一种自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法
【专利摘要】本发明公开了一种自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法。目前对厚朴粗提物进行分离和厚朴酚与厚朴酚的方法中，有的成本太高，而且生产量小，大规模生产不易实现。本发明利用厚朴粗提物中含有的厚朴酚与和厚朴酚在弱极性溶液中与一定浓度的碱性条件下能达到完全分离的特点，首先使用弱碱性溶剂从混合溶液中提取出厚朴酚，和厚朴酚保留在溶液中，再以强碱溶液萃取出和厚朴酚，将一些油类杂质保留在有机溶剂层，然后分别调酸，析出沉淀，这时所得的粗晶中厚朴酚与和厚朴酚含量有大幅度提高。本发明分离、纯化工艺简单易行，适合工业化大生产，所制得的厚朴酚、和厚朴酚可用于开发单一成分新药。
【专利说明】一种自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及自植物提取浸膏中制备天然化学品的方法，具体地说是一种从厚朴粗提物中提取出单一成分和厚朴酚与厚朴酚的方法。
【背景技术】
[0002]厚朴酌'(Magnolol)与和厚朴酌'(Honokiol)是中药厚朴的主要化学成分。药理试验表明，厚朴酚具有特殊的、持久的肌肉松弛作用及较强的抗菌作用，可抑制血小板聚集，临床上主要用作抗菌、抗真菌药。在抗菌作用方面，厚朴酚对格兰氏阳性菌、耐酸性菌、丝状真菌有显著的抗菌活性，对变形链球菌有更加显著的抗菌作用，对葡萄球菌的抑制作用最强。临床上主要用作消除胸腹满闷、镇静中枢神经、运动员肌肉松弛、抗真菌、抗溃疡等药。和厚朴酚在抗肿瘤治疗方面存在着巨大的潜力，有文献报道，和厚朴酚的抗肿瘤作用具有多靶点、多环节、多效应的特点，并且毒副作用低，不仅对常见的肿瘤细胞有明显的细胞毒作用，对于一些有药物抵抗的肿瘤细胞(如多发性骨髓瘤细胞)也有一定的治疗效果。
[0003]中国专利申请号201310217604.7公开了厚朴酚作为CYP2E1酶抑制剂的用途，研究结果表明厚朴酚对高脂高糖饲料喂养-低剂量STZ诱导的二型糖尿病大鼠的肝脏CYP2EI酶活性具有显著的抑制作用，对CYP2E1酶高表达所导致的大鼠肝脏氧化应激损伤具有明显保护作用，能明显降低糖尿病大鼠的血糖与血脂水平。这些实验依据和理论基础，都提示厚朴酚作为单一 成分开发既有很强的科学性和创新性，又有很高的开发应用价值。
[0004]目前对厚朴粗提物进行分离和厚朴酚与厚朴酚的工艺主要是大孔树脂吸附法、TLC制备分离法、高速逆流萃取法、硅胶柱层析法、高效液相色谱制备法等，高速逆流萃取法、高效液相色谱制备法设备昂贵，前期投入很大，成本太高，而且操作复杂，生产量小，大规模生产不易实现；硅胶柱层析法、大孔树脂吸附法虽然可以规模生产但得到的单一成分含量不高，且工作量大，周期长，生产成本太高，产品根本没有市场竞争力；TLC制备分离法只能用于实验室的小量制备，不能用于大规模工业生产。
[0005]中国专利申请号201110328031.6公开了一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法，其特点是先用乙醇溶液提取出厚朴总酚，再将厚朴总酚进行硅胶湿法装柱层析分离，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇进行洗脱，得到的厚朴酚含量只有90%左右，而且母液需重新硅胶柱纯化，周期长，效率低，成本高，不适合工业化大生产。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术存在的缺陷，提供一种从厚朴粗提物中提取高纯度厚朴酚与和厚朴酚的方法，用于开发新的厚朴单体制剂，提高附加值。
[0007]为此，本发明采用如下的技术方案:一种自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法，其步骤如下:
I)加热溶解:将厚朴粗提物干粉称重，按重量比加入10-20倍量的有机溶剂低极性烷烃或低极性醚，加热回流溶解2-4小时，得到的溶液中加入4-6倍溶剂体积的ρΗΙΟ-ll的缓冲溶液，保持溶液温度60~80°C，充分搅拌均匀，0.5~Ih后静置，分层；
2)萃取:将步骤I)所得的下层缓冲溶液收集，并乘热分离干净上层的有机溶剂；将上层有机层再以4-6倍溶剂体积的ρΗΙΟ-ll的缓冲溶液萃取，共五次，收集下层缓冲溶液；将上层有机层用4-6倍其体积的0.5-1.5%氢氧化钠溶液萃取I~3次，并乘热分离，收集下层氢氧化钠溶液；
3)酸化、沉淀:将步骤2)所得的下层缓冲溶液合并，冷却后加盐酸，调pH值为
2.5-3.5，静置析出沉淀，即 为厚朴酚粗晶；将步骤2)所得的下层氢氧化钠溶液合并，冷却后加盐酸，调pH值为2.5-3.5,静置析出沉淀，即为和厚朴酹粗晶；
4)重结晶、纯化:所述的重结晶是将步骤3)所得厚朴酚粗晶用10~20倍石油醚于60~80°C回流溶解后，析出下层的油层及污物，乘热分离出上层的石油醚，冷置后析晶，SP为98%以上的厚朴酚；同法，将步骤3)所得和厚朴酚粗晶处理后即得98%以上的和厚朴酚。
[0008]本发明利用厚朴粗提物中含有的厚朴酚与和厚朴酚在弱极性溶剂(即低极性溶剂)中与一定浓度的碱性条件下(即弱碱性溶液)能达到完全分离的特点，首先使用弱碱性溶液(ρΗΙΟ-ll缓冲溶液)从混合溶液中提取出厚朴酚，和厚朴酚保留在溶液中，再以强碱溶液(0.5-1.5%氢氧化钠)萃取出和厚朴酚，将一些油类杂质保留在有机溶剂层，然后分别调酸，析出沉淀，这时所得的粗晶中厚朴酚与和厚朴酚含量有大幅度提高(从百分之三十提高到百分之九十以上)，而且由于pH值控制到位(ρΗΙΟ-ll，特别ρΗΙΟ.5)，厚朴酚与和厚朴酚分离很彻底，所含杂质主要是一些挥发油，只需一步石油醚处理即可达到98%以上含量，更易进行大生产操作。
[0009]进一步，所述的低极性烷烃为正己烷或者环己烷。
[0010]进一步，所述的低极性醚为石油醚。
[0011]进一步,步骤2)中,萃取所用的缓冲溶液pH值为10.5,可保证厚朴酹与和厚朴酹的最大分离。
[0012]进一步，ρΗΙΟ.5缓冲溶液的配制方法为:碳酸氢钠2.1g和氢氧化钠0.712g，加水至1000ml,碳酸氢钠、氢氧化钠为分析纯,水为纯化水；pH10.5缓冲溶液的配制方法也可以为:碳酸氢钠2.1g和氢氧化钠0.9g,碳酸氢钠、氢氧化钠为工业级,水为饮用水。
[0013]进一步，萃取所用氢氧化钠溶液的质量百分浓度为1.0%。
[0014]进一步，所述的厚朴粗提物干粉中厚朴酚的含量在35-42%，萃取后所得粗晶中厚朴酚的含量在95%左右；和厚朴酚的含量在38-45%，萃取后所得粗晶中和厚朴酚的含量在93%左右。
[0015]本发明充分利用了厚朴酚与和厚朴酚在ρΗΙΟ~11间能达到完全分离的特点，首先精确配制缓冲溶液使PH稳定在10.5，达到最佳分离点，保证了萃取的选择性好、处理量大，使萃取完全、彻底；本发明分离、纯化工艺简单易行，适合工业化大生产，所制得的厚朴酚、和厚朴酚可用于开发单一成分新药。
【具体实施方式】
[0016]下面结合【具体实施方式】对本发明做进一步的说明，但不限于本实施例的范围。
[0017]实施例1
取厚朴粗提物100g，加环己烷1000ml，置10000ml圆底烧瓶中，于水浴上85°C加热回流热溶，待开始回流时反应2小时。取纯化水加热至约80°C左右，分析纯碳酸氢钠2.1g和分析纯氢氧化钠0.712g，加纯化水至1000ml，配制成ρΗΙΟ.5缓冲液。按前述方法配成的5000ml缓冲液加入10000ml圆底烧瓶中，开启搅拌30分钟使混合充分，静置10分钟后置分液漏斗上分层，分取下层缓冲液层，同法操作五次，取残留液检测无厚朴酚斑点后加入1%氢氧化钠溶液萃取和厚朴酚；将下层缓冲液层加入4MHCL (每1000ml缓冲液加入10ml4M盐酸)，使pH在3左右，充分搅拌后静置析晶，即得厚朴酚粗晶41.2g ;将下层氢氧化钠溶液加入4MHCL (每1000ml氢氧化钠溶液加入70ml4M盐酸)，使pH在2~3左右，充分搅拌后静置析晶，即得和厚朴酚粗晶43.1g ;厚朴酚粗晶41.2g加入410ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，可看到下层有部分油层和污物，乘热将上层干净石油醚倾入结晶皿中，冷置析晶，晶体以80°C干燥，得厚朴酚38.8g，含量99.03% ;和厚朴酚粗晶43.1g加入430ml石油醚(60~90°C)于80°C水浴回流溶解，析出下层油层，乘热将上层干净石油醚倾入结晶皿，冷置析晶，晶体以65°C干燥，得和厚朴酚40.llg，含量99.2%。
[0018]实施例2
取厚朴粗提物lOOOg，加环己烷10000ml，于100L反应釜中80°C加热回流3小时；另取饮用水IOOKg置敞口锅中加热至80°C左右，按氢氧化钠0.9g，碳酸氢钠2.lg，加饮用水至1000ml的比例加入碳酸氢钠和氢氧化钠，搅拌使充分溶解成ρΗΙΟ.5的缓冲液。开启反应釜搅拌机，边搅拌边加入50Kg缓冲液，再搅拌15分钟后，静置，分层；同法操作，共萃取五次，取残留液点样检测无厚朴酚斑点，取饮用水配制1%氢氧化钠溶液，萃取二次即可。将下层缓冲液层加入4MHCL ( 每1000ml缓冲液加入10ml4M盐酸)，使pH在3左右，充分搅拌后静置析晶，即得厚朴酚粗晶408g ;将下层氢氧化钠溶液加入4MHCL (每1000ml氢氧化钠溶液加入70ml4M盐酸)，使pH在2~3左右，充分搅拌后静置析晶，即得和厚朴酚粗晶425g ;厚朴酚粗晶408g加入4000ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，可看到下层有部分油层和污物，乘热将上层干净石油醚倾入结晶皿中，冷置析晶，晶体以80°C干燥，得厚朴酚381g，含量99.11% ;和厚朴酚粗晶425g加入4200ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，析出下层油层，乘热将上层干净石油醚倾入结晶皿，冷置析晶，晶体以65°C干燥，得和厚朴酚417.5g，含量98.6%。
[0019]实施例3
取厚朴粗提物10Kg，加环己烷80Kg，于多功能提取罐中加热回流4小时，使充分热溶；另取500Kg饮用水置敞口锅中，蒸汽加热至80°C左右，按氢氧化钠0.9g，碳酸氢钠2.lg，加饮用水至1000ml的比例加入碳酸氢钠和氢氧化钠，搅拌使充分溶解成ρΗΙΟ.5的缓冲液。开启多功能提取罐搅拌机，边搅拌边加入500Kg缓冲液，再搅拌15分钟后，静置，分层；同法操作，共萃取五次，取残留液点样检测无厚朴酚斑点，取饮用水配制1%氢氧化钠溶液，萃取二次。将下层缓冲液层加入4MHCL(每1000ml缓冲液加入10ml4M盐酸)，使pH在3左右，充分搅拌后静置析晶，即得厚朴酚粗晶4.14Kg ;将下层氢氧化钠溶液加入4MHCL(每1000ml氢氧化钠溶液加入70ml4M盐酸)，使pH在2~3左右，充分搅拌后静置析晶，即得和厚朴酚粗晶
4.53Kg ;厚朴酚粗晶4.14Kg加入41000ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，可看到下层有部分油层和污物，乘热将上层干净石油醚倾入结晶皿中，冷置析晶，晶体以80°C干燥，得厚朴酚3.98Kg，含量99.05% ;和厚朴酚粗晶4.53Kg加入45000ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，析出下层油层，乘热将上层干净石油醚倾入结晶皿，冷置析晶，晶体以65°C干燥，得和厚朴酚4.32Kg，含量99.02%。
[0020]上述实施例中厚朴酚与和厚朴酚的高效液相检测方法为:高效液相色谱仪Agilent 1260 ;流动相:甲醇一水(78:22);色谱柱:C18柱(4.6 X 250mm);检测波长选择294nm ;流速为:1.0ml/min,室温操作。
[0021]过程控制中TLC方法:硅 胶G薄层板10X 20cm ;展开剂:苯一甲醇(27:1);显色剂为:1%香草醛硫酸溶液，喷后在100°C加热至斑点显色清晰。
【权利要求】
1.一种自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法，其步骤如下: . 1)加热溶解:将厚朴粗提物干粉称重，按重量比加入10-20倍量的有机溶剂低极性烷烃或低极性醚，加热回流溶解2-4小时，得到的溶液中加入4-6倍溶剂体积的ρΗΙΟ-11的缓冲溶液，保持溶液温度60~80°C，充分搅拌均匀，0.5~Ih后静置，分层； . 2)萃取:将步骤I)所得的下层缓冲溶液收集，并乘热分离干净上层的有机溶剂；将上层有机层再以4-6倍溶剂体积的ρΗΙΟ-ll的缓冲溶液萃取，共五次，收集下层缓冲溶液；将上层有机层用4-6倍其体积的0.5-1.5%氢氧化钠溶液萃取I~3次，并乘热分离，收集下层氢氧化钠溶液； 3)酸化、沉淀:将步骤2)所得的下层缓冲溶液合并，冷却后加盐酸，调pH值为.2.5-3.5，静置析出沉淀，即为厚朴酚粗晶；将步骤2)所得的下层氢氧化钠溶液合并，冷却后加盐酸，调pH值为2.5-3.5,静置析出沉淀，即为和厚朴酹粗晶； 4)重结晶、纯化:所述的重结晶是将步骤3)所得厚朴酚粗晶用10~20倍石油醚于60~80°C回流溶解后，析出下层的油层及污物，乘热分离出上层的石油醚，冷置后析晶，SP为98%以上的厚朴酚；同法，将步骤3)所得和厚朴酚粗晶处理后即得98%以上的和厚朴酚。
2.根据权利要求1所述的自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法，其特征在于，所述的低极性烷烃为环己烷或正己烷。
3.根据权利要求1所述的自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法，其特征在于，所述的低极性醚为石油醚。
4.根据权利要求1、2或3所述的自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法，其特征在于，步骤2)中，萃取所用的缓冲溶液pH值为10.5。
5.根据权利要求4所述的自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法，其特征在于，ρΗΙΟ.5缓冲溶液的配制方法为:碳酸氢钠2.1g和氢氧化钠0.712g，加水至1000ml，碳酸氢钠、氢氧化钠为分析纯，水为纯化水。
6.根据权利要求4所述的自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法，其特征在于，ρΗΙΟ.5缓冲溶液的配制方法为:碳酸氢钠2.1g和氢氧化钠0.9g，碳酸氢钠、氢氧化钠为工业级，水为饮用水。
7.根据权利要求1、2或3所述的自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法，其特征在于，萃取所用氢氧化钠溶液的质量百分浓度为1.0%。
8.根据权利要求1、2或3所述的自厚朴粗提物中提取和厚朴酚与厚朴酚的方法，其特征在于，所述的厚朴粗提物干粉中厚朴酚的含量在35-42%，和厚朴酚的含量在38-45%。
【文档编号】C07C37/84GK103922899SQ201410161323
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月22日 优先权日:2014年4月22日
【发明者】吕文辉, 刘法千, 鲍立曾 申请人:浙江得恩德制药有限公司