专利名称：一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药材有效成分提取技术领域，特别涉及一种浙贝母总生物碱粗提取
物干膏。
背景技术：
浙贝母为百合科贝母属，浙贝母的干燥鳞茎，为传统常用中药之一，被列为著名的“浙八味”之一，其味苦、性寒，有清热润肺、化痰止咳、散结消肿等功效。浙贝母的主要活性成分为生物碱，含有浙贝甲素、浙贝乙素、原贝母碱、浙贝母苷、异浙贝甲素等。浙贝母中的总生物碱含量很低，仅含0. 12% -0. 25% (质量分数)，这给浙贝母的 总生物碱提取带来了特殊的困难。目前，对浙贝母总生物碱提取物制备方法的文献研究不多，且现有技术中提取工艺消耗溶剂量过大、提取效率低、成本过高、不适用于工业化大生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏，本发明使用逆流法提取浙贝母中的总生物碱，其能够更加充分地对总生物碱成分进行提取，与现有技术方法相比具有节省溶剂、提取效率高、成本低等特点，适于工业化生产制备。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏，采用逆流提取法进行提取得到，所述逆流提取法依次包括以下步骤步骤(I):取浙贝母，粉碎后加入质量分数为65-85%的乙醇水溶液，30_60°C下逆流提取4-6h，过滤后合并收集滤液，浓缩，得浓缩液；步骤(2):所述浓缩液中加入质量分数为2%的盐酸，充分搅拌，过滤，收集滤液，残渣用质量分数为2%的盐酸溶液洗涤两次，合并上述滤液；步骤(3):采用质量分数5%的氢氧化钾碱化步骤(2)所得滤液，调PH值至
7.0-9. 0，所得溶液以乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，得所述浙贝母总生物碱提取物，所述浙贝母总生物碱提取物在70°C真空干燥，即得到所述浙贝母总生物碱粗提取物干膏。本文所述“减压浓缩”为低温真空浓缩，其温度控制在1(T20°C。浓缩的程度是使所得最终的蔓越莓提取物的固形物含量控制在其重量的0. 49Tl%。在所述步骤(I)中，加入质量分数为75%乙醇水溶液，在40°C下逆流提取6小时。所述步骤(2)中，所述浓缩液中加入1/4倍生药材量的质量分数为2%盐酸。所述步骤(3)调PH值至8. O。本发明与现有技术相比，具有如下优点( I)本发明所采用逆流提取法，能够更加充分地对生物碱类成分进行提取，与现有技术方法相比具有节省溶剂、提取效率高、成本低等特点，适于工业化生产。
图I是乙醇的质量百分数(％)与浸出液中总生物碱质量(mg)的关系图。图2是接触时间(h)与浸出液中总生物碱质量(mg)的关系图。图3是温度(V )与浸出液中总生物碱质量(mg)的关系图。图4是本发明一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏的制备方法使用的装置的示意图。
具体实施方式
一、提取工艺条件考察I、浸出条件实验 (I)乙醇浓度对生物碱类化合物浸出效果的影响工业生产中，由于原料中常含有一定的水分，乙醇经循环使用后亦含有一定水分，乙醇浓度对生物碱类化合物的浸出存在很大的影响，故以不同浓度乙醇液对生物碱类物质进行浸出实验，以总生物碱质量跟踪分析。在乙醇浓度对从原料中浸出生物碱类的影响实验中，分别取5份原料，每份40. OOg,进行实验，以不同浓度的乙醇水溶液各180. 00ml，浸提6h，比较所得总生物碱质量；同时比较乙醇浓度对浸出后的固液分离及渣含量的影响，其结果如图I所示。由图I可知，相同条件下，浸出能力强弱依次为75% >80% >70% >85% >65%，因此，选择75%乙醇水溶液作为浸出剂。(2)接触时间对生物碱类化合物浸出效果的影响分别取6份原料，每份40. OOg,各加入浓度为75%的乙醇水溶液180. OOml进行浸出，接触时间分别为lh，2h，3h，4h，5h，6h，其浸出结果如图2所示。由图2可知，室温下(26°C )，浸出时间为6h，浸出反应基本达到平衡；延长浸出时间，浸出率基本不变。(3)温度对生物碱类化合物浸出效果的影响分别取6份原料粉料，每份40. OOg,各加入180. OOml浓度为75 %的乙醇水溶液，在不同的温度下浸出，浸出时间为2h，取样检测浸出液中总生物碱质量，结果如图3所示。由图3可知，随着浸出温度的增加，生物碱类的浸出率也相应的增加；在温度达到40°C时，增加温度，生物碱类的浸出率增加趋于缓慢。2、四段逆流渗漉法(工艺简图见图4)共安装了 6根￠25. 4mmX IOOOmm玻璃括口管，做为四段逆流渗漉浸出实验的浸出器(浸出柱)，其中四根运行，两根做周转用。每根柱中装入150. OOg浙贝母原料粉碎料(简称原料，以下同)，用计量泵将浸出剂(65-85%乙醇水溶液)，以约5ml ^mirT1的流量打入第一根浸出柱中，乙醇水溶液以约Icm HiirT1速度渗漉，当第一柱流出450ml浸出液后，将第一柱与第二柱接通。计量泵打入的新浸出剂经第一柱，流出进入第二柱；与上相同，当第二柱流出450ml黑色浸出液后，将第二柱与第三柱接通。依此类推，等到第四根柱流出450ml流出液后，将第四根柱与第五根柱接通。同时，将计量泵出口管从第一柱上端移至第二柱上端与第二柱接通(第一柱从系统中撤出)。此时，新的浸出剂，经计量泵进第二柱，经三、四、五柱后，从第五柱流出，同样取450ml浸出液；此后，新浸出剂进第三柱，从第六柱出浸出液。依此类推，不断循环进行四段逆流渗漉浸出实验至达到浸出平衡。本试验中第九柱开始至第十二柱止，这四根柱流出的浸出液已近似平衡时的浸出液，故当新的浸出剂从从第九根柱进，经十、^ 、十二柱，而从第十二柱下流出450ml黑色浸出液后,停止浸出试验。将九、十、十一、十二柱流出的浸出液取样，送检，测定总生物碱质量。(注柱体均为循环使用，九，十，十一，十二仅代表标号，不具实际意义)3、四段逆流渗漉浸出试验结果如上述的逆流法进行试验。每份样品为150. Og,以75%乙醇为浸出液，40°C下浸提6h，液固比为3。取九、十、十一、十二柱流出的浸出液进行测定，其结果如表I所示。表I四段逆流渗漉浸出试验结果
浸出柱号浸出液体积浸出总生物碱质量浸出总生物碱质量平均值浸出率(平均值) _(m0_(HiM)_(ma)_(%)
94*^0 0351.75
10450.0353.38352.6394.03
11450.0353.25
12450.0_352.14_从表I可知，浙贝母中总生物碱含量以0. 25%计，则四段逆流渗漉浸出法(以浸出液计)其浸出率达到94. 03% (以总生物碱计)。实施例以下通过具体实施例，对本发明作进一步的详细描述。实施例I :取浙贝母药材150g，加入4. 5倍量质量分数为70%的乙醇溶液、30°C下逆流提取4h，过滤后合并收集滤液，浓缩,浓缩液加入1/4倍生药材量质量分数为2%的盐酸，充分搅拌,过滤，收集滤液,残渣用质量分数为2%的盐酸溶液洗涤两次，合并上述滤液,滤液用用质量分数为5 %的NaOH溶液调pH值至7，所得溶液乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，萃取液减压浓缩，得浙贝母总生物碱提取物，所述浙贝母总生物碱提取物在70°C真空干燥，即得到所述浙贝母总生物碱粗提取物干膏790. 3mg。所述“减压浓缩”为低温真空浓缩，其温度控制在15°C。浓缩的程度是使所得最终的蔓越莓提取物的固形物含量控制在其重量的0. 5%。实施例2:取浙贝母药材150g，加入4. 5倍量质量分数为75%的乙醇溶液、40°C下逆流提取6h，过滤后合并收集滤液，浓缩,浓缩液加入1/4倍生药材量质量分数为2%的盐酸，充分搅拌,过滤，收集滤液,残渣用质量分数为2%的盐酸溶液洗涤两次，合并上述滤液,滤液用用质量分数为5 %的NaOH溶液调pH值至8，所得溶液乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，萃取液减压浓缩，得浙贝母总生物碱提取物，所述浙贝母总生物碱提取物在70°C真空干燥，即得到所述浙贝母总生物碱粗提取物干膏784. 5mg。所述“减压浓缩”为低温真空浓缩，其温度控制在10°C。浓缩的程度是使所得最终的蔓越莓提取物的固形物含量控制在其重量的0. 4%。实施例3
取浙贝母药材150g，加入4. 5倍量质量分数为80%的乙醇溶液、50°C下逆流提取5h，过滤后合并收集滤液，浓缩,浓缩液加入1/4倍生药材量质量分数为2%的盐酸，充分搅拌,过滤，收集滤液,残渣用质量分数为2%的盐酸溶液洗涤两次，合并上述滤液,滤液用用质量分数为5 %的NaOH溶液调pH值至9，所得溶液乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，萃取液减压浓缩，得浙贝母总生物碱提取物，所述浙贝母总生物碱提取物在70°C真空干燥，即得到所述浙贝母总生物碱粗提取物干膏792. 6mg。所述“减压浓缩”为低温真空浓缩，其温度控制在20°C。浓缩的程度是使所得最终的蔓越莓提取物的固形物含量控制在其重量的1%。含量测定取实施例I 3中所得的浙贝母的总生物碱提取物干膏12mg，用氯仿定容至IOOmL作为总生物碱提取物干膏中总生物碱含量测定用供试品溶液。
药材中总生物碱含量测定方法精密称定浙贝母粉末(过4号筛)2g，用氨水ImL 润湿15min后,加2OmL乙醚-氯仿-无水乙醇(体积比为25 : 8 : 2. 5),称重,超声处理40min,称重,用提取溶剂补足重量,4000r mirT1离心,精密吸取上清液5mL,蒸干,残洛加氯仿溶解并定容至10mL，摇匀，作为浙贝母药材中总生物碱含量测定用供试品溶液。精密称取浙贝甲素对照品5. 52mg,加氯仿溶解定容至50mL，作为对照品溶液。精密吸取总生物碱提取物干膏中总生物碱含量测定用供试品溶液I. 5mL、浙贝母中总生物碱含量测定用供试品溶液I. 5mL、对照品溶液lmL、2mL以及空白对照溶液氯仿，分别置于25mL容量瓶中，加入pH值为5. 0的邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液5mL及0. OOlmol L—1的溴麝香草酚蓝试液2mL，氯仿定容至刻度，充分摇匀后移入分液漏斗中，静置40min，分取氯仿层移至预先放有0. 20g无水硫酸钠(预先于105°C加热Ih)的具塞锥形瓶中，密闭摇匀，取上清液在416nm处测定吸光度，根据标准曲线计算浙贝母药材中总生物碱含量为0. 25%，根据以下公式计算总生物碱提取物干膏中的总生物碱含量
权利要求
1.一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏，其特征在于，采用逆流提取法进行提取得到，所述逆流提取法依次包括以下步骤 步骤(I):取浙贝母，粉碎后加入质量分数为65-85%的乙醇水溶液，30-60°C下逆流提取4-6h，过滤后合并收集滤液，浓缩，得浓缩液； 步骤(2):所述浓缩液中加入质量分数为2%的盐酸，充分搅拌，过滤，收集滤液，残渣用质量分数为2%的盐酸溶液洗涤两次，合并上述滤液； 步骤(3):采用质量分数5%的氢氧化钾碱化步骤(2)所得滤液，调PH值至7. 0-9. 0，所得溶液以乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，得浙贝母总生物碱提取物，所述浙贝母总生物碱提取物在70°C真空干燥，即得到所述浙贝母总生物碱粗提取物干膏。
2.如权利要求I所述的一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏，其特征在于，在所述步骤(I)中，加入质量分数为75%乙醇水溶液，在40°C下逆流提取6小时。
3.如权利要求I所述的一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏，其特征在于，所述步骤(2)中，所述浓缩液中加入1/4倍生药材量的质量分数为2%盐酸。
4.如权利要求I所述的一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏，其特征在于，所述步骤(3)调PH值至8. O。
5.如权利要求I所述的一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏，其特征在于，所述一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏中总生物碱含量为43. 6% ^44. 9%。
全文摘要
本发明公开了一种浙贝母总生物碱粗提取物干膏，采用逆流提取法进行提取得到，包括以下步骤步骤(1)取浙贝母，粉碎后加入65-85%的乙醇水溶液，30-60℃下逆流提取4-6h，过滤后合并收集滤液，浓缩，得浓缩液；步骤(2)所述浓缩液中加入盐酸，充分搅拌，过滤，收集滤液，残渣用盐酸溶液洗涤两次，合并上述滤液；步骤(3)采用质量分数5%的氢氧化钾碱化步骤(2)所得滤液，调pH值7.0-9.0，所得溶液以乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，得所述浙贝母总生物碱提取物。本发明采用逆流提取法，能够更加充分地对生物碱类成分进行提取，与现有技术方法相比具有节省溶剂、提取效率高、成本低等特点，适于工业化生产。
文档编号A61P11/14GK102772638SQ20121028323
公开日2012年11月14日 申请日期2012年8月10日 优先权日2012年8月10日
发明者季进军 申请人:宁波杰顺生物科技有限公司