一种治疗乙型肝炎中药组方提取物及其制备方法
【专利摘要】一种治疗乙型肝炎中药组方提取物及其制备方法，属于CO2超临界萃取【技术领域】。本发明组方提取物原料包括五味子、女贞子、连翘、苣荬菜、灵芝孢子粉和莪术，本发明的方法采用对五味子、女贞子、连翘、苣荬菜进行破碎、过筛、乙醇-水溶液浸泡、超临界萃获得五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物，通过对灵芝孢子粉超微粉破壁、制粒后经超临界萃取获得灵芝孢子粉萃取物，再对莪术破碎、水溶液浸泡、蒸馏获得莪术挥发油。采用本发明方法获得的组方提取物的有效成分含量均可保持在较高水平，可应用于乙型肝炎的治疗，具有较高的药用价值。
【专利说明】一种治疗乙型肝炎中药组方提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001]一种治疗乙型肝炎中药组方提取物及其制备方法，属于CO2超临界萃取【技术领域】。【背景技术】
[0002]中国专利CN1759884A公开了一种治疗乙型肝炎中药处方及其制备工艺，其提供了一种针对乙肝肝脾肾不足、瘀热邪毒互结症候的复方片剂、胶囊剂、颗粒剂及其处方和制备工艺。但其制备工艺为:五味子、女贞子、连翘乙醇提取，提取液滤过浓缩；北败酱水煎醇沉，上清液浓缩成浸膏；莪术蒸馏收集挥发油，挥发油以β~环糊精包合；将浸膏和灵芝孢子粉混合，加入羟丙甲纤维素和磷酸氢钙，乙醇制粒、颗粒干燥，以等量递增法将挥发油包合物加入，再加入辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂。该方法的提取过程复杂，耗时长；提取过程需要用到大量乙醇等提取溶剂；浓缩过程需消耗大量能源，且因温度较高易对药物中有效成分造成破坏。为解决这些弊端，亟需采取更先进的提取工艺对其进行提取。
[0003]现有技术中虽存在对单一组分的超临界萃取，但是现有技术对五味子、女贞子、连翘的超临界萃取温度和萃取压力的设定不够精确。五味子、女贞子、连翘萃取物中有效成分含量较低。在对于组合物的提取中，首先由于组合物中萃取的各组分的控制条件不同、所需获得的有效成分挥发性不同，采用的萃取手段较为复杂。特别是在组合物中各组分超临界萃取中，如各组分分开萃取则各组分超临界萃取的条件各不相同，现有技术的超临界萃取条件无法获得有效成分含量较高的萃取物；如将各组分原料直接混合后萃取，则需要萃取中有效成分种类多，难以确定合理的萃取条件。其次，虽然对组方提取物原料用乙醇-水溶液预先浸泡可提高有效成分的萃取率，但是 申请人:经研究发现现有技术中用于浸泡五味子、女贞子、连翘、苣荬菜的乙醇-水溶液的浓度设置不合理，造成乙醇-水溶液对五味子、女贞子、连翘、苣荬菜中有效成分的溶解度不能达到最佳效果，对后续超临界萃取造成不良影响。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是:针对上述现有技术存在的不足，提供一种治疗乙型肝炎中药组方提取物及其制备方法，该方法可获得的组方提取物中各原料有效成分的含量均可保持在较高值，并且该组方提取物对乙型肝炎有效好的治疗效果，可直接添加辅料生产成各种剂型的药品。
[0005]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:该治疗乙型肝炎中药组方提取物，该组方提取物原料由五味子、女贞子、连翘、苣荬菜、灵芝孢子粉和莪术组成，其特征在于，该组方提取物中总黄酮类化合物含量r8mg/g，总三萜类化合物含量liT29mg/g，五味子甲素含量14~24mg /g,齐墩果酸含量8~16mg/g, β -菔烯含量0.5~1.5mg/g。
[0006]一种治疗乙型肝炎中药组方提取物的制备方法，其特征在于，采用如下步骤:
a)用破碎机分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎，过10-20目筛；
b)将破碎后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜分别用乙醇-水溶液浸泡广8小时，乙醇体积浓度在10%~95% ；
c)分别将浸泡后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件:萃取釜温度35~60°C，萃取釜压力12~30MPa，分离器I温度4(T65°C，分离器I压力8~12MPa，分离器II温度35~40°C，分离器II压力5~8MPa，加入10%~95%乙醇为夹带剂，萃取时间为2~6小时；
d)萃取结束后，分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜从分离器釜1、11中得到的萃取液合并后于4(T60°C条件下浓缩，除去乙醇，分别得到五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物；
e)取灵芝孢子粉用超微粉碎机破壁，破壁率90-99%；
f)将破壁灵芝孢子粉用乙醇-水溶液湿法制粒，乙醇浓度在25%~75%,制粒后于40~601:干燥3~10小时；
g)将制粒后的破壁灵芝孢子粉投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件:萃取釜温度35~50°C，萃取釜压力12~30MPa，分离器I温度4(T60°C，分离器I压力8~12MPa，分离器II温度35~40°C，分离器II压力5~8MPa，萃取时间为2~6小时，萃取结束后，将分离器1、分离器II中得到的萃取液浓缩，获得灵芝孢子粉萃取物；
h)将莪术用破碎机破碎，加扩12倍量的水，浸泡10-12小时；
i)将浸泡后的莪术蒸馏61小时，收集莪术挥发油；
j)将获得的五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物、灵芝孢子粉萃取物和莪术挥发油混合搅拌均匀，即得。
[0007]步骤b)中所述的将破碎后的五味子用90-95%乙醇浸泡2~3小时，女贞子用75~80%乙醇浸泡2~3小时，连翘用90~95%乙醇浸泡2~3小时，苣荬菜用30~35%乙醇浸泡1~2小时。
[0008]步骤c)中所述的五味子萃取条件为萃取釜温度50~55°C，萃取釜压力15~18MPa，分离器I温度55~60°C，分离器I压力8~lOMPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6~7MPa，加入90-95%乙醇为夹带剂，萃取时间为3~4小时。
[0009]步骤c)中所述的女贞子萃取条件为萃取釜温度40~45°C，萃取釜压力13~16MPa，分离器I温度50~55°C，分离器I压力8~lOMPa，分离器II温度35~38°C，分离器II压力6~7MPa，加入75~80%乙醇为夹带剂，萃取时间为4~5小时。
[0010]步骤C)中所述的连翘萃取条件为萃取釜温度40~45°C，萃取釜压力15~18MPa，分离器I温度45~50°C，分离器I压力8~lOMPa，分离器II温度35~38°C，分离器II压力6~8MPa，加入90~95%乙醇为夹带剂，萃取时间为4小时。
[0011]步骤d)中所述的五味子浓缩条件为50~55°C浓缩4~5小时，女贞子浓缩条件为45~50°C浓缩4飞小时，连翘浓缩条件为4(T45°C浓缩5飞小时，苣荬菜浓缩条件为45~50℃浓缩6~7小时。
[0012]步骤f)中所述的将灵芝破壁孢子粉用60~65%乙醇湿法制粒，制粒后于45~50℃干燥5~6小时。
[0013]步骤g)中所述的破壁灵芝孢子粉萃取条件为萃取釜温度40~45°C，萃取釜压力15~20MPa，分离器I温度40~45°C，分离器I压力8~lOMPa，分离器II温度35~40°C，分离器
II压力6~7MPa，萃取时间为3~4小时。[0014]现有技术中虽然存在在超临界萃取前将原料进行粉碎过筛的设计，但是过筛目数过大，导致原料粉碎过细，导致萃取过程中压力过大、萃取液中夹杂杂质过多，萃取后残渣颗粒较小设备清理困难；但是如破碎颗粒过大则不利于酒精浸泡， 申请人:经研究发现将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎过10-20目筛，可使五味子、女贞子、连翘、苣荬菜在乙醇-水溶液中有效成分充分溶解，又便于萃取和清理。
[0015] 申请人:通过研究发现，虽然在水中加入乙醇可以改变水溶性物质的溶解度，但是乙醇浓度的高低对组方提取物原料中有效成分的溶出影响较大。 申请人:经研究确定了五味子、女贞子、连翘、苣荬菜最适宜的浸泡用乙醇-水溶液浓度，五味子用95%乙醇浸泡2小时，女贞子用80%乙醇浸泡3小时，连翘用95%乙醇浸泡3小时，苣荬菜用30%乙醇浸泡2小时。采用醇-水溶液浸泡组分原料五味子、女贞子、连翘、苣荬菜时，当乙醇浓度达到最适浓度时，组分原料中的有效成分可被较完全的萃取出来。
[0016] 申请人:在步骤c)中将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜采用分开萃取，并经研究确定了五味子、女贞子、连翘、苣荬菜的最佳萃取条件，并且确定了步骤d)中五味子、女贞子、连翘、苣荬菜的最佳浓缩温度和时间，以提高五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物中有效成分含量。
[0017]与现有技术相比，本发明的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物及其制备方法具有的有益效果是:采用本发明的方法，可提高溶质在超临界流体中的溶解度，增加了超临界流体对被萃取物的萃取能力，从而使药材中的萜类、木脂素类、黄酮类、挥发油类等重要生物活性成分被充分萃取出来，也提高了萃取物中有效成分的含量。与中药传统的水提、醇提等方法相比，本发明工艺流程简单，操作方便、无污染、无残留，萃取和分离器过程合二为一，产品品质高且能保持药材原有性质，可有效富集中药有效成分。采用本发明的萃取方法获得的组方提取物无需再加工，可直接与辅料(淀粉、鱼油、糖浆、蜂蜜)调配制成颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂或滴丸剂，减少了制药企业设备投入，有助于推广中成药的加工生产。
【具体实施方式】
[0018]实施例广7为本发明的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物及其制备方法的具体实施例。
[0019]实施例1
本发明中组方提取物原料配比按重量份计为五味子广7份、女贞子广7份、连翘广7份、苣荬菜1-7份、莪术1-7份，灵芝孢子粉1-7份。
[0020]本实施例中所选用的组分原料五味子、女贞、连翘、苣荬菜、灵芝孢子粉和莪术的重量份相等，均为1份。本实施例的组方提取物的其制备方法如下:
a)用破碎机分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎，过10目筛。
[0021]b)将破碎后的五味子用95%乙醇浸泡2小时，女贞子用80%乙醇浸泡3小时，连翘用95%乙醇浸泡3小时，苣荬菜用30%乙醇浸泡2小时。
[0022](Td)分别将浸泡后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取。
[0023]五味子萃取条件为萃取釜温度50°C，萃取釜压力18MPa，分离器I温度55°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入95%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为3小时，将五味子从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于50°C浓缩5小时，除去乙醇，得到五味子萃取物。
[0024]女贞子萃取条件为萃取釜温度45°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度50°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入80%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将女贞子从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于50°C浓缩4小时，除去乙醇，得到女贞子萃取物。
[0025]连翘萃取条件为萃取釜温度40°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度45°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入95%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将连翘从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于45°C浓缩5小时，除去乙醇，得到连翘萃取物。
[0026]苣荬菜萃取条件为:萃取釜温度60°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度65°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入30%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为6小时，将苣荬菜从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于50°C浓缩6小时，除去乙醇，得到苣荬菜萃 取物。
[0027]e)取灵芝孢子粉用超微粉碎机破壁，破壁率93%。
[0028]f)将破壁灵芝孢子粉用乙醇-水溶液湿法制粒，乙醇浓度在60%，制粒后于50°C干燥5小时。
[0029]g)将制粒后的灵芝孢子粉投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件为萃取釜温度40°C，萃取釜压力20MPa，分离器I温度45°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，萃取时间为3小时，萃取结束后，将分离器1、分离器II中得到的萃取液浓缩，获得灵芝孢子粉萃取物。
[0030]h)将莪术用破碎机破碎，加10倍量的水，浸泡12小时。
[0031]i)将浸泡后的莪术蒸馏7小时，收集得到莪术挥发油。
[0032]j)将获得的产物按重量份五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物、灵芝孢子粉萃取物和莪术挥发油按照等质量混合，搅拌均匀，即得一种治疗乙型肝炎中药组方提取物。
[0033]实施例2
本实施例中所选用的组分原料五味子、女贞、连翘、苣荬菜、灵芝孢子粉和莪术的重量份相等，均为1份。本实施例的组方提取物的其制备方法如下:
a)用破碎机分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎，过20目筛。
[0034]b)将破碎后的五味子用90%乙醇浸泡3小时，女贞子用80%乙醇浸泡2小时，连翘用90%乙醇浸泡3小时，苣荬菜用35%乙醇浸泡1.5小时。
[0035](Td)分别将浸泡后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取。
[0036]五味子萃取条件为萃取釜温度50°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度60°C，分离器I压力lOMPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入90%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为3小时，将五味子从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于50°C浓缩5小时，除去乙醇，得到五味子萃取物。[0037]女贞子萃取条件为萃取釜温度44°C，萃取釜压力16MPa，分离器I温度50°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入80%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将女贞子从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于50°C浓缩4小时，除去乙醇，得到女贞子萃取物。
[0038]连翘萃取条件为萃取釜温度40°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度45°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入95%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将连翘从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于45°C浓缩5小时，除去乙醇，得到连翘萃取物。
[0039]苣荬菜萃取条件为:萃取釜温度60°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度65°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入30%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为6小时，将苣荬菜从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于50°C浓缩6小时，除去乙醇，得到苣荬菜萃取物。
[0040]e)取灵芝孢子粉用超微粉碎机破壁，破壁率99%。
[0041 ] f)将破壁灵芝孢子粉用乙醇-水溶液湿法制粒，乙醇浓度在60%，制粒后于50°C干燥5小时。
[0042]g)将制粒后的灵芝孢子粉投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件为萃取釜温度40°C，萃取釜压力20MPa，分离器I温度45°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，萃取时间为3小时，萃取结束后，将分离器1、分离器II中得到的萃取液浓缩，获得灵芝孢子粉萃`取物。
[0043]h)将莪术用破碎机破碎，加10倍量的水，浸泡10小时。
[0044]i)将浸泡后的莪术蒸馏7小时，收集得到莪术挥发油。
[0045]j)将获得的产物按重量份五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物、灵芝孢子粉萃取物和莪术挥发油按照等质量混合，搅拌均匀，即得一种治疗乙型肝炎中药组方提取物。
[0046]实施例3
本实施例中所选用的组分原料五味子、女贞、连翘、苣荬菜、灵芝孢子粉和莪术的重量份相等，均为2份。本实施例的组方提取物的其制备方法如下:
a)用破碎机分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎，过10目筛。
[0047]b)将破碎后的五味子用90%乙醇浸泡2小时，女贞子用78%乙醇浸泡2.5小时，连翘用90%乙醇浸泡2小时，苣荬菜用35%乙醇浸泡2小时。
[0048](Td)分别将浸泡后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取。
[0049]五味子萃取条件为萃取釜温度50°C，萃取釜压力18MPa，分离器I温度55°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入95%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为3.5小时，将五味子从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于50°C减压0.04MPa浓缩5小时，除去乙醇，得到五味子萃取物。
[0050]女贞子萃取条件为萃取釜温度45°C，萃取釜压力13MPa，分离器I温度55°C，分离器I压力lOMPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入80%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将女贞子从分离器釜1、11中得到的萃取液合并，于50°C减压0.04 MPa浓缩5小时，除去乙醇，得到女贞子萃取物。
[0051]连翘萃取条件为萃取釜温度45°C，萃取釜压力18MPa，分离器I温度45°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度38°C，分离器II压力6MPa，加入90%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将连翘从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于45°C浓缩5小时，除去乙醇，得到连翘萃取物。
[0052]苣荬菜萃取条件为:萃取釜温度60°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度65°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入30%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为6小时，将苣荬菜从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于50°C浓缩6小时，除去乙醇，得到苣荬菜萃取物。
[0053]e)取灵芝孢子粉用超微粉碎机破壁，破壁率90%。
[0054]f)将破壁灵芝孢子粉用乙醇-水溶液湿法制粒，乙醇浓度在65%，制粒后于50°C干燥5小时。
[0055]g)将制粒后的灵芝孢子粉投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件为萃取釜温度30°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度45°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，萃取时间为2小时，萃取结束后，将分离器1、分离器II中得到的萃取液萃取液40°C常压浓缩7小时，获得灵芝孢子粉萃取物。
[0056]h)将莪术用破碎机破碎，加10倍量的水，浸泡11小时。
[0057]i)将浸泡后的莪术蒸馏7小时，收集得到莪术挥发油。
[0058]j)将获得的产物按重量份五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物、灵芝孢子粉萃取物和莪术挥发油按照等质量混合，搅拌均匀，即得一种治疗乙型肝炎中药组方提取物。
[0059]实施例4
本实施例中所选用的组分原料五味子、女贞、连翘、苣荬菜的重量份均为2份，灵芝孢子粉和莪术为3份。本实施例的组方提取物的其制备方法如下:
a)用破碎机分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎，过18目筛。
[0060]b)将破碎后的五味子用93%乙醇浸泡2.5小时，女贞子用80%乙醇浸泡2小时，连翘用92%乙醇浸泡2.5小时，苣荬菜用33%乙醇浸泡I小时。
[0061](Td)分别将浸泡后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取。
[0062]五味子萃取条件为萃取釜温度55°C，萃取釜压力17MPa，分离器I温度60°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力7MPa，加入93%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将五味子从分离器釜1、11中得到的萃取液合并，于50°C常压浓缩5小时，除去乙醇，得到五味子萃取物。
[0063]女贞子萃取条件为萃取釜温度40°C，萃取釜压力13MPa，分离器I温度53°C，分离器I压力9MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入75%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将女贞子从分离器釜1、11中得到的萃取液合并，于50°C常压浓缩4小时，除去乙醇，得到女贞子萃取物。
[0064]连翘萃取条件为萃取釜温度40°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度50°C，分离器I压力lOMPa，分离器II温度35°C，分离器II压力8MPa，加入95%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将连翘从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于45°C常压浓缩5小时，除去乙醇，得到连翘萃取物。
[0065]苣荬菜萃取条件为:萃取釜温度60°C，萃取釜压力20MPa，分离器I温度65°C，分离器I压力lOMPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入30%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为6小时，将苣荬菜从分离器釜1、11中得到的萃取液合并，于50°C常压浓缩6小时，除去乙醇，得到苣荬菜萃取物。
[0066]e)取灵芝孢子粉用超微粉碎机破壁，破壁率93%。
[0067]f)将破壁灵芝孢子粉用乙醇-水溶液湿法制粒，乙醇浓度在75%，制粒后于40°C干燥10小时。
[0068]g)将制粒后的灵芝孢子粉投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件为萃取釜温度50°C，萃取釜压力20MPa，分离器I温度45°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力7MPa，萃取时间为3小时，萃取结束后，将分离器1、分离器II中得到的萃取液40°C常压浓缩6小时，获得灵芝孢子粉萃取物。
[0069]h)将莪术用破碎机破碎，加10倍量的水，浸泡12小时。
[0070]i)将浸泡后的莪术蒸馏7小时，收集得到莪术挥发油。
[0071]j)将获得的产物按重量份五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物、灵芝孢子粉萃取物和莪术挥发油按照等质量混合，搅拌均匀，即得一种治疗乙型肝炎中药组方提取物。 [0072]实施例5
本实施例中所选用的组分原料五味子和女贞的重量份均为2份，连翘和苣荬菜的重量份均为3份，灵芝孢子粉和莪术为2份。本实施例的组方提取物的其制备方法如下:a)用破碎机分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎，过20目筛。
[0073]b)将破碎后的五味子用90%乙醇浸泡2小时，女贞子用75%乙醇浸泡2小时，连翘用90%乙醇浸泡2小时，苣荬菜用30%乙醇浸泡2小时。
[0074](Td)分别将浸泡后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取。
[0075]五味子萃取条件为萃取釜温度53°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度58°C，分离器I压力9MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，加入95%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为3小时，将五味子从分离器釜1、11中得到的萃取液合并，于50°C减压0.05 MPa浓缩5小时，除去乙醇，得到五味子萃取物。
[0076]女贞子萃取条件为萃取釜温度43°C，萃取釜压力14MPa，分离器I温度50°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度38°C，分离器II压力7MPa，加入80%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为5小时，将女贞子从分离器釜1、11中得到的萃取液合并，于50°C减压0.05 MPa浓缩4小时，除去乙醇，得到女贞子萃取物。
[0077]连翘萃取条件为萃取釜温度40°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度45°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度38°C，分离器II压力8MPa，加入90%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将连翘从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于45°C减压0.05 MPa浓缩6小时，除去乙醇，得到连翘萃取物。
[0078]苣荬菜萃取条件为:萃取釜温度55°C，萃取釜压力15MPa，分离器I温度60°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度40°C，分离器II压力8MPa，加入40%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为4小时，将苣荬菜从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于50°C减压0.05MPa浓缩7小时，除去乙醇，得到苣荬菜萃取物。
[0079]e)取灵芝孢子粉用超微粉碎机破壁，破壁率95% ；
f)将破壁灵芝孢子粉用乙醇-水溶液湿法制粒，乙醇浓度在60%，制粒后于50°C干燥5小时。
[0080]g)将制粒后的灵芝孢子粉投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件为萃取釜温度40°C，萃取釜压力20MPa，分离器I温度45°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6MPa，萃取时间为4小时，萃取结束后，将分离器1、分离器II中得到的萃取液50°C常压浓缩5小时，获得灵芝孢子粉萃取物。
[0081]h)将莪术用破碎机破碎，加10倍量的水，浸泡12小时。
[0082]i)将浸泡后的莪术蒸馏7小时，收集得到莪术挥发油。
[0083]j)将获得的产物按重量份五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物、灵芝孢子粉萃取物和莪术挥发油按照等质量混合，搅拌均匀，即得一种治疗乙型肝炎中药组方提取物。
[0084]实施例6
本实施例中所选用的组分原料五味子、女贞、连翘、苣荬菜、灵芝孢子粉的用量配比与实施例1相同。本实施例的组方提取物的其制备方法如下:
a)用破碎机分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎，过18目筛。
[0085]b)将破碎后的五味子用95%乙醇浸泡2小时，女贞子用80%乙醇浸泡3小时，连翘用95%乙醇浸泡3小时，苣荬菜用30%乙醇浸泡2小时。
[0086](Td)将浸泡后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜混合搅拌均匀，投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取。
[0087]萃取条件为萃取釜温度55°C，萃取釜压力12MPa，分离器I温度65°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度36°C，分离器II压力5MPa，加入60%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为5小时，将从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于40°C下减压0.05MPa浓缩6小时，除去乙醇，得到五味子、女贞子、连翘和苣荬菜的混合萃取物。
[0088]e)取灵芝孢子粉用超微粉碎机破壁，破壁率98%。
[0089]f)将破壁灵芝孢子粉用乙醇-水溶液湿法制粒，乙醇浓度在63%，制粒后于45°C干燥5小时。
[0090]g)将制粒后的灵芝孢子粉投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件为萃取釜温度37°C，萃取釜压力12MPa，分离器I温度55°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度40°C，分离器II压力8MPa，萃取时间为5小时，萃取结束后，将分离器1、分离器II中得到的萃取液50°C常压浓缩5小时，获得灵芝孢子粉萃取物。
[0091]h)将莪术用破碎机破碎，加12倍量的水，浸泡10小时。
[0092]i)将浸泡后的莪术蒸馏8小时，收集得到莪术挥发油。
[0093]j)将获得的混合萃取物、灵芝孢子粉萃取物和莪术挥发油混合，搅拌均匀，即得一种治疗乙型肝炎中药组方提取物。
[0094]实施例7本实施例中所选用的组分原料五味子、女贞、连翘、苣荬菜、灵芝孢子粉的用量配比与实施例1相同。本实施例的组方提取物的其制备方法如下:
a)用破碎机分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎，过18目筛。
[0095]b)将破碎后的五味子用90%乙醇浸泡3小时，女贞子用75%乙醇浸泡3小时，连翘用90%乙醇浸泡3小时，苣荬菜用35%乙醇浸泡2小时。
[0096](Td)将浸泡后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜等质量混合搅拌均匀，投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取。
[0097]萃取条件为萃取釜温度55°C，萃取釜压力12MPa，分离器I温度63°C，分离器I压力8MPa，分离器II温度38°C，分离器II压力6MPa，加入65%乙醇100ml为夹带剂，萃取时间为5小时，将从分离器釜1、II中得到的萃取液合并，于45°C下减压0.02MPa浓缩3小时，除去乙醇，得到五味子、女贞子、连翘和苣荬菜的混合萃取物。
[0098]e)取灵芝孢子粉用超微粉碎机破壁，破壁率90%。
[0099]f)将破壁灵芝孢子粉用乙醇-水溶液湿法制粒，乙醇浓度在25%，制粒后于60°C干燥3小时。
[0100]g)将制粒后的灵芝孢子粉投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件为萃取釜温度48°C，萃取釜压力24MPa，分离器I温度50°C，分离器I压力12MPa，分离器II温度38°C，分离器II压力5MPa，萃取时间为6小时，萃取结束后，将分离器1、分离器II中得到的萃取液55°C常压浓缩5小时，获得灵芝孢子粉萃取物。
[0101]h)将莪术用破碎机破碎，加9倍量的水，浸泡12小时。
[0102]i)将浸泡后的莪术蒸馏6小时，收集得到莪术挥发油。
`[0103]j)将获得的混合萃取物、灵芝孢子粉萃取物和莪术挥发油按照等质量混合，搅拌均匀，即得一种治疗乙型肝炎中药组方提取物。
[0104]检测结果
称取实施例广7获得的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物30g作为样本，用于进行五味子甲素、齐墩果酸、β_菔烯、总三萜类化合物、总黄酮类化合物含量检测。五味子甲素、齐墩果酸、β -菔烯、总三萜类化合物、总黄酮类化合物为治疗乙肝的主要显效成分，以上化学成分的含量高，则可反映本发明的方法所获得的组方提取物对乙肝的治疗有效成分含量高，对乙肝的治疗效果好。其中，五味子甲素可说明本发明的方法对五味子的超临界萃取效果。其中，β_菔烯可以反映连翘的萃取效果。其中，总黄酮可以反映苣荬菜的萃取效果。其中，齐墩果酸属于五环三萜类化合物，是女贞子中的主要成分，可以反映女贞子的萃取效果。其中，因灵芝孢子粉萃取物中不含齐墩果酸，它的主要成分应是灵芝酸等三萜类化合物，因此总三萜可以反映灵芝孢子粉的萃取效果。实施例广7中获得的治疗乙型肝炎中药组方提取物成分及其含量的检测方法如下，检测结果如表1所示。
[0105]1、五味子甲素含量测定:照高效液相色谱法[《中国药典》(2010年版)一部附录VID]测定。①色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(75:25)为流动相，检测波长为250nm。理论板数按五味子甲素峰计算应不低于3000。②对照品溶液的制备:取五味子甲素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.02mg的溶液，即得。③供试品溶液的制备:精密称取本品0.35g，置50ml量瓶中，加入流动相约40ml，超声使溶解，用流动相定容至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液Iml并转移至IOml量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，用0.45 μ m微孔滤膜过滤，取滤液，即得。④测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪测定即得。
[0106]2、β-菔烯含量测定:照气相色谱法[《中国药典》(2010年版)一部附录VIE]测定。①色谱条件与系统适用性试验:弹性石英毛细管柱(柱长为30m，内径为0.32_，膜厚度为0.SynODB-WAX (PEG-20M);程序升温:初始温度60°C，保持8分钟，然后以每分钟50°C的速率升温至200°C，保持5分钟；分流比为40:1。理论板数按β-菔烯峰计算应不低于6000。②对照品溶液的制备:取菔烯对照品适量，精密称定，加乙醇制成每Iml含
0.2mg的溶液，即得。③供试品溶液的制备:精密称取本品0.3g，置25ml量瓶中，加无水乙醇约20ml，超声使溶解，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μ m微孔滤膜过滤，取滤液，即得。④测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各I μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得。
[0107]3、齐墩果酸含量测定:照高效液相色谱法[《中国药典》(2010年版)一部附录VID]测定①色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-甲醇-水-磷酸-三乙胺(55:30:15:0.02:0.04)为流动相，检测波长为224nm。理论板数按齐墩果酸峰计算应不低于10000。②取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含
0.2mg的溶液，即得。③供试品溶液的制备:精密称取本品0.2g，置25ml量瓶中，加流动相约20ml，超声使溶解，用流动相定容至刻度，摇匀，用0.45 μ m微孔滤膜过滤，取滤液，即得。④测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪测定即得。
[0108]4、总三萜含量测定:照紫外-可见分光光度法[《中国药典》(2010年版)一部附录V Α]测定。①对照品溶液的制备:精密称取齐墩果酸对照品5mg，置50ml量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，即得(每Iml中含无水齐墩果酸0.1mg)。标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.lml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml于IOml具塞比色管中，常压水浴蒸干溶剂。加入新配置的5%香草醛-冰乙酸溶液0.20ml，高氯酸0.80ml，摇匀。于7(TC水浴加热15分钟，取出冷却至室温，加入`乙酸乙酯4ml，摇匀。以试剂空白为参比，在30分钟内，照紫外可见分光光度法(《中国药典》2010版一部附录V A)，在545nm处测吸光度值I (A)0以吸光度y (A)为纵坐标，以齐墩果酸浓度X (mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，求出直线回归方程并计算相关系数。②样品测定:组合物提取物I滴(约0.03g)，精密称定，加入无水乙醇约40ml，于70°C水浴加热并摇动使其溶解。冷却至室温后用无水乙醇定容至100ml，得供试品溶液。取供试品溶液液1.0Oml于IOml具塞比色管中，常压水浴蒸干溶剂，依标准曲线项下操作，测吸光度值y (A)0③通过线性回归方程算得供试品中总三萜类成分的含量。
[0109]5、总黄酮含量测定:照紫外-可见分光光度法[《中国药典》(2010年版)一部附录V A]测定。①对照品溶液的制备精密称取在120°C干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取20ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每Iml中含无水芦丁 0.2mg)。②标准曲线的制备:精密量取对照品溶液lml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液Iml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液Iml，摇匀，放置6分钟，加4%氢氧化钠溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010版一部附录V A)，在510nm波长处测定吸光度值y (A)0以吸光度y (A)为纵坐标，以芦丁浓度X (mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，求出直线回归方程并计算相关系数。③样品测定法:精密称取本品0.5g，置25ml量瓶中，加水至6ml，超声使溶解，照标准曲线制备项下的方法，自“5%亚硝酸钠溶液lml”起依法操作，测吸光度值y(A)0通过线性回归方程算得供试品中总黄酮的含量。
[0110]表1检测结果
【权利要求】
1.一种治疗乙型肝炎中药组方提取物，该组方提取物原料由五味子、女贞子、连翘、苣荬菜、灵芝孢子粉和莪术组成，其特征在于，该组方提取物中总黄酮类化合物含量rsmg /g，总三職类化合物含量19~29mg /g,五味子甲素含量14~24mg /g,齐墩果酸含量8~16mg/g,β -菔烯含量0.5~1.5mg/g。
2.一种治疗乙型肝炎中药组方提取物的制备方法，其特征在于，采用如下步骤: a)用破碎机分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜破碎，过10-20目筛； b)将破碎后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜分别用乙醇-水溶液浸泡广8小时，乙醇体积浓度在10%~95% ； c)分别将浸泡后的五味子、女贞子、连翘、苣荬菜投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件:萃取釜温度35~60°C，萃取釜压力12~30MPa，分离器I温度4(T65°C，分离器I压力8~12MPa，分离器II温度35~40°C，分离器II压力5~8MPa，加入10%~95%乙醇为夹带剂，萃取时间为2飞小时； d)萃取结束后，分别将五味子、女贞子、连翘、苣荬菜从分离器釜1、11中得到的萃取液合并后于4(T60°C条件下浓缩，除去乙醇，分别得到五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物； e)取灵芝孢子粉用超微粉碎机破壁，破壁率90-99%； f)将破壁灵芝孢子粉用乙醇-水溶液湿法制粒，乙醇浓度在25%~75%,制粒后于40~601:干燥3~10小时； g)将制粒后的破壁灵芝孢子粉投入超临界萃取设备内进行CO2超临界萃取，萃取条件:萃取釜温度35~50°C，萃取釜压力12~30MPa，分离器I温度4(T60°C，分离器I压力8~12MPa，分离器II温度35~40°C，分离器II压力5~8MPa，萃取时间为2飞小时，萃取结束后，将分离器1、分离器II中得到的萃取液浓缩，获得灵芝孢子粉萃取物； h)将莪术用破碎机破碎，加扩12倍量的水，浸泡10-12小时； i)将浸泡后的莪术蒸馏61小时，收集莪术挥发油； j)将获得的五味子萃取物、女贞子萃取物、连翘萃取物、苣荬菜萃取物、灵芝孢子粉萃取物和莪术挥发油混合搅拌均匀，即得。
3.根据权利要求2所述的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物的制备方法，其特征在于:步骤b)中所述的将破碎后的五味子用90-95%乙醇浸泡2~3小时，女贞子用7510%乙醇浸泡2~3小时，连翘用90~95%乙醇浸泡2~3小时，苣荬菜用30~35%乙醇浸泡1~2小时。
4.根据权利要求2所述的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物及其制备方法，其特征在于:步骤c)中所述的五味子萃取条件为萃取釜温度5(T55°C，萃取釜压力15~18MPa，分离器I温度55~60°C，分离器I压力8~lOMPa，分离器II温度35°C，分离器II压力6~7MPa，加入90-95%乙醇为夹带剂，萃取时间为3~4小时。
5.根据权利要求2所述的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物的制备方法，其特征在于:步骤c)中所述的女贞子萃取条件为萃取釜温度4(T45°C，萃取釜压力13~16MPa，分离器I温度50~55°C，分离器I压力8~lOMPa，分离器II温度35~38°C，分离器II压力6~7MPa，加入75~80%乙醇为夹带剂，萃取时间为4飞小时。
6.根据权利要求2所述的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物的制备方法，其特征在于:步骤c)中所述的连翘萃取条件为萃取釜温度4(T45°C，萃取釜压力15~18MPa，分离器I温度45~50°C，分离器I压力8~lOMPa，分离器II温度35~38°C，分离器II压力6~8MPa，加入90-95%乙醇为夹带剂，萃取时间为4小时。
7.根据权利要求2所述的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物的制备方法，其特征在于:步骤d)中所述的五味子浓缩条件为5(T55°C浓缩4飞小时，女贞子浓缩条件为45飞(TC浓缩4飞小时，连翘浓缩条件为4(T45°C浓缩5飞小时，苣荬菜浓缩条件为45飞(TC浓缩6~7小时。
8.根据权利要求1所述的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物及其制备方法，其特征在于:步骤f)中所述的将灵芝破壁孢子粉用60飞5%乙醇湿法制粒，制粒后于45飞(TC干燥5~6小时。
9.根据权利要求1所述的一种治疗乙型肝炎中药组方提取物的制备方法，其特征在于:步骤g)中所述的破壁灵芝孢子粉萃取条件为萃取釜温度4(T45°C，萃取釜压力15~20MPa，分离器I温度40~45°C，分离器I压力8~lOMPa，分离器II温度35~40°C，分离器II压力6~7MPa，萃取时 间为3~4小时。
【文档编号】A61P1/16GK103611087SQ201310649990
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年12月6日 优先权日:2013年12月6日
【发明者】闫敬武, 杜成德, 张潇晗 申请人:山东世博金都药业有限公司