专利名称：超声对比剂剂量配方的制作方法
技术领域：
本发明属于一般的诊断显像剂领域，特别涉及一种能够提供增强的图像和持续时间长的图像的超声对比剂(ultrasound contrast agent)剂量配方。
背景技术：
当利用超声来获得人或动物内部器官和结构的图像时，当超声波、声能波以一定的频率(当超过该频率时，能被人耳所感知)穿过人体时会被反射。不同类型的身体组织对超声波的反射不同，由反射不同内部结构的超声波所产生的反射可以被检出并通过电子学方法转换为可视图像。对于一些医疗情况，获得人们感兴趣的器官或结构的有用的图像尤其困难，这是因为在由缺乏对比增强剂的超声波的反射而产生的超声波图像中，上述结构的细节不能充分地从周围的组织中被分辩出来。通过向感兴趣的器官或其他结构中给予超声对比剂来提高超声波图像中的对比度，从而本质上改善对某些生理和病理状况的检测和观察。在有些情况下，对超声对比剂自身运动的检测是非常重要的。例如，由特定的心血管异常引起的独特的血流模式只有通过对血流给予超声对比剂并观察血流或血容量才可以被识别。当超声波穿过身体并被反射以产生能够据此作出内科诊断的图像时，用作超声对比剂的材料通过影响超声波而发挥作用。不同类型的物质以不同的方式和不同的程度影响超声波。此外，由对比增强剂所引起某些效果比其它试剂更容易被测量和观察。在选择理想的超声对比剂组合物时，人们通常更喜欢那些当超声波穿过身体时对超声波具有最显著作用的物质。此外，对超声波的作用应该易于测量。气体是用作超声对比剂的较好的介质。气体在使用之前必须固定化， 其可以作为表面活性剂固定化气泡或者通过用胶囊包在脂质体或者微粒中。在超声波图像中可以看到三种主要的对比增强效果，即，背反射、射束衰减、和声速差分。已有多种天然的和合成的聚合物被用于包封例如空气等超声对比剂，这些聚合物有助于制造给药后持续时间较长的超声对比剂。Schneider等在Invest. Radiol. , Vol 27、 pp. 134-139(1992)中描述了三种微米级的、填充空气的、合成的、聚合物颗粒。据报道这些颗粒在血浆中以及使用压力下稳定。然而，在2. 5MHz时它们的回声反射性低。另一种微泡 '混悬物F1I从超声处理后的蛋白肝i乳中被获得。Feinstein等，.T. Am. Coll. Cardiol. ,Vol. 11, pp. 59-65 (1988)。Feinstein描述了具有良好的体外稳定性、大小适合于肺与肺内腔之间通道(transpulmonary passage)的微泡的制备。然而，由于这些微泡在压力下不稳定，它们在体内寿命短暂，半衰期大约为几秒钟(与一个循环过程近似相等)。Gottlieb, S.等， T. Am. Soc. Echo. , Vol. 3, pp. 328 (1990)，摘要；和 Shapiro, J. R.等，T. Am. Coll. Cardiol. Vol. 16, pp.1603-1607(1990)。
Rasor Associates公司也在WO 80/02365中对明胶包封的微泡进行了描述。所述明胶包封的微泡是通过“聚结”明胶而形成的。分子生物系统公司(Molecular Biosystems, Inc.)在W096/04018中对包封在含氟材料的壳体内部的气体微泡进行了描述。Fritzch等报道了用半乳糖微晶(SHU454和SHU508)固定化的微泡。Fritzsch， T.等，Invest. Radiol. Vol. 23 (Suppl I), pp. 302-305 (1988);和 Fritzseh T.等，Invest. Radiol. ,Vol. 25 (Suppll) 160-161 (1990)。该微泡在体外持续15分钟但在体内持续不到20 秒。Rovai,D.等，T. Am. Coll. Cardiol. , Vol. 10,pp. 125—134(1987);和 Smith,M.等，Τ. Am. Coll. Cardiol. , Vol. 13, pp. 1622-1628(1989)。Schering Aktiengesellschaft 在欧洲专利EP 398935中公开了用于超声波显像的微胶囊密封气体或挥发性液体的制备以及用途， 其中，微胶囊由合成聚合物或多糖形成。Sintetica在欧洲专利458745中公开了一种用于治疗或诊断目的的空气或气体微球，该微球被能够分散在含水载体中的界面沉积聚合物薄膜所包缚，用于注射到宿主动物体内或用于口腔、直肠或尿道给药。Delta生物工程有限公司在WO 92/18164号专利中描述了一种用于成像的微粒的制备方法，该方法通过对蛋白质水溶液进行喷雾干燥形成具有内含气体的空心球体。WO 93/25242号专利描述了用于超声波成像的微粒的合成方法，所述微粒的结构为在聚氰基丙烯酸酯或聚酯的外壳内部含有气体。WO 92/21382公开了一种微粒对比剂的制造，所述微粒对比剂包括含有气体的共价键结合的基质，其中，所述基质为碳水化合物。Unger在美国专利第5，334，381号和5，123，414号以及5，352，435号中描述了用作超声对比剂的脂质体，其包括气体、气体前体例如pH活化或光活化气体前体，以及其他的液体或固体对比增强剂。其他人鉴于被包封的气体的效果，也提出了与空气相比增强显像的氟化气体的应用。Quay在美国专利No. 5，393，524中公开了包括全氟化碳在内的多种试剂在超声波显像中增强反衬度的应用。上述试剂由经挑选的气体小气泡或微泡组成，其在溶液中显示出较长的寿命，并且足够小以至于能够穿过肺，这使得其能够在心血管系统及其他重要器官的超声波图像中得以应用。Bracco在欧洲专利554213公开了氟化烃气体对预防微泡在曝露于血流压力时的崩解的作用。Nycomed在W095/23615专利中公开了一种用于显像的微胶囊，该微胶囊由包含全氟化碳的溶液例如蛋白质溶液等凝结而形成。麻省理工学院 (Massachusetts Institute of Technology)在专利 W095/03357 中公开了一种由聚乙二醇-聚(丙交酯-共-乙交酯)块状聚合物形成的微粒，该微粒内包封有显像剂，包含气体例如空气和全氟化碳。如同Sonus药物公司在W094/16739中所描述的，当固体和液体反射声波达到一个相似的程度，众所周知，气体是用作超声对比剂的更有效且更受欢迎的介质。 事实上，如WO 94/16739的实施例12所示，当对小型猪给药时，蛋白质微胶囊由于产生安全问题(以及功效问题)而不予考虑。美国专利6，132，699和5，611，344都描述了在合成聚合物外壳中使用全氟化碳来增强对比度的方法。美国专利5，837，221描述一种生产多孔聚合物微粒的方法，该方法将疏水性试剂合并入聚合物中来增加回声反射性。有数种超声对比剂在美国和欧洲都获批准，用于很有限的强心剂用药。 OPTISON0 (Amersham, Mallinkrodt)包含含有八氟丙烧气体的热变性人白蛋白微胶囊。 每毫升微球体混悬物包含5-8 X IO8个平均直径为2-4. 5微米粒度范围和220 μ g的八氟丙烷。这些微球体还没有被批准用于心肌血流评估，仅仅被批准用于心室增强作用。在较高的丸剂剂量下(5mL混悬物或1100 μ g八氟丙烷)，心室增强作用持续达5分钟。DEFINITY0 (Bristol Myers医学成像)包含含有脂类微球体的八氟丙烷,其中脂类壳由磷脂DPPA、DPPCJP mPEG-DPPE组成。每毫升混悬物包含I. 2 X IO10个微粒，该微粒的平均直径在I. 1-3. 3微米的粒度范围内且具有ΙΙΟΟμ g八氟丙烷。该试剂仅仅被批准用于心室增强作用，而没有被批准用于心肌血流评估。在700 μ L的丸剂剂量(用于70kg的人)下或5133 μ g的气体下，试剂在心室内增强作用的持续时间大约为3. 4分钟。IMAGENt0 (Photogen公司)包含含有全氟己烷的脂类微球体，其中，脂类外壳由磷脂DMPC组成。每毫升混悬物包含I. 4X109个微粒和92μ g的全氟己烷，其中，该微粒具有小于3微米的平均直径。该试剂仅仅被批准用于心室增强作用，而没有被批准用于心肌血流评估。在O. 43毫升的丸剂剂量(用于70kg的人)下或的气体下，试剂在心室内的增强作用的平均持续时间大约为2. 6分钟。在任何情况下，这些商品试剂仅具有有限的应用，没有被批准用于除心室增强作用之外的其他应用，这些试剂在心室的平均显像增强持续时间为5分钟或更少。仍然缺少能够增强心血管系统特别是心肌和心室的显像且具有较长持续时间的商业超声对比剂。现有技术中描述的试剂，当作为丸剂或短浸剂给药时，产生的心肌图像的持续时间明显小于处理一个完整的心脏测试所需要的时间。一般地，现有技术的药剂所提供的图像其用于心肌时的持续时间不到一分钟。人们希望获得这样的试剂，它能够提供的增强显像持续时间在心肌中为超过一分钟和/或在心室中为大于5分钟。因此，本发明的目的在于提供一种尤其适用于强心剂的剂量配方，其包含微粒，其中，微粒能够提供增强的图像和持续时间长的图像。本发明的另一个目的是提供一种试剂盒，用于在超声波显像方法中包含微粒的剂量配方给药。
发明内容
人们已经开发了具体的剂量配方并已经将其用于临床研究，该剂量配方使用了聚合物微粒，将能够提供显著且持续时间长的增强显像的全氟化碳气体合并入其中。该剂量配方典型地包括一、二或直到五个剂量，最好为一个或两个剂量的微粒，所述微粒由最好含有脂类的生物相容的聚合物形成，其含有在体温时为气体的全氟化碳。所述微粒以对增强超声波显像有效的剂量给患者投药，在心室内的持续时间为大于五分钟和/或在心肌中为大于一分钟，剂量范围从O. 025到8. Omg微粒/kg体重。优选给患者给药的剂量范围为从
0.05到4. Omg微粒/kg体重。在一个优选方案中，在心室中超声波显像的增强作用持续大于9分钟，和/或在心肌中则为大于2分钟。剂量配方典型地用小瓶或注射器提供。在一个典型的配方中，剂量配方呈干粉形式，使用之前需用无菌水重新配制，具体而言向装有干粉的小瓶或注射器内添加水， 然后摇动以产生等渗或等压的微粒悬浮液。在这些剂量配方的优选方案中，悬浮液包含
1.0-3. 5 X IO9微粒/mL，或25_50mg微粒/mL，最优选的浓度是悬浮液包含I. 5-2. 8 X IO9微粒/mL或30-45mg微粒/mL。在一个优选方案中,微粒的平均粒度小于8微米、最好是平均粒度为I. 8-3. O微米。在最佳方案中，气体是0 4、化4、(^6、(^6、(^8、(^8、(^1(|、或SF6。在优选方案中，气体是全氟正丁烧(n-perf luorobutane) (C4F10),以75-500 μ g/mL的微粒混悬物的给药量提供；优选全氟正丁烷以100-400 μ g/mL的微粒混悬物的给药量提供；最好是全氟正丁烷以150-350 μ g/mL的微粒混悬物的给药量提供；或者气体是八氟正丙烷，以75-375 μ g/mL 的微粒混悬物的给药量提供，最好为以120-300U g/mL的微粒混悬物的给药量提供。在最佳方案中，微粒由合成聚合物形成，所述合成聚合物例如有聚醇酸，包括聚乳酸、聚轻基乙酸、和聚(乳酸-共-轻基乙酸)，聚乙交酯(polyglycolides)、聚交酯和聚(丙交酯共乙交酯)，聚原酸酯(polyorthoesters)、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烃 (polyalkylenes)，例如聚乙烯和聚丙烯，聚烷撑二醇，例如聚乙二醇，聚氧化烯烃例如聚环氧乙烷，聚乙烯醇、聚戊酸、和聚(丙交酯共己内酯)、衍生物、共聚物及其混合物，以及相对于聚合物重量以0. 01-30被％的比例含有一个疏水化合物的聚合物，最好为以0. 01-30wt% (脂类重量/聚合物重量)的比例含有脂类的聚合物。在一个特别优选方案中，脂类为二油酰基磷脂酰胆碱(di ο I eoylpho sphat idyl cho line) (DOPC)、二肉豆蘧酰基磷脂酰胆碱 (dimyristoylphosphatidyIchoI in, DMPC)、双十五酸基憐脂酸胆喊(dipentadecanoylph osphat idyl cho line, DPDPC)、二月桂酸基憐脂酸胆喊(dilauroylphosphatidylcholine， DLPC)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(dipalmi toy lphosphat idyl choline, DPPC)、二硬 脂酰基磷脂酰胆碱(di stearoy lphosphat idyl choline, DSPC)、二花生酰基磷脂酰胆碱(diarachidoy lphosphat idyl choline, DAPC)、二山箭炔酰基磷脂酰胆碱 (dibehenoy lphosphat idyl cho line, DBPC)、双二十三烧酸基憐脂酸胆喊(ditricosanoyl phosphatidylcholine DTPC)、二木脂酸基憐脂酸胆喊(dilignoceroylphatidylcholine DLGPC);或磷脂酰乙醇胺。最好是，微粒中的合成聚合物是聚(丙交酯共乙交酯)，丙交酯对乙交酯的比例为 50 50(即I : I)，重均分子量在20，000-40，000道尔顿的范围内，微粒中的疏水化合物是DAPC，比例为5 6.6% (DAPC重量/聚合物重量)。剂量配方可以以包含微粒干粉的小瓶或注射器形式提供，或者以包含重悬浮微粒溶液的试剂盒形式提供。典型地，干粉的小瓶或注射器中也包含赋形剂例如糖或食盐，使得溶液等渗，或者重新配制后等渗。然后，将此剂量配方作为丸剂或注射剂通过注射给患者给药，在整个30分钟的期间内进行显像。微粒在多种诊断显像程序中都很有用，包括超声波显像、磁共振成像、荧光检查、X 射线和计算机化层析检查。在用于心脏病学应用例如心肌血流评估和心室增强作用的临床试验中对微粒进行了检验。
具体实施例方式这里，对改进后的方法、微粒、试剂盒、和用于超声波显像的剂量配方进行描述。微粒在各种诊断超声波显像的应用中非常有用，特别在超声程序中例如血管显像和超声波心动描记法例如心肌血流评估、心肌血容量评估和心室增强作用中非常有用。I.定义除非另作说明，和通常所使用的一样，术语"微粒"包括"微球体"和"微胶囊"，以及其他的微粒。微粒在形状上可以是球形的或非球形的。这里"微胶囊"一般被定义为具有一个包围着气体核心的外部聚合物壳的微粒。“微球体"被定义为可以是固体球形，或者由遍及充满气体的聚合物的气孔所形成的蜂窝状构造或海绵样结构的多孔球形。一些微球体可以包含由遍及聚合物外壳的充满气体的气孔所形成的具有蜂窝状构造或海绵样结构的外部聚合物外壳。对于这类微球体，该外部聚合物外壳包围内部的气体核心。和通常所使用的一样，术语"剂量(dosage)"和"药量(dose)"是同义词，表示一次给予的物质量，或产生预期诊断或对比效果所需的物质量。这里所使用的术语"剂量配方"，是指小瓶或其他容器例如注射器，其包含一个或多个剂量的要求产生预期诊断或对比效果的物质。与常规一样，这里"患者的部位"是指患者身上的一个特定的区域或部分。在有些情况下，"患者的部位"是指遍及患者全身的部位。这种部位的例子有肺部、胃肠部、心血管部位(包括心肌组织或心肌(例如心脏肌肉)、心室的室、围鳃腔、瓣膜功能)、肾部位以及身体的其他部位、组织、器官等等、包括脉管组织和循环系统、以及有病的组织、包括癌组织。"患者的部位"例如包括将要被诊断图像显像的部位。尽管患者的部位"也"可能是体外的，但是最好在体内。
脉管组织"表示血管(包括动脉、静脉、毛细血管等)。
'胃肠部位"包括食管、胃、小肠和大肠以及直肠所定义的部位。
与习惯一样，这里" 与习惯一样，这里J
与习惯一样，这里与习惯一样，这里患者部位。与习惯一样，这里
显像部位。与习惯一样，这里穿过心脏的心室。与习惯一样，这里与习惯一样，这里
肾部位"是指肾和直接连接肾的脉管组织，包括腹主动脉。 目标部位"和"目标区"交叉使用，均表示希望药剂到达的
欲显像部位"和"显像部位"交叉使用，均表示患者的预期
心室血流或心室增强作用"是指血流以一个或多个心脏循环
心房血流"是指血流以一个或多个循环穿过心脏的心房。 心肌血流"是指血液以一个或多个循环数在心脏肌肉或心肌的脉管组织中(包括在心脏的血管中)的流动。与习惯一样，这里"心肌血容量"是指在心脏肌肉或心肌的脉管组织中的血液的量。与习惯一样，这里
张周期和收缩周期。与习惯一样，这里像在亮度上的增加。与习惯一样，这里相对增加了的图像。与习惯一样，这里^与习惯一样，这里
心动周期"是指心脏的一个完整的收缩周期，包括心脏的舒
增加的亮度"是指与没有超声对比剂而获得的图像相比，图
增强的显像"是指与没有超声对比剂而获得图像相比，亮度
持续时间"是指显像的增加亮度可以被检出的总时间。
冠状动脉血管扩张剂"是指生理活性物质例如双嘧哌胺醇 (dipyridamole)或腺苷,当这些药物被患者服用时,能够引起心血管部位脉管组织的扩张。II.微粒
在优选方案中，微粒包含聚合物、脂类和全氟化碳气体。微粒可以既包含微球体也包含微胶囊，或只包含微球体或微胶囊。聚合物在优选方案中，微粒由合成聚合物形成。合成聚合物产生生物相容且无生物材料污染的微粒。另外，优选合成聚合物，是因为合成聚合物在体外和体内可再生合成和降解。根据体内稳定性所需要的时间选择聚合物，该例如时间是分布到欲显像的部位所需要的时间， 以及显像所需要的时间。合成聚合物可以被修饰以产生性质不同的微粒(例如，改变分子量和/或功能基团)。典型的合成聚合物有聚醇酸例如聚乳酸、聚羟基乙酸、和聚(乳酸共羟基乙酸)、 聚乙交酯(polyglycolides)、聚交酯、聚(丙交酯共乙交酯)及其混合物、聚酐、聚原酸酯 (polyorthoesters)、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烃,例如聚乙烯和聚丙烯、聚二醇例如聚乙二醇、氧化聚烯烃例如聚环氧乙烷聚乙烯醇、聚戊酸、和聚(丙交酯共己内酯)、及其衍生物、 共聚物和混合物。这里“衍生物”包括化学基团经取代、加成的聚合物，例如本领域技术人员通常使用的烷基、烷撑、羟基化、氧化及其他修饰。优选的可生物降解的聚合物的具体例子包括醇酸例如乳酸和羟基乙酸的聚合物、聚交酯、聚乙交酯(polyorthoesters)、聚(丙交酯共乙交酯)、与PEG的共聚物、聚酐、 聚(邻)酯、聚氨酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚(丙交酯共己内酯)及其共聚物。最佳优选聚合物是聚(丙交酯共乙交酯)，其中丙交酯对乙交酯的比例为50 50(即I : I)且聚合物的重均分子量在20，000-40, 000道尔顿范围内。重均分子量(Mw)是基于单个聚合物链分布内具有给定分子量的分子质量而计算出的平均分子量。Mw可以用凝胶渗透色谱法 (GPC)来测定。疏水化合物在一个优选方案中，如美国专利No. 5，837，221所描述的，聚合物包括一种疏水化合物。通常，例如脂类，它是疏水性的且在聚合物内部的量是一个有效剂量，结合这样的化合物会通过微粒限制水的渗透和/或吸收，也因此限制了微粒中气体的损失。这会有效增加由包含脂类、合成聚合物和包封有气体尤其是氟化气体例如全氟化碳的微粒所提供的增强显像的持续时间。能够用来固定聚合物微粒内部气体的脂类包括但不局限于下列种类的脂类脂肪酸及其衍生物、甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯、磷脂、鞘脂类、胆固醇和类固醇衍生物、萜烯和维生素。脂肪酸及其衍生物可以包括(但不局限于)饱和和不饱和脂肪酸、奇数和偶数的脂肪酸、顺反异构体、以及脂肪酸衍生物包括乙醇、酯、酸酐、羟基脂肪酸和前列腺素。可以使用的饱和和不饱和脂肪酸包括但不局限于具有12-22个碳原子的直链或支链分子。可以使用的饱和脂肪酸的例子包括但是不局限于月桂酸、肉豆蘧酸、棕榈酸和硬脂酸。可以使用的不饱和脂肪酸的例子包括但是不局限于月桂酸、抹香鲸酸、肉豆蘧烯酸、棕榈油酸、 岩芹酸和油酸。可以使用的支链脂肪酸的例子包括但是不局限于异月桂酸、异肉豆蘧酸、 异棕榈酸、异硬脂酸和异戊二烯类。脂肪酸衍生物包括12-(((7' -二乙氨基香豆素-3-) 羰基)甲氨基)_硬脂酸；N-[12_(((7' 二乙氨基香豆素-3-)羰基)甲基氨基)十八酰基]-2-氨基棕榈酸、N- 丁二酰-二油酰磷脂酰基乙醇胺和棕榈酰-高半胱氨酸；和/或它们的组合物。可以使用的甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯及其衍生物包括但是不局限于分子的碳原子数为6-24之间的脂肪酸或脂肪酸的混合物，二半乳糖基二甘油酯、I，2- 二油酰基-sn-甘油；I，2- 二棕榈酰基-sn-3- 丁二酰基甘油；和I，3- 二棕榈酰基_2_ 丁二酰基甘油。能够使用的磷脂包括但是不局限于磷脂酸、带有饱和与不饱和脂类的卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰衍生物、心磷脂、和酰基烷基磷脂。磷脂的例子包括但是不局限于二油酰基磷脂酰胆碱(dioleoylphosphatidylcholine) (DOPC)、二肉豆蘧酰基磷脂酰胆碱 (dimyri stoy lphosphat idyl cho line, DMPC)、双十五酸基憐脂酸胆喊(dipentadecanoylp hosphat idyl cho line, DPDPC)、二月桂酸基憐脂酸胆喊(dilauroylphosphatidylcholine, DLPC)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(dipalmi toy lphosphat idyl choline, DPPC)、二硬 脂酰基磷脂酰胆碱(di stearoy lphosphat idyl choline, DSPC)、二花生酰基磷脂酰胆碱(diarachidoy lphosphat idyl choline, DAPC)、二山箭炔酰基磷脂酰胆碱 (dibehenoy lphosphat idyl cho line, DBPC)、双二十三烧酸基憐脂酸胆喊(ditricosanoyl phosphatidylcholine DTPC)、二木脂酸基憐脂酸胆喊(dilignoceroylphatidylcholine DLPC);和磷脂酰乙醇胺,例如二油酰基磷脂酰基乙醇胺(dioleoylphosphatidylethanola mine)或I-十六烷基-2-棕榈酰甘油磷酸乙醇胺。也可以使用带有不对称的酰基链(例如带有一个6碳原子的酰基链和另一个12碳原子的酰基链)的合成磷脂。可以使用的鞘脂类包括神经酰胺、鞘磷脂、脑苷脂类、神经节苷脂、脑硫脂和溶血脑硫脂。神经鞘脂的例子包括但是不局限于神经节苷脂GM和GM2。可以使用的类固醇包括但是不局限于胆固醇、胆固醇硫酸酯、胆固醇半琥珀酸酯、6-(5-胆固醇-3 β-氧)己基-6-氨基-6-脱氧-I-硫代-a D-乳糖吡喃糖苷、6-(5-胆留烯_3β_氧)己基6_氨基6_脱氧-I-硫代-a D-甘露卩比喃糖苷以及(胆留烯基-4' -二甲基-35-胺基)丁酸酯。可以使用的其他的脂类化合物包括生育酚及其衍生物，以及油和衍生油，例如硬脂酰胺。许多阳离子脂类都可以使用，例如D0TMA，N-[I-(2，3-二氧化油酰基)丙基-N，N， N-三甲基氯化物；D0TAP、1，2-二氧化油酰基-3-(三甲氨基)丙烷；和D0TB、1，2-二油酰基-3- (4'-三甲基)丁酰基-sn-甘油。最优选的脂类是磷脂，最好为DPPC、DAPC, DSPC、DTPC、DBPC, DLPC,最好为DPPC、 DSPC、DAPC 和 DBPC。脂类的含量范围为O. 01-30% (脂类重量/聚合物重量)；最好为O. 1-20% (脂类重量/聚合物重量)，最优选为1-12% (脂类重量/聚合物重量)。当微粒由本发明所述的方法形成时，其大小可以得到良好的重现。这里，除非另作说明，术语颗粒的"大小"或"直径"是指数均粒子大小。下面列举一个可用于定义数均粒子大小(Xn)的等式的例子。
权利要求
1.一种试剂盒，其包含一种剂量配方和用于重新配制该剂量配方的溶液，其中该剂量配方包含微球体，所述微球体含有聚醇酸或者其共聚物或混合物、以及疏水化合物，并且所述微球体包封有在体温下为气体的全氟化碳气体，并且其中所述微球体是具有蜂窝状构造或海绵样结构的多孔球形，并且其中所述微球体为干粉，并且所述微球体用溶液重新配制形成等渗悬浮液，该悬浮液中的微球体浓度为1.0X109到 3. 5 X IO9微球体/mL悬浮液或微球体质量浓度为25 50mg微球体/mL悬浮液，并且其中剂量配方中所述微球体的剂量范围为O. 5 4. Omg微球体/kg体重,从而适合于在心肌中提供与没有服用对比剂时相比大于I分钟的增强超声波图像。
2.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述悬浮液中的微球体浓度范围为I.5 X IO9到2. 8 X IO9微球体/mL的悬浮液或微球体质量浓度为30到45mg微球体/mL的悬浮液。
3.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述微球体具有小于8微米的平均粒度。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述微球体具有I.9 2. 6微米的平均粒度。
5.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述剂量从O.5mg微球体/kg体重、2. Omg 微球体/kg体重和4. Omg微球体/kg体重中选择。
6.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述气体选自CF4、C2F4,C2F6, C3F6, C3F8, C4F8、C4F10 ο
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述气体是全氟正丁烷，以75 500μ g/ mL给药量的微球体悬浮液提供。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述气体是全氟正丁烷，以100 400 μ g/mL给药量的微球体悬浮液提供。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述气体是全氟正丁烷，以150 350 μ g/mL给药量的微球体悬浮液提供。
10.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述气体是八氟正丙烷，以75 375 μ g/mL给药量的微球体悬浮液提供。
11.如权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述八氟正丙烷以120 300μ g/mL给药量的微球体悬浮液提供。
12.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述疏水化合物与所述聚醇酸或者其共聚物或混合物以O. 01 30% (疏水化合物重量/聚醇酸或者其共聚物或混合物重量)的比例混合。
13.如权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述疏水化合物为脂类。
14.如权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述脂类是磷脂，选自二油酰基磷脂酰胆碱、二肉豆蘧酰基磷脂酰胆碱、双十五酰基磷脂酰胆碱、二月桂酰基磷脂酰胆碱、二棕榈酰基磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二花生酰基磷脂酰胆碱、二山嵛炔酰基磷脂酰胆碱、双二十三烷酰基磷脂酰胆碱、二木脂酰基磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺。
15.如权利要求14所述的试剂盒，其特征在于，所述聚醇酸共聚物是丙交酯与乙交酯的比例为I : I、重均分子量为20 40kDa的聚(丙交酯共乙交酯)，所述脂类是以5 .6.6% (脂类重量/聚醇酸共聚物重量)的比例与所述聚醇酸共聚物混合的二花生酰磷脂酰胆碱。
16.如权利要求I所述的试剂盒，其特征在于，所述悬浮液进一步含有一种或多种选自糖、盐和表面活性剂的赋形剂。
17.一种制造用于超声对比显像的组合物的方法，包括在溶液中悬浮含有聚醇酸或者其共聚物或混合物、以及疏水化合物的微球体；将所述悬浮液放入小瓶或注射器中；冷冻所述悬浮液；使所述小瓶冻干以在小瓶或注射器中产生干粉；和用在体温下为气体的全氟化碳气体回充冷冻干燥器以得到组合物，其中所述组合物包含微球体，并且所述微球体包封有全氟化碳气体，并且其中所述微球体是具有蜂窝状构造或海绵样结构的多孔球形，并且其中所述微球体为干粉，并且当微球体在使用之前用药学可接受的载体进行重新配制时，它们可形成第二悬浮液， 该第二悬浮液是等渗悬浮液，其中的微球体浓度为I. O X IO9到3. 5 X IO9微球体/mL第二悬浮液或微球体质量浓度为25 50mg微球体/mL第二悬浮液，并且其中剂量配方中所述微球体的剂量范围为O. 5 4. Omg微球体/kg体重,从而适合于在心肌中提供与没有服用对比剂时相比大于I分钟的增强超声波图像。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述悬浮液进一步含有赋形剂。
19.一种制造用于超声对比显像的组合物的方法，包括将含有聚醇酸或者其共聚物或混合物、以及疏水化合物的溶液中微球体干法混合；将混合物放入小瓶或注射器中；抽真空后，用在体温下为气体的全氟化碳气体充满小瓶或注射器以得到组合物，其中所述组合物包含微球体，所述微球体包封有全氟化碳气体，并且其中所述微球体是具有蜂窝状构造或海绵样结构的多孔球形，并且其中所述微球体为干粉，并且当微球体在使用之前用药学可接受的载体进行重新配制时，它们可形成等渗悬浮液， 该悬浮液中的微球体浓度为I. OX IO9到3. 5 X IO9微球体/mL悬浮液或微球体质量浓度为 25 50mg微球体/mL悬浮液，并且其中剂量配方中所述微球体的剂量范围为O. 5 4. Omg微球体/kg体重,从而适合于在心肌中提供与没有服用对比剂时相比大于I分钟的增强超声波图像。
20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述混合物进一步含有赋形剂。
全文摘要
临床研究已经实施并开发了具体的剂量配方，该剂量配方使用了能够提供显著增强显像且持续时间长的全氟化碳气体，将其并入聚合物的微粒开发而成。剂量配方包括由生物相容聚合物和全氟化碳形成的微粒，其中，聚合物最好混有脂类，全氟化碳在体温下为气体。所述微粒以对增强超声波显像有效的剂量给患者给药，在心室的时间为大于5分钟和/或在心肌中为大于一分钟，剂量范围为0.025到8.0mg微粒/kg体重。剂量范围优选为0.05到4.0mg微粒/kg体重。所述剂量配方一般是装在小瓶内提供。在一个典型的配方中，剂量配方由使用之前需用无菌水重新配制的干粉形成，具体而言向装有干粉的小瓶或注射器内添加水，然后摇动以产生等渗的或等渗压的微粒悬浮液。
文档编号A61K49/22GK102600485SQ201210028040
公开日2012年7月25日 申请日期2004年6月4日 优先权日2004年6月4日
发明者唐纳德·E·柴克林Ⅲ, 理查德·沃勒维奇, 茱丽·斯常博, 霍华德·伯恩斯坦 申请人:阿库斯菲尔公司