山慈菇有效部位在治疗老年痴呆的用途
【专利摘要】本发明涉及到从中药山慈菇（植物来源于独蒜兰和云南独蒜兰）中提取的有效部位，其制备方法，及其在治疗老年性痴呆和血管性痴呆的用途。经动物试验证实，该有效部位能够明显改善东莨菪碱致小鼠胆碱能损伤拟痴呆动物模型的学习记忆障碍；可以提高双侧颈总动脉结扎引起血管性痴呆大鼠对新物体的识别能力，改善血管性痴呆引起的物体识别障碍和空间学习记忆障碍；具有抗氧化能力，可以通过减少氧化损伤反应从而达到延缓神经细胞退行性变化的作用。
【专利说明】山慈菇有效部位在治疗老年痴呆的用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及从中药山慈菇(植物来源于独蒜兰和云南独蒜兰)提取的有效部位，这种有效部位的制备方法，含有这种有效部位的药物组合物，以及含有这种有效部位和其药物组合物在预防和治疗老年痴呆、血管性痴呆的用途，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]随着社会的发展，人类寿命的延长，社会老龄化现象日益严重，老年性痴呆症的患病率明显升高，已成为导致死亡的第四位主要原因。老年性痴呆主要包括阿尔茨海默氏病(Alzheimer，Disease,AD)和血管性痴呆(Vascular dementia, VD)。老年性痴呆是一种进行性的神经退行性疾病，主要表现为渐进性记忆障碍、认知功能障碍、人格改变及语言障碍等神经精神症状，严重影响社交、职业与生活功能。临床上主要表现为中枢认知功能障碍，老年斑、淀粉样蛋白沉积及神经元纤维缠结是其脑部主要的病理学特征。据统计我国现有310万左右老年性痴呆患者，65岁以上人群患病率高达5.9%。临床特征是进行性认知功能障碍，至疾病后期，患者生活不能自理，不能说话甚至连自己的近亲都不认识。这不但给病人自身带来很大的痛苦，同时也给病人家庭以及社会造成极大负担，影响社会和经济的发展。
[0003]由于其病因和发病机制尚不明确，目前没有特效方法逆转和阻止病情进展。但早期进行对症治疗，包括药物治疗改善认知功能、改善精神症状、心理社会治疗和良好的护理，对延缓患者生活质量减退十分重要。国内外批准用于阿尔茨海默病治疗的药物主要有
(I)胆碱酯酶抑制剂:通过抑制胆碱酯酶而抑制乙酰胆碱降解并提高活性，改善神经递质的传递功能。常用药物有多奈哌齐(donepezil),重酒石酸卡巴拉汀(rivastigmine),加兰他敏(galantamine)等。(2)谷氨酸受体拮抗剂:盐酸美金刚(memantine)是N-甲基-天冬氨酸(NMDA)受体激动剂。但上述药物治疗老年性痴呆作用单一，治疗效果有限，具有一定的副作。因此，研究与开发防治老年性痴呆的有效药物成为当今医药领域的重要研究课题。
[0004]山慈菇为传统少常用中药，始载于唐《本草拾遗》，具有清热解毒，消肿散结之功效。其来源为兰科植物杜醇兰Cremastra appendiculata、独蒜兰Ple1ne bulbocod1ides和云南独蒜兰P.yunnanensis的干燥假鳞茎。经前期研究发现中药山慈菇中的主要基源植物独蒜兰和云南独蒜兰(俗称“冰球子”)中提取、精制得到的有效部位具有预防和治疗老年性痴呆活性。
[0005]迄今为止，未见到山慈菇治疗老年性痴呆的研究报道。
【发明内容】
[0006]本发明提供了一种新的治疗老年性痴呆的药物，即从中药山慈菇(冰球子)中提取的有效部位。
[0007]本发明的另一目的是提供了山慈菇有效部位的制备方法。
[0008]本发明的再一目的是提供了含山慈菇有效部位的药物组合物。
[0009]本发明的又一目的是提供了山慈菇有效部位在预防和治疗老年性痴呆、血管性痴呆的用途。
[0010]为了解决本发明的技术问题，本发明采取如下技术方案:
[0011 ] 本发明中所称的山慈菇，植物来源于独蒜兰和云南独蒜兰，俗称“冰球子”。本发明提供了从山慈菇中提取的有效部位。
[0012]有效部位的制备方法如下:
[0013]1.提取方法:将原料药材(来源于冰球子的药材)经干燥后，适当粉碎，然后用溶剂提取，提取的溶剂包括水、醇类或水与醇类的混合溶剂。其中醇类溶剂优选:甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中的一种或几种的混合溶剂。水与醇的混合物，为40-95% (体积比)的醇溶液；提取方法包括:渗漉、浸提或加热回流提取；提取时溶剂用量为药材重量的5-20倍，提取可以在动态或静态下进行，为提高提取效率还可以选用超声波提取；提取的温度可以从室温到溶剂回流的温度范围内；提取可以连续进行或间歇进行，提取次数1-4次。提取液可以选用常压或减压浓缩得浸膏或无醇的浓缩液。
[0014]2.精制方法:
[0015](I)将上述浓缩液，过滤，稀释后经苯乙烯型大孔吸附树脂(如D101，HPD-1OO0HP-20等)精制，用水和5-15%乙醇洗脱除去杂质，用20-50%乙醇洗脱，减压蒸干，得山慈菇有效部位。
[0016](2)将上述浓缩浸膏经硅胶或硅藻土拌样，正相硅胶层析精制，石油醚、氯仿、乙醚等低极性有机溶剂洗脱，再用氯仿-甲醇(5:1)洗脱，减压蒸干，得山慈菇有机酸苄酯苷有效部位。
[0017](3)将上述浓缩浸膏经硅胶或硅藻土拌样，反相硅胶层析精制，水、醇和水的混合溶剂(如10%，20%乙醇)等极性有机溶剂洗脱，再用50%醇洗脱，减压蒸干，得山慈菇有机酸苄酯苷有效部位。
[0018](4)将上述浓缩得浸膏或无醇的浓缩液，稀释后，分别用石油醚、乙酸乙酯萃取，再用正丁醇萃取，减压蒸干，得山慈菇有机酸苄酯苷有效部位。
[0019]本发明还涉及以山慈菇有效部位作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将山慈菇有效部位与一种或多种药学上可以接受的固体或液体赋型剂和/或辅料结合，制成适用于人使用的任何剂型。山慈菇有效部位在其药物组合物中的含量通常为1-95% (重量比)。
[0020]本发明的山慈菇有效部位或组合物可以单独服用，或与其它治疗药物或对症药物合并使用。
[0021]本发明还涉及了山慈菇有效部位在预防和治疗老年性痴呆、血管性痴呆的用途。该有效部位经动物试验证实，能够明显改善东莨菪碱致小鼠胆碱能损伤拟痴呆动物模型的学习记忆障碍；可以提高双侧颈总动脉结扎引起血管性痴呆大鼠对新物体的识别能力，改善血管性痴呆引起的物体识别障碍和空间学习记忆障碍；具有抗氧化能力，可以通过减少氧化损伤反应从而达到延缓神经细胞退行性变化的作用。该有效部位具有预防和治疗老年性痴呆、血管性痴呆的用途。
【专利附图】
【附图说明】
[0022]图1山慈菇中有效部位中主要化学成分有机酸苄酯苷类化合物的紫外光谱特征。
[0023]图2山慈菇不同精制方法得到的有效部位高效液相色谱图。
[0024]图3定位航行实验。
【具体实施方式】
[0025]有效部位的制备
[0026]实施例1
[0027]山慈菇药材(来源于独蒜兰或云南独蒜兰)Ikg,加入8倍量50%乙醇浸泡后,加热回流提取三次，每次1.0小时。提取液减压回收乙醇并浓缩至无醇溶液，过滤，滤液通过经处理的D-101大孔吸附树脂(药材重量:树脂体积为1:1),先用8倍量树脂柱体积的水和4倍量树脂柱体积15%乙醇依次洗脱后,再用8倍量树脂体积的40%乙醇洗脱，减压回收40%乙醇洗脱液，减压蒸干即得山慈菇有机酸苄酯苷有效部位。
[0028]实施例2
[0029]山慈菇药材(来源于独蒜兰或云南独蒜兰)Ikg,加入12倍量75%乙醇浸泡后,力口热回流提取三次，每次1.0小时。提取液减压回收乙醇并浓缩至浸膏，经硅胶或硅藻土拌样(样品与娃胶或娃藻土比例为1:1?2),正相娃胶层析(样品与娃胶比例为1:50?100)精制，5倍量体积的石油醚-丙酮(100:0?1:1)梯度洗脱除去脂溶性杂质，再用5倍柱体积的氯仿，氯仿-甲醇(10:1)，及氯仿-甲醇(5:1)洗脱，收集氯仿-甲醇(5:1)洗脱部位减压蒸干，得山慈菇有机酸苄酯苷有效部位。
[0030]实施例3
[0031]山慈菇药材(独蒜兰或云南独蒜兰)Ikg,加入12倍量75%乙醇浸泡后,加热回流提取三次，每次1.0小时。提取液减压回收乙醇并浓缩至浸膏，将上述浓缩浸膏经反相硅胶或硅藻土拌样(样品与反相硅胶比例为1:2?5)，反相硅胶层析(样品与反相硅胶比例为1:80?200)精制，4倍柱体积的水、10%乙醇和30%乙醇溶剂洗脱，再用3倍柱体积50%乙醇洗脱，减压蒸干，得山慈菇有机酸苄酯苷有效部位。
[0032]实施例4
[0033]山慈菇药材(独蒜兰或云南独蒜兰)lkg,加入15倍量95%乙醇浸泡后,加热回流提取三次，每次1.0小时。提取液减压回收乙醇并浓缩至无醇溶液，过滤，滤液分别用石油醚、乙酸乙酯(体积比1:1)萃取，再用正丁醇(体积比1:1)萃取，减压蒸干，得山慈菇有机酸苄酯苷有效部位。
[0034]实施例5
[0035]山慈燕(植物来源于独蒜兰和云南独蒜兰)50%有机酸节酯苷类化合物(苹果酸和酒石酸苄酯苷类化合物)有效部位含量的确证。
[0036]山慈菇中治疗老年性痴呆的有效部位中主要化学成分是有机酸苄酯苷类化合物，该类化合物的紫外光谱中，在λ 224ηπι左右有最大吸收峰特征(见图1)，便于高效液相在线紫外检测样品中该类化合物。
[0037]高效液相色谱法含量测定条件:Alltech Prevail C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m)色谱柱；以乙腈为流动相Α，以水为流动相B，按照下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为224nm。高效液相色谱图见图2。
[0038]
【权利要求】
1.山慈菇的有效部位，其特征在于，有效部位含有50%有机酸苄酯苷类化合物，所述的有机酸苄酯苷类化合物选自苹果酸和酒石酸苄酯苷类化合物。
2.权利要求1中有效部位的制备方法，其特征在于，包括下面步骤: (1)将原料药山慈菇粉碎，然后用溶剂渗漉、浸提或加热回流提取，提取液常压或减压浓缩得浸膏； (2)此浸膏经各种层析方法精制、纯化得到山慈菇有效部位。
3.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，所用的药材原料为山慈菇的基原植物:独蒜兰和云南独蒜兰，俗称“冰球子”或其同属的亲缘植物。
4.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，步骤(I)提取所用的溶剂为水、醇类或水与醇类的混合溶剂。其中醇类溶剂包括:甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中的一种或几种的混合溶剂。
5.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，步骤(2)所用的精制、纯化方法为大孔吸附树脂层析、正相硅胶和反相硅胶层析，或者是这些方法的组合，或者将浸膏拌于硅胶或硅藻土中，用有机溶剂洗脱。
6.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，步骤(2)所用的精制方法中所使用的溶剂为石油醚、甲苯、乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醇、甲醇、水中的一种或数种混合溶剂。
7.权利要求2-6中任一所述的任意方法或组合方法所制备的有效部位。
8.根据权利要求1或7的任一的有效部位，其特征在于，有效部位含有50%有机酸苄酯苷类化合物即苹果酸和酒石酸苄酯苷类化合物，是指通过高效液相色谱检识，以峰面积归一化法计算，该类化合物的色谱峰的峰面积总和占整个有效部位所有色谱峰面积总和的50%以上。
9.一种药物组合物，其特征在于，含有其治疗剂量的权利要求1或7的任一有效部位及其药用载体的组合物。
10.根据权利要求9中所述的药用组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括将其制成注射液、片剂、胶囊、丸剂、口服液或滴丸剂型。
11.根权利要求1或7的任一有效部位在预防和治疗老年性痴呆和血管性痴呆的用途。
【文档编号】A61K36/898GK104173741SQ201310204452
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2013年5月28日 优先权日:2013年5月28日
【发明者】李帅, 张建军, 石建功, 崔保松, 李新娅, 徐瑞明, 王晓娟, 王超, 冀呈雪 申请人:中国医学科学院药物研究所