细胞色素c注射液的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种细胞色素C注射液。具体地说，本发明涉及一种药物组合物，其中包含细胞色素C、双甘氨肽、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、注射用水。本发明的细胞色素C药物组合物可用于各种组织缺氧急救的辅助治疗，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、氰化物中毒、新生儿窒息、严重休克期缺氧、脑血管意外、脑震荡后遗症、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗。
【专利说明】细胞色素C注射液
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，涉及一种药物制剂，特别是涉及一种细胞色素C的药物组合物例如注射液。本发明的细胞色素C药物组合物可用于各种组织缺氧急救的辅助治疗，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、氰化物中毒、新生儿窒息、严重休克期缺氧、脑血管意外、脑震荡后遗症、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗。
【背景技术】
[0002]细胞色素C (Cytochrome C, Cyt C)或称细胞色素复合体(Cytochrome Complex),是一种与粒线体内膜有关，结构松散而微小的血红素蛋白。它和其他细胞色素不同，是一种高度可溶性蛋白，可溶性达每升100克。细胞色素C是电子传递链不可或缺的元件，负责携带一粒电子，在复合物III和复合物IV之间传递。此外，它能够接受氧化和还原反应，但不与氧结合。在人体中，细胞色素C已经由CYCS基因完成编码。细胞色素C和细胞程序性死亡有关。
[0003]临床上使用的细胞色素C是一种细胞呼吸激动剂，它存在于细胞线粒体中的一种以铁卟啉为辅基的蛋白质。细胞色素C担负传递电子的作用，是细胞呼吸不可少的物质。当组织缺氧时，外源性细胞色素C即能进入细胞内，从而发挥其纠正细胞呼吸和物质代谢作用。本品是存在于细胞线粒体中的一种以铁卟啉为辅基的蛋白质，目前已能提纯分离。药用制剂是从动物心脏或酵母中分离出来的，细胞色素是呼吸链的一环。各种细胞色素按一定顺序排列组成细胞呼吸所不可少的。细胞色素C不能透过细胞膜，因此对正常人无作用，当组织缺氧时、细胞膜通透性增高，外源性制剂即能进入细胞内，从而发挥其纠正细胞呼吸和物质代谢作用。
[0004]现有技术已有诸多关于细胞色素C及其药品的制备方法。例如，中国专利申请号94110756.6 (CN1106019A，陈庆功)公开了一种从动物心脏中提取细胞色素C粗品的生产工艺，它由原料处理、一次提取、二次提取、吸附、沸石的清洗、洗脱、盐析、沉淀、透析等工艺步骤完成，其特征是吸附工艺采用分层沉淀动态吸附的方法，这样可以缩短吸附时间，提高吸附效率，避免了因吸附时间过长而造成母液变质。
[0005]中国专利申请号200910229517.7 (CN101709086A，东诚)公开了一种细胞色素C的
提取方法。以哺乳动物心肌为原料，采用硫酸铝溶液提取法制备，提取过程中硫酸铝的浓度控制在0.1_10%，硫酸铝溶液的体积控制在1-5倍量心肌体积，提取pH值控制在3-6，反应温度控制在0-30°C，提取时间控制在l_4h。再经吸附洗脱，最终得到细胞色素C。本发明具有方法成本低、步骤简单、提取条件温和、引入杂质少、反应物无污染、适合工业化大生产的特点。
[0006]中国专利申请号201110094755.9 (CN102206265A，宏业)公开了以哺乳动物心提取细胞色素C溶液的生产方法。将哺乳动物心脏经酸水提取，吸附材料吸附，酸水洗脱，盐析，沉淀及透析法制得细胞色素c溶液粗品，粗品经离子交换纯化，最终精制得细胞色素C溶液。[0007]中国专利申请号201110268301.9 (CN102295699A，西北大学)公开了一种细胞色素C的纯化新工艺，包括以下步骤:(I)从动物脏器或者酵母中提取得到细胞色素C的粗提液；(2)向粗提液中加入无机盐进行盐析，静置离心弃去沉淀的杂蛋白，收集上清液；(3)加缓冲液调节上清液中无机盐浓度至20%~35%，再用前沿疏水色谱法对其进行纯化，即将所得溶液连续上样于预先用20%~35%的无机盐溶液平衡过的疏水色谱柱中，收集穿透液；
(4)用20%~35%无机盐溶液冲洗色谱柱至吸光度达到稳定，收集色谱流出液，与穿透液合并，即为纯化后的细胞色素C。本发明操作简便，分离纯化效果好，效率高，成本低。
[0008]中国专利申请号200710086421.0(CN101019836A，蔡海德)公开了细胞色素C纳米脂质体药物及其制备方法。其中细胞色素C纳米脂质体药物，包括如下重量份数的原料:中性磷脂40-80 ;谷留醇10-20 ;胆固醇20-40 ;胞色素C10-30 ;聚乙二醇20-25 ;还原性谷胱甘肽5-10 ;维生素C40-50。据信该发明提供的脂质体药物可用于临床各种缺氧的急救或辅助治疗。
[0009]中国专利申请号201210578970.0 (CN103055305A，丰原)公开了一种注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂，包括如下重量份的组分:细胞色素C75~300份；L-精氨酸30~60份；依地酸二钠2~5份；甘露醇150份。该冻干制剂选用依地酸二钠和L-精氨 酸作为辅料，有利于提高细胞色素C的稳定性，药液配制过程选用甘露醇作为冻干赋形剂，选用磷酸或磷酸钠溶液作为PH值调节剂，可使产品质量更稳定；在甘露醇溶液中经活性炭处理后再加入细胞色素C，避免了细胞色素C因活性炭吸附而引起的含量降低的问题；该发明采用的制备方法，将冻干时间由23小时缩短至14~16小时，降低能耗30%，同时在不增加硬件投入的情况下，可提高产能30%左右，显著降低了生产成本。
[0010]由于细胞色素C是一种含铁元素的有色蛋白质，是生物体中酶氧化系统中一个非常重要的酶。细胞色素C是含铁卟啉盐基性结合蛋白质，由N、S、Fe、C、H五种元素组成。从猪心肌提取的细胞色素C的Fe含量为0.43%，分子量为13000，等电点pHIO。
[0011]细胞色素C的大分子化学结构决定了其制剂配制存在诸多需要克服的困难。例如制剂的澄明度就是经常出现的问题。例如，郁福年(医药工业，细胞色素C注射液工艺改革，1980年08期)中探讨了细胞色素C注射液澄明度不够好，探讨其主要原因是细胞色素C原料中杂蛋白未除尽所致。又例如，姜洪志等(医药工业，细胞色素C注射液澄明度的改进，1986年10期)从提高原料纯度，改进过滤方法，控制配剂pH值等方面进进行研究以期获得具有更好澄明度的细胞色素C注射液。
[0012]因此，提供一种具有良好药学性能例如物理性质和/或化学性质和/或生物学性质的细胞色素C产品，仍然是本领域技术人员极其期待的。
【发明内容】
[0013]本发明的目的在于提供一种具有良好药学性能例如物理性质和/或化学性质和/或生物学性质的细胞色素C产品，特别是一种可注射用的细胞色素C产品。本发明人已经出人意料地发现，具有本发明特征的细胞色素C药物组合物具有优良的药学性能。本发明基于此发现而得以完成。
[0014]为此，本发明第一方面提供了一种药物组合物，其中包含细胞色素C、双甘氨肽、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、注射用水。[0015]根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其每Iml中包含:
[0016]
【权利要求】
1.一种药物组合物，其中包含细胞色素C、双甘氨肽、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、注射用水。
2.根据权利要求1的药物组合，，其每1ml中包含:_
3.根据权利要求1-2的药物组合物，其中还包含L-半胱氨酸； 或者，其每1ml中包含:
4.根据权利要求1-3的药物组合物，其特征在于: 其为溶液型的药物组合物； 其为注射液； 其为无菌注射液； 还任选地包含酸碱调节剂；在一个实施方案中，所述酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、枸橼酸、枸橼酸钠、乙酸、乙酸钠或其组合；和/或 其PH值为6.0~8.0,例如其pH值为6.0~7.5，例如其pH值为6.5~7.5，例如其pH值为7.0~7.5。
5.根据权利要求1-4的药物组合物，其特征在于: 其为注射液，其在配制时经过活性炭吸附处理过程； 其为注射液，其在配制时经过活性炭吸附处理过程，所述活性炭吸附处理中与活性炭一起还添加有纸浆；和/或 其为注射液，其在配制时经过活性炭吸附处理过程，该活性炭吸附处理过程是:向包含活性成分的药液中加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆，搅拌10~30分钟；其中所述与活性炭一起加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.05%~0.2%(w/v)，优选 0.05% ~0.l%(w/v) ο
6.根据权利要求1-5的药物组合物，其为注射液，其是照以下方法配制得到的: (1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的70~80% ； (2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0~7.2 ; (3)加热至50-60。。，加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆，保温搅拌10~30分钟； (4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8 μ m和0.45 μ m的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆； (5)补加注射用水至全量；测定溶液的PH值，必要时调节溶液的pH值至7.0~7.5，充入氮气，4-6 °C冷藏48h,依次 用0.45 μ m、0.22 μ m的微孔滤膜无菌过滤,滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得。
7.制备细胞色素C药物组合物例如权利要求1-6的细胞色素C药物组合物例如注射液的方法，所述细胞色素C药物组合物中包含:细胞色素C、双甘氨肽、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、注射用水；该方法包括以下步骤: (1)将各固体辅料与细胞色素C溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的70~80% ； (2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至7.0~7.2 ; (3)加热至50-60。。，加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入纸浆，保温搅拌10~30分钟； (4)将步骤(3)所得药液先用滤纸过滤，接着依次用0.8 μ m和0.45 μ m的微孔滤膜进行过滤，以除去活性炭和纸浆； (5)补加注射用水至全量；测定溶液的pH值，必要时调节溶液的pH值至7.0~7.5，充入氮气，4-6°C冷藏48h,依次用0.45 μ m>0.22 μ m的微孔滤膜无菌过滤,滤液灌装入玻璃瓶中，密封，即得。
8.根据权利要求7的方法，其中所述的纸浆是以干滤纸配制的。
9.根据权利要求8的方法，其中与活性炭一起加入的纸浆的量，以干滤纸计，在药液中的浓度为0.05%~0.2%(w/v)，优选0.05%~0.l%(w/v);进一步地，其如说明书第二方面任一实施方案所述。
10.权利要求1-6所述细胞色素C药物组合物或者权利要求7-9所制备的细胞色素C药物组合物在制备用于各种组织缺氧急救及其的辅助治疗，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、氰化物中毒、新生儿窒息、严重休克期缺氧、脑血管意外、脑震荡后遗症、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗的药物中的用途。
【文档编号】A61P39/00GK103536910SQ201310532764
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】赵东明, 贾红军, 方专, 罗隽, 潘旭, 苟治君 申请人:成都天台山制药有限公司