六味地黄汤提取物在治疗痴呆或认知功能障碍中的用途

六味地黄汤提取物在治疗痴呆或认知功能障碍中的用途
【专利摘要】本发明涉及六味地黄汤提取物的用途，具体涉及六味地黄汤提取物在制备预防和/或治疗痴呆或认知功能障碍的药物中的用途。本发明的六味地黄汤提取物能够明显改善痴呆模型小鼠的物体识别记忆能力、空间学习记忆能力、被动回避反应能力和主动回避反应能力，可用于预防和/或治疗痴呆或认知功能障碍，具有很好的应用前景。
【专利说明】六味地黄汤提取物在治疗痴呆或认知功能障碍中的用途

【技术领域】
[0001] 本发明涉及六味地黄汤提取物的用途，具体涉及六味地黄汤提取物在制备预防和 /或治疗痴呆或认知功能障碍的药物中的用途。

【背景技术】
[0002] 痴呆是脑部疾病所致的综合征，它通常具有慢性进行性的性质，并在意识清楚的 情况下，出现多种高级皮层功能奈乱，通常伴有认知功能的损伤，偶尔W情绪控制和社会行 为或动机的衰退为前驱症状。它不同于先天精神发育迟滞，并且通常要求认知功能障碍持 续存在至少6个月。轻度认知障碍（mild CO即itive impairment,MCI)特指那些记忆或认 知功能下降但未达到痴呆标准的人，MCI发展成痴呆的危险性高于正常人群，向阿尔茨海默 病（Alzheimer's Disease, AD)的年转化率是正常人群的10倍，MCI被认为是正常衰老向 痴呆的过渡阶段。
[0003] 目前国际上对痴呆的分类主要有3类；①老年性痴呆也称阿尔茨海默病 (Alzheimer's Disease, AD)，是发生在老年期及老年前期的一种慢性进行性退化性脑变性 疾病，W进行性记忆减退、认知障碍、人格改变为主要特征。分为家族遗传性老年性痴呆和 散发性两种，而家族遗传性老年性痴呆又分为早发型和晚发型。②血管性痴呆（Vascular Dementia, VaD)，是由于脑血管疾病的原因，造成缺血性、出血性及急慢性缺血缺氧性脑血 管疾病引起的脑组织损害基础上产生的W高级神经认知功能障碍为主的一组临床综合征。 主要包括多发梗死性痴呆、多发性腔隙性痴呆、脑淀粉样血管病变、脑低灌注性痴呆W及出 血性痴呆等。③混合性痴呆，指既有老年性痴呆又有血管性痴呆或其他类型痴呆，其他类 型痴呆主要包括额顯叶痴呆（F'ronto-Temproal Dementia, FTD)、路易体痴呆值ementia of Lewy Body, DLB)、帕金森病性痴呆（Parkinson Disease Dementia)、亨廷顿病伴痴呆 (Huntington Disease Dementia)、皮质基底节变性（Corticobasal Degeneration)等痴呆 类型。其中阿尔茨海默病占痴呆症50 %?60 %，位于第一，而第二位便是血管性痴呆。
[0004] 对于痴呆的治疗药物主要包括；①抗精神病药，其适应症为痴呆伴发的幻觉和妄 想等精神病性症状，还有严重的激越和兴奋情况下也可用，在擔妄也可W应用。临床研究 资料表明，所有传统抗精神病药物在用于痴呆的治疗中都有一定疗效，但疗效相当，并且在 使用传统抗精神病药物治疗痴呆患者伴发的激越中，只有18%的患者能从中获益，而且传 统药物很容易产生难W耐受的副反应。由于传统抗精神病药物的副反应，近年来开始使用 非传统抗精神病药物：氯氮平、利培丽、奧氮平、奎的平。虽然非传统抗精神药物的疗效和 安全性较传统抗精神药物有一定的提高，但也会出现锥体外系、嗜睡、过度镇静和粒细胞 缺乏等副反应，同时氯氮平有明显的抗胆碱能的作用，因此也不适用于痴呆患者。②情感 调节药物，其适应症为痴呆伴发的激越和攻击性，但会产生皮疹、镇静、运动不能、肝损伤 等副作用，并且对于患者的认知功能改善效果较差。③抗抑郁药，其适应症为痴呆患者伴 随激越或攻击性而发生的抑郁表现，它虽然可W有效的抗抑郁，改善患者的感情淡漠、抑 郁、易激惹、意识混浊、焦虑、恐惧及坐立不安。但其副作用也较为明显，主要包括；镇静、 体位性低血压W及擔妄。④己醜胆碱醋酶抑制剂，越来越多的临床试验证明己醜胆碱醋 酶抑制剂不但能改善认知功能，而且对于轻度和中度AD患者伴发的行为与精神症状也有 效，但其只能延缓病程而不能从根本上改善痴呆患者认知功能。⑥N-甲基-D-天冬氨酸 (N-methyl-D-aspartic acid, NMDA)受体枯抗剂，NMDA受体在涉及学习和记忆的各种形式 的突触可塑性方面起重要作用，NMDA受体被明显激活而产生兴奋性毒性。但是完全阻断 NMDA受体也损害正常突触传递。
[0005] 目前对于MCI的治疗尚无统一方案，没有通过FDA批准的预防和/或治疗的药物， 一般的治疗是应用神经保护药和促智药，如维生素E、维生素C和化拉西坦，叶酸、维生素 B12低于正常水平者进行补充，但疗效还在研究。
[0006] 实际中，仍需要更为有效且副作用小的治疗痴呆或认知功能障碍的药物。
[0007] 传统中药因其副作用小且标本兼治广受患者信赖，六味地黄方作为其中的代表名 方经过千年传承，具有显著的滋阴补肾、增强免疫、抗衰老等功效，但尚无严格的临床研究 证明其对痴呆或认知功能障碍有治疗作用。而对于六味地黄汤提取物，更无证明其对痴呆 或认知功能障碍有改善或治疗作用。


【发明内容】

[0008] 本发明的发明人经过大量创造性研究，发现传统中药名方六味地黄汤经过科学处 理和提取后，能够明显改善痴呆模型小鼠的物体识别记忆能力、被动回避反应能力、主动回 避反应能力及空间学习记忆能力。本发明即基于W上发现而完成。
[0009] 本发明提供了六味地黄汤提取物在制备预防和/或治疗痴呆或认知功能障碍的 药物中的用途。
[0010] 根据本发明任一项所述的用途，其中六味地黄汤的原料药由熟地黄、山莱英、 山药、泽泻、牡丹皮和巧冬六味中药配伍组成，优选地，按照巧.8?7. 3) :(4.4?3.6): (4. 4?3. 6) : (3. 3?2. 7) : (3. 3?2. 7) : (3. 3?2. 7)的重量比例配伍组成，特别优选地， 按照8 ;4 ;4 ;3 ;3 ;3的重量比例配伍组成。
[0011] 根据本发明任一项所述的用途，其中六味地黄汤提取物包括11. 4-17. 0重量％的 多糖，1. 85-2. 27重量％的糖巧（糖式）W及23. 5-35. 5重量％的寡糖。
[0012] 在本发明的实施方案中，所述六味地黄汤提取物包括14. 2重量％的多糖。
[0013] 在本发明的实施方案中，所述六味地黄汤提取物包括2. 06重量％的糖巧（糖式）。
[0014] 在本发明的实施方案中，所述六味地黄汤提取物包括29. 5重量％的寡糖。
[0015] 在本发明的具体实施方案中，所述六味地黄汤提取物含有14. 2重量％的多糖， 2. 06重量％的糖巧（糖式）W及29. 5重量％的寡糖。
[0016] 根据本发明任一项所述的用途，其中所述的多糖含有鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、 半乳糖和半乳糖酵酸。
[0017] 根据本发明任一项所述的用途，所述糖巧含有莫诺巧、马钱素和巧药巧。
[001引在本发明的实施方案中，所述莫诺巧、马钱素和巧药巧的含量分别为 0. 92-1. 12%、0. 48-0. 60%和 0. 44-0. 53%。
[0019] 根据本发明任一项所述的用途，其中所述的寡糖为甘露H糖。
[0020] 根据本发明任一项所述的用途，其中六味地黄汤提取物的制备方法包括W下步 骤：
[0021] i )将由熟地黄、山莱英、山药、泽泻、丹皮和巧冬按巧.8?7.:3) :(4.4?3.6): (4. 4?3. 6) : (3. 3?2. 7) : (3. 3?2. 7) : (3. 3?2. 7)的重量比例组成的混合物，优选地， 按8 ;4 ;4 ;3 ;3 ;3组成的混合物用水蒸煮一次或多次（例如两次或H次），然后浓缩至浸 膏；
[0022] ii )伴随揽拌往浸膏中加入C1-4焼基醇至浓度10-40% (v/v)(例如25-35% v/ V，例如30% v/v)，放置，离也，W及任选的冲洗的步骤，将离也所得上清液与任选的洗液合 并为上清液；
[002引址）浓缩上清液，伴随揽拌往浓缩液中加C1-4焼基醇至浓度50-95 % (v/v)(例如 55-80% v/v，例如60% v/v)，放置，分离得部位A和上清液；
[0024] iv )将化）中上清液进行大孔吸附树脂柱层析，用水和极性有机溶剂依次洗脱，极 性有机溶剂洗脱液浓缩后得部位B ;
[0025] V )将iv )中水洗脱液浓缩后上活性炭柱，用水和极性有机溶剂依次洗脱，极性有 机溶剂洗脱液浓缩后得部位C ;
[0026] Vi)将化）中部位A，iv )中部位B和V )中部位C合并即得所述六味地黄汤提取 物。
[0027] 在本发明的实施方案中，其中六味地黄汤提取物的制备方法包括W下（1)-(3)项 中的一项或多项：
[002引 （1)步骤iv )中的大孔吸附树脂可W为所有型号的弱极性大孔吸附树脂，例如为 HP-20 ；
[0029] (2)其中Cw焼基醇选自甲醇、己醇中的一种或两种；
[0030] (3)其中所述极性有机溶剂选自甲醇、己醇、丙醇和丙丽中的一种或多种，其浓度 范围为10-95%，例如为20-60%，例如为30%。
[0031] 根据本发明任一项所述的用途，其中所述药物还包括药学上可接受的载体或赋形 剂。
[0032] 根据本发明任一项所述的用途，所述痴呆或认知功能障碍疾病选自(1)中枢神经系 统变性疾病；阿尔茨海默病、轻度认知障碍、额-顯叶痴呆、Prion病、路易体痴呆、帕金森 病、亨廷顿病；口)非变性病痴呆：①血管性痴呆；②占位性病变引起的痴呆；肿瘤、慢性硬膜 下血肿、慢性脑賊肿引起的痴呆；③感染引起的痴呆：脑膜脑炎、神经梅毒、艾滋病、阮蛋白 病引起的痴呆；④脑外伤性痴呆；⑥正常颇压性脑积水引起的痴呆；⑧内分泌代谢障碍引 起的痴呆；内分泌障碍、库欣综合征、高膜岛素血症、甲状腺功能低下、垂体功能减退、低血 糖、肝功能衰竭、肾衰竭、肺功能衰竭、慢性电解质奈乱、血扑晰病、维生素炬1、烟酸、叶酸、 维生素B12等）缺乏引起的痴呆；⑦中毒、缺氧（酒精、重金属、一氧化碳、药物、缺氧等）引 起的痴呆；⑨副肿瘤综合征引起的痴呆。
[0033] 下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
[0034] 本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此， 本发明仍然希望再次对该些术语和短语更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公 知含义不一致的，W本发明所表述的含义为准。
[00巧]本发明所述"六味地黄汤"为中药汤剂，是由熟地黄、山莱英、山药、泽泻、牡丹皮和 巧冬六味中药按照一定的重量比例配伍组成而制作的水煎剂。
[0036] 本发明所述"六味地黄汤提取物"，是W熟地黄、山莱英、山药、泽泻、牡丹皮和巧冬 为原料，按照一定配比，经过物理化学提取分离过程，定向获取和浓集其中的某一种或多种 有效成分而形成的混合物产品。在本发明的实施方案中，所述六味地黄汤提取物的制备方 法和各组分含量测定方法参照中国发明专利CN1626228A。在本发明的具体实施方案中，所 述六味地黄汤提取物参照中国发明专利CN1626228A中实施例1的方法制备，也称为六味地 黄巧糖。
[0037] 在本发明的实施方案中，所述"六味地黄巧糖"是指包括14. 2重量％的多糖，2. 06 重量％的糖巧（莫诺巧、马钱素和巧药巧）和29. 5重量％的甘露H糖的六味地黄汤提取 物，其中六味地黄汤的原料药由熟地黄、山莱英、山药、泽泻、牡丹皮和巧冬六味中药W 8: 4 ;4 ;3 ;3 ;3的重量比例配伍组成。
[0038] 本文所用术语"治疗"具有其一般含义，并且在本文特别地是指对已经罹患痴呆或 认知功能障碍的哺乳动物采用本发明的联合用药物或药盒产品进行处理，W期对所述痴呆 或认知功能障碍产生治疗、治愈、缓解、减轻等作用。
[0039] 类似地，本文所用术语"预防"具有其一般含义，并且在本文特别地是指对可能罹 患痴呆或认知功能障碍或者对本发明所述痴呆或认知功能障碍具有罹患风险的哺乳动物 采用本发明的联合用药物或药盒产品进行处理，W期对所述痴呆或认知功能障碍产生防 止、预防、阻止、隔断等作用。
[0040] 本文所用术语"药学可接受的"通常是指制药领域可使用，对产品或者对哺乳动物 无害，或具有合理的或可接受的利益/风险比。
[0041] 本文所用术语"载体"或"赋形剂"可W是制药领域中任何常规的载体和赋形剂。 具体的载体和赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用 于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例 女口，可W作为药学上可接受的载体或赋形剂包括药学领域常规的载体、赋形剂、稀释剂、填 充剂、溶剂、支持剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂 等。必要时，还可W包括香味剂、防腐剂和甜味剂等。
[0042] 根据本发明，所述的药物剂型包括但不限于；片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、注射液、 注射用粉剂、透皮贴剂、软膏剂、凝胶剂、栓剂、口服溶液、口服混息液、注射用乳剂、口服乳 剂等、缓释片剂、控释片剂等。上述各种剂型的药物均可W按照药学领域的常规方法制备。
[0043] 本发明所述的六味地黄汤提取物能明显改善痴呆模型小鼠的物体识别记忆能力、 空间学习记忆能力、被动回避反应能力和主动回避反应能力，可用于痴呆或认知功能障碍 的预防和/或治疗。
[0044] 尤其地，在家族遗传性痴呆模型小鼠试验中，本发明的六味地黄汤提取物在各实 验中的治疗作用普遍优于阳性对照药物。

【具体实施方式】
[0045] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可W通过市购获得的常规产品。
[0046] 本发明的痴呆模型小鼠分为两类，一类属于散发或自发型痴呆模型，为快速老化 模型小鼠 P 系（Senescence Accelerated Mouse-Prone)中 SAMP8 亚系，10 月龄，对照小鼠 为抗快速老化模型小鼠 R 系（Senescence Accelerated Mouse-Resistant)中 SAMRl 亚系， 10月龄，本实验自繁殖；一类属于家族或遗传型痴呆模型，为APPswe/PSldcg双转基因小鼠， 12月龄。野生型为巧7BL/6J小鼠，12月龄，购自北京华阜康生物科技有限公司（SCXK北京 2009-0004)。
[0047] 本发明分别选取盐酸美金刚和盐酸多奈脈齐作为阳性药对照组，采用灌胃给药。
[0048] 盐酸多奈脈齐（北京偶合科技有限公司，120014-06-4)，分子式；C24肥9N03 ?肥1， 分子量;416 ;
[0049] 盐酸美金刚。（北京偶合科技有限公司，41100-52-1)，分子式；C12肥IN,分子量： 216。
[0050] 本发明W六味地黄巧糖作为供试药物，采用灌胃给药，
[005。 该药物参照中国发明专利CN1626228A中实施例1的方法制备得到。
[0052] 本发明的六味地黄巧糖进行了 3批动物实验，连续给药4个月。
[0053] 下述实施例中所用的药物剂量如下：
[0054] 盐酸多奈脈齐10毫克Ag体重，盐酸美金刚30毫克Ag体重，六味地黄巧糖160 毫克Ag体重。
[00巧]连施例1.本发明的六味化黄巧糖对于快谏老化樽巧小鼠的物体识别巧能力的 燃
[0056] 1.材料
[0057] 1. 1动物；快速老化模型小鼠SAMP8 (清洁级）和抗快速老化模型小鼠SAMRl (清 洁级），体重29?33g。
[0058] 1. 2试剂药品：盐酸多奈脈齐；盐酸美金刚；六味地黄巧糖。
[0059] 1. 3实验仪器；订制测试箱尺寸为30X30X30cm(宽X长X高），箱体为黑色不 透明有机玻璃，箱底为透明有机玻璃。通过Anymaze软件对小鼠探究物体视频的采集。
[0060] 2.方法
[0061] 2.1给药方法
[0062] 根据小鼠的体重，采取随机分组的方法将小鼠分为五组；正常对照组（SAMR1型正 常小鼠），模型对照组（SAMP8型散发自发型痴呆模型小鼠），阳性药对照组（盐酸多奈脈齐 组和盐酸美金刚组），六味地黄巧糖组，每组10只。用药剂量参照成人临床剂量，盐酸多奈 脈齐10毫克Ag体重，盐酸美金刚30毫克Ag体重，六味地黄巧糖160毫克Ag体重，均 W去离子水为溶剂配成溶液对小鼠进行灌胃，每日1次，每次按小鼠体重0. Olml/g，正常溶 剂对照组和模型溶剂对照组则W等体积去离子水灌胃，其中正常溶剂对照组是指正常小鼠 给予去离子水为溶剂作为对照，模型溶剂对照组是指模型小鼠给予去离子水为溶剂作为对 照。
[0063] 2. 2新异物体识别实验
[0064] 实验开始前对Anymaze软件进行设置，并检测其工作状态是否正常。
[0065] 适应期；将每只小鼠放入不含测试物体的测试箱内20min，小鼠自由活动，W适应 新环境。两小鼠之间需对箱体内的环境进行必要的清理，除去异味，供识别物体使用5%酒 精擦拭，箱体使用自来水清洁。
[0066] 学习期：将两个相同的物体分别标记为a和b，放入箱体两端一侧，分别将每 一组小鼠放入测试箱体另一侧中央。分别累计16min内小鼠探查两个物体各自总时间 巧xploratcxry Time) ;Tal和化。判断标准为；小鼠面向物体，鼻子触碰或者贴近物体距离 小于1cm。任何非正面身体与物体接触，或者越过、爬上物体眺望均不计入小鼠探查物体时 间。
[0067] 测试期：分为短时记忆与长期记忆两阶段考察。短时记忆于训练期后1虹，长时记 忆则于训练期2化r或者更长时间（根据具体情况选择时间的长短，短期记忆或者长期记 忆也可根据情况进行选择）。将两个相同物体之一 b替换为新物体（Novel object)c，其 他条件不变。依次将小鼠放入测试箱内，分别累计4min内小鼠探查新旧物体各自总时间 巧xploratoiT Time) ;Ta2和TcdW优先指数Preferential index(P. I) = (T c/(Ta2+Tc)) 作为小鼠认知功能的指标。该指标越高代表小鼠的记忆能力越高。正常小鼠优先指数在 70% 社。
[0068] 2. 3统计方法
[0069] 统计学处理；数据W均数+标准差（玉±S )表示，采用GraphPad 5. 03软件进行统 计分析。
[0070] 3.结果
[0071] 实验结果详见表1。
[0072] 表1各给药组对痴呆模型小鼠（SAMP8和SAMR1)新异物体识别实验中优先指数的 影响（免tS，n = 10)
[0073]

【权利要求】
1. 六味地黄汤提取物在制备预防和/或治疗痴呆或认知功能障碍的药物中的用途。
2. 根据权利要求1所述的用途，其中所述六味地黄汤的原料药由熟地黄、山茱萸、 山药、泽泻、牡丹皮和茯苓六味中药配伍组成，优选地，按照（8. 8?7. 3) :(4. 4?3.6): (4. 4?3. 6) : (3. 3?2. 7) : (3. 3?2. 7) : (3. 3?2. 7)的重量比例配伍组成，特别优选地， 按照8 :4 :4 :3 :3 :3的重量比例配伍组成。
3. 根据权利要求1或2所述的用途，其中所述六味地黄汤提取物包括11. 4-17. 0重 量％的多糖，1. 85-2. 27重量％的糖苷以及23. 5-35. 5重量％的寡糖。
4. 根据权利要求3所述的用途，其中所述的多糖含有鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳 糖和半乳糖醛酸。
5. 根据权利要求3所述的用途，其中所述的糖苷含有莫诺苷、马钱素和芍药苷。
6. 根据权利要求3所述的用途，其中所述的寡糖为甘露三糖。
7. 根据权利要求1-6任一项所述的用途，其中所述六味地黄汤提取物的制备方法包括 以下步骤： i )将由熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、丹皮和茯苓按（8.8?7. 3) :(4.4?3.6): (4. 4?3. 6) : (3. 3?2. 7) : (3. 3?2. 7) : (3. 3?2. 7)的重量比例组成的混合物，优选地， 按8 :4 :4 :3 :3 :3组成的混合物用水蒸煮一次或多次（例如两次或三次），然后浓缩至浸 膏； ? )伴随搅拌往浸膏中加入(；_4烷基醇至浓度10-40% (v/v)(例如25-35% v/v，例如 30% v/v)，放置，离心，以及任选的冲洗的步骤，将离心所得上清液与任选的洗液合并为上 清液； iii )浓缩上清液，伴随搅拌往浓缩液中加入(V4烷基醇至浓度50-95 % (v/v)(例如 55-80% v/v，例如60 % v/v)，放置，分离得部位A和上清液； iv)将iii)中上清液进行大孔吸附树脂柱层析，用水和极性有机溶剂依次洗脱，极性有 机溶剂洗脱液浓缩后得部位B ; v )将iv)中水洗脱液浓缩后上活性炭柱，用水和极性有机溶剂依次洗脱，极性有机溶 剂洗脱液浓缩后得部位C ; vi )将iii )中部位A，iv )中部位B和v )中部位C合并即得到所述六味地黄汤提取 物。
8. 根据权利要求1-7任一项所述的用途，其中所述药物还含有药学上可接受的载体或 赋形剂。
9. 根据权利要求1-8任一项所述的用途，所述痴呆和/或认知功能障碍选自⑴中枢神 经系统变性疾病：阿尔茨海默病、轻度认知障碍、额-颞叶痴呆、Prion病、路易体痴呆、帕 金森病、亨廷顿病；⑵非变性病痴呆：①血管性痴呆；②占位性病变引起的痴呆：肿瘤、慢性 硬膜下血肿、慢性脑脓肿引起的痴呆；③感染引起的痴呆：脑膜脑炎、神经梅毒、艾滋病、阮 蛋白病引起的痴呆；④脑外伤性痴呆；⑤正常颅压性脑积水引起的痴呆；⑥内分泌代谢障 碍引起的痴呆：内分泌障碍、库欣综合征、高胰岛素血症、甲状腺功能低下、垂体功能减退、 低血糖、肝功能衰竭、肾衰竭、肺功能衰竭、慢性电解质紊乱、血卟啉病、维生素（B1、烟酸、叶 酸、维生素 B12等）缺乏引起的痴呆；⑦中毒、缺氧（酒精、重金属、一氧化碳、药物、缺氧等） 引起的痴呆；⑧副肿瘤综合征引起的痴呆。
【文档编号】A61K36/8945GK104225167SQ201410551142
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年10月17日 优先权日:2014年10月17日
【发明者】张永祥, 周文霞, 程肖蕊, 王健辉, 曾菊, 徐一冉, 张小锐, 刘港, 程军平 申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所