专利名称：一种云芝糖肽及其脂质体的制作方法
技术领域：
本发明属于天然药物有效成分提取及应用技术领域，涉及一种云芝糖肽及其脂质体，同时还涉及该云芝糖肽的提取、纯化方法及云芝糖肽脂质体的制备方法。
背景技术：
从云芝深层发酵获得的云芝多糖(PSK)是日本公司开发的一种抗恶性肿瘤的药物(商品名=Krestin)，用于治疗乙型肝炎、迁徙性肝炎、慢性活动性肝炎等，并适用于肝癌的预防与治疗。另一个从云芝深层发酵获得的云芝糖肽(PSP)能抑制人肺癌、胃癌、白血病、淋巴癌细胞及腹水癌等多种癌细胞的增生；并能显著提高负瘤者饮食，缓解疼痛，提高耐缺氧能力；消除因化疗或者放疗引起的白血球降低作用，提高机体IgG含量和吞噬指数等。上市的云芝糖肽或者云芝多糖制剂，目前其原料药的生产工艺流程为水提、浓缩、醇沉或不醇沉、离心、烘干。这种传统的多糖生产工艺存在能耗高、由于热浓缩、高温干燥产生的梅拉德反应导致多糖颜色深、多糖水溶性差、多糖生物活性低，或者消耗大量酒精增加成本、增加生产的不安全性，以及多糖含量低等缺陷。
发明内容
本发明的目的是克服上述不足之处提供一种云芝多糖含量达到80%以上，颜色浅，水溶性好，尽可能的保留生物活性的云芝糖肽。本发明的另一目的是提供利用上述云芝糖肽制备得到云芝糖肽脂质体，该云芝糖肽脂质体使得云芝糖肽在体内能够被更好的吸收利用，并且通过脂质体的缓释作用，使药物在体内有效血药浓度维持较长时间。本发明的目的是通过以下方式实现的—种云芝糖肽，其特征在于该云芝糖肽是经过以下步骤制备得到的I)云芝菌丝体经粉碎后，在95 100°C条件下保温4 5小时制备得到云芝水提液；2)将云芝水提液通过截留分子量为40万 45万道尔顿的陶瓷膜微滤，得到微滤液；微滤采用的工作温度为40°C 50°C，工作压力进压为3. O 8. Obar，出压为I. O
5.Obar ；3)上述微滤液按照I 2:1的比例加入体积比为4 :1的氯仿正丁醇混合液，振摇，离心，取上层液，重复10 15次，40°C减压除去有机溶剂，分离纯化，得到纯化后的云芝水提液；4)上述纯化后的云芝水提液浓缩至50°C下相对密度为I. 10 I. 15，加入浓缩液2 4倍体积浓度为95%的乙醇，醇沉6 8h，离心，收集并干燥醇沉物，即得云芝糖肽。优选步骤“2)”所述的微滤膜截留分子量为45万道尔顿，微滤的工作温度为40°C 45°C，工作压力进压为4. Obar,出压为3. Obar。步骤“3)”中所述的分离纯化优选采用模拟移动床色谱分离系统进行连续分离纯化，采用“4-7-2-7根”色谱柱的分配方式进行分离纯化，柱内装入分离用的树脂AB-8型大孔吸附树脂。 在所述的模拟移动床色谱分离系统进行四区循环分离时，采用进料流速为50ml 150ml/min,交换水洗流速为30ml 100ml/min ;顶水流速为20ml 100ml/min ;产品出口流速为55ml 160ml/min ;循环泵流速为IOOml 300ml/min。还可以设置再生水洗流速为30ml 100ml/min ;再生剂流速为30ml 50ml/min ；再生剂为浓度为5%的氢氧化钠溶液。本发明优选进料流速为120ml/min,交换水洗流速为50ml/min ;顶水流速为20ml/min ;再生水洗流速为lOOml/min ;再生剂氢氧化钠溶液流速为30ml/min ;再生剂浓度为5% ;产品出口流速为150ml/min ;循环泵流速为100mlml/min。步骤“4)”所述的干燥优选为冷冻干燥，条件为温度为30°C，压力为80Pa，物料厚度3 IOmm,优选物料厚度5mm。本发明所述的云芝糖肽作为活性成分可与磷脂及胆固醇制备云芝糖肽脂质体，该脂质体由以下重量份的原料制成磷脂10 40重量份，胆固醇I 20重量份，云芝糖肽35 45重量份。优选脂质体由以下重量份的原料制成磷脂15 30重量份,胆固醇10 20重量份，云芝糖肽35 40重量份。最优选脂质体由以下重量份的原料制成磷脂25重量份，胆固醇15重量份，云芝糖肽40重量份。其中，所述的磷脂可为卵磷脂、脑磷脂或大豆磷脂，优选大豆磷脂。上述云芝糖肽脂质体可与多种药学上可接受的辅料制备成制剂。辅料可包括稀释剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、助流剂、填充剂等，所述的制剂优选为片剂、口服液剂、胶囊剂、颗粒剂等剂型。该药物制剂中的填充剂包括但不限于乳糖、蔗糖、葡萄糖、微晶纤维素、淀粉、羧甲基淀粉、预胶化淀粉等；粘合剂包括但不限于淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊精、聚乙二醇6000、低粘度的羧甲基纤维素；崩解剂包括但不限于淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、海藻酸羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羧甲基淀粉钠等；润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、单硬脂酸甘油脂等。本发明制成的各种制剂中，以云芝多糖为药物活性成分，其有效量可以为制剂总量的10% 95%。本发明云芝多糖脂质体的制备方法可采用逆向蒸发法或薄膜超声法。逆向蒸发法以磷脂、胆固醇和云芝糖肽为原料，将磷脂、胆固醇溶解于原料10 30倍重量的氯仿或者乙醚中，加入待包封的浓度为25%的云芝糖肽水溶液，其中，水溶液有机溶剂(即氯仿或者乙醚)=1 :3 I :5 (重量比)，进行短时超声，直至形成稳定的W/0型乳状液，然后减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，滴加原料10 15倍重量的磷酸缓冲液(pH5. 8,0. Olmol/L)，旋转帮助器壁上的凝胶脱落，在减压下继续蒸发，制得水性混悬液，通过超速离心法，除去未包入的药物，即得大单室脂质体；冷冻干燥，即得云芝脂质体。也可采用薄膜分散法以磷脂、胆固醇和云芝糖肽为原料，将磷脂、胆固醇和云芝糖肽溶解于原料10 30倍量的氯仿中，减压蒸发(35 60°C)至成膜，加入原料30倍重量的磷酸缓冲液(PH5. 8,0. Olmol/L)将膜洗下，加O. 5mm直径的玻璃珠数粒，搅拌30分钟，在25°C下放置3小时，使薄膜湿涨，再在25°C下，搅拌2小时，制成脂质体悬液。将上述的脂质体悬液用直径为2微米的微孔滤膜过滤，在将得到的滤液冷冻干燥，即得云芝脂质体。
率。
本发明云芝糖肽脂质体在260nm波长处测定多糖含量，从而得到包封率及突释
,W、_ 芝J旨质体悬液中药物总量-游离药物的量ο — 云芝脂质体悬液中云芝多糖药物总量 X °
-穷释率(%)- 透析液中云芝多糖含量1W%
—ImL脂质体悬液中云脂多糖的含量
本发明通过逆向蒸发法得到的云芝脂质体包封率能达到80%以上，且体外突释率较低，逆向蒸发法可包裹较大体积的水溶液(约60%，大于超声分散法约30倍)，更适于包裹水溶性药物及大分子生物活性物质。与现有技术比较本发明的有益效果I、云芝糖肽产品多糖含量高传统的云芝糖肽提取方法为水提、醇沉，得到的产品中夹裹一定量的葡萄糖、低聚糖及无机盐等，并且产品含有大量醇不溶性蛋白质，产品的多糖含量低，本发明制备云芝糖肽经过水提，微滤除菌体及温和的大分子蛋白质方法，有效除去游离蛋白质，而不破坏具有生物活性的糖结合蛋白，采用模拟移动床色谱分离系统进行分离纯化，分离用的树脂为AB-8型大孔吸附树脂，能进一步有效脱色、脱单糖、低聚糖及无机盐等，本发明云芝糖肽中云芝多糖含量达到80%以上，云芝糖肽产品的水溶性好，颜色较浅。2、提高云芝糖肽产品的质量传统的热浓缩和热干燥方式容易导致云芝糖肽产生梅拉德反应以及变性，产品的水溶性变差，同时产品的颜色较深，该工艺采用膜过滤和冷冻干燥相结合的温和加工方式有效保证产品的品质。3、采用特定的组方对云芝糖肽进行脂质体包埋覆盖后，得到优异的包封率及突释率，通过脂质体的缓释作用，使药物在体内有效血药浓度维持较长时间。本发明云芝糖肽脂质体的制备简单易行、成本较低廉，适用于工业化生产。
图I是模拟移动床色谱分离系统四区循环流程示意图。图中，I为工作区I段，2为工作区2段，3为工作区3段，4为工作区4段，5为交换水洗入口，6为进料口，7为中间罐，8为产品出口，9为顶水出口，10为再生水洗入口，11为再生剂入口，12为废液出口。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明，下述该实施仅用于说明本发明，而对本发明没有限制。实施例I :纯化的云芝糖肽原料药I、云芝发酵液来源由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供变色栓菌(云芝)，Trametes，保藏号CGMCC 5. 161，将菌株转接到斜面培养基26 28°C常规培养7天，得活化的云芝菌株；将活化好的云芝菌株接种于种子培养基，其中种子培养基组成为葡萄糖6%，酵母粉4%，蛋白胨5%，磷酸二氢钾O. 2%，硫酸镁O. 02%，消泡剂O. 1%，用水配制，pH值自然，26 28°C振荡培养3天得云芝一级种子液；将一级种子液接入二级种子培养基，其中二级种子培养基组成为葡萄糖4%，酵母粉4%，蛋白胨4%，磷酸二氢钾O. 2%，硫酸镁O. 02%,消泡剂0.1%，用水配制，pH值自然，26 28°C培养3天，接种量1%，通气I O. 4 O. 8vvm ;将二级种子培养基接入发酵培养基，其中发酵培养基组成为葡萄糖3%，酵母粉4%，蛋白胨4%，磷酸二氢钾O. 2%，硫酸镁O. 02%,消泡剂O. 1%，用水配制，pH值自然，26 28°C培养4天，接种量3%，通气I : O. 3 O. 5vvm，发酵结束即为云芝发酵液。2、微滤过滤将上述云芝发酵液2000Kg (发酵液固形物含量为3%)通过微滤过滤，得到云芝发酵液的微滤透析液1750Kg和250Kg的湿菌丝体(含水量为81%)，将湿菌丝体常规干燥得到云芝菌丝体。微滤过滤所用的膜材料是孔径为50nm的陶瓷膜，具体工艺条件是操作温度为50 60°C，进压为3. Obar,出压为I. Obar，压力差为2. Obar。3、取上述云芝菌丝体粉碎后，加入10倍量的纯化水，95 100°C保温4小时制备得到云芝水提液；云芝水提液经过微滤，微滤所采用的膜材料为陶瓷膜，其截留分子量为45万道尔顿，微滤膜工作温度为45°C，工作压力进压为5. Obar,出压为3. Obar ;取微滤液按照I :1的比例加入氯仿正丁醇(体积比4 :1)混合液中，剧烈振摇脱除游离蛋白质，离心分离取上层液，重复10次；40°C减压除去有机溶剂；对脱除蛋白质云芝水提液采用模拟移动床分离系统StarS印-30025连续分离纯化，如图I所示，模拟移动床分配系数采用“4-7-2-7根“的分区方式进行等度洗脱，其中进料流速为150ml/min ;交换水洗流速为100ml/min ;顶水流速为40ml/min ;再生水洗流速为40ml/min ;再生剂浓度为5%的氢氧化钠溶液，流速为30ml/min ;产品出口流速为110ml/min ;循环泵流速为ΙΟΟπιΙ/π η。^- 根”的分区方式为工作区I段位于进料点与残液出料口之间的工作区，采用4根色谱柱；工作区2段位于进料口与产品出口之间的分离区，采用7根色谱柱；工作区3段位于产品出口与顶洗出口之间的顶洗区，采用2根色谱柱；工作区4段位于再生水洗进口和废液出口之间的再生区，采用7根色谱柱；分离用的树脂为ΑΒ-8型大孔吸附树脂。将上述产品出口液(即纯化后的云芝水提液)浓缩至50°C下相对密度为I. 15，加入浓缩液3倍体积浓度为95%的乙醇，醇沉8h，离心，分离得到醇沉物。醇沉物经过冷冻干燥处理，温度为30°C、干燥室压力为80Pa、物料厚度5mm，即得到云芝糖肽，得率为12. 5%。25克该糖肽可以完全溶解在100毫升纯化水中；该糖肽多糖含量为80. 2% ;该糖肽颜色为浅黄色。实施例2 :纯化的云芝糖肽原料药取按照实施例I方法制备得到的云芝菌丝体粉碎后，加入10倍量的纯化水，95 100°C保温5小时制备得到云芝水提液；云芝水提液经过微滤，微滤所采用的膜材料为陶瓷膜，其截留分子量为40万道尔顿，微滤膜工作温度为45°C，工作压力进压为4. Obar,出压为3. Obar ;取微滤液按照2 :1的比例加入氯仿正丁醇(体积比4 :1)混合液中，剧烈振摇脱除游离蛋白质，离心分离取上层，重复10次;40°C减压除去有机溶剂。对脱除蛋白质云芝水提液采用模拟移动床分离系统连续分离纯化，其模拟移动床分离系统StarS印-30025连续分离纯化，其模拟移动床分配系数采用“4_7_2_7根“的分区方式进行等度洗脱，其中进料流速为120ml/min ;交换水洗流速为50ml/min ;顶水流速为20ml/min ;再生水洗流速为100ml/min ;再生剂氢氧化钠溶液流速为30ml/min ;再生剂氢氧化钠浓度为5% ;产品出口流速为150ml/min ;循环泵流速为100ml/min。“4-7_2_7根”的分区方式为工作区I段位于进料点与残液出料口之间的工作区，采用4根色谱柱；工作区2段位于进料口与产品出口之间的分离区，采用7根色谱柱；工作区3段位于产品出口与顶洗出口之间的顶洗区，采用2根色谱柱；工作区4段位于再生水洗进口和废液出口之间的再生区，采用7根色谱柱；分离用的树脂为AB-8型大孔吸附树脂。将上述产品出口液浓缩至50°C下相对密度为I. 1，加入浓缩液2倍体积浓度为95%的乙醇，醇沉8h，离心分离得到醇沉物。醇沉物经过冷冻干燥处理，温度为30°C、干燥室压力为80Pa、物料厚度5mm，即得到云芝糖肽，得率为13%。25克该糖肽可以完全溶解在100毫升纯化水中；该糖肽多糖含量为86. 1% ;该糖肽颜色为浅黄色。实施例3 :纯化的云芝糖肽原料药取按照实施例I方法制备得到的云芝菌丝体，加入10倍量的纯化水，95 100°C保温4小时制备得到云芝水提液；云芝水提液经过微滤，微滤所采用的膜材料为陶瓷膜，其截留分子量为45万道尔顿，微滤膜工作温度为40°C，工作压力进压为4. Obar,出压为
3.Obar ；取微滤液，按照2 1的比例加入氯仿正丁醇(体积比4 :1)混合液，剧烈振摇脱除游离蛋白质，离心分离取上层，重复10次；40°C减压除去有机溶剂。对脱除蛋白质云芝水提液采用模拟移动床分离系统StarS印-30025连续分离纯化，其模拟移动床分配系数采用“4-7-2-7根“的分区方式进行等度洗脱，其中进料流速为50ml/min ;交换水洗流速为80ml/min ;顶水流速为40ml/min ;再生水洗流速为30ml/min ；再生剂氢氧化钠溶液流速为30ml/min ;再生剂氢氧化钠浓度为5% ;产品出口流速为90ml/min ;循环泵流速为100ml/min。“4_7_2_7根”的分区方式为工作区I段位于进料点与残液出料口之间的工作区，采用4根色谱柱；工作区2段位于进料口与产品出口之间的分离区，采用7根色谱柱；工作区3段位于产品出口与顶洗出口之间的顶洗区，采用2根色谱柱；工作区4段位于再生水洗进口和废液出口之间的再生区，采用7根色谱柱；分离用的树脂为AB-8型大孔吸附树脂。将上述产品出口液浓缩至50°C下相对密度为I. 12，加入浓缩液2倍体积95%乙醇，醇沉8h，离心，分离得到醇沉物。醇沉物经过冷冻干燥处理，温度为30°C、干燥室压力为80Pa、物料厚度5mm，即得到云芝糖肽，得率为12. 8%。25克该糖肽可以完全溶解在100毫升纯化水中；该糖肽多糖含量为85. 4% ;该糖肽颜色为浅黄色。实施例4纯化的云芝糖肽原料药制备云芝糖肽脂质体称取大豆磷脂15g，胆固醇10g，溶于400mL的氯仿溶液中。按照实施例2方法制备得到的云芝糖肽40g,加入160mL纯化水,加入到上述氯仿溶液中,超声5min,形成稳定的W/0型乳状液，然后减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，滴加2000mL磷酸缓冲液(pH5.8，O. Olmol/L),旋转帮助器壁上的凝胶脱落，在减压下继续蒸发，制得水性混悬液，通过超速离心，除去未包入的药物，即得大单室脂质体；加热温度为30°C、干燥室压力为80Pa、物料厚度3mm，冷冻干燥，即得云芝脂质体，包封率可达到80. 4%，突释率为5. 5%。实施例5 :纯化的云芝糖肽原料药制备云芝糖肽脂质体称取大豆磷脂20g，胆固醇10g，溶于600mL的氯仿溶液中。按照实施例2方法制备得到的云芝糖肽40g,加入160mL纯化水,加入到上述氯仿溶液中,超声8min,形成稳定的W/0型乳状液，然后减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，滴加2500mL磷酸缓冲液(pH5. 8，
0.01mol/L),旋转帮助器壁上的凝胶脱落，在减压下继续蒸发，制得水性混悬液，通过超速离心，除去未包入的药物，即得大单室脂质体；加热温度为30°C、干燥室压力为80Pa、物料厚度3mm，冷冻干燥，即得云芝脂质体，包封率可达到83. 7%，突释率为5. 1%。实施例6 :纯化的云芝糖肽原料药制备云芝糖肽脂质体称取大豆磷脂25g，胆固醇15g，溶于1025mL的氯仿溶液中。按照实施例2方法制备得到的云芝糖肽40g,加入160mL纯化水,加入到上述氯仿溶液中，超声12min,形成稳定的W/0型乳状液，然后减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，滴加3000mL磷酸缓冲液(pH5. 8，0. Olmol/L)，旋转帮助器壁上的凝胶脱落，在减压下继续蒸发，制得水性混悬液，通过超速离心，除去未包入的药物，即得大单室脂质体；加热温度为30°C、干燥室压力为80Pa、物料厚度3mm，冷冻干燥，即得云芝脂质体。包封率可达到89. 6%，突释率为3. 1%。实施例7 :云芝糖肽脂质体制备其他药物制剂处方58克上述实施例6云芝糖肽脂质体，微晶纤维素5. 8克，淀粉2. 6克，低取代羟丙基纤维素O. 55克，聚维酮K300. 14克，硬脂酸镁O. 08克，欧巴代17B689880. 5克，乙醇10克。工艺配制含2%的聚维酮k30的60%乙醇；称取处方量的云芝糖肽脂质体、微晶纤维素、淀粉，混合均匀，将上述混分用2%的聚维酮K30制软材，过18目筛制粒；置60°〇烘箱干燥2h ;干燥后取出，经18目筛整粒；称取处方量的低取代羟丙基纤维素和硬脂酸镁加入到上述颗粒中，总混；测定中间体；用6mm浅凹模冲压片；配制浓度为6%的80%乙醇欧巴代17B68966包衣液；包衣增重4. 0%，即可得到云芝糖肽缓释片，其他选项应符合中华人民共和国药典2010版相应项下。实施例8 :云芝糖肽缓释片释放度用体外释放度测定方法(浆法)50r/min，温度37°C，缓释介质为脱气后新鲜纯化水900mL，在上述条件下，于不同时间点取样5mL，并即时补充新鲜介质5mL，所取样品立即经O. 45微米微孔滤膜过滤，取滤液，按照上述方法测定实施例8云芝糖肽缓释片和云芝糖肽片(市售普通片，安徽新力药业股份有限公司生产)的累积释放度。结果见下表。云芝糖肽片累积释放度考察结果(％)
权利要求
1.一种云芝糖肽，其特征在于该云芝糖肽是经过以下步骤制备得到的1)云芝菌丝体经粉碎后，在95 100°C条件下保温4 5小时制备得到云芝水提液；2)将云芝水提液通过截留分子量为40万 45万道尔顿的陶瓷膜微滤，得到微滤液；微滤采用的工作温度为40°C 50°C，工作压力进压为3. O 8. Obar,出压为I. O 5. Obar ；3)上述微滤液按照I 2:1的比例加入体积比为41的氯仿正丁醇混合液，振摇，离心，取上层液，重复10 15次，40°C减压除去有机溶剂，分离纯化，得到纯化后的云芝水提液；4)上述纯化后的云芝水提液浓缩至50°C下相对密度为I.I I. 15，加入浓缩液2 4倍体积浓度为95%的乙醇，醇沉6 8h，离心，收集并干燥醇沉物，即得云芝糖肽。
2.根据权利要求I所述的云芝糖肽，其特征在于步骤“2)”所述的微滤膜截留分子量为45万道尔顿，微滤的工作温度为40°C 45°C，工作压力进压为4. Obar,出压为3. Obar。
3.根据权利要求I所述的云芝糖肽，其特征在于步骤“3)”中所述的分离纯化采用模拟移动床色谱分离系统，采用“4-7-2-7根”色谱柱的分配方式进行分离纯化，柱内装入分离用的树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
4.根据权利要求3所述的云芝糖肽，其特征在于模拟移动床色谱分离系统分离纯化采用进料流速为50ml 150ml/min,交换水洗流速为30ml 100ml/min ;顶水流速为20ml 100ml/min ;产品出口流速为55ml 160ml/min ;循环泵流速为IOOml 300ml/min。
5.根据权利要求4所述的云芝糖肽，其特征在于再生水洗流速为30ml 100ml/min，再生剂流速为30ml 50ml/min，再生剂为浓度为5%的氢氧化钠溶液。
6.根据权利要求I所述的云芝糖肽，其特征在于在步骤“4)”所述的干燥为冷冻干燥，条件为温度为30°C，压力为80Pa，物料厚度3 10mm。
7.权利要求I所述的云芝糖肽作为活性成分与磷脂及胆固醇制备云芝糖肽脂质体，该脂质体由以下重量份的原料制成磷脂10 40重量份，胆固醇I 20重量份，云芝糖肽35 45重量份。
8.权利要求7所述的云芝糖肽作为活性成分与磷脂及胆固醇制备云芝糖肽脂质体，该脂质体由以下重量份的原料制成磷脂15 30重量份，胆固醇10 20重量份，云芝糖肽35 40重量份。
9.根据权利要求8所述的的云芝糖肽脂质体，其特征在于该脂质体由以下重量份的原料制成磷脂25重量份，胆固醇15重量份，云芝糖肽40重量份。
10.根据权利要求7、8或9所述的的云芝糖肽脂质体，其特征在于所述的磷脂为卵磷脂、脑磷脂或大豆磷脂。
全文摘要
本发明公开了一种云芝糖肽及其脂质体，该云芝糖肽是经过水提，微滤，氯仿-正丁醇振摇除去游离蛋白质，分离纯化，醇沉，干燥制备得到的，还可以以云芝糖肽为原料，磷脂和胆固醇为膜材制备得到云芝糖肽脂质体。本发明云芝糖肽中云芝多糖含量可达到80%以上，云芝糖肽的颜色浅，水溶性好，并且很好地保留了云芝糖肽的生物活性；云芝糖肽脂质体使得云芝糖肽在体内能够被更好的吸收利用，并且通过脂质体的缓释作用，延长药物在体内有效血药浓度时间。
文档编号A61P29/00GK102911279SQ201210406140
公开日2013年2月6日 申请日期2012年10月23日 优先权日2012年10月23日
发明者马猛华, 徐国华, 岳宗翠, 王英燕, 赵伏梅, 秦建丽 申请人:江苏神华药业有限公司