专利名称：：治疗方法
技术领域：
：本发明涉及治疗蛋白尿或与蛋白尿相关之疾病的方法。
背景技术：
：在本说明书中引用的所有参考文献(包括任何专利或专利申请)通过引用并入本文。应清楚地理解，尽管本文中提及了许多现有技术出版物，但是该引用不构成承认这些文献中的任一个形成本领域中常规知识的一部分。尿蛋白损失(蛋白尿)在世界范围内影响约I亿人并且是肾小球源性肾功能障碍(包括炎症)的特征。蛋白尿本身对于肾疾病和肾外疾病二者而言均是风险因素。蛋白尿一般反映了在通常情况下非滤过性血浆大分子(例如白蛋白)的肾小球通透性的提高。尤其在肾组织的疾病(肾炎、肾病、固缩肾(contractedkidney))中以及由心功能不全引起的充盈肾(engorgedkidney)中出现蛋白尿。除白蛋白(白蛋白尿)之外，球蛋白和其他血蛋白体(bloodproteinbody)也进入尿中。肾足细胞及其足突(footprocess,FP)是肾小球中超滤系统的重要部件，其中它们包含与内皮细胞和肾小球基底膜(glomerularbasementmembrane,GBM)一起的滤过屏障。足细胞位于肾的肾小球内，在那里它们附着于GBM。足细胞FP通过裂孔隔膜(slitdiaphragm,SD)(—种经修饰的黏着连接(adherensjunction))而相互连接。蛋白尿性肾疾病通常与由足细胞微丝系统的重排驱动的不同程度的足细胞膜重建(FP消失和/或SD破坏)相关。由白蛋白穿过肾小球足细胞滤过屏障渗漏至尿中而引起的微量白蛋白尿(microalbuminuria)被认为是系统性脉管系统中更广泛功能障碍的临床窗(clinicalwindow),表明许多疾病(例如,包括代谢综合征、心血管疾病(cardiovasculardisease,CVD)或糖尿病)风险的提高。因此，存在对改进的和/或额外的用于治疗蛋白尿或与蛋白尿相关疾病之方法的需要。发明概述第一方面提供了用于治疗蛋白尿或与蛋白尿相关之疾病的方法，其包括向有此需要的对象施用治疗有效量的乳铁蛋白(Iactoferrin)。第二方面提供了用于治疗蛋白尿的乳铁蛋白。第三方面提供了乳铁蛋白在制备用于治疗蛋白尿之药物中的用途。所述第一方面的方法以及所述第二和第三方面的用途直接基于出乎意料的观察结果乳铁蛋白能够在诊断为代谢综合征的对象中(尤其是基线尿白蛋白/肌酸酐比值(albumin/creatinineratio,ACR)大于约2mg/mmol的对象亚组中)降低蛋白尿。在本发明的一些方面中可使用任何生物活性乳铁蛋白。然而，第四方面提供了用于治疗蛋白尿的、可经口摄入或可经口施用的乳铁蛋白。所述第四方面的可经口摄入或可经口施用的乳铁蛋白适于根据所述第一方面来施用。用于治疗蛋白尿的现行医疗标准(standardofcare)必需施用血管紧张素转化酶(angiotensin-convertingenzyme,ACE)抑制剂或血管紧张素受体阻断剂(angiotensinreceptorblocker,ARB)。本发明提供了用于治疗蛋白尿的替代治疗。或者，本发明可延迟开始施用ACE抑制剂或ARB的需求。或者，本发明可用于与ACE抑制剂或ARB相结合。附图简述图1描述了研究设计的示意图。图2描述了在基线具有>2mg/mmol之尿ACR的参与者亚组中的尿白蛋白/肌酸酐比值(ACR)。图3描述了仅对于乳铁蛋白组的来自图2的尿ACR数据。图4描述了来自图2的在访问3(V3)和访问I(Vl)之间的尿ACR数据中的百分比变化。发明详述本发明涉及使用乳铁蛋白治疗蛋白尿。本文中使用的术语“治疗”指降低症状的严重程度和/或频率，消除症状和/或潜在病因(underlyingcause)，防止发生症状(预防)和/或其潜在病因，以及改善或修复损伤。因此，例如，第一方面的“治疗”蛋白尿的本发明方法包括在易感的个体中预防病症或疾病和在有临床上有症状的个体中治疗病症或疾病。本文中使用的“治疗”涵盖在脊椎动物、哺乳动物、尤其是人中对病症或疾病的任何治疗或预防，并且包括抑制病症或疾病，即，阻止其发生；或者缓解或改善病症或疾病的影响，即引起病症或疾病之影响的消退。本文中使用的“症状”指由特定病症或疾病(即潜在病因)引起并且与其相伴随的现象，并且作为该病症或疾病的指示。“症状”可直接在对象中可观察，或可例如通过使用实验室测试或测定而间接可观察。另外，如本文中所使用的，治疗症状包括对潜在病因的治疗并且对治疗潜在病因的治疗包括对症状的治疗。本文中使用的“预防”或“预防的”或“预防性”治疗包括在对象中预防病症的发生或改善所述病症的后续进展，所述对象可能易患有所述病症但却尚未被诊断患有所述病症。本文中使用的术语“蛋白尿”指蛋白质在尿中以超过正常的水平存在。“蛋白尿”包括“白蛋白尿”和“微量白蛋白尿”。尿中正常的人蛋白质水平的范围是约O至30mg/L，但是对于随机尿样本而言，所述水平可能达到约80mg/L。对于24小时尿采集，正常的人尿蛋白水平的范围是约O至150mg。尿ACR大于约30mg/mmol指示蛋白尿。当蛋白尿水平下降至低于基线至少约10%时(例如，在基线时100的值将下降至少约10%至约90)，则蛋白尿被“治疗”、“改善”或“降低”。在第一至第三方面的一些实施方案中，在对象中蛋白尿的降低为低于基线至少约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多。在第一至第三方面中任一方面的一个实施方案中，在对象中蛋白尿的降低为低于基线约56%或约78%。可在开始治疗后约I周，或者约2、3或4周，或者约I个月，或者约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月，或者约I年，或者约2或3年或者更长之后评估蛋白尿的降低。蛋白尿(包括白蛋白尿和微量白蛋白尿)通常引起或指示疾病，但是不限于产生疾病。蛋白尿旨在包括所有形式的蛋白尿，包括但不限于生理性蛋白尿；功能性蛋白尿；和运动性蛋白尿，其涉及过度肌肉运用之后的功能性蛋白尿形式。另外，蛋白尿涵盖良性蛋白尿(也称为“自发性”蛋白尿(“essential”proteinuria)),其指不是肾中病理学变化之结果的类型或蛋白尿。蛋白尿还涵盖病理性蛋白尿，例如尿中的蛋白质水平高于正常生理水平。在细胞水平，蛋白尿伴随足细胞的结构重排。肾超滤位于肾小球(血管和细胞的组合)内。高度特化的足细胞进行滤过工作并且是肾疾病中的主要靶细胞。足细胞可以以高度动态方式重组其基于肌动蛋白的细胞骨架。这样的重组确定了肾中超滤屏障的完整性。足细胞足突中的肌动蛋白细胞骨架从应力纤维(stressfibre)到皮质肌动蛋白(corticalactin)的重组导致足细胞足突消失和发生蛋白尿。足细胞损伤可由许多病症和因素引起。这些改变导致进行性肾损伤并且随时间导致肾功能的退化。本文中使用的术语“白蛋白尿”(还称为“大量白蛋白尿(macroalbuminuria)”)指白蛋白在尿中以超过正常的水平存在。因为尿蛋白主要是白蛋白，所以正常的人尿ACR水平的范围是约O至30mg/mmol。本文中使用的术语“微量白蛋白尿”指尿中存在白蛋白，所述白蛋白在人中以约20至200μg/分钟的速率或以约30至300mg/L的水平排泄。当由尿ACR定义时，“微量白蛋白尿”指尿ACR大于约30mg/g,或者尿ACR对女性而言为约3.5mg/mmol或更大以及对男性而言约2.5mg/mmol或更大。微量白蛋白尿通常是肾疾病的早期预警，但是也可能因其他原因而存在。“肌酸酐”是肌肉中肌酸的分解产物，并且一般以相当恒定的速率由身体产生(取决于肌肉质量(musclemass))。肌酸酐主要通过肾(肾小球滤过和近肾小管分泌)从血液中滤出。很少甚至没有肌酸酐的小管重吸收。肌酸酐可以以mg/dL或ymol/L为单位来报告(lmg/dL等于88.4ym0l/L)。通常的人血清肌酸酐参考范围对女性而言是O.5至1.Omg/dL(约45至90μmol/L)或50至110μmol/L,而对男性而言是0.7至1.2mg/dL(60至llOymol/L)或60至120μmol/L。男性比女性易于具有更高水平的肌酸酐，这是因为男性通常比女性具有更多的骨骼肌质量。如果肾的滤过不足，那么血浆肌酸酐水平就会上升。因此，血浆和尿中的肌酸酐水平可用于计算肌酸酐清除率(CrCl),其反映了肾小球滤过率(glomerularfiltrationrate，GFR)。GFR在临床上很重要，这是因为其是肾功能的量度。然而，在严重的肾功能障碍的情况下，肌酸酐清除率将会被过高估计，因为主动分泌肌酸酐将占被清除的总肌酸酐的较大比例。酮酸、西咪替丁和甲氧苄啶降低肌酸酐的小管分泌，因而提高了GFR评估的准确性(尤其是在严重肾功能障碍中)。可通过测量血浆肌酸酐浓度和血浆尿素浓度来对肾功能进行较全面的评估。血尿素氮(BUN)与肌酸酐的比值可说明问题，但不是肾固有的那些；例如，与肌酸酐不成比例的尿素水平升高可说明肾前性(pre-renal)问题,例如容量不足(volumedepletion)。血衆尿素浓度可表示为BUN(以给出BUN/肌酸酐比值)或尿素(以给出尿素/肌酸酐比值)。正常的人血浆BUN值是7至30mg/dL或正常人血浆尿素值是2.5至10.7mmol/L。本文中使用的“BUN/肌酸酐比值”是BUN(mg/dL)与血浆肌酸酐(mg/dL)的比值(mg/g)。或者，“尿素/肌酸酐比值”是血浆尿素(mmol/L)与血浆肌酸酐(ymol/L)的摩尔比值。在该比值背后的原理是尿素和肌酸酐二者均由肾小球自由滤过这一事实。然而，通过小管的尿素重吸收可被调节(提高或降低)，而肌酸酐重吸收保持恒定和最低。因此，血衆BUN/肌酸酐比值大于约20mg/mg或尿素/肌酸酐比值大于约lOOmmol/mmol可说明肾前性疾病(在血浆中BUN重吸收相对于肌酸酐提高并且不成比例地升高)。约10至20mg/mg的血衆BUN/肌酸酐比值或约40至lOOmmol/mmol的尿素/肌酸酐比值可表示正常或肾后性(post-renal)疾病(BUN重吸收在正常极限内)。低于约10mg/mg的血衆BUN/肌酸酐比值或低于约40mmol/mmol的尿素/肌酸酐比值可指示肾内性(intra-renal)疾病(肾损伤引起BUN重吸收降低并且在血浆中BUN相对于肌酸酐不成比例地降低)。然而，由于在参考范围内较低或正常偏低的肌酸酐和BUN或尿素,升高的BUN/肌酸酐比值或尿素/肌酸酐比值不大可能具有临床意义。在第一至第三方面中任一方面的一个实施方案中，待治疗的蛋白尿与肾前性疾病、肾内性疾病(即肾疾病)或肾后性疾病相关。用于检测和诊断蛋白尿、白蛋白尿或微量白蛋白尿的方法为本领域技术人员所公知，包括放射免疫测定、乳胶体免疫测定(immunoassayswithlatexbody)、突光免疫测定、酶免疫测定、凝集抑制、免疫比浊法(immunoturbidimetry)、免疫浊度测定法(immunonepheIometry)和放身寸免疫扩散测定(radial`immunodiffusionassay)。可通过对单个尿样本或对定时尿采集进行特定尿测试来测量蛋白尿、白蛋白尿或微量白蛋白尿。本领域技术人员应知晓用于确定肌酸酐和尿素浓度的基于酶的或基于抗体的方法。在第一、第二或第三方面的一个实施方案中，蛋白尿与葡萄糖代谢受损、胰岛素作用受损、代谢综合征、糖尿病(diabetesmellitus(diabete))、高血压和/或肥胖相关。本文中使用的“代谢综合征”指一批一起出现并且提高对象发生2型糖尿病、卒中或心脏病之风险的疾病。代谢综合征的原因很复杂并且仍不十分清楚，但是有人认为其与遗传相关。超重或肥胖以及缺乏身体活动(physicallyinactive)提高了发生代谢综合征的风险。代谢综合征还被称为“综合征X”或“胰岛素抗性综合征”。当对象患有以下疾病时被归类为患有代谢综合征-中心性(腹部)肥胖-在肚子(腹部)中及周围有过多脂肪-加上以下因素中的任意两个〇高血压；〇高血液三酸甘油(highbloodtriacylglycerol)；〇低的高密度脂蛋白(HDL)；〇空腹葡萄糖受损(血液葡萄糖水平比正常高但是没有高到足以被诊断为2型糖尿病)；和〇胰岛素抗性(身体不像其应当的那样有效地使用胰岛素，尤其在肌肉和肝中)。本文中使用的“胰岛素抗性”指这样的状态，其中胰需要释放升高水平的胰岛素以维持正常血液葡萄糖水平。胰岛素抗性提高了发生2型糖尿病的风险并且见于大多数患有该类型糖尿病的人中。如果胰不能够产生额外的胰岛素以克服胰岛素抗性，那么血液葡萄糖水平将会上升并且将发生葡萄糖耐量受损或糖尿病。患有2型糖尿病的对象通常还具有代谢综合症的其他特征以及显著提高的心血管疾病风险。本文中使用的“中心性肥胖”是身体脂肪主要沉积在腹部周围和身体上部。腰围与发生代谢综合征的风险成比例。对象发生中心性肥胖的风险取决于其性别和种族背景而有所不同。通常，94cm或更大(男性)或者80cm或更大(女性)的腰围指示代谢综合征的风险。本文中使用的“高血压”指在不存在其他风险因素时人对象中的血压大于约140/90mmHg。人对象中的理想血压范围被认为是低于约130/80mmHg(或更低，如果存在其他疾病)。高血压提高了发生心血管疾病、卒中和肾疾病的风险。三酰甘油和胆固醇是来源于饮食的以及由肝产生并且通过脂蛋白在血液中运输的脂质。升高的血液三酰甘油和降低的HDL胆固醇提高了代谢综合征和动脉粥样硬化(这在心血管疾病中是促成因素)的风险。超重或肥胖本身也是诸如高三酰甘油水平、高血压和动脉粥样硬化等病症的风险因素。本文中使用的“葡萄糖耐量受损”(有时称为“前驱糖尿病(pre-diabetes)”)指血液葡萄糖水平比正常更高但是没有高到足以被称为糖尿病。患有未经治疗的葡萄糖耐量受损或空腹葡萄糖受损的对象中的三分之一将发生糖尿病。这些病症中的许多以复杂的方式相互关联并且难以弄清事件链(chainofevents)。一些研究人员认为肥胖可能是代谢综合征的起点。糖尿病定义了由多重致病因素引起的代谢疾病的复合体并且其特征为一般与蛋白质和脂肪代谢受损相关的葡萄糖代谢受损。这导致了升高的空腹和餐后血糖，如果不对其进行治疗将导致并发症。已知有四种不同类型的糖尿病，(I)I型糖尿病，(2)2型糖尿病，(3)所谓的妊娠糖尿病，其在怀孕期间首先开始或被确认，以及(4)主要基于遗传缺陷的另一些形式。术语“糖尿病”包括但不限于代谢异常，例如提高的血液葡萄糖水平、肥胖相关的病理状况、葡萄糖耐量受损、提高的胰岛素抗性、高血脂、血脂异常、胆固醇提高(高胆固醇血症、高甘油三酯血症)、高胰岛素血症、高血压和微量白蛋白尿。葡萄糖耐量受损和空腹葡萄糖受损是被称为前驱糖尿病的两种症状。该阶段与所谓的胰岛素抗性相关，所述胰岛素抗性是一组称为“代谢综合征”或“综合征X”的代谢疾病之一，尤其与高脂和肌肉比值相关。因为2型糖尿病通常与来自综合征X的其他症状(例如高甘油三酯血症或血脂异常)相关。糖尿病的两种主要形式是I型和2型糖尿病，其中2型糖尿病是最普遍的形式。I型和2型糖尿病与高血糖症、高胆固醇血症和高血脂症相关。在I型和2型糖尿病中对胰岛素和绝对胰岛素缺乏不敏感导致通过肝、肌肉和脂肪组织利用的葡萄糖降低并且导致血液葡萄糖水平升高。不受控制的高血糖症与多个器官(例如，眼、心脏、血管、肾和神经)的功能障碍和衰竭相关，从而因微血管和大血管疾病(包括肾病、神经病、视网膜病、腿和足的溃疡、脂肪肝疾病、高血压、心血管疾病和脑血管疾病(卒中)，所谓的糖尿病并发症)的风险提闻而导致提闻且过早的死亡率。I型糖尿病是这样的糖尿病形式，其一般在幼年或青春期开始，并且特征为产生胰岛素的β细胞的自身免疫破坏，从而导致胰岛素分泌的完全缺陷。2型糖尿病是这样的糖尿病形式，其主要在成年人中发生，在疾病的早期阶段中，可在他们中产生足够的胰岛素，但是缺陷在于胰岛素敏感性，尤其在外周组织中胰岛素介导的对葡萄糖的利用和代谢中。在与2型糖尿病相关的多种组织中的变化甚至在检测到临床症状之前就存在。还考虑治疗由创伤(例如烧伤或氮失衡)和脂肪组织疾病(例如肥胖)引起的胰岛素抗性。另外，根据第一至第三方面中任一方面的待治疗的尿蛋白包括但不限于与以下相关(即由以下引起或引起以下)的蛋白尿急性肾炎综合征；奥尔波特综合征(Alportsyndrome);氨基酸尿；淀粉样变性；良性直立性(体位性)蛋白尿；膀胱肿瘤；心血管疾病；胶原血管疾病(例如系统性红斑狼疮)；充血性心力衰竭；脱水；糖尿病；糖尿病性肾病；埃博拉(ebola)出血热；子痫(eclampsia);法布里病(Fabry1sdisease)；范克尼综合征(Fanconisyndrome);局灶性节段性肾小球硬化症(focalsegmentalglomerulosclerosis,FSGS);肾小球疾病(例如膜性肾小球肾炎)；肾小球性肾炎；古德帕斯丘综合征(Goodpasturesyndrome);重金属摄入；血红蛋白尿；溶血性尿毒症综合征(hemolytic-uremicsyndrome,HUS)；HIV相关的肾病；高血压；高血压性肾硬化；IgA肾病(即贝尔热病(Berger’sdisease));IgM肾病；感染(例如系统性感染、HIV、梅毒、肝炎、链球菌感染后(post-streptococcalinfection));间质性肾炎；肾(肾性)疾病；肾(肾性)窘迫(distress);红斑狼疮；恶性高血压；髓质囊性肾疾病；1型和II型膜增生性肾小球肾炎；膜性肾病；系膜增殖性肾炎；微小病变性疾病(minimalchangedisease);多发性骨髓瘤；肌红蛋白尿；指甲髌骨综合症；坏死性血管炎；肾炎综合征；肾病综合征(即内在肾衰竭)；肾毒性药物；器官排斥；胰窘迫(pancreaticdistress);多囊性肾疾病；感染后肾小球肾炎(例如链球菌感染后肾小球肾炎)；子痫前期(preeclampsia);急进性(新月体性)肾小球肾炎；反流性肾病；肾静脉血栓形成；结节病；镰状细胞疾病；剧烈运动(strenuousexercise);应激(stress);肾的中毒性损伤；尿窘迫(urinarydistress);尿道感染；以及血管内皮功能障碍。伴随严重的蛋白尿，通常可发生低蛋白血症并且其导致胶体渗透压(oncoticpressure)降低(腹水、水肿、胸腔积液)。在美国，每年有超过100，000人被诊断为肾衰竭。肾衰竭(或终末期肾病变，endstagerenaldisease,ESRD)是慢性肾疾病(chronickidneydisease,CKD)的最后阶段。糖尿病、高血压和肾炎或肾性炎症在美国和澳大利亚是肾疾病最常见的原因(在澳大利亚分别有34%、14%和22%的新患者)。CKD和蛋白尿被认为位列对于CVD、住院治疗和全因死亡率(all-causemortality)而言最显著的临床风险因素之中。可作为糖尿病并发症之结果的肾疾病或损伤被称为糖尿病性肾病，其特征为肾小球过度滤过、细胞外基质积聚、肾小球增大、系膜扩张和管间纤维化，从而最终导致糖尿病性肾小球硬化和进行性肾衰竭。早期诊断糖尿病和早期干预在减慢向许多I型和相当比例的2型糖尿病对象中观察到的肾衰竭的进展中是关键性的。源于糖尿病的肾衰竭在美国占新肾衰竭病例的几乎44%和在澳大利亚占新CKD病例的34%。在美国几乎有2400万人患有糖尿病并且在澳大利亚有7.6%的人口(或大约150万人)患有糖尿病。即使当糖尿病被控制时，该疾病仍可导致CKD和肾衰竭。在美国，约20至30%患有糖尿病的人发生糖尿病性肾病，接近180，000人最终因肾衰竭而死亡。肾功能障碍可通过促进血管增厚和血管钙化以及通过活化炎性途径而促成全面的CVD。还认为，胰岛素抗性与氧化应激(早期肾功能降低和白蛋白尿)密切相关。最近，蛋白尿和微量白蛋白尿已经被鉴定为CVD的风险因素。高血压是肾疾病的另一常见原因。患有糖尿病的人倾向于患高血压。有许多药学研究工作旨在积极地减慢慢性肾疾病的进展。CKD有两个重要的异常临床测试结果减小的肾小球滤过率(GFR，评估的GFR低于约60mL/分钟)和蛋白尿。例如，在患有2型糖尿病的患者中经常观察到尿白蛋白排泄的水平大于正常水平。发生糖尿病性肾疾病要历经许多年。在数年中，发生肾疾病的人将会有少量血蛋白，白蛋白开始渗漏到他们的尿中。适度提高的白蛋白尿水平(所谓的微量白蛋白尿)表明进行性肾功能损失直到糖尿病性肾病以及心血管发病和死亡。随着疾病发展，更多的蛋白质(包括白蛋白)渗漏到尿中。该阶段称作大量白蛋白尿或蛋白尿。随着尿中蛋白量的提高，肾的滤过功能一般开始下降。随着肾损伤的发生，血压通常也升高。根据第一至第三方面中任一方面的待使用的乳铁蛋白或第四方面的乳铁蛋白包括但不限于乳铁蛋白、突变型乳铁蛋白、截短型乳铁蛋白、乳铁蛋白叶(lobe)或者上述任一种与其他肽、多肽、蛋白质或乳铁蛋白水解产物的融合物。乳铁蛋白是SOkD的铁结合糖蛋白，其存在于大部分外分泌液中，包括眼泪、胆汁、支气管黏液、胃肠液、子宫颈-阴道黏液、精液和乳汁。这是循环多形核中性粒细胞(circulatingpoIy-morphonucIearneutrophil)的次级特异性颗粒的主要成分。最富集的乳铁蛋白来源是哺乳动物的乳汁和初乳(colostrum)。乳铁蛋白以2至7μg/mL的浓度循环。它具有多种推测的生物学作用，包括调节铁代谢、免疫功能和胚胎发育。乳铁蛋白具有针对一系列病原体(包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌以及真菌(包括酵母))的抗微生物活性。乳铁蛋白的抗微生物作用基于其结合铁的能力，铁对病原菌的生长是必需的。乳铁蛋白还抑制数种病毒的复制并且通过与细菌膜上的脂多糖之脂质A组分相结合来提高一些细菌对抗生素和溶菌酶的敏感性。本文中使用的“乳铁蛋白”指纯乳铁蛋白，天然衍生、重组或合成的乳铁蛋白，乳铁蛋白片段，乳铁蛋白变体，乳铁蛋白水解产物，或者其任何混合物或组合。乳铁蛋白可以是每分子含有不多于2(即，0、1或2)个金属离子的纯乳铁蛋白多肽。乳铁蛋白可被分离或纯化。“经分离”或“经纯化”的乳铁蛋白基本不含与其天然相关联的至少一种物质(agent)或化合物。例如，经分离的蛋白质基本不含来自其所来源之细胞或组织来源的至少一些细胞材料或污染蛋白质。短语“基本不含细胞材料”指制备物，其中乳铁蛋白为至少50至59%(w/w)的纯度，至少60至69%(w/w)的纯度，至少70至79%(w/w)的纯度，至少80-89%(w/w)的纯度，至少90至95%的纯度，或者至少96%、97%、98%、99%或100%(w/w)的纯度。可通过任何合适的标准方法(例如，通过柱色谱法、聚丙烯酰胺凝胶电泳或HPLC分析)测量多肽的纯度。实际上，用于制备乳铁蛋白的离子/乳铁蛋白比值的测量值可以在O2.5的范围内。乳铁蛋白可以是天然多肽(例如从乳汁分离的)、重组多肽或合成多肽。可通过在无细胞表达系统中或转基因动物、植物、真菌或细菌或者其他可用的物种中表达来生产重组乳铁蛋白。重组人乳铁蛋白可购自ProSpecProteinSpecialists。或者,可使用已知的有机合成方法来生产乳铁蛋白。可通过阳离子交换色谱随后超滤和渗滤来从乳汁中分离乳铁蛋白。可用的乳铁蛋白片段包括乳铁蛋白水解产物的单个组分，含有N叶或C叶或者这二者的片段，N叶或C叶的片段,乳铁蛋白肽(Iactoferricin)以及(通过人工或天然过程)产生的和通过如下述的已知技术鉴定的片段。乳铁蛋白可以是哺乳动物来源的。牛和人乳运铁蛋白(Iactotransferrin)(乳铁蛋白前体)、乳铁蛋白和其中的肽的经核实的序列可见于Swiss-Prot(http://au.expasy.org/cg1-bin/sprot-search-ful)。乳铁蛋白可包括，例如牛乳运铁蛋白前体(检索号P24627)或其片段乳铁蛋白肽B,或者人乳运铁蛋白前体(检索号P02788)或其片段Kaliocin-1、LactoferroxinA、LactoferroxinB或Lactoferroxin。已经报道并且可用于第一至第四方面中任一方面的乳铁蛋白氨基酸和mRNA序列的其他实例包括但不限于人乳铁蛋白的氨基酸(检索号AAW71443和NP_002334)和mRNA(检索号NM_002343)序列；牛乳铁蛋白的氨基酸(检索号NP_851341和CAA38572)和mRNA(检索号X54801和NM_180998)序列；山羊乳铁蛋白的氨基酸(检索号JC2323、CAA55517和AAA97958)和mRNA(检索号U53857)序列；马乳铁蛋白的氨基酸(检索号CAA09407)和mRNA(检索号AJO10930)序列；绵羊乳铁蛋白的氨基酸(检索号NP_001020033)和mRNA(检索号ΝΜ_001024862)序列；猪乳铁蛋白的氨基酸(检索号NP_999527、AAL40161和AAP70487)和mRNA(检索号NM_214362)序列；小鼠乳铁蛋白的氨基酸(检索号NP_032548和A28438)和mRNA(检索号NM_008522)序列；水牛(waterbuffalo)乳铁蛋白的氨基酸(检索号CAA06441)和mRNA(检索号AJ005203)序列；骆驼乳铁蛋白的氨基酸(检索号CAB53387)和mRNA(检索号AJ131674)序列。可以以野生型或变体形式使用这些序列。因此，在第一至第四方面中任一方面的一个实施方案中，所述乳铁蛋白是绵羊、山羊、猪、小鼠、水牛、骆骑、牦牛(yak)、马、驴、美洲鸵(llama)、牛或人的乳铁蛋白。在另一个实施方案中，所述乳铁蛋白是野牛(buffalo)或鹿的乳铁蛋白。可产生乳铁蛋白的动物可以是转基因动物，所述转基因动物被设计成在其乳汁中过量表达乳铁蛋白。可使用维持野生型乳铁蛋白多肽之生物活性的野生型乳铁蛋白多肽的变体(例如，含有至少2(例如，4、6、8、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700)个氨基酸的野生型乳铁蛋白多肽的片段，或含有乳铁蛋白多肽序列的重组蛋白质)。或者，可使用本领域中公知的遗传工程或化学合成技术来生产乳铁蛋白。本文中使用的术语“变体”指通过添加、缺失或替换一个或更多个氨基酸而不同于给定物种的乳铁蛋白之主要野生型氨基酸序列的天然(例如，等位基因变体)或非天然(例如，人工产生的突变体)乳铁蛋白。用于产生此类变体的方法是本领域中已知的。可用的重组乳铁蛋白和乳铁蛋白片段及其产生方法在以下中报道美国专利说明书美国专利No.5，571，691、美国专利No.5，571，697、美国专利No.5，571，896、美国专利No.5，766，939、美国专利No.5，849，881、美国专利No.5，849，885、美国专利No.5，861，491、美国专利No.5，919，913、美国专利No.5，955，316、美国专利No.6，066，469、美国专利No.6，080，599、美国专利No.6，100，054、美国专利No.6，111，081、美国专利No.6，228，614、美国专利No.6，277，817、美国专利No.6，333，311、美国专利No.6，455，687、美国专利No.6，569，831、美国专利No.6，635，447、美国2005-0064546和美国2005-0114911。可用的变体还包括牛乳铁蛋白变体bLf-a和bLf-b。本领域普通技术人员应理解，蛋白质结构中的某些氨基酸可被替换为另一些氨基酸而对乳铁蛋白的活性没有不利的影响。因此，本发明人考虑可在乳铁蛋白的氨基酸序列中进行多种改变而不明显地丧失其生物效用或活性。这样的变化可包括缺失、插入、截短、替换、融合、模体(motif)序列的改组(shuffling)等。本领域技术人员会认识到，乳铁蛋白可在其氨基酸序列中包含任何数目的保守性变化而不改变其生物特性，从而产生“变体”。这样的保守氨基酸修饰基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如其疏水性、亲水性、电荷、大小等。考虑多种前述特征的示例性保守替换对本领域技术人员而言是公知的并且包括精氨酸和赖氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；丝氨酸和苏氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；以及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。`乳铁蛋白的同源物也包括在术语“变体”的含义内。同源物通常是来自不同物种的多肽，但其共有与相应的多肽基本相同的生物学功能或活性。变体可共有至少50%、55%、60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,95%,96%,97%,98%^；99%的序列同一性。本领域技术人员应很容易领会，许多软件包能够让他们设计或鉴定乳铁蛋白核苷酸和氨基酸序列的同源物，例如“BLAST”程序或其他合适的软件包。可通过包括但不限于用于使野生型蛋白质突变的技术来产生变体乳铁蛋白，例如但不限于对编码乳铁蛋白的野生型核苷酸序列进行定点诱变并使所产生的多核苷酸表达；用于产生可表达的多核苷酸片段的技`术，例如使用一组随机或经选择的引物的PCR;用于完全或部分蛋白水解或者水解野生型或变体乳铁蛋白多肽的技术；以及用于化学合成多肽的技术。可通过表达作为来自乳铁蛋白DNA或RNA或者其变体或片段的重组分子来制备乳铁蛋白的变体或片段。可将编码乳铁蛋白之变体或片段的核酸序列插入到用于在细胞中表达的合适载体中，所述细胞包括真核细胞(例如但不限于曲霉属(Aspergillus))或细菌细胞(例如但不限于大肠杆菌(E.coli))。可使用已知的PCR技术来制备乳铁蛋白变体或片段，所述技术包括但不限于易错PCR(error-pronePCR)和DNA改组(DNAshuffling)。易错PCR是在DNA聚合酶的复制保真度较低的情况下进行PCR的方法，从而获得沿PCR产物的整个长度的高效率点突变。DNA改组指体外由随机片段化基于序列同源性的DNA分子随后在PCR反应中通过引物延伸固定交叉所引起的在不同的DNA分子(但高度相关的DNA序列)之间的强制同源重组。也可通过已知的有机合成方法产生乳铁蛋白的变体或片段。在第一至第四方面中所使用的乳铁蛋白可包含铁离子(如在天然乳铁蛋白多肽中)或非铁金属离子(例如，铜离子、铬离子、钴离子、锰离子、锌离子或镁离子)。例如，可将分离自牛乳的乳铁蛋白的铁耗尽，随后荷载另一种类型的金属离子。例如，可根据用于上述荷载铁的相同方法实现对铜的荷载。用其他金属离子荷载乳铁蛋白的方法是本领域中已知的。乳铁蛋白(例如，分离自牛乳的乳铁蛋白)的制备可包含单个物种的多肽，例如，每分子结合两个铁离子。其还可包含不同物种的多肽，例如，一些分子不结合离子而另一些各自结合一个或两个离子；一些分子各自结合铁离子而另一些各自结合铜离子；一些分子各自是含有0、1或2个金属离子的生物学活性的乳铁蛋白多肽(全长或比全长短)而另一些各自是(相同或不同)多肽的片段；或者所有分子各自是含有0、1或2个金属离子的(相同或不同)全长乳铁蛋白多肽的片段。可通过用于分离结合金属之多肽的已知技术(包括但不限于金属亲和色谱法)获得结合金属离子的乳铁蛋白片段。乳铁蛋白片段可与游离的或固定的金属离子(例如Fe3+)接触，然后以合适的方式纯化。例如，片段可在中性PH下与通过螯合作用固定至包含亚氨基二乙酸或三(羧甲基)_乙二胺配体之色谱基质的金属离子相接触。可通过降低所使用缓冲剂的PH和离子强度来从支持基质上洗脱所结合的片段并将其收集。可根据本领域中已知的方法制备金属结合片段。可从全长乳铁蛋白多肽的水解产物(例如，部分消化(如蛋白酶消化))中制备全长乳铁蛋白多肽和全长乳铁蛋白多肽之多种片段的混合物。可例如通过完全消化(即，消化后没有全长多肽剩余)全长乳铁蛋白多肽或通过混合全长乳铁蛋白多肽的不同片段来制备全长乳铁蛋白多肽之多种片段的混合物。根据本领域中公知的方法(例如，通过调节蛋白酶的量或孵育时间)来控制消化的程度。另外，可通过将全长乳铁蛋白多肽与全长乳铁蛋白多肽之多种片段(例如，合成片段)相混合来获得全长乳铁蛋白多肽和全长乳铁蛋白多肽之多种片段的混合物。在第一至第四方面中任一方面的一个实施方案中，所述乳铁蛋白包括完全或部分的酶水解产物(包括但不限于蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、凝乳酶、溶纤酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、肽酶或氨肽酶水解产物)、完全或部分的微生物水解产物(包括但不限于由来自以下属的细菌水解芽孢杆菌属(Bacillus)、双歧杆菌属(Bifidus)、肠球菌属(Enterococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、片球菌属(Pediococcus)、丙酸菌属(Propionbacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)或链球菌属(Streptococcus)或者其混合物)、完全或部分的酸水解产物(包括但不限于三氟乙酸和盐酸水解产物)、溴化氰水解产物或者其混合物。乳铁蛋白水解产物可以是天然、重组或合成的乳铁蛋白多肽或者其混合物的水解产物。乳铁蛋白水解产物可以是人乳铁蛋白水解产物或牛乳铁蛋白水解产物或者其混合物。乳铁蛋白可以是非糖基化的或糖基化的。可用天然或非天然糖基完全或部分地糖基化乳铁蛋白。此外，可例如通过与聚合物相缀合来修饰乳铁蛋白以提高其循环半衰期，例如通过聚乙二醇化或其他化学修饰。还可期望的是，将修饰引入乳铁蛋白以提高贮存稳定性。还考虑将这样的经修饰乳铁蛋白用于根据第一至第四方面的用途。乳铁蛋白可包含按重量计约50至100%或者按重量计至少约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%的乳铁蛋白。以下是用于从牛乳中分离乳铁蛋白的示例过程。将新鲜脱脂乳(7L，pH6.5)在4°C下以5ml/分钟的流量通过在milliQ水中平衡的300mlSSepharoseFastFlow柱。用2·5倍床体积(bedvolume)的水冲洗未结合的蛋白质，用大约2.5倍床体积的各自为O.1M、0.35M和1.OM的氯化钠逐步洗脱结合的蛋白质。收集IM氯化钠中的不显眼的粉红带洗脱乳的铁蛋白作为单一级分并用milliQ水透析，然后冷冻干燥。将经冷冻干燥的粉末溶于25mM磷酸钠缓冲剂(pH6.5)中并且用上述缓冲剂中的梯度至IM的氯化钠以3ml/分钟的流量在SSepharoseFastFlow上再次进行色谱分析。将含有通过凝胶电泳和反相HPLC确定的足够纯度之乳铁蛋白的级分合并，透析，然后冷冻干燥。在含有O.15M氯化钾的80mM磷酸氢二钾(ρΗ8·6)中采用S印hacryl300通过凝胶过滤完成乳铁蛋白的最终纯化。将选择的级分合并，用milliQ水透析，然后冷冻干燥。如通过HPLC分析表明该制备物的纯度大于95%，并且对于乳铁蛋白的铁饱和形式，其光谱比值(280nm/465nm)为19或更低。通过将2:1摩尔过量的5mM次氨基三乙酸铁(ferricnitrilotriacetate)添加至I%纯化乳铁蛋白的50mMTris溶液(pH7.8，含有IOmM碳酸氢钠)来实现铁饱和。通过用100倍体积的milliQ水(更新两次)在4°C下透析总共20小时来移除过量的次氨基三乙酸铁。随后将荷载铁的(全)乳铁蛋白冷冻干燥。通过用30倍体积的含有500mg/LEDTA二钠的O.1M柠檬酸(ρΗ2·3)在4°C下透析1%高度纯化乳铁蛋白样本的水溶液30小时来制备耗尽铁的(去辅基)乳铁蛋白(iron-depleted(apo_)Iatoferrin)。随后，通过用30倍体积的milliQ水(更新一次)透析来移除柠檬酸盐和EDTA，并且将所得无色溶液冷冻干燥。在第一至第三方面中任一方面的一个实施方案中，所述乳铁蛋白可经口摄入或可经口施用。可经口摄入或可经口施用的乳铁蛋白可以是胶囊化的(encapsulated)、微胶囊化的(microencapsulated)或纳米胶囊化的(nanoencapsulated)。这些方面的任一方面中使用的乳铁蛋白可提供为营养品(nutraceutical)或药物。本文中使用的术语“营养品”指可分离或纯化自食物(例如乳制品)的可食用产品，其被证明在经口施用时具有生理学益处或提供对急性或慢性疾病或损伤的保护或缓解。因此，营养品可单独或者与可食用的食物或饮料混合以饮食制备物或补充剂(supplement)的形式存在。“营养品”还称为“功能性食品”。可通过本领域中已知的多种方法和工艺来生产营养品，包括但不限于合成(化学或微生物)、从生物材料中提取、将功能性成分或组分与常规食品混合、发酵或者使用生物技术工艺。营养品可在身体中直接发挥其作用或其可例如通过肠内菌群而发挥功能。一般来说，尽管不是完全必需的，但是这样的营养品将包含纯化至一定程度的乳铁蛋白，或至少将可验证营养品(例如“FirstLeaf”)的所有组分。营养品是根据第三方面制造的药物或第四方面的乳铁蛋白的一个实例。合适的食品、饮料或可食用的消费品的实例包括可溶性粉末、奶粉、糖果(confectionary)、重构的水果产品、早餐谷物(breakfastcereals)、即食棒(ready-to-eatbar)、小吃棒(snackbar)、燕麦坚果能量棒(mueslibar)、涂抹调味品(spreads)、沙司(dips)、乳制品(包括酸奶和奶酪)、液体或即饮制品(包括基于乳制品或非乳制品的饮料(例如，乳、果汁、茶或软饮料))、食品补充剂、膳食补充剂(例如，硬胶囊或软胶囊、小袋(min1-bag)或者片(tablet)、茶包)、营养制品、运动营养补充剂(包括基于乳制品或非乳制品的运动营养补充剂)、用于向婴儿施用的婴儿配方(尤其是人性化乳配方)、食品添加剂(例如蛋白质末(proteinsprinkles))和膳食补充剂产品(包括日常补充剂片)。营养品优选具有可接受的感官特性(例如可接受的气味、味道和适口性(palatability))。可常规地生产营养品；例如，可通过将蛋白质与其他添加剂(例如，多种香料、纤维、甜味剂)一起共混以制备组合物，并且还可存在其他添加剂。如果使用的话，乳化剂可包含在共混物中。营养品可包含其他营养物，例如氨基酸、蛋白质或糖类。此时可添加额外的维生素和矿物质，但是一般稍后添加以避免热降解。另一些维生素和/或矿物质可选自以下中的至少一种维生素A、B1、B2、B3、B5、B6、B11、B12、生物素、C、D、E、H和K以及钙、镁、钾、锌和铁。如果期望生产粉状营养品，那么可将乳铁蛋白与粉状形式的额外的组分混合。粉末的水分含量应低于按重量计约5%。之后，可将水(优选已经过反渗透的水)混合到其中以形成液体混合物。如果营养品将以准备消费的液体形式提供，那么可对其进行加热以降低细菌负荷。如果期望生产液体营养品组合物，那么优选将液体混合物无菌地填充到合适的容器中。可使用本领域常见技术来实施容器的无菌填充。用于实施这种性质之无菌填充的合适装置可市购。优选地，所述营养品还包含一种或更多种可药用载体、稀释剂或赋形剂。营养品可包含缓冲剂，例如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；糖类，例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、乳果糖或右旋糖；甘露醇或乳糖醇(Iactitol);蛋白质；多肽或氨基酸，例如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，例如EDTA;辅料以及防腐剂。由于牛乳是已经在食物链中数百年的天然产品，所以用作营养品的乳铁蛋白不需要是完全纯的。然而，为了降低待施用组合物的量，优选的将乳铁蛋白相对于在乳中乳铁蛋白浓度进行显著地浓缩。优选地，以乳中乳铁蛋白浓度的至少10倍的浓度并且更优选乳中乳铁蛋白浓度的20、30、40或50倍的浓度施用乳铁蛋白。药物制剂是适于向人施用的那些。兽用制剂是适于向动物施用的那些。通常来说，这样的制剂将包含经纯化的乳铁蛋白或者至少制剂(例如“FirstLeaf”)的所有组分将是可核实的。制剂是根据第三方面制备的药物或第四方面的乳铁蛋白的实例。根据第三方面制备的药物或第四方面的乳铁蛋白可包含一种或更多种载体和任选的其他治疗剂。每种载体、稀释剂、辅料和/或赋形剂可以是药学上“可接受的”。“可药用载体”意指非生物学上或在其他方面上非期望的材料，即，可将所述材料与所选择的活性剂一起向个体施用而不引起任何不期望的生物效应或以有害的方式与药物组合物中包含的任何其他组分相互作用。类似地，本文中所提供的新化合物的“可药用”盐或酯不是生物学上或在其他方面上不期望的盐或酯。本文中使用的“药物载体”是用于向对象递送物质的可药用溶剂、助悬剂或载剂。所述载体可以是液体或固体并且根据所考虑的计划施用方式而进行选择。每种载体从不是生物学上或在其他方面上不期望的意义上说必须是药学上“可接受的”，即所述载体可与物质一起向对象施用而不引起任何或严重的不良反应。可在含有常规无毒可药用载体、辅料和载剂的制剂中经口、局部或肠胃外施用所述制剂。优选地，经口施用所述制剂。可作为片剂、水性或油性混悬剂、糖锭剂(lozenge)、锭剂(troche)、散剂、颗粒剂、乳剂、胶囊、糖浆剂或酏剂经口施用所述制剂。用于经口使用的制剂可包含选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的一种或更多种物质以生产药学上精致的且适口的制剂。合适的甜味剂包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿司帕坦或糖精。合适的崩解剂包括玉米淀粉、甲基纤维素、聚乙烯卩比咯烧酮、黄原胶、膨润土、藻酸或琼脂。合适的矫味剂包括薄荷油(peppermintoil),鹿蹄草(wintergreen)、楼桃、橙的油或覆盆子香料(raspberryflavoring)。合适的防腐剂包括苯甲酸钠、维生素Ε、α生育酚、抗坏血酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或亚硫酸氢钠。合适的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、油酸钠、氯化钠或滑石粉。合适的延时剂(delayagent)包括单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。片剂可包含与适于制备片剂之无毒可药用赋形剂相混合的物质。这些赋形剂可以是例如⑴惰性稀释剂，例如碳酸钙、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；(2)成粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或藻酸；⑶黏合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及⑷润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。这些片剂可不包衣或通过已知的技术进行包衣以延迟在胃肠道中崩解和吸收，从而提供更长时间的持续作用。例如，可使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。在一个实例中，可根据常规程序通`过压制乳铁蛋白与固体载体和润滑剂的混合物来配制片剂。固体载体的实例包括淀粉和糖膨润土。还可以以包含黏合剂(例如，乳糖或甘露醇)、常规填料和压片剂(tabletingagent)的硬壳片剂或胶囊形式来施用乳铁蛋白。本文中使用的术语肠胃外包括静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、结膜下、腔内、经皮和皮下注射、用于向肺或鼻腔施用的气雾剂或者通过输注(通过例如渗透泵)施用。用于肠胃外施用的制剂包括无菌水性或非水性溶液剂、混悬剂和乳剂。非水性溶剂的实例有丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯(例如油酸乙酯)。水性载体包括水、醇/水性溶液、乳液或混悬液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外载剂包括氯化钠溶液、林格右旋糖(Ringer'sdextrose)、右旋糖和氯化钠、乳酸盐林格溶液(lactatedRinger’s);静脉内载剂包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(例如基于林格右旋糖的那些)等。还可存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、生长因子和惰性气体等。所述制剂还可包含提供补充的、额外的或增强的治疗功能的其他活性化合物。所述制剂还可与施用说明书一起包含在容器、包装或分配器(dispenser)中。可存在以兽用制剂形式使用的制剂，其可例如通过本领域的常规方法制备。这样的兽用制剂的实例包括适于以下的那些(a)经口施用、外用，例如兽用顿服药(drench)(例如水性或非水性溶液剂或混悬齐U);片剂或大丸剂(bolus);用于与饲料混合的粉剂、颗粒剂或微丸；用于向舌头施用的糊齐U，如果待向反刍动物施用的话，这尤其适于保护而避免经过瘤胃(rumen)；(b)肠胃外施用，例如通过皮下、肌内或静脉内注射，例如作为无菌溶液剂或混悬剂；或者(在适当时)通过乳房内注射，其中将混悬剂或溶液剂经由乳头引入乳房；(C)局部施用，例如向皮肤施用的霜剂、软膏剂或喷雾剂；或者(d)阴道内，例如子宫托(pessary)、霜剂或泡沫剂。为了便于施用和剂量的均匀性，尤其有利地以剂量单位形式配制所述制剂。本文中使用的剂量单位形式指适合作为用于待治疗之对象的作为单位剂量的物理上分散单位；每个单位包含计算用于与所需的药物载体联合以产生期望治疗效果的预定量的活性化合物。通过(并且直接取决于)活性化合物的独特特征和待实现的特定治疗效果以及在组合用于治疗个体的此类活性化合物的领域中固有的局限性来确定本发明剂量单位形式的说明书。以治疗有效量来施用所述制剂。本文中使用的乳铁蛋白的“有效量”是足以降低蛋白尿的剂量。一般来说，治疗有效量可随着对象的年龄、状况和性别以及对象中医疗状况的严重程度而改变。可由医师确定剂量并且(如需要的话)调整至适合所观察到的治疗效果。用于施用乳铁蛋白的适当剂量的范围可以是5mg至100mg、15mg至85mg、30mg至70mg或40mg至60mg、5mg至500mg、10mg至400mg、20mg至300mg、25mg至250mg、40mg至200mg、50mg至IOOmg0例如剂量可以是5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、125、150、175、200、225、230或250mg。可以以一次剂量施用或者间隔(例如，每日一次、每日两次、每周一次和每月一次)施用所述制剂。可根据乳铁蛋白的半衰期或蛋白尿的严重程度来调整计量方案。一般来说，作为大丸剂给药来施用所述制剂，以在给药后最长时间内使循环乳铁蛋白的水平最大化。在所述大丸剂给药之后可使用连续输注。有越来越多的证据表明，蛋白尿不仅是肾损伤和/或疾病进展的结果(疾病标志物)，而且是肾损伤和/或肾疾病进展的直接原因或风险因素。有证据表明，通过多种途径发生源自蛋白尿的肾损伤，包括诱导导致间质中炎性细胞浸润和持续纤维发生(fitoogenesis)的小管趋化因子表达和补体活化。巨噬细胞在间质炎性浸润物(infiltrate)中是显著的。在患有慢性肾疾病的对象中，该细胞类型介导肾损伤的进展至这样的程度肾活检中的巨噬细胞数目预测肾的存活。炎性细胞的化学引诱物(chemoattractant)和黏附分子通过近端小管细胞的过量超滤蛋白质荷载而上调。因此，用于降低蛋白尿的治疗是减慢肾疾病进展的常见临床实践。当前，可用于降低蛋白尿的药物是用于治疗高血压的药物。已经证明两种类型的药物(ACE抑制剂和ARB)有效地降低蛋白尿水平并且减慢肾疾病的进展。尽管ACE/ARB在降低蛋白尿中确切药理机制尚不清楚，但是没有数据表明它们参与炎性过程。因此，第一和第二方面的一个实施方案还包括向用ACE抑制剂或ARB治疗的对象施用ACE抑制剂或ARB或者施用乳铁蛋白。在第三方面的一个实施方案中，使用ACE抑制剂或ARB配制药物。如果作为分开的制剂而摄入或施用，那么乳铁蛋白可在用ACE抑制剂或ARB治疗之前和/或同时和/或之后用于治疗蛋白尿。有益于蛋白尿或者相关病症或疾病的其他治疗上可用的物质可任选地包含在乳铁蛋白中或者与乳铁蛋白同时或依次施用。整个本说明书中，除非上下文另有需要，否则词语“包含/包括”将被理解为表明包括所述要素或整数或者要素或整数的组，但不排除任何其他要素或整数或者要素或整数的组。还必须注意的是，除非上下文清楚地另外指明，本说明书中使用的没有数量词修饰的名词表示一个/种或更多个/种。对本领域技术人员来说显而易见的是，虽然为了清楚和理解的目的而详细地描述了本发明，但是可对本文中描述的实施方案和方法进行多种修改和改变，只要不背离本说明书中公开的本发明理念的范围即可。实施例临床试验概述‘FirstLeaf’乳铁蛋白研究是包括以下三个治疗组的随机化临床试验FirstLeaf;乳铁蛋白和安慰剂。安慰剂组充当比较者(comparator)并且所述试验是随机化双盲设计。独立于研究队伍之外地确定治疗组的分配并且参与者和研究人员二者均不知道哪一组进行哪一种治疗，直到完成12周的干预期。每位参与者分配有独特研究编号。在统计软件程序‘Minitab’TM*，统计人员通过使用参与者的独特研究编号将参与者随机分入三个治疗组。临床试验药剂师基于这三组分发药物。‘FirstLeaf’是由FOURLEAFJAPANCo.Ltd开发的保健补充剂(healthsupplement)。除其他成分之外，每个药片包含25mg乳铁蛋白。该乳铁蛋白由MGNutritionals(MurrayGoulburnCo-opLtd的子公司)提供。该项目根据试验方案和临床试验的国际临床协调指南(InternationalClinicalHarmonisationGuidelinesforClinicalTrials)的标准进行。伦理问题和所研究药物的耐受性项目的过程中没有出现意料之外的问题，包括严重不良事件、出乎意料的不良事件或对参与者的影响。然而，一位女性参与者由于在开始药物研究后不久发生广泛的身体皮疹而退出药物研究。皮疹在停药后逐渐消退。其他四位参与者由于胃肠症状而临时停止服用所研究的药物(持续4至18天)。在全部的四个病例中，症状消退并且在恢复给药之后没有复发。没有收到对所进行研究的投诉。目的该研究是随机化双盲临床试验，用于考察‘FirstLeaf’和乳铁蛋白对指示通常与生活方式和环境相关慢性疾病风险之健康参数的影响。经12周的干预期，给予患有代谢综合征的男性和女性以下三种治疗(相匹配的胶囊)之一(I)‘FirstLeaf’；(2)仅乳铁蛋白；或者(3)安慰剂。在这三个组之间比较经干预期的临床和生化标志物的变化。简介‘FirstLeafy‘FirstLeaf’是日本成年人通常作为保健补充剂而服用的用于增强幸福感(wellbeing)和提高免疫力的补充剂。其包含万寿菊(Marigold)、黑醋粟(cassis)和花草茶(herbaltea)、小米草(Eyebright)的提取物。成分包括番爺红素(Iycopene)、乳铁蛋白、辅酶QlO和叶黄素(lutein)。番茄红素和叶黄素是类胡萝卜素，认为其作为抗氧化剂而提供保健益处。辅酶Qltl(还称为泛醌(ubiquinone))是尤其与对心脏病提供之保护相关的维生素样物质。乳铁蛋白乳铁蛋白是具有强大的抗微生物及免疫调节活性的铁结合糖蛋白。最近还表明乳铁蛋白通过刺激成骨细胞之增殖和分化以及抑制破骨细胞生成(osteoclastogenesis)而促进骨骼生长。因此，现在认为乳铁蛋白可在骨骼生长和治愈中具有生理作用，并且作为合成代谢因子(anabolicfactor)在骨质疏松症中具有潜在的治疗作用。尽管乳铁蛋白是从乳清乳中提取的，但是它还是以低浓度见于中性粒细胞的次级颗粒中的天然糖蛋白。动物研究已经表明，乳铁蛋白的全身水平在炎症期间显著提高并且认为乳铁蛋白可在平衡来自一些炎性反应介质的对骨架的分解代谢作用中发挥作用。有人提出乳铁蛋白的作用机制还包括差异调节细胞免疫应答的组分。该机制的活化有可能改变了不同T辅助细胞的比例，并且辅助Tl细胞与辅助T2细胞的比值(Thl/Th2)提供对变态反应症状的指示。研究目的主要疗效目的研究的主要目的是在12周的干预期间在‘FirstLeaf’治疗组(活性物)、‘乳铁蛋白’治疗组(活性物)和安慰剂(对照)组之间比较与代谢综合征、骨质疏松症和免疫功能相关的临床和生化标志物的变化。对象和方法根据全国涉人研究道德操守声明(NationalStatementonEthicalConductinResearchInvolvingHumans)(澳大利亚联邦,2001年)、ICH临床试验质量管理规范(ICHGoodClinicalPracticeguidelines)和赫尔辛基宣言(DeclarationofHelsinki)(1996)进行该研究。该研究经Barwon健康研究和伦理咨询委员会(BarwonHealthResearchandEthicsAdvisoryCommittee)(06/09)批准并且所有的参与者签署对研究的知情同意书。入诜标准所有的参与者满足澳大利亚代谢综合征标准并且超重。大部分的体重指数属于肥胖的范畴(>30)。具体地，所有的对象满足以下标准才有资格进行该试验能走动的门诊患者(男性和女性)，年龄为25岁和更大；体重指数(bodymassindex,BMI)为25至35kg/m2(BMI=重量[kg]除以身高[米]的平方)；筛选时，所有的参与者患有代谢综合征-所有都患有中心性肥胖，其定义为男性白种人的腰围>94cm和女性白种人的腰围>80cm，并且其他群体具有种族特异性的值；-加上以下四个因素中的任意两个1.升高的血清甘油三酯水平(≥1.7mmol/L)；2.降低的血清HDL胆固醇水平(男性中<1.03mmol/L，女性中<1.29mmol/L)；3.升高的血压(bloodpressure,BP)(收缩BP>I3OmmHg或舒张BP>85mmHg或者治疗之前经诊断为高血压)；以及4.空腹血糖受损(在之前没有诊断为2型糖尿病时空腹血糖≥5.6mmol/L且≤7.Ommol/I,)。棑除标准·已知对乳蛋白过敏；·BMK25或>35kg/m2；目前正在服用任何以下药物或在过去的6个月中已服用任何以下药物超过一个月经口降血糖剂；胰岛素；二膦酸盐/酯；选择性雌激素受体调节剂；锶；甲状旁腺激素(parathyroidhormone,PTH);骨化三醇(calcitriol)或雌激素(不包括阴道雌激素乳膏)；糖皮质激素治疗，相当于在之前的三年期间每天>5mg的泼尼松龙超过6个月。之前诊断的以下医疗状况糖尿病；类风湿性关节炎；佩吉特病(Pagetsdisease);多发性骨髓瘤；除了非侵袭性非黑色素瘤性皮肤癌和原位子宫颈癌之外的癌症；显著的肾疾病或血浆肌酸酐>150μmol/L;高钙血症(经校正的血浆钙>2.65mmol/L);结节病；甲状腺功能亢进(在过去的2年中)；或者活跃的消化性溃疡病或炎性肠疾。剂量所有参与者的药物研究的剂量是每IOkg体重(在访问I时的体重)I个胶囊。由于参与者的平均体重是89kg，所以平均剂量是每天9个胶囊。告知参与者在早晨摄取一半的剂量并且在晚上摄取一半的剂量。安慰剂是不含活性成分的乳糖粉末。每个‘FirstLeaf’药片含有25.5mg乳铁蛋白以及其他活性成分。一个标准的‘FirstLeaf’药片相当于一个胶囊。每个乳铁蛋白胶囊含有125mg乳铁蛋白，即每个胶囊比每个‘FirstLeaf’胶囊多大约5倍的乳铁蛋白。评估参与者到Geelong医院的临床试验中心(ClinicalTrialUnit)进行三次研究访问-访问I=基线；访问2=药物研究开始后6周；以及访问3=开始药物研究后12周。在每次研究访问时进行包括人体测量学在内的病理学和临床评估。将病理样本离心并且酌情分装，之后立即贮存在_80°C。询问参与者在过去的6周以及在过去的12个月中经历的变应性症状。制备用于研究的药物并且由Geelong医院的临床试验药剂师在访问I和2时进行分发。给予参与者6周的供应以及额外一周的供应(万一需要重新安排其下一个研究访问)。在下一个研究访问时回收所有未使用的研究药物并且对其进行计数。顺从性计算为与推荐的胶囊剂量相比所服用胶囊的百分比。统计分析主要的终点是在三个组之间的从基线到三个月的临床和生化标志物的变化。如果‘FirstLeaf’组或乳铁蛋白组的因变量平均值与安慰剂组的不同，那么对分析进行检验(test)。如果平均值在基线(访问I)时没有不同但是在访问2和/或访问3时与安慰剂组不同，那么这是潜在有意义的。使用方差分析对治疗作用进行评价，显著性定义在P<0.05。还通过查看‘自基线以后的因变量的变化’(即访问3-访问I)来研究基线(访问I)之后的任何均数差。方差分析比较多于两组的群体平均值。双因素方差分析同时对治疗组之间以及基线访问和6周和12周干预时的研究访问之间平均值的差别进行了检验。使用非平衡数据的一般线性模型通过双因素方差分析对数据进行分析。该方法同时对以下组合中平均值的差别进行了检验(A)治疗组组1对组2;组1对组3以及组2对组3(B)访问编号V1对V2；V1对V3；V2对V3采用用于等方差的检验(除对治疗组之间以及访问次数之间相互作用进行的检验)转换(自然对数等)非正态分布的参数。检验的零假设(nullhypothesis)H0μ!=μ2=μ3:在组1、2和3中每个参数(因变量)的平均值相等。H1:在组1、2和3之间‘因变量’平均值不相等。随后酌情进行Post-hoc分析。如果P值小于O.05,那么进行采用多重检验Tukey’s调整的Adhoc分析。该第二过程鉴别三个治疗组之间的差异是否出现在干预(即访问2和/或3)之后。构建问卷用于归类。根据参与者在每个治疗组中的比例对在基线时询问的问题进行分析，表明了与他们在访问I时的答案相比有所提高的状态。通过比例的卡方检验(Ch1-squaretest)分析所有的回答，即有所提高的参与者比例在三个治疗组之间不同么？。使用统计软件程序(Minitab，版本13)进行统计分析。研究的时间安排(timeline)列在表I中。表1:时间安排权利要求1.治疗蛋白尿的方法，其包括向有此需要的对象施用治疗有效量的乳铁蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白尿是白蛋白尿或微量白蛋白尿。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中利用尿白蛋白/肌酸酐比值(ACR)诊断所述蛋白尿。4.根据权利要求3所述的方法，其中在诊断蛋白尿时所述对象的所述ACR大于或等于约2mg/mmol05.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中利用血尿素氮(BUN)/肌酸酐比值或尿素/肌酸酐比值诊断所述蛋白尿。6.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其还包括向所述对象施用ACE抑制剂或ARB。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中经口施用所述乳铁蛋白。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述乳铁蛋白作为食品、饮料、补充剂、营养品或药物而经口施用。9.根据权利要求7的所述方法，其中经口施用的所述乳铁蛋白是胶囊化的、微胶囊化的或纳米胶囊化的。全文摘要本方法涉及治疗蛋白尿的方法，其包括施用乳铁蛋白。文档编号A61K9/107GK103068401SQ201180040591公开日2013年4月24日申请日期2011年6月24日优先权日2010年6月24日发明者彼得·霍布曼,米歇尔·罗尼,杰夫·尼克尔森,凯里·桑德斯申请人:墨累古尔本合作有限公司