专利名称：：蓼子朴提取物及其提取方法、用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种药物
技术领域：
的提取物及其提取方法、用途，具体是一种寥子朴提取物及其提取方法、用途。
背景技术：
：蓼子朴(Inulasalsoloides(Turc.)Ostenf.)为菊科旋覆花属植物。蓼子朴的花以及开花前的全草均可药用，有解热、利尿的功能，其全草还可作为治疗脉管炎的主药。在中国的新疆、内蒙古、青海东北部、陕西、河北、山西、辽宁中西部均有广泛的分布。旋覆花属植物在全世界有着广泛的分布，全球共有100余种，其中中国分布共有25余种。国内外学者先后从该属植物中分离得到黄酮、倍半萜内酯、萜类等结构类型的化合物，其中倍半萜内酯是其中一类主要的成分。倍半萜内酯具有很重要的生理功能和生理活性，具有驱虫杀虫、抗菌抗肿瘤、抗病毒、免疫抑制等多种作用，有的还有神经系统活性。倍半萜内酯还因为其结构简单，并且具有多种结构形式，可作为研发药物的先导化合物。目前，关于寥子朴的化学成分的文献不多，到目前为止仅报道了十余种化合物，均为倍半萜类成分。1994年，Bing-NanZhou等(ZhouBN，BaiNS，LinLZ，CordellGA.SesquiterpenelactonesfromI.salsoloides.Phytochemistry1994;36:721724)人从寥子朴中分得两个新的倍半萜内酯i皿lasalsolin和i皿lasalsolide，以及两个已知的4t合物eupatolide禾口budleinB，并发I见inulasalsolin禾口eupatolideX寸kB禾口P-388细胞株具有一定的细胞毒性；1996年，F.Jesks等人(JeskF，HuneckS，JakupovicJ.FurthersesquiterpenelactonesfromI.salsoloides.Phytochem1996;41:1539-42)从该植物中发现数十个化合物，其中包括吉玛烷型倍半萜内酯，linearsesquiterpenes以及melampolide类型的结构；李玉平等(李玉平，慕小倩，冯俊涛，张兴，几种菊科植物杀菌活性的初步研究[J]。西北农林科技大学学报(自然科学版)，2002，30(1):6872;李玉平，冯俊涛，邵红军，祝木金，慕小倩，张兴，25种菊科植物提取物对3种植物病原菌的药效试验.西北农林科技大学学报(自然科学版)，2003，31(4):123126)报道发现寥子朴具有很强的抑菌活性，对小麦赤霉、苹果炭疽、辣椒疫霉、玉米大斑等多种病原菌有100%的抑制率。经对现有技术的文献检索发现，尚未见与本发明的寥子朴提取物及其提取方法、用途有关的报道。
发明内容本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种寥子朴提取物及其提取方法、用途。本发明涉及的寥子朴植物提取具有较好的抑制NO产生的活性，具有抗炎作用，可用于制备抗炎药物。第一方面，本发明涉及一种寥子朴提取物，该提取物为寥子朴倍半萜A或沙地旋覆花内酯B;其中，3所述寥子朴倍半萜A的结构式为151314oh|j"ho、所述沙地旋覆花内酯B的结构式为15CHOOH1ftC3H鳳HOH第二方面，本发明还涉及所述寥子朴提取物的提取方法，包括如下步骤步骤一，取寥子朴，乙醇渗透提取，得提取液；步骤二，浓縮提取液，得浸膏，加水稀释，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，减压回收各萃取部分，得侵膏，步骤三，硅胶柱色谱洗脱，得寥子朴提取物。步骤一中，所述乙醇的体积分数为80%。步骤二中，所述石油醚萃取的次数为4次。步骤二中，所述乙酸乙酯萃取的次数为5次。步骤二中，所述减压回收具体为50°C、0.09Mpa条件下进行回收。步骤三中，所述色谱洗脱使用的硅胶柱的目数为100200目。步骤三中，所述洗脱具体为以二氯甲烷与甲醇的体积比为(1001):l的梯度进行洗脱。第三方面，本发明还涉及前述寥子朴提取物的用途本发明所述的寥子朴提取物用于制备抗炎药物。与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果实验证明，寥子朴倍半萜A抑制NO活性的IC5。值为1.26iig/mL，沙地旋覆花内酯B的IC5。为0.27yg/mL，这两个化合物具有较好的抑制NO产生的活性，具有抗炎作用，可用于制备抗炎药物。具体实施例方式本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1寥子朴倍半萜A的制备寥子朴18.0kg，粉碎，以75%乙醇(体积分数)渗漉提取3次，每次20L，24小时；提取液45t:减压浓縮成浸膏，得到浸膏1010.0g，加2.5L水稀释后，先以8L石油醚萃取3次，再以8L乙酸乙酯萃取5次，45t:减压回收各萃取部分得相对密度为1.05的浸膏，压力控制在0.lMPa。乙酸乙酯部位经硅胶(ioo200目)柱色谱，以二氯甲烷甲醇(ioo:i1:1)梯度洗脱，以薄层层析跟踪检测，共分成10个小部位。部位5依次经硅胶(200300目)柱色谱和S印hadexLH-20柱色谱分离，收集二氯甲烷甲醇1:1部分，薄层层析检测，得到化合物经结构鉴定为寥子朴倍半萜A，该化合物量为109mg。寥子朴倍半萜A为白色针状结晶，溶于甲醇，氯仿。ESI-MS显示分子离子峰273.4[M+H]+。HR-ESI-MSm/z273.1200[M+H]+，计算值273.1203，C15H2904，确定分子式为C15H2804。实施例2沙地旋覆花内酯B的制备寥子朴18.Okg，粉碎，以75%乙醇(体积分数)渗漉提取3次，每次20L，24小时；提取液45t:减压浓縮成浸膏，得到浸膏1010.0g，加2.5L水稀释后，先以8L石油醚萃取3次，再以8L乙酸乙酯萃取5次，45t:减压回收各萃取部分得相对密度为1.05的浸膏，压力控制在0.lMPa。乙酸乙酯部位经硅胶(ioo200目)柱色谱，以二氯甲烷甲醇(ioo:i1:1)梯度洗脱，以薄层层析跟踪检测，共分成10个小部位。部位5依次经硅胶(200300目)柱色谱和S印hadexLH-20柱色谱分离，收集二氯甲烷甲醇2:1部分，薄层层析检测，得到化合物经结构鉴定为沙地旋覆花内酯B，该化合物量为123mg。沙地旋覆花内酯B无色结晶，溶于甲醇，不溶于氯仿，丙酮。ESI-MS显示分子离子峰m/z295.3[M+H]+，HR-ESI-MSm/z295.1180[M+H]+，计算值295.1182，C15H1906，确定分子式为C15H2。06。实施例3寥子朴倍半萜A的制备寥子朴10.0kg，粉碎，以60X乙醇(体积分数)渗漉提取2次，每次10L，18小时；提取液5(TC减压浓縮成浸膏，得到浸膏612g，加1L水稀释后，先以5L石油醚萃取4次，再以5L乙酸乙酯萃取5次，5(TC减压回收各萃取部分得相对密度为1.08的浸膏，压力控制在0.09Mpa;乙酸乙酯部位经硅胶(ioo200目)柱色谱，以二氯甲烷甲醇(ioo:i1:1)梯度洗脱，以薄层层析跟踪检测，共分成10个小部位。部位5依次经硅胶(200300目)柱色谱和S印hadexLH-20柱色谱分离，收集二氯甲烷甲醇1:l部分，薄层层析检测，得到化合物经结构鉴定为寥子朴倍半萜A(见表1)，该化合物量为73mg。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例4沙地旋覆花内酯B的制备寥子朴10.0kg，粉碎，以60X乙醇(体积分数)渗漉提取2次，每次10L，18小时；提取液5(TC减压浓縮成浸膏，得到浸膏612g，加1L水稀释后，先以5L石油醚萃取4次，再以5L乙酸乙酯萃取5次，5(TC减压回收各萃取部分得相对密度为1.08的浸膏，压力控制在0.09Mpa;乙酸乙酯部位经硅胶(ioo200目)柱色谱，以二氯甲烷甲醇(ioo:i1:1)梯度洗脱，以薄层层析跟踪检测，共分成10个小部位。部位5依次经硅胶(200300目)柱色谱和S印hadexLH-20柱色谱分离，收集二氯甲烷甲醇2:l部分，薄层层析检测，得到化合物经结构鉴定为沙地旋覆花内酯B的制备(见表2)，该化合物量为84mg。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>实施例5寥子朴倍半萜A的制备寥子朴5kg，粉碎，以80%乙醇(体积分数)渗漉提取3次，每次10L，24小时；提取液4(TC减压浓縮成浸膏，得到浸膏372g，加800mL水稀释后，先以4L石油醚萃取3次，再以4L乙酸乙酯萃取4次，4(TC减压回收各萃取部分得相对密度为1.IO的浸膏，压力控制在0.1Mpa;乙酸乙酯部位经硅胶(ioo200目)柱色谱，以二氯甲烷甲醇(ioo:i1:1)梯度洗脱，以薄层层析跟踪检测，共分成10个小部位。部位5依次经硅胶(200300目)柱色谱和S印hadexLH-20柱色谱分离，收集二氯甲烷甲醇2:l部分，薄层层析检测，得到化合物经结构鉴定为寥子朴倍半萜A(见表1)，该化合物量为48mg。实施例6沙地旋覆花内酯B的制备寥子朴5kg，粉碎，以80%乙醇(体积分数)渗漉提取3次，每次10L，24小时；提取液4(TC减压浓縮成浸膏，得到浸膏372g，加800mL水稀释后，先以4L石油醚萃取3次，再以4L乙酸乙酯萃取4次，4(TC减压回收各萃取部分得相对密度为1.IO的浸膏，压力控制在0.1Mpa;乙酸乙酯部位经硅胶(100200目)柱色谱，以二氯甲烷与甲醇的体积比为(1001):1的梯度进行洗脱，以薄层层析跟踪检测，共分成10个小部位。部位5依次经硅胶(200300目)柱色谱和S印hadexLH-20柱色谱分离，收集二氯甲烷甲醇1:1部分，薄层层析检测，得到化合物经结构鉴定为沙地旋覆花内酯B(见表2)，该化合物量为56mg。实施效果通过对RAW264.7巨噬细胞(购于上海生科院细胞资源中心)NO代谢的影响，观察受试单体的抗炎活性。(1)样品制备受试样品寥子朴倍半萜A，沙地旋覆花内酯B，寥子朴倍半萜A由实施例1、3、5制得，沙地旋覆花内酯B由实施例2、4、6制得。均用匿SO溶解，分别配置成不同浓度的溶液(最终浓度100、30、10、3、1、0.3、0.1ug/ml)(DMSO的终浓度《0.5%)，备用。阳性对照氨基胍3.4iig/mL。诱导剂LPS。[ooes](2)实验方法RAW264.7巨噬细胞培养在含10%小牛血清的DMEM培养基中(5%0)2，95%湿润空气，37")。加入1yg/mLLPS，4小时后再分组加入各个受试样品。每组上清液100yL与等体积的Griess试剂(1%对氨基苯磺酸的5%磷酸溶液与0.1%的萘乙烯二胺水溶液1:1混合)混合，室温下反应10min。(3)评价标准及统计方法于540nm下进行比色测定，各组实验结果以SPSS软件ONEWAYANNOVA方法进行统计分析。实验结果发现，寥子朴倍半萜A抑制NO活性的IC5。值为1.26yg/mL，沙地旋覆花内酯B的IC5。为0.27g/mL，提示这两个化合物具有较好的抑制NO产生的活性，具有抗炎作用。权利要求一种蓼子朴提取物，其特征在于，该提取物为蓼子朴倍半萜A或沙地旋覆花内酯B；其中，所述蓼子朴倍半萜A的结构式为所述沙地旋覆花内酯B的结构式为F201010300529720100121C000011.tif,F201010300529720100121C000012.tif2.—种根据权利要求1所述的寥子朴提取物的提取方法，其特征在于，包括如下步骤步骤一，取寥子朴，乙醇渗透提取，得提取液；步骤二，浓縮提取液，得浸膏，加水稀释，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，减压回收各萃取部分，得浸膏；步骤三，硅胶柱色谱洗脱，得寥子朴提取物。3.根据权利要求2所述的寥子朴提取物的提取方法，其特征是，步骤一中，所述乙醇的体积分数为80%。4.根据权利要求2所述的寥子朴提取物的提取方法，其特征是，步骤二中，所述石油醚萃取的次数为4次。5.根据权利要求2所述的寥子朴提取物的提取方法，其特征是，步骤二中，所述乙酸乙酯萃取的次数为5次。6.根据权利要求2所述的寥子朴提取物的提取方法，其特征是，步骤二中，所述减压回收具体为50°C、0.09Mpa条件下进行回收。7.根据权利要求2所述的寥子朴提取物的提取方法，其特征是，步骤三中，所述色谱洗脱使用的硅胶柱的目数为100200目。8.根据权利要求2所述的寥子朴提取物的提取方法，其特征是，步骤三中，所述洗脱具体为以二氯甲烷与甲醇的体积比为(1001):l的梯度进行洗脱。9.一种根据权利要求1所述的寥子朴提取物的用途，其特征在于，该用途为在制备抗炎药物中的用途。所述沙地旋覆花内酯B的结构式为全文摘要一种药物
技术领域：
的蓼子朴提取物及其提取方法、用途；本发明涉及的蓼子朴植物提取为蓼子朴倍半萜A或沙地旋覆花内酯B；所述蓼子朴提取物的提取方法，包括如下步骤步骤一，取蓼子朴，乙醇渗透提取，得提取液；步骤二，浓缩提取液，得浸膏，加水稀释，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，减压回收各萃取部分，得浸膏，步骤三，硅胶柱色谱洗脱，得蓼子朴植物提取物；本发明还涉及所述的蓼子朴提取物在制备抗炎药物中的用途。本发明涉及的蓼子朴植物提取具有较好的抑制NO产生的活性，具有抗炎作用，可用于制备抗炎药物。文档编号C07D307/00GK101747153SQ201010300529公开日2010年6月23日申请日期2010年1月21日优先权日2010年1月21日发明者严诗楷,张卫东,扈晓佳,金慧子申请人:上海交通大学