专利名称：羊胚胎素冻干粉及制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及羊胚胎素的应用，也涉及护肤类化妆品生产技术领域。
背景技术：
现在护肤类化妆品应用传统技术エ艺制作，一般都添加一定比例的防腐剤，以抑制化妆品中细菌的滋生。随着羊胚胎素的开发，现有一些产品也采用了羊胚胎素提取液，但由于羊胚胎素很难在液态类、膏霜类等护肤化妆品中长期保持生物类提取物质的活性，因此现有的产品不能达到预期的效果
发明内容
本发明目的在于提出ー种能保持羊胚胎素生物活性的羊胚胎素冻干粉。本发明包括羊胚胎素、右旋糖酐40和海藻糖。本发明还提出上述羊胚胎素冻干粉的制备エ艺
本发明制备エ艺步骤是
1)在80 90°C温度条件下，将右旋糖酐40溶解于纯化水中，冷却至60 70°C后加入海藻糖，搅拌溶解形成透明液体，然后将透明液体经微孔滤膜过滤，取滤过液；
2)将步骤I)取得的滤过液冷却至40 45°C，加入羊胚胎素原液，搅拌均匀，再经微孔滤膜过滤，取滤过液；
3)将步骤2)取得的滤过液通入无菌的微孔滤膜过滤容器中，进行常温无菌处理，过滤后将所得滤过液密封包装；
4)将密封包装的半成品在冻干箱中，控制冻干箱内温度先从室温降温至-35°C，再从-35°C升到5°C，中间经过抽真空步骤，最后取出密封包装的成品，常温保存。本发明应用冻干技术在制备护肤化妆品中，依靠冷冻干燥后，无水真空密封的条件，使化妆品在无菌并且不添加任何防腐剂的情况下，在常温下长期有效的保持羊胚胎素中的生物活性。本发明特点
1、运用冻干技术可以使化妆品在不添加防腐剂的情况下，长期有效保质，完全去除化妆品因为防腐剂的刺激对皮肤导致的副作用；
2、冻干技术可长期保持羊胚胎素的生物活性，使羊胚胎素的护肤效果真正普及至广大消费者。另，本发明所述羊胚胎素原液、右旋糖酐40、海藻糖和纯化水的投料比为60 4
4 32。本发明以羊胚胎素原液为主要成分，少量右旋糖酐40为冻干赋形剂，少量海藻糖可以有效地保护羊胚胎素中活性蛋白质分子，因为右旋糖酐需加热溶解，所以需要部分纯化水溶解。本发明所述步骤I)中的微孔滤膜的孔径为O. 80 μ m，此孔径为首次粗滤，目的在于去除直径大于O. 80 μ m的杂质。
本发明所述步骤2)的微孔滤膜的孔径为O. 22 μ m。此处使用O. 22 μ m孔径为在非无菌环境中精滤，去除细菌，确保下一步骤无菌处理顺利进行。本发明所述步骤3)的微孔滤膜的孔径为O. 22 μ m。此处使用的O. 22 μ m孔径滤膜
及滤器已经消毒无菌处理，确保此步骤所得滤液完全无菌。
具体实施例方式一、制备羊胚胎素冻干粉 分别称取羊胚胎素原液60kg、右旋糖酐40 4 kg、海藻糖4 kg、纯化水32 kg。生产步骤
I、将右旋糖酐40和纯化水混合置于加热容器内，加热至80 90°C，待完全溶解至澄清后，冷却至60 70°C后，现向容器内加入海藻糖，搅拌使之溶解成透明液体，将透明液体经
O.SOym孔径的微孔滤膜过滤，取滤过液A。2、将滤过液A冷却至40 45°C，加入羊胚胎素原液，搅拌均匀，再经O. 22 μ m孔径的微孔滤膜过滤，滤过液B。3、将滤过液B通入已无菌消毒、微孔滤膜孔径为0.22 μ m的过滤容器中，进行常温无菌处理，此步骤必须在无菌万级洁净区完成，过滤后将所得液体分装入3ml玻璃瓶，每瓶Iml液体，送入冻干箱。4、在冻干箱中，依设定好的冻干程序，从室温到-35°C，再从_35°C到5°C，中间经过抽真空步骤，确保产品内的水分完全升华，形成白色块状为宜。5、从冻干箱中取出玻璃瓶，于常温下保存。ニ、冻干粉的活性检测
I、将制成的羊胚胎素冻干粉进行动物试验
实验动物BALB/C公鼠，80只，每只体重20 ± 3g。分为8组，每组10只。将制成的冻干粉溶解于纯化水中，制成浓度分别为O. llg/Ι的羊胚胎素水溶液。其中7组分别注射配置好的羊胚胎素水溶液，剂量分别为2mg/kg/. bw、4mg/kg/.bw、8mg/kg/· bw0I组为空白对照组，注射生理盐水。毎日一次，连续注射15天，眼眶采血用于检測。全血样分离淋巴细胞后测定T细胞亚群中⑶3、⑶4和⑶8的活性，全血分离血清后測定IgG、IgM、IgA ;超氧化物岐化酶(SOD)和表皮生长因子(EGF)、白细胞介素_2 (IL-2)。检测方法
超氧化物岐化酶(SOD)用酶法检測，试剂盒由南京聚カ研究所生产销售。表皮生长因子(EGF)用ELISA方法检测，试剂盒采购自加拿大YES公司。白细胞介素-2(IL_2)用ELISA方法检测，试剂盒采用ORIGINAL公司。T细胞亚群的检测，应用康赛生物技术公司的免疫荧光诊断试剂盒。检测结果显示，羊胚胎素冻干粉经试验证实有以下生物学活性
Cl)小鼠的超氧化物岐化酶(SOD)增高，最高由正常的87 Iu/ml升高到184Iu/ml ；
(2)小鼠的白细胞介素-2(IL-2)升高，由正常的152pg/ml升高到204pg /ml ；
(3)T淋巴细胞亚群中⑶3、⑶4增强，说明T淋巴细胞的抗原信号识别和信号传导加強；
(4)小鼠体内的IgG升高，由正常的2.7升高到4. I ；
(5)表皮生长因子(EGF)由正常的118pg/ml升 高到136pg/ml。2、干粉活性的长效试验
本试验以检测超氧化物岐化酶(SOD)来判断同一温度下含水羊胚胎素和羊胚胎素冻干粉(无水)的活性保持区別。所用羊胚胎素冻干粉为同一批次产品，溶解羊胚胎素所用水均为无菌处理过的纯化水。在27 °C室温下，开盖
权利要求
1.羊胚胎素冻干粉，其特征在于包括羊胚胎素、右旋糖酐40和海藻糖。
2.如权利要求I所述羊胚胎素冻干粉的制备エ艺，其特征在于包括以下步骤 1)在80 90°C温度条件下，将右旋糖酐40溶解于纯化水中，冷却至60 70°C后加入海藻糖，搅拌溶解形成透明液体，然后将透明液体经微孔滤膜过滤，取滤过液； 2)将步骤I)取得的滤过液冷却至40 45°C，加入羊胚胎素原液，搅拌均匀，再经微孔滤膜过滤，取滤过液； 3)将步骤2)取得的滤过液通入无菌的微孔滤膜过滤容器中，进行常温无菌处理，过滤后将所得滤过液密封包装； 4)将密封包装的半成品在冻干箱中，控制冻干箱内温度先从室温降温至_35°C，再从-35°C升到5°C，中间经过抽真空步骤，最后取出密封包装的成品，常温保存。
3.根据权利要求2所述羊胚胎素冻干粉的制备エ艺，其特征在于所述羊胚胎素原液、右旋糖酐40、海藻糖和纯化水的投料比为60 : 4 : 4 : 32。
4.根据权利要求2或3所述羊胚胎素冻干粉的制备エ艺，其特征在于所述步骤I)中的微孔滤膜的孔径为O. SOym0
5.根据权利要求4所述羊胚胎素冻干粉的制备エ艺，其特征在于所述步骤2)的微孔滤膜的孔径为O. 22 μ m。
6.根据权利要求5所述羊胚胎素冻干粉的制备エ艺，其特征在于所述步骤3)的微孔滤膜的孔径为O. 22 μ m。
全文摘要
羊胚胎素冻干粉及制备工艺，涉及羊胚胎素的应用，也涉及护肤类化妆品生产技术领域，由羊胚胎素、右旋糖酐40和海藻糖组成，本发明应用冻干技术在制备护肤化妆品中，依靠冷冻干燥后，无水真空密封的条件，使化妆品在无菌并且不添加任何防腐剂的情况下，在常温下长期有效的保持羊胚胎素中的生物活性。
文档编号A61K8/98GK102688176SQ20121019508
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月14日 优先权日2012年6月14日
发明者周旻昊, 王挺, 袁佩瑾 申请人:扬州扬大联环药业基因工程有限公司