一种中药瓜蒌皮提取物及其提取方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药提取物制备技术领域，尤其涉及一种中药瓜萎皮提取物及其提取 方法与应用。
【背景技术】
[0002] 瓜萎为常用中药，为《中国药典》2010年版一部收载，瓜萎的来源为栝楼及双边栝 楼的干燥成熟果实，为中医治疗胸痹之要药，具清热涤痰，宽胸散结及润燥滑肠、扩张冠脉、 保护心肌缺血等功效。其化学成分主要包括油脂、有机酸类，留醇、三萜及其苷类，蛋白质、 氨基酸类及微量元素等。
[0003] 目前瓜萎皮提取物在心血管方面的应用有：瓜萎皮注射液可用于治疗或改善心绞 痛。口服瓜萎片剂可用于治疗冠心病，瓜萎配伍其他中药可用于治疗心绞痛、慢性心功能不 全、心律失常等。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种中药瓜萎皮提取物的提取方法及其应用，旨在筛选出 瓜萎皮提取物对血管作用的有效部位，以提高瓜萎皮治疗疾病的疗效。
[0005] 本发明是这样实现的，一种中药瓜萎皮提取物的提取方法，包括以下步骤：
[0006] (1)将中药瓜萎皮饮片20kg粉碎加入其两倍量的水，煎煮水减半后过滤去渣，所 得溶液用DlOl大孔树脂IOkg吸附，用质量百分浓度为70%的乙醇3000ml洗脱，抽滤掉大 孔树脂，将溶液加热去除掉多余溶剂，加热浓缩至300ml得到一级中药瓜萎皮提取物。
[0007] 优选地，所述提取方法中，在步骤（1)之后还包括步骤：
[0008] (2)将步骤（1)得到的一级瓜萎皮提取物用有机溶剂300ml萃取，在旋转蒸发仪中 蒸发掉有机溶剂，得到二级中药瓜萎皮提取物。
[0009] 优选地，在步骤（2)中，所述有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯和正丁醇中的至少一种。
[0010] 优选地，在步骤（2)中，所述有机溶剂为氯仿。
[0011] 优选地，所述提取方法中，在步骤（2)之后还包括步骤：
[0012] (3)将步骤（2)中得到的二级中药瓜萎皮提取物用有机溶剂300ml过玻璃层析柱， 得到三级中药瓜萎皮提取物。
[0013] 优选地，在步骤（3)中，所述有机溶剂为纯氯仿，按质量比I : 1配比的氯仿与甲 醇的混合液，或者按质量比1 : 10配比的氯仿与甲醇的混合液。
[0014] 优选地，在步骤（3)中，所述有机溶剂为按质量比I : 1配比的氯仿与甲醇的混合 液。
[0015] 优选地，所述提取方法中，在步骤（3)之后还包括步骤：
[0016] (4)将步骤（3)中得到的三级中药瓜萎皮提取物过薄层色谱板，获取Rf = 0.4层 析物、Rf = 0.6层析物以及Rf = 0.8层析物，得到四级中药瓜萎皮提取物。
[0017] 优选地，在步骤（4)中，所述三级中药瓜萎皮提取物过薄层色谱板后，获取Rf = 0. 6层析物，得到中药瓜萎皮提取物的终产物。
[0018] 本发明进一步提供了上述中药瓜萎皮提取物在血管保护方面的应用。
[0019] 本发明克服现有技术的不足，提供一种中药瓜萎皮提取物的提取方法及其应用， 将粉碎中药瓜萎皮饮片加入其两倍量的水，煎煮过滤去渣，所得溶液用大孔树脂吸附，再用 质量百分浓度为70%的乙醇洗脱，抽滤掉大孔树脂，将溶液中多余溶剂去除掉，得到一级提 取物；一级提取物用有机溶剂萃取，蒸发掉有机溶剂，得到二级提取物；二级提取物用有机 溶剂过玻璃层析柱，得到三级提取物；最后，将三级提取物过薄层色谱板，获取Rf = 〇. 4层 析物、Rf = 〇. 6层析物以及Rf = 0. 8层析物，得到四级提取物。上述各级提取物对血管具 有很好的保护作用，并且效果逐渐优化。
【附图说明】
[0020] 图1是本发明实施例1中瓜萎皮提取物（EPT)对大鼠血浆NO浓度的影响；其 中，Control :空白对照组；LDL :低密度脂蛋白损伤组；ETP(L) :LDL+40%乙醇组；ETP(M): 0^+70%乙醇组出了？〇1):0^+95%乙醇组出了？(1) :0^+水提组；数据表示平均值±标准 误，n = 8-10 ;**p < 0? Olvs 对照组；++p < 0? Olvs LDL 组；
[0021] 图2是本发明实施例2中瓜萎皮提取物（EPT)对大鼠血清中NO的含量影响；其中， Control :空白对照组；LDL :低密度脂蛋白损伤组；EPT(L) :LDL+氯仿萃取组；EPT(Y) :LDL+ 乙酸乙酯萃取组；EPT(Z) :LDL+正丁醇萃取组；EPT(S) :LDL+水提取组；数据表示：平均值 土标准误，n = 8-10 ;**p <0? Olvs Control 组，++p <0? Olvs LDL 组；
[0022] 图3是本发明实施例3中瓜萎皮提取物（EPT)对大鼠血液中NO含量的影响；其 中，Control :空白对照组；LDL :低密度脂蛋白损伤组；EPT(X):纯氯仿组；EPT(Y):氯仿、甲 醇，I : 1组；EPT(Z):氯仿、甲醇，1 : 10组；数据表示：平均值土标准差，n = 8-10;++p <0? Olvs Control 组，*p <0? 05, **p <0? Olvs LDL 组；
[0023] 图4是本发明实施例4中瓜萎皮提取（EPT)物对大鼠血清中NO含量的影响；其 中，Control :空白对照组；LDL :低密度脂蛋白损伤组；EPT⑴：Rf值为0. 4组；EPT(Y) :Rf 值为0. 6组；EPT (Z) :Rf值为0. 8组；数据表示：平均值土标准差，n = 8-10 ;++p < 0.0 lvs Control 组，**p <0? Olvs LDL 组；
【具体实施方式】
[0024] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对 本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并 不用于限定本发明。
[0025] 实施例1
[0026] 1、一级中药瓜萎皮提取物的制备
[0027] 将20kg瓜萎皮饮片粉碎加入其两倍量的水煎煮，待水减少一半时，停止加热倒出 溶液，将溶液过滤去渣，得到瓜萎皮煎煮药液。
[0028] 将溶液移至大烧杯，倒入溶液容量二分之一的大孔吸附树脂，静置12个小时，过 滤，留下大孔吸附树脂，其水溶液弃去。
[0029] 同时配置95 %的乙醇溶液，70 %的乙醇溶液，40 %乙醇溶液，及双蒸水各3000ml。 将吸附有药物的大孔树脂分成四等分，分别用95%的乙醇溶液，70%的乙醇溶液，40%乙醇 溶液，及双蒸水洗脱，抽滤掉大孔树脂。将溶液中多余溶剂，即乙醇用旋转蒸发仪去除掉， 得到含有不同成分的药物溶液（即本实施例中的一级中药瓜萎皮提取物，分别是用95%的 乙醇，用70%的乙醇，用40%乙醇，及用双蒸水洗脱的药物），将以上四种药物分别浓缩至 300ml〇
[0030]2、大鼠的分组及药物处理
[0031] 将48只SD大鼠分成六组每组8只，随机分组：
[0032] ①Control :空白对照组，实验前48h尾部静脉注射生理盐水（0. 9%氯化钠注射 液）（4mg/kg)以作为对照组；
[0033] ②LDL :LDL损伤组，实验前48h尾部静脉注射LDL (4mg/kg);
[0034] ③EPT (L) :40 %乙醇洗脱部分+LDL组，40 %乙醇洗脱部分（4ml/kg)每天灌胃1 次，连续5天，提取物灌胃第四天尾部静脉注射LDL(4mg/kg);
[0035] ④EPT (M) :70 %乙醇洗脱部分+LDL组，70 %乙醇洗脱部分（4ml/kg)每天灌胃1 次，连续5天，其他处理过程同③；
[0036] ⑤EPT (H) :95%乙醇洗脱部分+LDL组，95 %乙醇洗脱部分（4ml/kg)每天灌胃1 次，连续5天，其他处理过程同③。
[0037] ⑥EPT (W):水洗脱部分+LDL组，水洗脱部分（4ml/kg)每天灌胃1次，连续5天， 其他处理过程同③；
[0038] 3、取血法
[0039] 将大鼠用25%乌来糖腹腔麻醉后，固定在鼠板上，切开大鼠颈部皮肤，用玻璃分针 分离一侧颈总动脉，用动脉夹夹住近心端，远心端用线结扎，用眼科剪剪一 V型切口，插入 动脉导管，用试管取血约6ml，离心5分钟（3000r/min)，取上清液冷冻待检测。
[0040] 4、血清中NO的含量的检测
[0041] 机体中NO释放后很快转变成代谢产物NO3-和