ 細羅潘(5-FU)；寻驟狀竞蓉二錄咎h^p+驟 (denopterin) λ 霜厚(methotrexate) λ霜相厚(PterOPterin) λ⑴ ￥ ^(trimetrexate) ； 厚E竞蓉，i錄咎麯辟弹骑(fludarabine) λ6丨鐵_礙厚(mercaptopurine) >薪# 厚(thiamiprine) >薪娘 厚(thioguanine) ；&!'潘E竞蓉、i錄咎艰到#.骑(ancitabine) ^_ (azacitidine) λ6- ^0_ (SaUridine) λIw-M^ (CarmOfUr) λν"ιι^_ (Qytarabine) >^薄 細 _ (dideoxyuridine) Λ^ ρ 細_ (doxifluridine) λ 贫酿#骑(enocitabine) >麯細 _ (fpoxuridine);潘簿 ^, i錄咎木#搬園(CalUSterOne) Λ3Μ_#潘 (dromostanolone propionate) >^薪^ (epitiostanol) λ#^§5(mepitiostane) >*^1廳(Γ+① 5cH-*sr+ 口①);郭^_^编^,酿咎娜·沐雄(旨Μ·口 cgH-1口Γ+① ι曰IQ-①r^^lffi(mitotane) λ ^^[ffi(trilostane) ；^驟^^逢二撕咎^寻驟(folinic acid);職趣廳^1蹈雕(ace glatone) ；mBs猜離_ (^0-。^。3^口曰IQ-①glycoside) ; _ ZJsaM(aminolevulinic acid) ;5S^0B1S(eniluracil) ；^PY潘(amsacrine) ;bestrabucil ;bcvHi^(bisantrene);贫^ ^(edatraxate) ；SBS猜(Q-gfsfamide);薛#^#(demecolcine);薛 PYms (diaziquone) ;elf〇rnithine ;|對連職雜(elliptinium acetate)；游结獅 (epothilone)；贫^茶· (etoglucid)；哉驟潇； IR (hydroxyurea) ；#甜^|| (Ientinan) ； ^辟潘(IOnidamine) ；^^7K 姊味蓉EE(maytansinoids), i撕咎#§ (maytansine)菩^隊爾 (ansamitocin);沐弟箕攝(mitoglmzone);沐^_画酬(mitoxantrone) ；M薄；ii SI (mopidamol) - Π 0哉^潘(nitracrine) ;_^#τ (PentOStatin) ；ΜΜ 鐵？f (Phenamet) ; Ptt 洲 bcv_(PirarUbiCin) ； _ pt画酬(IOSOXantrOne) ； ^,rcM(Podophyllinic acid) ；2| Zj ^薄每(ethylhydrside);刻士 EJ# (procarbazine) ; PSKK 娘 φ#(JHS NaturalProducts, Eugene, OR) ;_爾味(rsoxane) ；|网獅 (rhizoxin) ;m爾S-(gs*〇f iran);藏靜碟(SPirOgermaniUm)；笛)<>潘^爾園驟(tenuazonic acid) ；m^猜 IS (triaziquone);luk -mMmsi 難菡 _ 滌 arichothecenes) Ot 斛裥 TI2 挪 .淨菡 _ (VerrUCarin)>1-HS爾 (roridin)A^^AMlffl^ (anguidin)) ；JPi^[ffi(Urethan)；沐#薛#(VindeSine) ;; ^Ε (ts『l3azine) ；4職触迎 tM(曰 annomustine) th0^0
25醇(mitobronitol) ;二溴卫矛醇(mitolactol);哌泊溴烧(pipobroman) ；gacytosine ;阿糖胞苷(arabinoside) ( “Ara_C”)；环憐酸胺(cyclophosphamide);塞替派(thiotepa)；紫杉烧类(taxanes),例如 TAXOL 帕利他赛(paclitaxel) (Bristol-Myers SquibbOncology, Princeton, N. J.)、ABRAXANE 不含克列莫佛(Cremophor)、清蛋白改造纳米颗粒剂型帕利他赛(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)和TAXOTERE 多西他赛(doxetaxel) ( Rhone -Poulenc Rorer, Antony, France)；苯丁酸氮芥(chlorambucil) ； GEMZAR 吉西他滨(gemcitabine) ；6-硫鸟嘌呤(thioguanine);巯基嘌呤(mercaptopurine);甲氨蝶呤(methotrexate);钼类似物，诸如顺钼(cisplatin)和卡钼(carboplatin);长春喊(vinblastine);钼(platinum);依托泊苷(etoposide) (VP-16);异环磷酰胺(ifosfamide);米托蒽酉昆(mitoxantrone);长春新碱(vincristine) ； NAVELBINE 长春瑞滨(vinorelbine);能灭瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide);依达曲沙(edatrexate);道诺霉素(daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin);希罗达(xeloda);伊本勝酸盐(ibandronate);伊立替康(irinotecan)(Camptosar, CPT-1I)(包括伊立替康及5-FU和亚叶酸的治疗方案)；拓扑异构酶抑制 剂RFS2000 ;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);类视黄酸类(retinoids),诸如视黄酸(retinoic acid);卡培他滨(capecitabine);考布他汀(combretastatin);亚叶酸(Ieucovorin)(LV);奥沙利钼(oxaliplatin)，包括奥沙利钼治疗方案(FOLFOX) ;PKC-a、Raf、H-Ras、EGFR(例如Erlotinib (Tarceva )和VEGF-A的、降低细胞增殖的抑制剂；及任何上述物质的药剂学可接受的盐、酸或衍生物。该定义还包括作用于调节或抑制激素对肿瘤作用的抗激素剂诸如抗雌激素类和选择性雌激素受体调控物类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADLX: 他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4_轻基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene);抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、MEGASE 醋酸甲地孕酮(megestrolacetate) > AROMASIN 依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozolc)、RIV丨S( )R伏罗唑(vorozole)、FEMARA 来曲唑(letrozole)和 ARlMiDEX 阿那曲唑(anastrozole);抗雄激素类，诸如氟他米特(fIutamide)、尼鲁米特(niIutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(Ieuprolide)、和戈舍瑞林(goserelin);以及曲沙他滨(troxacitabine) (1，3_ 二氧戍环核苷胞喃唳类似物)；反义寡核苷酸,特别是抑制牵涉异常(abherant)细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α、Raf和H-Ras ;核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如ANGIOZYME 核酸)和HER2表达抑制剂；疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如ALLOVECTIN 疫苗、LEUVECTIN 疫苗和 VAXID 疫苗；PROLEUMN rIL-2 ; LURTOTECAN 拓扑异构酶 I 抑制剂；ABAREL1X rmRH ;长春瑞滨(Vinorelbine)和埃斯波霉素(Esperamicins)(见美国专利No. 4，675，187);及任何上述物质的药剂学可接受的盐、酸或衍生物。术语“前体药物”在用于本申请时指与母药(parent drug)相比对肿瘤细胞的细胞毒性较小并能够酶促活化或转变为更具活性母药形式的药用活性物质的前体和衍生物形式。参见例如 Wilman, “Prodrugs in CancerChemotherapy^ , Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615thMeeting Belfast (1986)和 Stella 等，“Prodrugs: AChemical Approach to TargetedDrug Delivery，，，Directed Drug Delivery, Borchardt等，(ed. )，pp. 247-267，Humana Press (1985)。本发明的前体药物包括但不限于含磷酸盐/酯前体药物、含硫代磷酸盐/酯前体药物、含硫酸盐/酯前体药物、含肽前体药物、D-氨基酸修饰前体药物、糖基化前体药物、含β_内酰胺前体药物、含任选取代苯氧基乙酰胺的前体药物或含任选取代苯乙酰胺的前体药物、可转化为更具活性而无细胞毒性的药物的5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿苷前体药物。可衍生为本发明使用的前体药物形式的细胞毒性药物的例子包括但不限于上文描述的那些化疗剂。术语“并行”在本文中用于指使用两种或更多种治疗剂，其中至少部分施用在时间上交叠。因而，并行施用包括如下的剂量给药方案，一种或多种药剂的施用中断后施用一种或多种其它药剂。“放射疗法”或“放疗”指使用定向伽马射线或贝塔射线来诱发对细胞的足够损伤，以限制细胞正常发挥功能的能力或全然破坏细胞。应当领会，本领域知道许多方式来 确定治疗的剂量和持续时间。典型的治疗作为一次施用来给予，而典型的剂量范围为每天10-200个单位(戈瑞(Gray))。“ 降低或抑制”指引起 20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或更多的总体降低的能力。降低或抑制可以指所治疗的病症的症状、转移的存在或大小、或原发性肿瘤的大小。“延长存活(extending survival) ”或“提高存活可能性”意味着使接受治疗的患者的PFS和/或OS相对于未接受治疗的患者(例如相对于未用抗c-met抗体治疗的患者)或相对于对照治疗方案(诸如只用化疗剂的治疗，诸如乳腺癌的标准治疗中使用的那些)有延长或提高。存活在治疗启动之后或在初始诊断之后监测至少约I个月、2个月、4个月、6个月、9个月、或至少约I年、或至少约2年、或至少约3年、或至少约4年、或至少约5年、或至少约10年、等。对于本发明的方法，术语“指导”患者意味着通过任何手段，但是优选书面地，诸如以包装插页或其它书面推广材料的形式提供关于可应用疗法、药疗、处理、处理方案、等等的指导。对于本发明的方法，术语“宣传(promoting) ”意味着通过任何手段，包括书面地，诸如以包装插页的形式提供、登广告、出售、或描述特定药物、药物组合、或治疗模态。宣传在本文中指治疗剂，诸如抗c-met抗体、抗VEGF抗体和紫杉烧或诸如抗c_met抗体和紫杉烷用于适应证，诸如乳腺癌治疗的宣传，其中此类宣传得到食品和药品管理局(FDA)批准，认为已证明与受试者群体中统计上显著的治疗功效和可接受的安全性有关。术语“销售”在本文中用于描述产品(例如药物)的宣传、出售或分发。销售具体包括目的在于包装、登广告、和任何使产品商业化的商业活动。受试者“群体”指一组癌症受试者，诸如临床试验中的，或对特定适应证诸如乳腺癌疗法FDA批准之后肿瘤学家看到的。术语“静脉内输注”指以超过约5分钟的一段时间，优选30-90分钟，将药物导入动物或人患者的静脉，尽管依照本发明，静脉内输注或可施用10小时或更短时间。
术语“静脉内推注”或“静脉内快速注射”指在约15分钟内或更短时间，优选5分钟或更短时间，将药物施用到动物或人的静脉中使得机体接受药物。术语“皮下施用”指通过自药物容器的相对较慢的、持续递送，将药物导入动物或人患者的皮肤下，优选在皮肤和皮下组织间的袋内。所述袋可通过夹起或拉起皮肤并远离皮下组织来创建。术语“皮下输注”指以一段时间，包括但不限于30分钟或更短，或者90分钟或更短，通过自药物容器的相对较慢的、持续递送，将药物导入动物或人患者的皮肤下，优选在皮肤和皮下组织间的袋内。任选的是，输注可通过植入动物或人患者皮肤下的药物递送泵的皮下植入来进行，其中所述泵以预定的一段时间，诸如30分钟、90分钟、或跨越治疗方案持续时间的一段时间，递送预定量的药物。术语“皮下推注”指将药物施用至动物或人患者的皮肤下，其中推注药物递送优选 短于约15分钟，更优选短于5分钟，最优选短于60秒。施用优选在皮肤和皮下组织间的袋内，其中所述袋可通过例如夹起或拉起皮肤并远离皮下组织来创建。治疗剂本发明的特征在于例如抗c-met抗体和紫杉烷在治疗患者中病理状况(诸如三重阴性转移性乳腺癌)的联合疗法中的用途。本发明的特征还在于例如抗c-met抗体、VEGF拮抗剂(诸如抗VEGF抗体)和紫杉烷在治疗患者中病理状况(诸如三重阴性转移性乳腺癌)的联合疗法中的用途。抗c-met 抗体在本发明的方法中有用的抗c-met抗体包括任何以足够亲和力和特异性结合c-met且能降低或抑制一种或多种c-met活性的抗体。抗c_met抗体可用于调控HGF/c-met相关效应的一个或多个方面，包括但不限于c-met活化、下游分子信号传导(例如丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)磷酸化)、细胞增殖、细胞迁移、细胞存活、细胞形态发生和血管发生。这些效应可通过任何生物学相关机制来调控，包括破坏配体(例如HGF)结合c-met、c-met磷酸化和/或c-met多聚化。所选择的抗体正常情况下会具有足够强的对c-met的结合亲和力，例如抗体会以介于IOOnM-1pM之间的Kd值结合人c-met。抗体亲和力可通过例如基于表面等离振子共振的测定法(诸如BIAcore测定法，如PCT申请公开文本No. W02005/012359中所记载的)；酶联免疫吸附测定法(ELISA);和竞争测定法(例如RIA)来测定。优选地，本发明的抗c-met抗体能在靶向和干扰涉及c-met/HGF活性的疾病或状况中用作治疗剂。还有，可以将所述抗体提交其它生物学活性测定法，例如为了评估它作为治疗剂的效力。此类测定法是本领域已知的，而且取决于抗体的靶抗原和预定用途。抗c-met抗体(可以作为单臂抗体来提供)是本领域已知的。参见例如Martens, T, et al(2006)Clin Cancer Resl2(20Ptl):6144 ；US6, 468, 529 ；W02006/015371 ；W02007/063816。本申请公开了在人中施用onartuzumab(可互换称作“MetMAb”)，一种包含Fe区的单臂抗体。MetMAb的序列显不于图1和2。MetMAb(也称作0Α 5ν2和onartuzumab)还记载于例如 W02006/015371 ；Jin et al, Cancer Res (2008) 68:4360。本发明还涵盖施用MetMAb的生物学相似形式。本文中还描述和例示了抗c-met抗体的实例。本发明还涵盖抗肝细胞生长因子(HGF)抗体的使用。HGF是c-met受体的配体。抗HGF 抗体是本领域已知的。参见例如 Kim KJ,等 Clin Cancer Res. (2006) 12 (4) : 1292-8 ；W02007/115049 ；W02009/002521；W02007/143098；W02007/017107 ；W02005/017107 ；L2G7 ；AMG-102 (rilotumumab) ,AV-299。可以作为抗c-met抗体的补充或替代来施用抗HGF抗体。在一些实施方案中，本发明提供本文中描述的或本领域已知的、单臂形式的抗c-met抗体的使用。因而,一方面,抗c-met抗体是包含Fe区的单臂抗体(即重链可变域和轻链可变域形成单一抗原结合臂)，其中Fe区包含第一和第二 Fe多肽，其中第一和第二 Fe多肽以复合物存在且形成与包含所述抗原结合臂的Fab分子相比提高所述抗体片段稳定性的Fe区。为了治疗需要拮抗功能且抗体的二价性导致不想要的激动效应的病理状况，单臂抗体(即包含单一抗原结合臂的抗体)的单价性状在抗体结合靶分子时导致和/或确保拮抗功能。此外，包含Fe区的单臂抗体特征在于与具有相似/基本上相同的抗原结合特征的Fab形式相比卓越的药动学属性(诸如延长的半衰 期和/或降低的体内清除速率)，如此克服使用常规单价Fab抗体时的主要缺点。单臂抗体披露于例如W02005/063816 ；Martenset al, Clin Cancer Res(2006)，12:6144。在一些实施方案中,抗c-met抗体是抗c_met抗体或其抗体片段,其中抗c_met抗体包含(a)含有重链可变域的第一多肽，所述多肽包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYffLHWVRQAPGKGLEffVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:21) ; (b)包含轻链可变域的第二多肽，所述多肽包含序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 22);和包含Fe区的第三多肽，所述多肽包含序列DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 4)，其中重链可变域和轻链可变域作为复合物存在且形成单一抗原结合臂，其中第一和第二 Fe多肽以复合物存在且形成与包含所述抗原结合臂的Fab分子相比提高所述抗体片段稳定性的Fe区。在一个实施方案中，抗c-met抗体包含重链可变域，其包含图1 (SEQ IDN05-7)所绘⑶R1-HC、⑶R2-HC和⑶R3-HC序列中的一项或多项。在一些实施方案中，抗体包含轻链可变域，其包含图1 (SEQ ID N08-10)所绘CDR1_LC、CDR2_LC和CDR3-LC序列中的一项或多项。在一些实施方案中，重链可变域包含图1 (SEQ ID N011-14)所绘FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和FR4-HC序列。在一些实施方案中，轻链可变域包含图1(SEQ ID N015-18)所绘FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC 和 FR4-LC 序列。在其它实施方案中，抗体包含由以美国典型培养物保藏中心登录号ATCCHB-11894 (杂交瘤1A3. 3. 13)或HB-11895 (杂交瘤OT5. 11. 6)保藏的杂交瘤细胞系生成的单克隆抗体的一种或多种CDR序列。一方面,抗c-met抗体包含(a)至少一个、两个、三个、四个或五个选自下组的高变区(CDR)序列(i)CDR-Ll，其包含序列 A1-A17，其中 A1-A17 为 KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQID NO:23) ;(ii)CDR-L2，其包含序列Bl-B7，其中Bl-B7为WASTRES(SEQ ID NO:24) ； (iii)CDR-L3，其包含序列 C1-C9，其中 C1-C9 为 QQYYAYPWT(SEQ ID NO:25) ; (iv)CDR-Hl，其包含序列 D1-D10，其中 Dl-DlO 为 GYTFTSYWLH(SEQ ID NO:26) ; (v)CDR-H2，其包含序列 E1-E18，其中 E1-E18 为 GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ IDNO: 27);和(vi) CDR-H3，其包含序列 F1-F11，其中Fl-Fll为XYGSYVSPLDY(SEQ ID NO: 28)且X不是R ;和(b)至少一个变体CDR，其中变体⑶R序列包含SEQ ID NO: 23, 24，25，26，27或28所绘序列中的至少一个残基的修饰。在一个实施方案中，本发明的抗体的⑶R-Ll包含SEQ ID N0:23的序列。在一个实施方案中，CDR-L2包含SEQ ID NO:24的序列。在一个实施方案中，CDR-L3包含SEQ ID NO:25的序列。在一个实施方案中，⑶R-Hl包含SEQ ID NO:26的序列。在一个实施方案中，⑶R-H2包含SEQ ID N0:27的序列。在一个实施方案中，⑶R-H3包含SEQ ID N0:28的序列。在一个实施方案中，⑶R-H3包含TYGSYVSPLDY(SEQ ID N0:29)。在一个实施方案中，⑶R-H3包 含SYGSYVSPLDY(SEQ ID NO: 30)。在一个实施方案中，包含这些序列(以本文中描述的组合)的抗体是人源化的或人的。一方面，本发明提供包含一个、两个、三个、四个、五个或六个⑶R的抗体，其中每个CDR包含选自SEQ ID NO:23, 24，25，26，27，28和29中的任一序列、由选自SEQ ID N0:23，24，25，26，27，28和29中的任一序列组成或基本上由选自SEQ IDNO: 23，24，25，26，27，28 和 29 中的任一序列组成，且其中 SEQ ID NO: 23 对应于 CDR-Ll，SEQID N0:24对应于CDR-L2，SEQ ID NO:25 对应于 CDR-L3，SEQ ID NO:26 对应于 CDR-Hl，SEQID N0:27对应于CDR-H2，且SEQ ID NO:26，27或28对应于CDR-H3。在一个实施方案中，本发明的抗体包含⑶R-L1、⑶R-L2、⑶R-L3、⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3，其中每项依次包含SEQ ID NO:23，24，25，26，27 和 29。在一个实施方案中，抗体包含 CDR-L1、CDR-L2、CDR_L3、CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3，其中每项依次包含 SEQ ID NO: 23，24，25，26，27 和 30。变体⑶R可具有⑶R内一个或多个残基的修饰。在一个实施方案中，⑶R-L2变体在下述位置的任意组合中包含1-5 (1、2、3、4或5)处替代B1 (Μ或L)，B2 (P、T、G或S)，B3 (N、G、R 或 T)，B4 (1、N 或 F)，B5 (P、1、L 或 G)，B6 (A、D、T 或 V)和 B7 (R、1、M 或 G)。在一个实施方案中，⑶R-Hl变体在下述位置的任意组合中包含1_5(1、2、3、4或5)处替代D3 (N、P、L、S、A、I)，D5 (1、S 或 Y)，D6 (G、D、T、K、R)，D7 (F、H、R、S、T 或 V)和 D9 (M 或V)。在一个实施方案中，⑶R-H2变体在下述位置的任意组合中包含1-4 (1、2、3或4)处替代Ε7 (Υ)，Ε9 (I), ElO (Ι)，Ε14 (Τ 或 Q)，E15 (D、K、S、T 或 V)，E16 (L)，E17 (E、H、N 或D)和E18 (Y、E或H)。在一个实施方案中，⑶R-H3变体在下述位置的任意组合中包含1-5(1、2、3、4 或 5)处替代F1 (T、S)，F3 (R、S、H、T、A、K)，F4 (G), F6 (R、F、Μ、Τ、Ε、K、A、L、ff), F7 (L、1、T、R、K、V)，F8 (S、A)，F10 (Y、N)和 Fll (Q、S、H、F)。每个位置后面的括号中的字母指明例示性的替代(即替换)氨基酸；正如对本领域技术人员显而易见的是，其它氨基酸作为本文所述背景中替代氨基酸的合适性可以使用本领域已知的和/或本文中描述的技术例行评估。在一个实施方案中，⑶R-Ll包含SEQ ID N0:23的序列。在一个实施方案中，变体CDR-H3中的Fl为T。在一个实施方案中，变体CDR-H3中的Fl为S。在一个实施方案中，变体CDR-H3中的F3为R。在一个实施方案中，变体CDR-H3中的F3为S。在一个实施方案中，变体CDR-H3中的F7为T。在一个实施方案中，抗体包含变体CDR-H3，其中Fl为T或S，F3为R或S，且F7为T。在一个实施方案中，抗体包含变体⑶R-H3，其中Fl为T，F3为R且F7为T。在一个实施方案中，抗体包含变体CDR-H3，其中Fl为S。在一个实施方案中，抗体包含变体CDR-H3，其中Fl为T且F3为R。在一个实施方案中，抗体包含变体⑶R-H3，其中Fl为S，F3为R且F7为T。在一个实施方案中，抗体包含变体⑶R-H3，其中Fl为T，F3为S，F7为T，且F8为S。在一个实施方案中，抗体包含变体⑶R-H3，其中Fl为T，F3为S，F7为T，且F8为A。在一些实施方案中，所述变体⑶R-H3抗体进一步包含⑶R-Ll、⑶R-L2、CDR-L3、⑶R-Hl和⑶R-H2，其中每项依次包含SEQ ID NO: 1，2，3，4和5所绘序列。在一些实施方案中，这些抗体进一步包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，第71位为A，第73位为T且/或第78位为A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体进一步包 含人K I轻链框架共有序列。在一个实施方案中，抗体包含变体CDR-L2，其中B6为V。在一些实施方案中，所述变体⑶R-L2抗体进一步包含⑶R-L1、⑶R-L3、CTR-Hl、⑶R-H2和⑶R-H3，其中每项依次包含SEQ ID NO:23，25，26，27和28所绘序列。在一些实施方案中，所述变体CDR-L2抗体进一步包含⑶R-Ll、⑶R-L3、⑶R-Hl、⑶R-H2和⑶R-H3，其中每项依次包含SEQ IDNO:23, 25，26，27和29所绘序列。在一些实施方案中，所述变体⑶R-L2抗体进一步包含CDR-L1、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2 和 CDR-H3，其中每项依次包含 SEQ IDNO: 23, 25，26，27 和30所绘序列。在一些实施方案中，这些抗体进一步包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，第71位为A，第73位为T且/或第78位为A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体进一步包含人K I轻链框架共有序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含变体⑶R-H2，其中E14为T，E15为K且E17为E。在一个实施方案中，抗体包含变体CDR-H2，其中E17为E。在一些实施方案中，所述变体⑶R-H3抗体进一步包含⑶R-L1、⑶R-L2、⑶R-L3、⑶R-H1、和⑶R-H3，其中每项依次包含SEQID NO:23，24，25，26和28所绘序列。在一些实施方案中，所述变体⑶R-H2抗体进一步包含 CDR-Ll、CDR-L2、CDR-L3、CDR-Hl、和 CDR-H3，其中每项依次包含 SEQID NO:23, 24，25，26和29所绘序列。在一些实施方案中，所述变体⑶R-H2抗体进一步包含⑶R-Ll、⑶R-L2、CDR-L3、CDR-H1、和CDR-H3，其中每项依次包含SEQ ID NO: 23，24，25，26和30所绘序列。在一些实施方案中，这些抗体进一步包含人亚组III重链框架共有序列。在这些抗体的一个实施方案中，框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位处的替代。在这些抗体的一些实施方案中，第71位为A，第73位为T且/或第78位为A。在这些抗体的一个实施方案中，这些抗体进一步包含人K I轻链框架共有序列。在其它实施方案中，c-met抗体特异性结合c-met Sema结构域或其变体的至少一部分。在一个例子中，拮抗性抗体特异性结合至少一种选自下组的序列LDAQT(SEQID NO:33)(例如 c-met 的残基 269-273)，LTEKRKKRS(SEQID NO:34)(例如 c-met 的残基300-308)，KPDSAEPM(SEQ ID NO:35)(例如 c_met 的残基 350-357)和 NVRCLQHF(SEQ IDNO:36)(例如c-met的残基381-388)。在一个实施方案中，拮抗性抗体特异性结合由至少一种选自下组的序列的部分或整个形成的构象表位LDAQT(SEQ ID NO:33)(例如c-met的残基 269-273)，LTEKRKKRS (SEQ ID NO: 34)(例如 c-met 的残基 300-308)，KPDSAEPM (SEQID NO: 35)(例如 c-met 的残基 350-357)和 NVRCLQHF (SEQ ID NO: 36)(例如 c-met 的残基381-388)。在一个实施方案中，拮抗性抗体特异性结合与序列LDAQT(SEQ ID NO:33),LTEKRKKRS(SEQ ID NO:34)、KPDSAEPM(SEQ ID NO:35)和 / 或 NVRCLQHF(SEQ ID NO:36)具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%序列同一性或相似性的氨基酸序列。一方面，抗c-met抗体包含至少一项促进抗体片段内的Fe序列异二聚化，同时将同二聚化降至最低的特征。此类特征改善免疫球蛋白群的收率和/或纯度和/或同质性。在一个实施方案中，所述抗体包含构成“结”和“穴”的Fe突变，如W02005/063816 ；Ridgeway, J等，Prot Eng (1996) 9:617-21 ；Zhu Z 等 Prot Sci (1997)6:781-8 所描述的。例如，穴突变可以是Fe多肽中的T366A、L368A和/或Y407V中的一项或多项，而结突变可以是T366W。抗VEGF抗体和VEGF拮抗剂 要用于生成抗体的VEGF抗原可以是例如VEGF165分子以及VEGF的其它同等型或其含有期望表位的片段。可用于生成本发明的抗VEGF抗体的其它形式的VEGF对于本领域技术人员会是显而易见的。人VEGF首先是使用牛VEGF cDNA作为杂交探针筛选自人细胞制备的cDNA文库而获得的。Leung等(1989) Science，246 :1306。一种由此鉴定出的cDNA编码一种165个氨基酸的蛋白质，其与牛VEGF具有超过95%的同源性；此165个氨基酸的蛋白质通常称作人VEGF (hVEGF)或VEGF165。人VEGF的促有丝分裂活性通过在哺乳动物宿主细胞中表达人VEGF cDNA得到了验证。由经人VEGF cDNA转染的细胞条件化的培养基促进毛细血管内皮细胞增殖，而对照细胞不然。Leung等(1989) Science,见上文。虽然可以自天然来源分离和纯化血管内皮细胞生长因子，随后用于治疗用途，但是该蛋白质在滤泡细胞中相对低的浓度和回收VEGF所需要的努力和费用两个方面的高成本证明在商业上是无益的。因而，进行进一步努力来经重组DNA技术克隆和表达VEGF。(参见例如 Ferrara, LaboratoryInvestigation72 :615_618 (1995)及其中引用的参考文献)。源自可变RNA剪接，VEGF在多种组织中作为多种同二聚体形式(每个单体121、145、165、189、和206个氨基酸)表达。VEGF121是一种可溶性丝裂原，不结合肝素；更长形式的VEGF以越来越高的亲和力结合肝素。肝素结合形式的VEGF可以在羧基末端被纤溶酶切割以释放可扩散形式的VEGF。纤溶酶切割后鉴定出的羧基末端肽的氨基酸测序是Arg110-Alamo作为同二聚体分离到的氨基末端“核心”蛋白，VEGF (1-110)以与完整VEGF165同二聚体相比相似的亲和力结合中和性单克隆抗体(诸如称作4. 6.1和3. 2E3.1.1的抗体)和可溶性形式的VEGF受体。最近还鉴定出数种在结构上与VEGF有关的分子，包括胎盘生长因子(PIGF)、VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D 和 VEGF-E0 Ferrara 和 Davis-Smyth (1987) Endocr. Rev.，见上文；Ogawa 等 J. Biological Chem. 273 :31273_31281(1998)；Meyer 等 EMBO J.，18 :363_374(1999)。受体酪氨酸激酶Flt-4 (VEGFR-3)鉴定为VEGF-C和VEGF-D的受体。Joukov等ΕΜΒ0. J. 15 1751 (1996);Lee 等 Proc. Natl. Acad. Sc1. USA93 :1988-1992 (1996);Achen 等(1998) Proc. Natl. Acad. Sc1. USA95 :548_553。VEGF-C 显示出涉及对淋巴管发生的调节。Jeltsch 等 Science276 1423-1425 (1997)。已经鉴定出两种VEGF受体，即Flt-1 (也称作VEGFR-1^P KDR (也称作VEGFR-2)。Shibuya 等(1990) 0ncogene8 :519_527 ；de Vries 等(1992) Science255 :989_991 ；Terman等(1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 187 :1579-1586。神经租蛋白-1 显不为选择性VEGF受体，能够结合肝素结合性VEGF同等型(Soker等(1998) Ce 1192:735-45)。Flt-1和KDR都属于受体酪氨酸激酶(RTK)家族。RTK包含具有多样生物学活性的跨膜受体的大家族。目前，鉴定出至少十九(19)个独特RTK亚家族。受体酪氨酸激酶(RTK)家族包括对于多种细胞类型的生长和分化至关重要的受体(Yarden和Ullrich (1988) Ann. Rev.Biochem. 57 :433_478 ;Ullrich 和 SchlessingeK 1990)Cell61 :243_254)。RTK 的内在功能在配体结合后被活化，导致受体和多种细胞底物磷酸化，随后导致多种细胞应答(Ullrich和Schlessinger (1990) Cell61 :203_212)。如此，受体酪氨酸激酶介导的信号转导通过·与特定生长因子(配体)的细胞外相互作用而启动，通常接着是受体二聚化、刺激内在蛋白质酪氨酸激酶活性和受体转磷酸。由此为细胞内信号转导分子创建结合位点，并导致与一系列细胞质信号传导分子的复合物形成，推动适宜细胞应答。(例如细胞分裂、分化、代谢影响、细胞外微环境的变化)参见Schlessinger和Ullrich( 1992)Neuron9 :1_20。在结构上，Flt-1和KDR都具有胞外域中的七个免疫球蛋白样结构域、单个跨膜区、和被激酶插入域中断的共有酪氨酸激酶序列。Matthews 等(1991) Proc. Natl. Acad. Sc1. USA88 :9026_9030 ；Terman 等(1991) 0ncogene6 1677-1683。在本发明的方法中有用的抗VEGF抗体包括任何抗体或其抗原结合片段，它们以足够亲和力和特异性结合VEGF且能降低或抑制VEGF的生物学活性。抗VEGF抗体通常不会结合其它VEGF同源物，诸如VEGF-B或VEGF-C，也不会结合其它生长因子，诸如P1GF、PDGF、或bFGF。在本发明的某些实施方案中，抗VEGF抗体包括但不限于与由杂交瘤ATCCHB10709 生成的单克隆抗 VEGF 抗体 A4. 6.1 ;依照 Presta 等(1997) Cancer Res. 57 4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体结合相同表位的单克隆抗体。在一个实施方案中，抗VEGF抗体是“贝伐单抗(BV)”，也称作“rhuMAb VEGF”或“AVASTIN ” >它包含经过突变的人IgGl框架区和来自小鼠抗hVEGF单克隆抗体A. 4. 6.1的抗原结合互补决定区，阻断人VEGF结合其受体。贝伐单抗大约93%的氨基酸序列(包括大部分框架区)是自人IgGl衍生，而且约7%的序列是自小鼠抗体A4. 6.1衍生的。贝伐单抗和其它人源化抗VEGF抗体进一步记载于2005年2月26日公告的美国专利No. 6，884，879。别的抗体包括G6或B20系列抗体(例如G6_31、B20_4.1),如记载于PCT公开号 W02005/012359、PCT
发明者P.H.帕特尔, A.C.彼得森 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司